检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物工程杂志 2011年第4期31卷 12-17页

作者：王晓婷李敏连晓宁杨慧翠曹锴郭云兰仲蕾魏文祥苏州大学基础医学与生物科学学院细胞与分子生物学教研室苏州215123

目的:研究RPB5调节蛋白(RMP)在正常肝细胞及肝癌细胞基因组稳定性中的作用,并探讨其与细胞凋亡的相关性。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从mRNA水平检测正常细胞系及多种肿瘤细胞系中RMP的表达。不同剂量60Coγ射线照射肝癌细胞S... 详细信息

目的:研究RPB5调节蛋白(RMP)在正常肝细胞及肝癌细胞基因组稳定性中的作用,并探讨其与细胞凋亡的相关性。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从mRNA水平检测正常细胞系及多种肿瘤细胞系中RMP的表达。不同剂量60Coγ射线照射肝癌细胞SMMC-7721细胞和正常肝细胞HL-7702细胞,RT-PCR法检测RMP的表达,流式细胞技术检测照射肝癌细胞周期变化及细胞凋亡。应用RNA干扰技术研究RMP在肝癌细胞基因组稳定性中的作用。结果:正常细胞系及多种肿瘤细胞系中RMP基因均有不同程度的表达。经60Coγ射线诱导的肝癌细胞及正常肝细胞RMP表达水平明显升高,且有一定剂量依赖性。随着照射剂量增加细胞凋亡明显增多,细胞周期G1期增高,而S期明显降低。RMP被干扰后,电子显微镜观察细胞形态发生明显改变,p21基因表达减弱。结论:RMP具有维持细胞基因组稳定性的潜在作用。RMP的表达与p53、p21等具有一定相关性,可能与后者协同调节细胞凋亡过程。

关键词：肝癌细胞 RNA干扰 RMP基因放疗基因组稳定性

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RMP基因干扰对肝癌细胞周期的影响

RMP基因干扰对肝癌细胞周期的影响

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第七届全国医学生物化学与分子生物学和第四届全国临床应用生物化学与分子生物学联合学术研讨会暨医学生化分会会员代表大会

作者：郭云兰杨慧翠魏文祥苏州大学基础医学与生物科学学院细胞分子生物学教研室

目的:建立RMP(RPB5-Mediating Protein)基因干扰的稳定细胞株,研究RMP基因干扰对正常肝细胞及其肝癌细胞周期的影响。方法:构建RMP基因的短发卡RNA(short-hairpin RNA,shRNA)真核表达载体pGPU6-Neo-RMPi。通过脂质体转染的方法转染到SMM... 详细信息

目的:建立RMP(RPB5-Mediating Protein)基因干扰的稳定细胞株,研究RMP基因干扰对正常肝细胞及其肝癌细胞周期的影响。方法:构建RMP基因的短发卡RNA(short-hairpin RNA,shRNA)真核表达载体pGPU6-Neo-RMPi。通过脂质体转染的方法转染到SMMC-7721肝癌细胞中,G418筛选出干扰RMP基因的细胞株;RT-PCR检测RMP基因的表达:流式细胞仪PI染色检测细胞周期

关键词：干扰 RMP 肝癌细胞细胞周期

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重组人IL-1β分子的克隆、表达及其单克隆抗体的制备

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苏州大学学报（医学版） 2011年第4期31卷 609-612页

作者：刘佳佳马守宝梁勇王明华刘海燕苏州大学医学部基础医学与生物科学学院生物化学与分子生物学系江苏苏州215123 苏州大学生物医学研究院细胞分子与肿瘤免疫学实验室江苏苏州215123

目的克隆人IL-1β基因,纯化其原核表达的产物,并制备其单克隆抗体(mAb)。方法重组原核表达质粒pET-32a(+)-IL-1β在宿主菌BL21(DE3)表达后,用割胶回收、电洗脱的方法纯化原核表达的蛋白,并用其免疫BALB/c小鼠,采用常规杂交瘤技术制备相... 详细信息

目的克隆人IL-1β基因,纯化其原核表达的产物,并制备其单克隆抗体(mAb)。方法重组原核表达质粒pET-32a(+)-IL-1β在宿主菌BL21(DE3)表达后,用割胶回收、电洗脱的方法纯化原核表达的蛋白,并用其免疫BALB/c小鼠,采用常规杂交瘤技术制备相应的mAb。用ELISA法检测mAb的效价,并进行Ig亚类、特异度的检测。结果本研究利用HL-60细胞系cDNA为模板经PCR克隆了人IL-1β基因,纯化的重组人IL-1β蛋白纯度和含量分别为95%和0.75μg/μl。共筛选出能稳定分泌抗人IL-1β的杂交瘤细胞2株,分别为5G5和8H8。抗体亚型均为IgG2a,轻链均为κ链。结论克隆了人IL-1β基因,并成功纯化了其原核表达的蛋白,以纯化的蛋白为免疫原制备的鼠抗人IL-1β的单克隆抗体(mAb),为实验室及临床研究奠定了一定的基础。

关键词： IL-1β 蛋白纯化单克隆抗体

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脐血CD34+造血干/祖细胞在再生丝素膜上向内皮细胞分化的研究

脐血CD34+造血干/祖细胞在再生丝素膜上向内皮细胞分化的研究

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2011 International Conference on Biomedicine and Engineering

作者：陈瑶田丽娜张晓峰盛伟华韩亚丽刘铁连杨吉成缪竞诚苏州大学医学部基础医学与生物科学学院细胞与分子生物学教研室

目的:以人脐血CD34造血干/祖细胞为种子细胞,探讨其体外分离、纯化、诱导扩增和分化为内皮细胞的可行性,以及丝素材料对其生长、粘附、分化等情况的影响。方法:采集新鲜脐血,磁珠分选方法（MACS）分离出CD34单个核细胞,分别接种到再生... 详细信息

目的:以人脐血CD34造血干/祖细胞为种子细胞,探讨其体外分离、纯化、诱导扩增和分化为内皮细胞的可行性,以及丝素材料对其生长、粘附、分化等情况的影响。方法:采集新鲜脐血,磁珠分选方法（MACS）分离出CD34单个核细胞,分别接种到再生丝素膜（SF）和明胶包被的培养皿上,用含有内皮细胞生长因子（VEGF）和纤维细胞生长因子（bF GF）的M199培养基诱导分化,并比较不同材料上D34细胞的贴壁率及向内皮细胞分化比率。结果:细胞形态学观察发现,SF组和明胶组CD34细胞培养2周细胞长满瓶底并达到增殖高峰,细胞呈"铺路石"状排列;经诱导培养10d后,SF组和明胶组内皮细胞表型CD31阳性率分别为（75.53±4.89）%和（74.59±3.58）%,培养14d后,两组细胞vW F阳性率均可达80%以上;透射电镜两组细胞胞浆内均可见内皮细胞的Weibel-Palade小体;CD34+细胞在明胶和SF上均可较快贴壁,平均贴壁率为90.8%和85.2%,同时两组内皮细胞的分化比率均能达到60%以上,无明显差异。结论:脐血D34造血干/祖细胞在VEGF等细胞因子的诱导下有可能定向分化为内皮细胞,同时可用SF作为其向内皮细胞分化的支架材料,最终用于具有快速形成毛细血管网能力的组织化器官替代品。

关键词：脐血 CD34+造血干/祖细胞诱导分化内皮细胞丝素

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Ad-VEGF165-Ang-1转基因细胞修饰的再生丝素膜诱导血管形成效应及分子机制研究

Ad-VEGF165-Ang-1转基因细胞修饰的再生丝素膜诱导血管形成效应及...

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2011 International Conference on Biomedicine and Engineering

作者：陈瑶田丽娜张晓峰刘铁连韩亚丽盛伟华杨吉成缪竞诚苏州大学医学部基础医学与生物科学学院细胞与分子生物学教研室

目的:构建VEGF165及Ang-1双基因共表达腺病毒载体并研究该转基因细胞修饰的再生丝素膜诱导血管形成活性及其分子机制。方法:首先在科室已构建的IRES和双启动子介导的腺病毒空载体间分别插入Ang-1和VEGF165基因,由此构建出Ad-VEGF165-Pol... 详细信息

目的:构建VEGF165及Ang-1双基因共表达腺病毒载体并研究该转基因细胞修饰的再生丝素膜诱导血管形成活性及其分子机制。方法:首先在科室已构建的IRES和双启动子介导的腺病毒空载体间分别插入Ang-1和VEGF165基因,由此构建出Ad-VEGF165-PolyA-promoter-Ang-1、Ad-Ang-1-PolyA-promoter-VEGF165和Ad-VEGF165-IRES-Ang-1重组腺病毒载体。ELISA法检测比较IRES及PolyA-promoter二个不同载体中目的基因的表达;同时结合兔角膜缘注射病毒诱导血管新生的结果,挑选出一个最佳Ang-1与VEGF165双基因共表达腺病毒载体。将此最佳双基因共表达腺病毒感染在再生丝素膜上培养的兔骨髓基质细胞,用荧光显微镜、RT-PCR及ELISA法检测VEGF165及Ang-1基因在兔骨髓基质细胞中的转录和表达;转基因细胞修饰的再生丝素膜植入兔角膜层,检测角膜新生血管生长面积;HE染色及免疫组化法检测兔角膜层中血管密度及血管形成相关因子的表达。结果:(1)并成功获得了高效价的Ad-VEGF165-PolyA-promoter-Ang-1、Ad-Ang-1-PolyA-promoter-VEGF165和Ad-VEGF165-IRES-Ang-1重组病毒子。(2)ELISA法及兔角膜缘注射病毒法挑选与血管形成相关的最佳双基因腺病毒共表达载体Ad-VEGF165-PolyA-promoter-Ang-1。(3)培养于再生丝素膜上生长的兔骨髓基质细胞经上述挑选的病毒感染后,将该转基因细胞修饰的再生丝素膜植入兔角膜层,2周新生血管长入再生丝素膜植入区域的角膜内,新生血管维持1月以上,HE染色与免疫组化显示血管密度明显增多,CD34在兔角膜层中获得成功表达,与转Ad-GFP细胞修饰的再生丝素膜组和单纯再生丝素膜组比较呈显著性差异(P<0.05),由此证明Ad-VEGF165-PolyA-promoter-Ang-1转基因兔骨髓基质细胞修饰的丝素材料可促进血管生成。结论:成功构建并挑选出VEGF165和Ang-1最佳双基因共表达腺病毒载体,转VEGF165及Ang-1基因修饰的再生丝素膜有利于新生血管形成,为今后利用转基因种子细胞修饰的再生丝素膜,或构建诱导血管形成的生物膜材料提供了分子依据。

关键词：再生丝素膜血管生成素-1 血管内皮生长因子腺病毒转基因

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利培酮和齐拉西酮对精神分裂症病人血浆CK影响

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齐鲁医学杂志 2011年第6期26卷 515-516页

作者：薛晓斌缪竞诚苏州大学基础医学与生物科学学院细胞与分子生物学教研室江苏苏州215100 青岛市精神卫生中心六病房

目的观察精神分裂症病人血浆细胞因子（CK）水平的变化,探讨利培酮和齐拉西酮对病人CK水平的影响。方法采用酶联免疫吸附法,检测50例精神分裂症病人治疗前后白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平,... 详细信息

目的观察精神分裂症病人血浆细胞因子（CK）水平的变化,探讨利培酮和齐拉西酮对病人CK水平的影响。方法采用酶联免疫吸附法,检测50例精神分裂症病人治疗前后白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平,以50名健康人作为对照。结果治疗前后利培酮和齐拉西酮组IL-2、IL-6和TNF-α的水平均高于正常对照组,差异有显著性（F=74.73-140.53,q=14.72-45.06,P〈0.01）;经利培酮及齐拉西酮治疗8周后,IL-2、IL-6和TNF-a水平均明显降低,与治疗前比较差异有显著意义（t=3.34-19.43,P〈0.01）。结论精神分裂症存在CK介导的免疫功能障碍,利培酮和齐拉西酮对CK具有调节作用。

关键词：精神分裂症利培酮齐拉西酮白细胞介素2 白细胞介素6 肿瘤坏死因子α

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pp-GalNAc-T4表达载体的构建

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医药论坛杂志 2011年第24期32卷 131-133页

作者：李喆郭向红吴士良苏州市中医医院药剂科江苏苏州215007 苏州工业园区娄葑医院内科苏州大学基础医学及生物科学学院生物化学与分子生物学教研室

目的构建pp-GalNAc-T4的正义表达载体。方法采用质粒转染法构建真核表达载体。结果构建了pp-GalNAc-T4的正义表达载体,并得到了鉴定。结论构建了pp-GalNAc-T4的正义表达载体,研究发现了在pp-GalNAc-T4c DNA转染NB4细胞株后,在mRNA水平... 详细信息

目的构建pp-GalNAc-T4的正义表达载体。方法采用质粒转染法构建真核表达载体。结果构建了pp-GalNAc-T4的正义表达载体,并得到了鉴定。结论构建了pp-GalNAc-T4的正义表达载体,研究发现了在pp-GalNAc-T4c DNA转染NB4细胞株后,在mRNA水平及蛋白水平能稳定上调pp-GalNAc-T4的表达,可以用于以后的研究。

关键词： pp-GalNAc-T4 载体构建

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RMP基因沉默对肝癌SMMC-7721细胞增殖和迁移能力的影响

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肿瘤 2010年第1期30卷 15-20页

作者：连晓宁杨慧翠曹锴李敏盛伟华王晓婷郭云兰魏文祥苏州大学基础医学与生物科学学院细胞分子生物学教研室苏州215123

目的:建立RMP(RPB5-mediating protein)基因沉默的稳定细胞株,研究RMP小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和迁移的抑制作用。方法:首先,体外合成3条RMP基因的siRNA,并转染到SMMC-7721细胞中,RT-PCR检测3条siRNA对RMP基因表达的抑制作用,筛选出最佳干扰序列;然后,pGPU6-Neo-RMP-484真核表达载体转染,G418筛选出稳定干扰RMP基因的细胞株,RT-PCR法检测该稳定细胞株中RMP基因的干扰效率,MTT法检测RMP-siRNA对SMMC-7721细胞增殖及细胞黏附能力的影响,划痕实验检测细胞迁移能力的变化。结果:利用RNA干扰技术成功建立了RMP基因下调的稳定细胞株,与SMMC-7721细胞对照组比较,其RMP mRNA表达水平下调了(83.67±2.56)%。稳定转染siRNA的细胞株细胞增殖受到抑制,增殖抑制率可达(74.33±0.58)%。稳定转染细胞株的细胞黏附能力有所增加,迁移率则相应降低。结论:成功筛选出了稳定转染RMP-siRNA重组载体的细胞株。pGPU6-Neo-RMP-484重组载体能有效抑制RMP基因在肝癌SMMC-7721细胞内的表达,可作为RMP分子机制研究的细胞模型。RMP基因的下调能有效抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖,使其黏附率增加,同时细胞的迁移率降低。

关键词：癌,肝细胞 RNA干扰细胞增殖细胞运动 RPB5调节蛋白

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IRES/polyA-promoter介导的Ang-1与VEGF165双基因表达效率的对比分析

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中国生物工程杂志 2010年第12期30卷 10-19页

作者：陈瑶缪竞诚韩亚丽盛伟华包婉蓉田丽娜张凤娟吕海涛杨吉成苏州大学医学部基础医学与生物科学学院细胞与分子生物学教研室苏州215123 苏州大学附属儿童医院苏州215006

目的：构建IRES及polyA-promoter介导人血管生成素-1（Angiogenin-1,Ang-1）和人血管内皮生长因子165（vascular endothelial growth factor165,VEGF165）双基因共表达的腺病毒载体,比较IRES与polyA-promoter不同表达模式及其对位于二者前后基因的表达效率和诱导兔角膜新生血管的形成功能,为今后构建双基因或多基因高效共表达载体提供实验依据。方法：以pAdTrack-CMV-Ang-1-IRES-VEGF165质粒为模板,PCR扩增人VEGF165及Ang-1基因片段,分别将其亚克隆至改建的pAdTrack-CMV-PolyA-promoter及pAdTrack-CMV-IRES转移质粒中,构建pTrack-CMV-Ang-1-polyA-promoter-VEGF165、pTrack-CMV-VEGF165-polyA-promoter-Ang-1、pTrack-CMV-VEGF165-IRES-Ang-1基因重组转移质粒,再与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细菌中同源重组,然后经PacI线性化后转染QBI-293A人胚肾成纤维细胞（简称293A细胞）,收获腺病毒重组病毒子Ad-Ang-1-polyA-promoter-VEGF165及Ad-VEGF165-polyA-promoter-Ang-1,Ad-VEGF165-IRES-Ang-1,RT-PCR检测Ang-1和VEGF165在QBI-293A细胞中的转录,ELISA法分别检测不同腺病毒载体目的基因的表达量,比较分析Ang-1与VEGF165基因在IRES和polyA-promoter介导的不同腺病毒表达载体中的表达能力,及在同一腺病毒表达载体中前后不同位置的表达效率。并进一步于兔角膜缘注射Ad-Ang-1-polyA-promoter-VEGF165,Ad-VEGF165-polyA-promoter-Ang-1,Ad-VEGF165-IRES-Ang-1,Ad-Ang-1-IRES-VEGF165,检测角膜新生血管的面积,并比较其诱导血管形成能力的差异。结果：测序显示Ang-1和VEGF165序列正确,不同重组腺病毒载体均获得成功包装,病毒效价可达2~5×1010pfu/m l,RT-PCR检测Ang-1和VEGF165均能有效转录,ELISA法检测结果表明Ang-1、VEGF165基因不仅均能在细胞中有效表达,而且IRES介导的Ang-1及VEGF165基因,无论在IRES上游或下游,其表达量均低于polyA-promoter相同位置的Ang-1及VEGF165基因表达量,大约降低60%~70%左右,同时Ang-1/VEGF165在同一载体上、下游不同位置,其下游基因的表达量均明显低于上游基因表达量,大约降低30%~40%左右。角膜血管形成动物实验的结果表明Ad-VEGF165-PolyA-promoter-Ang-1及Ad-VEGF165-IRES-Ang-1诱导角膜新生血管形成面积和血管密度的能力相对较强,且前者比后者效果更为显著。结论：在腺病毒表达载体中,由IRES/polyA-promoter介导的Ang-1与VEGF165双基因均能在细胞中成功表达,并具血管诱导性,但polyA-promoter比IRES介导的双基因表达效率高,诱导血管形成能力强;同时两者下游基因的表达量及血管诱导性能均明显低于上游基因。

关键词：血管生成素-1 血管内皮生长因子 IRES PolyA-promoter 构建

来源：评论

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自体骨或硫酸钙人工骨结合MC＋~椎间融合器在颈椎前路融合中的应用：疗效及并发症比较

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中国组织工程研究与临床康复 2010年第4期14卷 718-721页

作者：陈同磊成茂华沈忆新言湛军连晓宁董启榕苏州大学附属第二医院骨科江苏省苏州市215004 苏州大学基础医学与生物科学学院细胞分子生物学教研室江苏省苏州市215123

背景:自体骨在颈椎植骨融合术中应用最早、最多,但其来源有限,同时也带来供骨区感染、出血、术后疼痛等并发症。近年来随着新型植骨融合材料的使用,使上述并发症得以避免或减少。目的:比较MC+?椎间融合器结合自体骨与硫酸钙人工骨在颈... 详细信息

背景:自体骨在颈椎植骨融合术中应用最早、最多,但其来源有限,同时也带来供骨区感染、出血、术后疼痛等并发症。近年来随着新型植骨融合材料的使用,使上述并发症得以避免或减少。目的:比较MC+?椎间融合器结合自体骨与硫酸钙人工骨在颈椎前路融合中的临床效果。方法:于2008-01/12对26例脊髓型颈椎病患者共34个节段实施前路椎间盘摘除、椎体融合术,取颈前斜切口3.0～4.0cm,切除椎间盘及后纵韧带,保留终板,自体骨组椎间融合器填充自体髂骨松质骨,硫酸钙组椎间融合器填充Wright公司OsteoSet人工骨,结合固定嵌片使用。以术后X射线片和JOA评分及术后Odom’s疗效评定标准评价疗效。结果与结论:两组共26例患者(34个节段)全部获得随访,术后两组JOA评分无明显差异,术后两组临床疗效评定(Odom’s标准)优良率,硫酸钙组高于自体骨组,但差异无显著性意义(P>0.05)。术后3,6个月人工骨组融合率比自体骨组低,但12个月时两组融合率均为100%。硫酸钙组术后6个月前凸角丢失较自体骨组多0.4°,两组间比较差异无显著性意义(P>0.05)。提示硫酸钙结合MC+?椎间融合器与自体骨结合MC+?椎间融合器治疗脊髓型颈椎病的临床疗效一致,但硫酸钙人工骨可以有效避免取骨区并发症。

关键词：脊髓型颈椎病聚醚醚酮硫酸钙人工骨生物材料硬组织植入物

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