检索结果-内蒙古大学图书馆

中华实验外科杂志 2021年第8期38卷 1413-1416页

作者：丁志丹梁光辉王跃斌李丰科赵凯方泽民赵军杨吉成赵高峰郑州大学第一附属医院胸外科 450052 河南省肿瘤医院胸外科郑州450008 苏州大学第一附属医院胸外科 215000 苏州大学基础医学院细胞与分子生物学教研室 215123

目的探讨携带人抑瘤素M(OSM)重组腺病毒表达载体对A549人肺癌细胞生长的影响和抗肿瘤机制。方法用最佳感染复数的病毒感染A549细胞,用荧光显微镜、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)法检测OSM在人肺癌细胞中的... 详细信息

目的探讨携带人抑瘤素M(OSM)重组腺病毒表达载体对A549人肺癌细胞生长的影响和抗肿瘤机制。方法用最佳感染复数的病毒感染A549细胞,用荧光显微镜、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)法检测OSM在人肺癌细胞中的转录和表达;荧光显微镜观察A549细胞的形态学改变;噻唑蓝(MTT)法和FCM检测Ad-OSM对A549细胞的生长抑制和细胞凋亡的影响;半定量RT-PCR法检测OSM基因的表达对A549细胞中的B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、p53基因表达的影响。多组间均数比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA),两两比较采用q检验。结果Ad-OSM组与Ad组和磷酸盐缓冲液(PBS)对照组比较,Ad-OSM对A549人肺癌细胞有明显生长抑制作用(-0.250±0.021,t=12.012,P<0.05;-0.220±0.016,t=13.470,P<0.05),Ad组和PBS对照组差异无统计学意义(2.333±2.097,t=1.113,P>0.05)。用流式细胞仪检测细胞凋亡,Ad-OSM能明显诱导A549细胞凋亡,其中凋亡率可达20.6%,与Ad(2.5%)组和PBS组比较差异有统计学意义(17.800±0.627,t=28.380,P<0.05;17.530±0.667,t=26.335,P<0.05)。RT-PCR和Western blot法检测到OSM基因在A549细胞成功转录和表达;OSM基因表达对A549细胞增殖有明显抑制作用,并可诱导人肺癌细胞凋亡,OSM基因可通过上调细胞中bax、p53和下调bcl-2基因表达诱导细胞凋亡。结论OSM基因可明显抑制A549人肺癌细胞生长,诱导其凋亡,该现象可能是通过改变bax、bcl-2、p53基因表达水平来发挥抗肿瘤作用。

关键词：腺病毒载体肺癌凋亡

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Ad-ING4对人大细胞肺癌NCI-H460细胞移植瘤抑癌效应的体内实验研究

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中华实验外科杂志 2021年第7期38卷 1295-1299页

作者：梁光辉丁志丹李振轩杨吉成赵军邢文群郑州大学附属肿瘤医院胸外科 450008 郑州大学第一附属医院胸外科 450052 苏州大学基础医学院细胞与分子生物学教研室 215123 苏州大学附属第一医院心胸外科 215000

目的:探讨腺病毒介导的ING4基因表达对NCI-H460肺癌细胞裸鼠移植瘤的抑癌增效作用及分子机制。方法:用Ad-ING4重组腺病毒在裸鼠NCI-H460移植瘤的瘤体内注射治疗,观察肿瘤生长变化,治疗结束后3 d处死裸鼠、摘取瘤体并称瘤体重量;免疫组... 详细信息

目的:探讨腺病毒介导的ING4基因表达对NCI-H460肺癌细胞裸鼠移植瘤的抑癌增效作用及分子机制。方法:用Ad-ING4重组腺病毒在裸鼠NCI-H460移植瘤的瘤体内注射治疗,观察肿瘤生长变化,治疗结束后3 d处死裸鼠、摘取瘤体并称瘤体重量;免疫组织化学检测瘤体组织中B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、生存素(Survivin)等相关因子的表达。组间数据比较采用t检验。结果:动物实验结果表明,Ad-ING4组的平均体积明显低于磷酸盐缓冲液(phosphate buffer saline,PBS)对照组(720.20±23.51,t=30.64,P<0.05)和Ad-GFP空病毒组(469.90±32.57,t=14.43,P<0.05),差异有统计学意义;平均瘤体重量明显低于Ad-GFP组(0.732±0.068,t=9.26,P<0.01)和PBS组(0.757±0.049,t=15.32,P<0.05),差异有统计学意义;Ad-ING4重组腺病毒能显著抑制裸鼠NCI-H460移植瘤的生长,瘤重的抑制率达32.69%,与空病毒载体Ad-GFP组和细胞对照PBS组比较差异有统计学意义(P<0.05);免疫组织化学结果显示Ad-ING4重组腺病毒能明显上调bax和Caspase-3蛋白的表达水平,下调bcl-2和Survivin蛋白的表达水平。结论:腺病毒介导的IL-24基因可明显抑制人肺癌细胞NCI-H460移植瘤的生长,诱导其凋亡,其分子机制可能与上调bax、Caspase-3等促凋亡因子的表达,下调bcl-2、Survivin等凋亡抑制因子的表达有关。

关键词：肺癌腺病毒载体肿瘤抑制

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Ad-生长抑制因子4-polyA-promoter-白细胞介素-24对NCI-H460肺癌细胞抑癌增效作用的体内实验研究

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中华实验外科杂志 2020年第6期37卷 1093-1098页

作者：梁光辉丁志丹袁东风杨吉成赵军邢文群郑州大学附属肿瘤医院胸外科 450008 郑州大学第一附属医院胸外科 450052 苏州大学基础医学院细胞与分子生物学教研室 215123 苏州大学附属第一医院心胸外科 215000

目的探讨腺病毒介导的生长抑制因子4(ING4)和白细胞介素(IL)-24双基因共表达对NCI-H460肺癌细胞裸鼠移植瘤的抑癌增效作用及分子机制。方法根据腺病毒携带基因类型,把实验分5组,PBS、Ad、Ad-IL-24、Ad-ING4、Ad-ING4-IL-24组。以50的感... 详细信息

目的探讨腺病毒介导的生长抑制因子4(ING4)和白细胞介素(IL)-24双基因共表达对NCI-H460肺癌细胞裸鼠移植瘤的抑癌增效作用及分子机制。方法根据腺病毒携带基因类型,把实验分5组,PBS、Ad、Ad-IL-24、Ad-ING4、Ad-ING4-IL-24组。以50的感染复数(MOI)各重组腺病毒分别感染NCI-H460细胞(苏州大学基础医学院细胞和分子生物学教研室提供),蛋白质印迹法(Western blot)鉴定ING4和/或IL-24基因在NCI-H460细胞中的表达;噻唑蓝(MTT)法检测各重组腺病毒对NCI-H460细胞的生长抑制作用;各重组腺病毒注入裸鼠瘤体内进行抗肿瘤实验,观察各组瘤体体积变化;治疗15 d后处死裸鼠、摘取瘤体并称瘤体质量;免疫组织化学检测瘤体组织中B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、生存素(Survivin)等相关因子的表达。统计学采用单因素方差分析。结果动物实验结果表明,腺病毒介导白细胞介素-24(Ad-IL-24)、腺病毒介导生长抑制因子4(Ad-ING4)、腺病毒介导白细胞介素-24及生长抑制因子4(Ad-ING4-IL-24)组的肿瘤平均体积明显低于腺病毒(Ad)组[(559.880±43.704)mm3,t=12.811,P<0.01;(573.720±42.019)mm3,t=13.654,P<0.01;(834.700±44.948)mm3,t=18.570,P<0.01]和磷酸盐缓冲液(PBS)组[(-710.210±32.608)mm3,t=21.780,P<0.01;(724.050±30.313)mm3,t=23.886,P<0.01;(-985.030±34.257)mm3,t=28.754,P<0.01],平均瘤体重量明显低于Ad组[(0.547±0.080)g,t=6.812,P<0.01;(0.607±0.082)g,t=7.433,P<0.01;(0.919±0.082)g,t=11.221,P<0.01]和PBS组[(0.572±0.067)g,t=8.597,P<0.01;(0.632±0.068)g,t=9.260,P<0.01;(0.944±0.069)g,t=13.775,P<0.01],差异均有统计学意义;Ad-ING4-IL-24组对裸鼠NCI-H460肺癌移植瘤的抑癌作用明显优于Ad-IL-24、Ad-ING4单基因组(0.302±0.048,t=6.213,P<0.01;0.250±0.053,t=4.685,P<0.01),差异有统计学意义,呈现抑癌增效相加作用(Q=0.940)。ING4和/或IL-24能够上调bax、Caspase-3等因子的表达,下调bcl-2、Survivin等因子的表达,且Ad-ING4-IL-24组优于Ad-IL-24、Ad-ING4单基因组(0.263±0.055,t=4.286,P<0.01),差异有统计学意义。结论Ad-ING4-IL-24双基因共表达在体内对NCI-H460细胞裸鼠移植瘤均具有抑癌增效作用,其分子机制可能与上调bax、Caspase-3等促凋亡因子的表达,下调bcl-2、Survivin等凋亡抑制因子的表达有关。

关键词：生长抑制因子4 白细胞介素-24 腺病毒肺癌抑癌增效

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Ad-生长抑制因子4-polyA-promoter-白细胞介素-24对NCI-H460肺癌细胞抑癌增效作用的体外实验研究

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中华实验外科杂志 2020年第7期37卷 1267-1271页

作者：梁光辉丁志丹袁东风李振轩杨吉成赵军邢文群郑州大学附属肿瘤医院胸外科 450008 郑州大学第一附属医院胸外科 450052 苏州大学基础医学院细胞与分子生物学教研室 215123 苏州大学附属第一医院心胸外科 215000

目的探讨腺病毒介导的生长抑制因子4(ING4)和白细胞介素(IL)-24双基因共表达对NCI-H460肺癌细胞抑癌增效作用及其机制。方法以50感染复数(MOI)各重组腺病毒分别感染NCI-H460细胞,蛋白质印迹法(Western blot)鉴定ING4和/或IL-24基因在NCI... 详细信息

目的探讨腺病毒介导的生长抑制因子4(ING4)和白细胞介素(IL)-24双基因共表达对NCI-H460肺癌细胞抑癌增效作用及其机制。方法以50感染复数(MOI)各重组腺病毒分别感染NCI-H460细胞,蛋白质印迹法(Western blot)鉴定ING4和/或IL-24基因在NCI-H460细胞中的表达;噻唑蓝(MTT)法检测各重组腺病毒对NCI-H460细胞的生长抑制作用;经膜联蛋白V-藻红蛋白(Annexin V-PE)/7-氨基放线菌素D(7-AAD)染色后流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率变化;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测NCI-H460细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、生存素(Survivin)等因子的表达,Western blot法检测其中裂解的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)因子的表达。结果 ING4和/或IL-24基因在NCI-H460细胞中能够有效表达;96 h时相点生长抑制率Ad-IL-24、Ad-ING4、Ad-ING4-IL-24组对NCI-H460细胞的生长抑制率明显高于Ad组(27.800±4.271,t=6.508,P<0.01)、(27.130±3.341,t=8.121,P<0.01)、(50.767±2.671,t=19.005,P<0.01),差异有统计学意义;Ad-ING4-IL-24组对NCI-H460细胞的生长抑制率明显优于Ad-IL-24(22.967±4.933,t=4.655,P<0.01)、Ad-ING4(23.633±4.154,t=5.689,P<0.01)单基因组,差异有统计学意义,并呈现抑癌增效相加作用(Q=0.93)。FCM检测结果表明,Ad-IL-24、Ad-ING4、Ad-ING4-IL-24组作用于NCI-H460细胞72 h的诱导细胞凋亡率明显高于磷酸盐缓冲液(PBS)组(16.440±0.896,t=18.340,P<0.01)、(14.000±1.562,t=13.255,P<0.01)、(29.660±1.519,t=19.522,P<0.01)和Ad组(14.450±1.058,t=13.660,P<0.01)、(12.010±1.196,t=1.040,P<0.01)、(27.670±1.620,t=17.082,P<0.01),差异有统计学意义,其中Ad-ING4-IL-24组中NCI-H460细胞的细胞凋亡率明显高于Ad-IL-24(15.660±1.773,t=8.834,P<0.01)、Ad-ING4(13.220±1.628,t=7.858,P<0.01)单基因组,差异有统计学意义;Ad-ING4-IL-24组可明显上调bax、Caspase-3等因子的表达,下调bcl-2、Survivin等因子的表达。结论 Ad-ING4-IL-24双基因共表达在体外对NCI-H460细胞具有抑癌增效作用,其分子机制可能与上调bax、Caspase-3等促凋亡因子的表达,下调bcl-2、Survivin等凋亡抑制因子的表达有关。

关键词：生长抑制因子4 白细胞介素-24 腺病毒肺癌抑癌增效

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***-ING4对人鼻咽癌细胞CNE抑癌增效及其机制的研究

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临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2014年第6期28卷 410-415页

作者：王奕鸿盛伟华杨吉成刘济生苏州大学附属第一医院耳鼻咽喉科苏州215006 苏州大学基础医学院细胞与分子生物学教研室

目的:研究带RGD的腺病毒介导的ING4对人鼻咽癌细胞CNE生长、凋亡及细胞周期的影响并探讨其可能调节机制。方法:以***-ING4及腺病毒空载体感染CNE细胞,RT-PCR法检测ING4基因的表达水平,Western blot法检测目的蛋白的表达。用MTT试验检测I... 详细信息

目的:研究带RGD的腺病毒介导的ING4对人鼻咽癌细胞CNE生长、凋亡及细胞周期的影响并探讨其可能调节机制。方法:以***-ING4及腺病毒空载体感染CNE细胞,RT-PCR法检测ING4基因的表达水平,Western blot法检测目的蛋白的表达。用MTT试验检测ING4对CNE细胞生长情况的影响,用Annexin V-PE/7-AAD双染色测定ING4对CNE细胞凋亡的影响,用PI单染色检测ING4对CNE细胞细胞周期的影响。RT-PCR检测p21、Bcl-2、Bax基因的表达水平的差异,Western blot法检测Survivin蛋白、Cleaved-caspase3蛋白表达的差异。结果:CNE细胞感染***-ING4 72h后,ING4在CNE细胞中过表达,CNE细胞的生长受到明显抑制,细胞凋亡率明显升高,G2/M期出现明显阻滞。RT-PCR结果显示,感染***-ING4的CNE细胞中Bcl-2表达下降,p21、Bax表达升高,差异具有统计学意义(均P<0.01)。Western blot结果显示Survivin蛋白表达下降,Cleaved-caspase3蛋白表达升高。结论:***-ING4可以对鼻咽癌细胞株CNE的起到抑癌增效作用,这一作用可能是通过下调Bcl-2、Survivin表达及上调p21、Bax、caspase3实现的。

关键词： Ad RGD-ING4 鼻咽肿瘤 MTT 凋亡

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腺病毒介导的ING4基因对人肺腺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其分子机制

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中国肺癌杂志 2014年第2期17卷 142-147页

作者：黄锦宏杨吉成凌春华赵大国谢宇锋由振华常熟市第二人民医院呼吸内科常熟215500 苏州大学医学部基础医学与生物科学学院细胞与分子生物学教研室苏州215123 苏州大学附属第一医院呼吸内科苏州215006

背景与目的肿瘤生长抑制因子4(inhibitor of growth 4,ING4)基因是一种重要的肿瘤抑制因子,研究发现ING4基因对多种肿瘤细胞具有抑癌作用。本研究旨在探讨ING4基因对人肺腺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其潜在的作用机制。方法采用SPC-A... 详细信息

背景与目的肿瘤生长抑制因子4(inhibitor of growth 4,ING4)基因是一种重要的肿瘤抑制因子,研究发现ING4基因对多种肿瘤细胞具有抑癌作用。本研究旨在探讨ING4基因对人肺腺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其潜在的作用机制。方法采用SPC-A1细胞株建立肺腺癌裸鼠移植瘤模型,15只荷瘤裸鼠随机等分为PBS组、腺病毒组(Ad-GFP组)、腺病毒介导的ING4组(Ad-ING4组),上述各组进行局部干预用药,动态测量肿瘤体积,治疗结束后摘取瘤体称重并计算瘤重抑瘤率;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测瘤体内细胞凋亡情况,免疫组织化学SP法检测天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、环氧化酶-2(COX-2)、Fas与FasL的表达。结果 Ad-ING4组的肿瘤体积、瘤重均呈现明显下降,与Ad-GFP组抑瘤率(1.31%±0.31%)比较,差异有统计学意义(P<0.05),其抑瘤率为(33.17%±5.24%);Ad-ING4组的凋亡指数为(69.23%±6.53%),与PBS组(17.04%±1.10%)、Ad-GFP组(18.81%±1.93%)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。SP法检测结果显示,Ad-ING4可明显上调Caspase-3、Fas与FasL表达,下调COX-2表达。结论 ING4具有抑制肺腺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用,该作用机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关。

关键词：生长抑制因子4 肺肿瘤移植瘤

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RGD修饰的腺病毒介导的ING4对人鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤的影响

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解放军医药杂志 2014年第4期26卷 50-54页

作者：王奕鸿刘济生盛伟华杨吉成苏州大学附属第一医院耳鼻咽喉科江苏苏州215006 苏州大学基础医学院细胞与分子生物学教研室江苏苏州215006

目的研究RGD修饰的腺病毒介导的ING4对人鼻咽癌细胞(CNE)裸鼠移植瘤的影响并探讨其可能调节机制。方法用RGD修饰的ING4单基因腺病毒载体(***-ING4)及腺病毒空载体(***-GFP)感染CNE细胞,RT-PCR法及Western blot法检测ING4基因的表达水平... 详细信息

目的研究RGD修饰的腺病毒介导的ING4对人鼻咽癌细胞(CNE)裸鼠移植瘤的影响并探讨其可能调节机制。方法用RGD修饰的ING4单基因腺病毒载体(***-ING4)及腺病毒空载体(***-GFP)感染CNE细胞,RT-PCR法及Western blot法检测ING4基因的表达水平。采用CNE细胞株来建立15只人鼻咽癌裸鼠模型,分为PBS组、***-GFP及***-ING4组,每组5只。分别对瘤体内局部注射相应的干预用药,动态测量肿瘤体积,免疫组化检测Caspase-3基因的表达。结果 CNE细胞感染***-ING4 72 h后,ING4在CNE细胞中过表达,***-ING4组肿瘤体积明显小于PBS组及***-GFP组(P<0.01),免疫组化结果显示***-ING4组比其余两组Caspase-3基因的表达明显上调(P<0.01)。结论 ***-ING4抑制人鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤的生长,可能的机制是通过上调Caspase-3基因促进肿瘤细胞凋亡。

关键词： Ad RGD-ING4 鼻咽肿瘤基因,肿瘤 Caspase-3 裸鼠

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腺病毒介导的白介素24联合放疗对CNE-2Z细胞株及其裸鼠移植瘤的抑瘤增效作用

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中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2013年第11期48卷 942-950页

作者：孙朋杨吉成谢宇锋盛伟华刘济生苏州大学附属第一医院耳鼻咽喉苏州215006 苏州大学基础医学院细胞与分子生物学教研室

目的研究以腺病毒为载体的白细胞介素24（IL-24）基因（简称AdVIL-24）过表达对人CNE-2Z鼻咽癌细胞体内外放疗的抑癌增效作用及潜在的作用机制.方法将AdVIL-24感染CNE-2Z细胞,用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法及Western blot法检测IL... 详细信息

目的研究以腺病毒为载体的白细胞介素24（IL-24）基因（简称AdVIL-24）过表达对人CNE-2Z鼻咽癌细胞体内外放疗的抑癌增效作用及潜在的作用机制.方法将AdVIL-24感染CNE-2Z细胞,用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法及Western blot法检测IL-24在CNE-2Z细胞中的转录和表达.体外实验：将PBS组、AdV组、AdVIL-24组、放疗组及AdVIL-24联合放疗组的CNE-2Z细胞,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测CNE-2Z细胞的生长情况；碘化丙啶（PI）染色检测细胞周期,Annexin-V-PE/7-AAD染色检测CNE-2Z细胞凋亡率的变化；RT-PCR检测CNE-2Z细胞中P21、P27、cyclin E、CDK2、Bcl-2、Bax的转录；Western blot检测CNE-2Z细胞中P21、P27、cyclin E、CDK2、Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达.体内实验：采用CNE-2Z细胞株建立人鼻咽癌裸鼠模型,然后将各组荷瘤裸鼠瘤体进行相应处理,动态测量肿瘤体积及最后取瘤称量重量；免疫组化检测P21、P27、cyclin E、CDK2、Bcl-2、Bax、Caspase-3、CD34、VEGF等因子的表达以及微脉管密度.采用金正均法（Q值）计算联合用药后的最终效应.结果体外实验：AdVIL-24联合放疗组能使CNE-2Z细胞生长出现抑制（P＜0.05,Q3d=0.916,Q4d=1.050）；G1期阻滞（50.37％,P＜0.05,Q=1.042）;并诱导其凋亡（48.82％,P＜0.05,Q=1.042）；能明显上调P21、P27、Bax/Bcl-2、Caspase-3等基因转录和表达,下调cyclin E、CDK2基因的转录和表达（P＜0.05；QP21 =0.959,QP27 =0.956,Qcyclin E=1.078,QCDK2=1.046,QBax/Bcl-2=0.995）.体内实验：AdVIL-24联合放疗组能使CNE-2Z移植瘤生长出现抑制（P＜0.05,Qvolume14=1.053,Qweight=1.004）；诱导其凋亡（P＜0.05,Q=0.974）；上调P21、P27、Bax/Bcl-2、cleaved-Caspase-3的表达,下调cyclin E、CDK2的表达（P ＜0.05,QP21=0.920,QP27=0.937,Qcyclin E=1.060,QCDK2=1.019,QBax/Bcl-2=0.982,Qcleaved-Caspase-3=0.927）；CD34、VEGF的表达以及微脉管密度较弱（P＜0.05；QCD34=0.990,QMVD=0.988）.放疗组VEGF的表达出现了明显的表达增强（P＜0.05）,然而AdVIL-24能够明显抑制其表达（P＜0.05）.结论 AdVIL-24联合放疗能有效抑制肿瘤的生长促进其凋亡,是治疗鼻咽癌的一种可能有效的方法.

关键词：鼻咽肿瘤白细胞介素类基因疗法放射疗法细胞系,肿瘤

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人类多重剪接RNA结合蛋白类基因的克隆和分析

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江苏医药 2013年第6期39卷 624-628页

作者：张雅娟肖娟娟鲁德意王尉平苏州卫生职业技术学院检验药学系江苏省215009 苏州大学医学部基础医学与生物科学学院生物化学与分子生物学教研室

目的通过同源筛选的方法拼接并克隆人类多重剪接RNA结合蛋白2(RBPMS2)基因。方法采用同源筛选策略,以人RBPMS2基因作为信息探针,在GeneBank数据库中进行分析,将获得的高度同源的表达序列标签(EST)用VECTOR NTI软件拼接成重叠群。通过UCS... 详细信息

目的通过同源筛选的方法拼接并克隆人类多重剪接RNA结合蛋白2(RBPMS2)基因。方法采用同源筛选策略,以人RBPMS2基因作为信息探针,在GeneBank数据库中进行分析,将获得的高度同源的表达序列标签(EST)用VECTOR NTI软件拼接成重叠群。通过UCSCGenome Blat Server分析,确定RBPMS2基因的染色体定位,SMART网上分析工具进行结构域预测,Unigene数据库进行表达谱分析。结果电子克隆到人类RBPMS2新基因cDNA序列,含完整的开放阅读框(ORF)。RBPMS2基因编码的多肽由209个氨基酸组成,分子量22.5KDa,等电点8.63。SMART分析显示RBPMS2蛋白包含1个RNA识别模体(RRM)结构域。RBPMS2基因位于第15号染色体,定位在15q22.31,由7个外显子和6个内含子组成。电子表达谱分析显示RBPMS2在卵细胞、受精卵、囊胚、不同发育阶段的胚胎、膀胱、肾脏等组织中高表达。结论分析并克隆到了一个新的人类RBPMS2基因。

关键词：多重剪接RNA结合蛋白克隆

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B7-H4实时荧光定量PCR检测方法的建立及其在人胃癌组织中的初步应用

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中国医药生物技术 2013年第2期8卷 81-87页

作者：王琦蒋敬庭魏文祥苏州大学医学部基础医学与生物科学学院细胞与分子生物学教研室 215123 苏州大学附属第三医院肿瘤生物诊疗中心常州213003

目的建立实时荧光定量PCR检测B7-H4的方法并初步应用于人胃癌组织。方法将B7-H4和内参GAPDH的PCR扩增产物经测序鉴定正确后克隆入载体pMD19－T，构建重组质粒标准品，并纯化、定量及梯度稀释，分别建立B7．H4和GAPDH的标准曲线，应用实... 详细信息

目的建立实时荧光定量PCR检测B7-H4的方法并初步应用于人胃癌组织。方法将B7-H4和内参GAPDH的PCR扩增产物经测序鉴定正确后克隆入载体pMD19－T，构建重组质粒标准品，并纯化、定量及梯度稀释，分别建立B7．H4和GAPDH的标准曲线，应用实时荧光定量PCR检测8例人胃癌组织中的B7一H4相对于GAPDH的表达情况。结果B7．H4的最低检测拷贝数为5．27拷贝，线性范围5．27×10^1～5．27×10^7拷贝，标准曲线方程Y=-3．1395X＋41．805，直线回归相关系数r=0．994904，批间变异系数范围2.39％～3．59％，扩增效率108．2％；GAPDH的最低检测拷贝数为38．6拷贝，线性范围3．86×10^2～3．86×10^7拷贝，标准曲线方程Y=-3．2436x＋41．083，直线回归相关系数r=0．998913，批间变异系数范围2．26％～3．86％，扩增效率103．4％。8例人胃癌组织的B7．H4相对于GAPDHmRNA表达水平在0．044～0．888之间。结论荧光定量PCR检测B7．H4的方法具备较高的敏感性和特异性，且系统有良好的重复性和线性范围。

关键词：胃肿瘤实时荧光定量PCR B7-H4

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