检索结果-内蒙古大学图书馆

生物工程学报 2009年第10期25卷 1586-1592页

作者：包婉蓉缪竞诚盛伟华单云波李正祎汪小华井莹莹韩亚丽杨吉成苏州大学医学部基础医学与生命科学学院细胞与分子生物学教研室苏州215123

旨在研究携带人IL-24基因的腺病毒表达载体(Ad-IL-24)对SGC-7901人胃癌细胞的生长抑制作用并分析其分子机制。以不同MOI(感染复数)的Ad空载体腺病毒感染SGC-7901人胃癌细胞,筛选出最佳感染剂量;Ad-IL-24以最佳感染剂量感染SGC-7901胃癌... 详细信息

旨在研究携带人IL-24基因的腺病毒表达载体(Ad-IL-24)对SGC-7901人胃癌细胞的生长抑制作用并分析其分子机制。以不同MOI(感染复数)的Ad空载体腺病毒感染SGC-7901人胃癌细胞,筛选出最佳感染剂量;Ad-IL-24以最佳感染剂量感染SGC-7901胃癌细胞,RT-PCR法和Western blotting法检测腺病毒介导的IL-24基因在SGC-7901胃癌细胞中的转录;MTT法检测Ad-IL-24对SGC-7901胃癌细胞的生长抑制作用,流式细胞仪检测其诱导SGC-7901人胃癌细胞凋亡和细胞周期改变的效应,Hoechst33258染色荧光显微镜检测其诱导胃癌细胞凋亡的核形态改变;RT-PCR半定量法进一步检测SGC-7901胃癌细胞中凋亡相关基因的转录。结果显示,100MOI为感染SGC-7901胃癌细胞的腺病毒最佳感染剂量;Ad-IL-24能成功介导IL-24基因在SGC-7901胃癌细胞中转录性表达;Ad-IL-24感染SGC-7901胃癌细胞后,能明显抑制胃癌细胞生长和诱导凋亡;Ad-IL-24能显著上调SGC-7901胃癌细胞中bax、caspase-3和p53的表达和下调bcl-2的表达。因此,腺病毒介导的IL-24表达具有明显抑制SGC-7901人胃癌细胞生长和诱导凋亡的抗肿瘤效应,其机制可能与上调bax/bcl-2、caspase-3和p53密切相关。

关键词：腺病毒人白介素-24 胃癌肿瘤基因治疗抗肿瘤效应

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腺病毒介导IL-24-E1A双基因载体的构建及其体外抑制SMMC-7721肝癌细胞生长作用初探

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生物工程学报 2009年第7期25卷 1035-1041页

作者：汪小华缪竞诚谢宇锋盛伟华单云波杨吉成苏州大学附属第一医院苏州215001 苏州大学医学部基础医学与生物科学学院细胞与分子生物学教研室苏州215123

构建IL-24和E1A双基因腺病毒载体,获得Ad-IL-24-E1A重组腺病毒子,分析其体外抑瘤作用。PCR及BglⅡ和SalⅠ酶切获得IL-24,与空载体构建成pAdTrack-IL-24-IRES。XhoI和EcoRV酶切获得E1A片段,与pAdTrack-IL-24-IRES连接后成功构建pAdTrack-IL-24-IRES-E1A,同源重组、包装和扩增获得Ad-IL-24-E1A重组病毒子。用50MOI重组腺病毒感染SMMC-7721肝癌细胞,MTT法测定Ad-IL-24-E1A的细胞生长抑制作用;流式细胞仪分析细胞凋亡情况。本研究成功获得Ad-IL-24-E1A重组病毒子。与其他组相比,Ad-IL-24-E1A明显抑制肿瘤细胞生长,感染48h后凋亡率达52%,而抑制正常细胞作用不明显。研究提示Ad-IL-24-E1A双基因重组载体明显抑制SMMC-7721肝癌细胞生长。

关键词：构建 Ad-IL-24-E1A SMMC-7721肝癌细胞抑瘤

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表达抗-VEGF发夹状核酶腺病毒载体的构建及其对结肠癌生长的抑制作用

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癌症 2009年第4期28卷 373-378页

作者：常树建陈卫昌杨吉成谢宇峰盛伟华苏州大学附一院消化内科江苏苏州215006 苏州大学基础医学院细胞与分子生物学教研室江苏苏州215123

背景与目的:VEGF过表达提示结肠癌预后不良。本实验构建带有抗-VEGF发夹状核酶的复制缺陷型腺病毒,观察其对结肠癌VEGF表达及肿瘤生长的抑制作用。方法:将人工合成的抗-VEGF发夹状核酶DNA定向克隆至转移质粒pAdTrack-CMV多克隆位点,然... 详细信息

背景与目的:VEGF过表达提示结肠癌预后不良。本实验构建带有抗-VEGF发夹状核酶的复制缺陷型腺病毒,观察其对结肠癌VEGF表达及肿瘤生长的抑制作用。方法:将人工合成的抗-VEGF发夹状核酶DNA定向克隆至转移质粒pAdTrack-CMV多克隆位点,然后与病毒骨架质粒pAdEasy-1在细菌BJ5183中重组,在293a细胞中包装成完整病毒(命名为Ad-Rz)并复制扩增、纯化。RT-PCR检测病毒感染后抗-VEGF发夹状核酶在HT-29细胞中的表达、real-time PCR及ELISA检测其对VEGF mRNA及蛋白表达的抑制作用。观察Ad-Rz对HT-29细胞和裸鼠移植瘤生长的抑制作用,CD34标记检测肿瘤组织微血管密度(MVD)。结果:抗-VEGF发夹状核酶成功克隆至复制缺陷型腺病毒载体上。抗-VEGF发夹状核酶可在HT-29细胞中表达,Ad-Rz感染的HT-29细胞中VEGFmRNA的相对表达量大约为PBS组的45%(P<0.05)。ELISA结果显示Ad-Rz感染后的细胞上清液中蛋白含量(A值)为0.455±0.35/百万细胞,低于PBS组(P<0.05)。Ad-Rz对HT-29细胞的生长抑制无统计学意义(P>0.05),但可显著抑制肿瘤组织内血管的形成(P<0.05),Ad-Rz治疗的移植瘤增殖率低于PBS组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:腺病毒载体介导的抗-VEGF发夹状核酶可有效抑制HT-29细胞VEGF的表达及移植瘤组织内血管的生成。

关键词：抗-VEGF发夹状核酶腺病毒载体构建 VEGF 结肠肿瘤

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IL-24基因修饰的树突状细胞促进CIK细胞对肺癌细胞的杀伤作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2009年第9期29卷 841-846页

作者：郁心夏卫王浦南徐洪卫陈宇奚华新杨吉成缪竞诚无锡市红十字中心血站 214021 苏州大学医学部基础医学与生物科学学院细胞与分子生物学教研室 215123

目的研究IL-24基因修饰的树突状细胞（DC）与同源细胞因子诱导的杀伤细胞（cyto—kine-induced killer，CIK）共培养后对A549肺癌细胞的杀伤作用及其机制。方法从健康人外周血单个核细胞中常规诱导DC、CIK细胞，同时抽提重组腺病毒质粒p... 详细信息

目的研究IL-24基因修饰的树突状细胞（DC）与同源细胞因子诱导的杀伤细胞（cyto—kine-induced killer，CIK）共培养后对A549肺癌细胞的杀伤作用及其机制。方法从健康人外周血单个核细胞中常规诱导DC、CIK细胞，同时抽提重组腺病毒质粒pAdEasy-1-pTrack—CMV—IL-24，PacⅠ酶切线性化后脂质体转染QBI-293A细胞，收获Ad—IL-24重组病毒。将IL-24基因通过重组病毒导入已负载肿瘤抗原的DC，获得细胞称为DC—IL-24。RT—PCR和ELISA法检测DC中IL-24基因的表达，FCM和ELISA法检测DC表型及分泌细胞因子能力的变化，将DC和CIK细胞混合培养，溶血试验检测CIK细胞产生穿孔素的能力，FCM法检测共培养的DC-CIK细胞对A549肺癌细胞细胞毒活性的变化。结果获得了高滴度的重组病毒Ad—IL-24并成功将IL-24基因导入DC，在倒置荧光显微镜下可观察到荧光，IL-24可上调DC表面CDSO、CD83、HLA—DR、CIMO、CXCR4分子的表达，转染后DC分泌IL-12、TNF-α仅和IL-24的能力显著增强，DC—IL-24更能促进CIK细胞产生穿孔素，与同源CIK细胞共培养后对A549肺癌细胞的细胞毒活性明显增强。结论IL-24基因修饰的DC能增强自体CIK细胞产生特异性抗肿瘤免疫，其机制与IL-24能促进DC表型成熟，分泌Th1型细胞因子，维持DC活化状态，进而促进CIK细胞活化密切相关。

关键词： IL-24 树突状细胞 CIK细胞 A549细胞

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抗肿瘤基因重组药物和腺病毒基因治疗载体的产业化转让项目

抗肿瘤基因重组药物和腺病毒基因治疗载体的产业化转让项目

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第六届长三角科技论坛生物产业发展分论坛

作者：杨吉成谢宇锋盛伟华缪竞诚苏州大学医学部基础医学系细胞分子生物学教研室苏州 215123

本文分别介绍了人白细胞介素-24 (hIL-24)基因重组抗肿瘤药物蛋白(rhIL-24)项目，hIL-24腺病毒载体(Ad- hIL-24)肿瘤基因治疗项目、ING4腺病毒载体(Ad-ING4)肿瘤基因治疗项目、双基因表达腺病毒肿瘤墓因治疗载体项目的项目研究以及项目... 详细信息

本文分别介绍了人白细胞介素-24 (hIL-24)基因重组抗肿瘤药物蛋白(rhIL-24)项目，hIL-24腺病毒载体(Ad- hIL-24)肿瘤基因治疗项目、ING4腺病毒载体(Ad-ING4)肿瘤基因治疗项目、双基因表达腺病毒肿瘤墓因治疗载体项目的项目研究以及项目产业发展前景。

关键词：抗肿瘤基因重组药物腺病毒基因治疗载体产业化转让

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IL-24基因修饰增强CIK细胞对HL-60细胞的细胞毒作用

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中国免疫学杂志 2009年第12期25卷 1080-1084页

作者：夏卫郁心王浦南徐洪卫陈宇奚华新杨吉成缪竞诚无锡市红十字中心血站输血重点实验室无锡214021 苏州大学医学部基础医学与生物科学学院细胞与分子生物学教研室苏州215123

目的:研究IL-24基因修饰的CIK细胞与同源树突状细胞共培养后对白血病细胞的杀伤作用及其机制。方法:从健康人外周血单个核细胞中常规诱导DC和CIK细胞,电穿孔法将IL-24基因导入CIK细胞中(获得细胞为CIK-IL24),RT-PCR和ELISA法检测CIK细胞... 详细信息

目的:研究IL-24基因修饰的CIK细胞与同源树突状细胞共培养后对白血病细胞的杀伤作用及其机制。方法:从健康人外周血单个核细胞中常规诱导DC和CIK细胞,电穿孔法将IL-24基因导入CIK细胞中(获得细胞为CIK-IL24),RT-PCR和ELISA法检测CIK细胞中IL-24基因的表达,FCM和ELISA法检测转基因前后CIK表型及分泌细胞因子能力的变化,将CIK细胞和同源DC共培养,FCM法检测共培养的DC-CIK细胞对HL-60细胞细胞毒活性的变化。结果:通过电穿孔法成功将IL-24基因导入CIK细胞,与对照组相比,转IL-24基因后CIK细胞中CD3+、CD3+CD56+细胞的比例无明显改变,CD4+CD25+细胞比例显著下降。IL-24可上调CD3+CD56+细胞表面粘附分子CD54、CXCR4的表达,转染IL-24基因后CIK分泌TNF-α和IFN-γ的能力显著增强,与DC共同作用HL-60细胞时转染IL-24基因后的CIK细胞细胞毒活性明显增强。结论:通过IL-24基因修饰,明显增强了CIK细胞对HL-60细胞的杀伤能力,其机制与IL-24促进CIK分泌TNF-αI、FN-γ,上调CIK细胞表面粘附分子的表达,减少CD4+CD25+调节性T细胞比例等密切相关。

关键词：人IL-24 CIK细胞 HL-60细胞细胞毒

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表达抗血管内皮细胞生长因子核酶和白细胞介素24腺病毒载体的构建及其对结肠癌HT-29细胞的毒性作用

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中华肿瘤杂志 2009年第6期31卷 433-433页

作者：常树建杨吉成陈卫昌谢宇峰盛伟华苏州大学附属第一医院消化内科 215006 苏州大学基础医学院细胞与分子生物学教研室

肿瘤的发生是一个多基因改变过程，因此，在肿瘤基因治疗过程中，以单一基因为靶点的治疗很难取得显著的抗肿瘤效果。我们构建了同时带有双基因抗血管内皮细胞生长因子（vascularendothelialgrowthfactor，VEGF）发夹状核酶（Rz）和白... 详细信息

肿瘤的发生是一个多基因改变过程，因此，在肿瘤基因治疗过程中，以单一基因为靶点的治疗很难取得显著的抗肿瘤效果。我们构建了同时带有双基因抗血管内皮细胞生长因子（vascularendothelialgrowthfactor，VEGF）发夹状核酶（Rz）和白细胞介素24（interleukin-24，IL-24）的腺病毒载体，并初步观察了其对结肠癌HT-29细胞的毒性作用。

关键词：血管内皮细胞生长因子脱氧核糖核酸酶类白细胞介素24 腺病毒载体 HT-29细胞

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Ad-ING4抑制人A549肺癌细胞及其裸鼠移植瘤的生长

Ad-ING4抑制人A549肺癌细胞及其裸鼠移植瘤的生长

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第六届长三角科技论坛生物产业发展分论坛

作者：杜贤荣杨吉成谢宇锋盛伟华朱晔涵苏州大学附属第一医院呼吸内科苏州 215006 苏州大学基础医学院细胞与分子生物学教研室苏州 215123

目的：研究腺病毒介导的ING4基因(Ad—ING4)对肺癌体内外的抑制作用及其潜在的分子机制。方法：体外采用不同MOI的Ad—ING4感染人A549肺癌细胞,并用MTT法检测Ad—ING4对A549肺癌细胞的抑制作用,流式细胞仪(FCM)检测肿瘤细胞的凋亡率,采... 详细信息

目的：研究腺病毒介导的ING4基因(Ad—ING4)对肺癌体内外的抑制作用及其潜在的分子机制。方法：体外采用不同MOI的Ad—ING4感染人A549肺癌细胞,并用MTT法检测Ad—ING4对A549肺癌细胞的抑制作用,流式细胞仪(FCM)检测肿瘤细胞的凋亡率,采用A549细胞株建立人肺癌裸鼠模型,瘤体局部注射干预用药,每隔5d测量一次肿瘤体积,治疗结束后1wk,将裸鼠处死,摘除瘤体称重,计算抑瘤率;瘤块HE染色,免疫组化检测ING4、P53、Caspase3、Survivin、CD34、HIF—1等基因的表达。结果：Ad—ING4感染A549细胞抑制率可达47.62％左右：72 h凋亡率为18.5％;荷瘤裸鼠经治疗后,Ad—ING4组和DDP组的肿瘤体积、瘤重均明显缩小,其抑瘤率分别达到42.43％和46.47％,DDP组出现不良反应;免疫组化检测Ad—ING4组和DDP组与对照组比较,P53、Caspase3的表达上调(P细胞及其裸鼠移植瘤的生长具有明显的抑制作用。其抑瘤机制可能与上调P53、Caspase3基因的表达和下调Survivin、CD34、HIF—1的基因表达进而诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤血管形成等有关。

关键词：腺病毒介导 ING4基因肺癌细胞移植瘤生长抑制细胞凋亡

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抑瘤素M的研究进展

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上海医学 2008年第8期31卷 602-604页

作者：胡志清缪竞诚苏州大学基础医学系细胞与分子生物学教研室 215123

抑瘤素M(OSM)最初是1986年Zarling等从U937组织型淋巴瘤细胞(histiocytic lymphomacells)培养上清液中分离的一种对A375黑色素瘤细胞有生长抑制作用的因子^[1]。OSM主要由活化的T淋巴细胞、单核细胞和巨噬细胞分泌,这种诱导分泌过程可... 详细信息

抑瘤素M(OSM)最初是1986年Zarling等从U937组织型淋巴瘤细胞(histiocytic lymphomacells)培养上清液中分离的一种对A375黑色素瘤细胞有生长抑制作用的因子^[1]。OSM主要由活化的T淋巴细胞、单核细胞和巨噬细胞分泌,这种诱导分泌过程可以出现在机体的大多数组织中。OSM属于白细胞介素(IL)-6家族成员,[第一段]

关键词：抑瘤素M 生长抑制作用黑色素瘤细胞淋巴瘤细胞培养上清液 T淋巴细胞白细胞介素 U937

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抑制缺氧诱导因子-1α仪表达对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞裸鼠体内成瘤性的影响

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中华血液学杂志 2008年第4期29卷 247-251页

作者：李炳宗庄文卓陈萍傅晋翔苏州大学附属第二医院血液科 215004 苏州大学基础医学系细胞与分子生物学教研室

目的利用RNA干扰（RNAi）技术抑制多发性骨髓瘤（MM）细胞系RPMI8226细胞中缺氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor，HIF-1α）表达，探讨对RPMI8226细胞在裸鼠体内成瘤性的影响。方法利用短发夹RNA（shRNA）表达载体pSilencer2．1... 详细信息

目的利用RNA干扰（RNAi）技术抑制多发性骨髓瘤（MM）细胞系RPMI8226细胞中缺氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor，HIF-1α）表达，探讨对RPMI8226细胞在裸鼠体内成瘤性的影响。方法利用短发夹RNA（shRNA）表达载体pSilencer2．1-U6 hygro构建RNAi载体，在RPMI8226细胞中抑制HIF-1α的表达。应用RT—PCR技术和Western blot方法，鉴定RNAi后HIF-1α的表达。ELISA法测定细胞上清中血管内皮生长因子（VEGF）表达的改变。流式细胞术检测RNAi前后细胞周期的改变。研究缺氧（PO2 为1％）条件下，抑制HIF-1α的表达对其靶基因VEGF和葡萄糖转运蛋白（Glut-1）表达的影响。利用异种移植瘤模型观察HIF-1α干扰后对肿瘤生长的影响。结果RNAi后，HIF-1α的表达在mRNA和蛋白水平均明显降低。常氧条件下，RNAi组（RPMI8226-i1和RPMI8226-i2）和未干扰组（RPMI8226-c和RPMI8226）细胞上清中VEGF浓度无明显差异；缺氧条件下四组细胞上清中VEGF浓度分别为（506．0±53．2）、（494．7±63．1）、（984．4±61．9）和（938．2±62．2）pg／ml。RPMI8226-i1和RPMI8226-i2组较RPMI8226-c和RPMI8226组明显降低（P〈0．05）。G0／G1期累积受到抑制，S期细胞比例增加。缺氧条件下VEGF和Glut-1等靶基因的表达明显下调（P〈0．05）。裸鼠皮下成瘤性实验表明，抑制HIF-1α的表达，能够明显抑制肿瘤的生长。结论RNAi抑制RPMI8226细胞HIF-1α表达，可能通过抑制肿瘤的血管新生和糖代谢过程来发挥肿瘤抑制作用。

关键词： RNA干扰缺氧诱导因子-1α RPMI8226细胞成瘤性

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