检索结果-内蒙古大学图书馆

肿瘤 2008年第11期28卷 942-945页

作者：段光军韩志强林云霞杨鹏胡华成盛伟华王金志杨吉成苏州大学附属第二医院呼吸内科苏州215004 苏州大学基础医学院细胞与分子生物学教研室苏州215123

目的:构建重组人源化hING4基因并探究其对肺癌细胞的生长抑制效应。方法:以pcDNA3.0-mING4重组质粒为模板,通过定点突变技术构建带有绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒Ad-hING4基因。用荧光显微镜和RT-PCR法检测hING4在肺癌细胞中的表达;We... 详细信息

目的:构建重组人源化hING4基因并探究其对肺癌细胞的生长抑制效应。方法:以pcDNA3.0-mING4重组质粒为模板,通过定点突变技术构建带有绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒Ad-hING4基因。用荧光显微镜和RT-PCR法检测hING4在肺癌细胞中的表达;Western印迹法检测hING4对肺癌细胞中Bax、Bcl-2表达的影响;集落形成试验和FCM法检测hING4对肺癌细胞增殖和凋亡影响。结果:基因测序和PCR结果提示成功构建人源化Ad-hING4基因;并能在肺癌细胞中表达,对肺癌细胞有细胞毒作用;Western印迹法检测结果提示基因在上调Bax表达同时下调Bcl-2的表达;集落形成试验、FCM检测结果提示hING4基因可抑制肺癌细胞增殖并诱导凋亡。结论:成功构建了Ad-hING4基因,并能在体外抑制肺癌细胞生长。

关键词：肺肿瘤 ING4蛋白人诱变突点基因肿瘤抑制

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RNA干扰HIF-1α表达对白血病K562细胞高三尖杉酯碱敏感性的影响

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癌症 2008年第7期27卷 723-728页

作者：李炳宗庄文卓陈萍傅晋翔苏州大学附属第二医院血液科江苏苏州215004 苏州大学基础医学院细胞与分子生物学教研室江苏苏州215123

背景与目的:缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)是细胞对缺氧应答的一个重要的转录因子,目前对缺氧条件下血液系统恶性肿瘤,尤其是白血病生物学改变的研究相对较少。本研究探讨应用RNA干扰技术抑制HIF-1α在慢性... 详细信息

背景与目的:缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)是细胞对缺氧应答的一个重要的转录因子,目前对缺氧条件下血液系统恶性肿瘤,尤其是白血病生物学改变的研究相对较少。本研究探讨应用RNA干扰技术抑制HIF-1α在慢性粒细胞白血病细胞系K562中的表达后,细胞对化疗药物高三尖杉酯碱(homoharringtonine,HHT)敏感性的变化。方法:利用shRNA表达载体pSilencer2.1-U6hygro构建RNA干扰载体,在K562细胞中抑制HIF-1α的表达,潮霉素筛选获得阳性克隆。应用实时定量RT-PCR技术研究缺氧(1%O2分压)条件下,抑制HIF-1α的表达对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、磷酸甘油酸激酶(phosphoglycerate kinase,PGK)、葡萄糖转运蛋白-1(glucose transporter-1,Glut-1)和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达的影响。应用MTT比色法观察抑制HIF-1α表达后,K562细胞对HHT敏感性的变化。结果:转染后HIF-1α在mRNA和蛋白水平的表达均被抑制,缺氧条件下HIF-1α的靶基因VEGF、PGK、Glut-1、P-gp等表达明显下调。HIF-1α被干扰后的K562细胞对HHT的敏感性增加。结论:抑制K562细胞的HIF-1α表达可以抑制血管生成和糖代谢相关基因表达,并且增加对HHT的敏感性。

关键词： RNA干扰缺氧诱导因子-1α K562细胞靶基因高三尖杉酯碱

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TNF-α抑制多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞成骨潜能

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江苏医药 2008年第1期34卷 42-44页

作者：李炳宗庄文卓傅晋翔苏州大学附属第二医院血液病科 215004 苏州大学基础医学系细胞与分子生物学教研室

目的探讨多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓间充质干细胞(MSCs)成骨潜能变化,以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)对MSCs成骨潜能的影响。方法分离培养MM患者和正常人的MSCs,鉴定其生物学特性。体外成骨诱导后,实时RT-PCR检测其成骨指标的变化,VonKossa... 详细信息

目的探讨多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓间充质干细胞(MSCs)成骨潜能变化,以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)对MSCs成骨潜能的影响。方法分离培养MM患者和正常人的MSCs,鉴定其生物学特性。体外成骨诱导后,实时RT-PCR检测其成骨指标的变化,VonKossa染色测定其钙质沉积,ELISA法检测MM患者和正常人骨髓血清中TNF-α的浓度。MSCs成骨体系中加入TNF-α,2周后检测MSCs成骨指标mRNA表达量及其钙质沉积程度。结果MM患者的MSCs成骨潜能较正常人降低,其骨髓血清中的TNF-α浓度较正常人高。TNF-α可以抑制MSCs成骨潜能。结论TNF-α抑制MSCs成骨潜能可能参与骨髓瘤骨病发病机制。

关键词：骨髓瘤间充质干细胞肿瘤坏死因子α 成骨

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Ad-ING4、IL-24的肿瘤基因治疗

Ad-ING4、IL-24的肿瘤基因治疗

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第16次全国干扰素及细胞因子学术会议

作者：杨吉成苏州大学医学部基础医学系细胞分子生物学教研室

针对各种肿瘤发生、发展机制，肿瘤基因治疗大致从以下几个方面着手，包括抑制癌基因的表达活性，补偿肿瘤抑制基因的活性，抑制血管生成，免疫基因治疗，自杀基因疗法，肿瘤多药耐药基因治疗等。本文介绍了肿瘤基因治疗的策略，对目前... 详细信息

针对各种肿瘤发生、发展机制，肿瘤基因治疗大致从以下几个方面着手，包括抑制癌基因的表达活性，补偿肿瘤抑制基因的活性，抑制血管生成，免疫基因治疗，自杀基因疗法，肿瘤多药耐药基因治疗等。本文介绍了肿瘤基因治疗的策略，对目前肿瘤基因治疗研究面临的主要问题及展望进行了论述，并就ING4,hIL24的肿瘤基因治疗情况进行了简述。

关键词： Ad-ING4 IL-24 肿瘤基因治疗细胞因子基因表达

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人延伸体复合物Elp3亚基表达及功能研究

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医学分子生物学杂志 2008年第3期5卷 229-234页

作者：孙冬梅杨吉成谢宇锋盛伟华李敏魏文祥苏州大学基础医学系细胞与分子生物学实验室江苏省苏州市215123

目的将人延伸体复合物(elongator)的中心亚基elp3(elongtor complexprotein3)基因导入293T细胞,观察它对293T细胞生长特性以及基因转录活性的影响。方法用脂质体将pFlAGCMV4-Elp3真核表达载体导入293T细胞,通过G418持续筛选阳性克隆,建... 详细信息

目的将人延伸体复合物(elongator)的中心亚基elp3(elongtor complexprotein3)基因导入293T细胞,观察它对293T细胞生长特性以及基因转录活性的影响。方法用脂质体将pFlAGCMV4-Elp3真核表达载体导入293T细胞,通过G418持续筛选阳性克隆,建立elp3的稳定表达细胞株。通过RT-PCR、免疫荧光法检测外源性elp3基因的表达。MTT法测定细胞生长曲线、流式细胞仪法测定细胞周期及凋亡情况。瞬时转染不同组合的质粒后,收集细胞用荧光素酶报告基因法检测转染前后荧光素酶活性的变化。结果Elp3可以抑制293T细胞生长,并使细胞出现G1期阻滞,未引起293T细胞凋亡。elp3能激活转录,但作用较弱。elp4也可激活转录,过量表达elp3基因与elp4基因时,可明显激活转录,说明两者有协同激活转录作用。Elp3与转录因子TFⅡF亚基RAP30基因过量表达时,两者也可协同激活转录。结论Elp3对293T细胞的生长有明显抑制作用,可诱导G1期细胞阻滞,具有转录激活功能,并可分别与Elp4亚基、RAP30亚基协同激活转录。

关键词： Elp3亚基延伸体复合物基因的表达与调控

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RMP在肝癌细胞基因组稳定性和凋亡中的作用

RMP在肝癌细胞基因组稳定性和凋亡中的作用

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华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会

作者：李敏杨慧翠杨吉成盛伟华连晓宁曹锴魏文祥苏州大学基础医学与生物科学学院细胞与分子生物学教研室

研究RPB5调节蛋白（RMP）在正常肝细胞及肝癌细胞基因组稳定性中的作用,并探讨其与细胞凋亡的相关性。采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）从mRNA水平检测正常细胞系及多种肿瘤细胞系中RMP的表达。不同剂量Coγ射线照射SMMC-7721细胞和... 详细信息

研究RPB5调节蛋白（RMP）在正常肝细胞及肝癌细胞基因组稳定性中的作用,并探讨其与细胞凋亡的相关性。采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）从mRNA水平检测正常细胞系及多种肿瘤细胞系中RMP的表达。不同剂量Coγ射线照射SMMC-7721细胞和正常肝细胞HL-7702细胞,RT-PCR法检测RMP的表达,流式细胞技术检测照射后肝癌细胞周期变化及细胞凋亡。应用RNA干扰技术研究RMP在肝癌细胞基因组稳定性中的作用。正常细胞系及多种肿瘤细胞系中RMP基因均有不同程度的表达。经Coγ射线诱导的肝癌细胞及正常肝细胞RMP表达水平明显升高,且有一定剂量依赖性。随着照射剂量增加细胞凋亡明显增多,细胞周期G期增高,而S期明显降低。RMP被干扰后,电子显微镜观察细胞形态发送明显改变,p21基因表达减弱。RMP具有维持细胞基因组稳定性的潜在作用。RMP的表达与p53、p21等具有一定相关性,可能与后者协同调节细胞凋亡过程。

关键词：肝癌细胞 RNA干扰 RMP基因放疗基因组稳定性

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延长因子的过表达引发293T细胞的G1期阻滞及生长抑制

延长因子的过表达引发293T细胞的G1期阻滞及生长抑制

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华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会

作者：魏文祥孙冬梅李敏杨惠翠杨吉成缪竞诚苏州大学基础医学与生物科学学院细胞与分子生物学教研室

延长因子复合体(Elongator complex)与磷酸化的RNA聚合酶Ⅱ相结合,参与了转录的延长阶段及RNA的处理(RNA prosessing)等过程。为了研究延长因子复合体对细胞生长的影响,我们建立了ELP3和ELP4稳定表达的细胞株。应用免疫沉淀方法我们从E... 详细信息

延长因子复合体(Elongator complex)与磷酸化的RNA聚合酶Ⅱ相结合,参与了转录的延长阶段及RNA的处理(RNA prosessing)等过程。为了研究延长因子复合体对细胞生长的影响,我们建立了ELP3和ELP4稳定表达的细胞株。应用免疫沉淀方法我们从ELF3稳定表达的细胞株中纯化了ELP1/ELP2/ELP3的核心复合物(core Elongator),而在ELP4稳定表达的细胞株只分离得到游离的ELP4,表明ELP3和ELP4并不存在于同一复合体中。流式细胞技术显示ELP3的过度表达致使大部分的293T细胞被阻滞在G1期,表明延长因子复合体参与了细胞周期限制点的调节。ELP3可以提高VP16的激活转录。ELP4对激活转录没有明显的作用,但却能与ELP3协调提高激活转录。

关键词： ELP 稳定表达复合体细胞株延长因子生长抑制

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用无细胞蛋白合成系统重组表达恶性疟原虫蛋白的研究

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中国人兽共患病学报 2008年第9期24卷 816-819,823页

作者：曹俊金子修坪井敬文鸟居本美诸葛洪祥夏超明高琪苏州大学医学院基础医学系苏州215123 日本长崎大学热带病研究所日本爱媛大学无细胞技术研究中心日本爱媛大学分子寄生虫教研室江苏省血吸虫寄生虫病防治研究所卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室江苏省寄生虫分子生物学重点实验室

目的探索无细胞麦芽体外蛋白合成系统重组表达恶性疟原虫蛋白可行性,并检测用重组蛋白制备的免疫血清对原虫蛋白的特异性反应。方法将目的蛋白PfRON2的部分片断克隆连接到重组表达载体后,用无细胞麦芽体外蛋白合成系统进行重组表达并纯... 详细信息

目的探索无细胞麦芽体外蛋白合成系统重组表达恶性疟原虫蛋白可行性,并检测用重组蛋白制备的免疫血清对原虫蛋白的特异性反应。方法将目的蛋白PfRON2的部分片断克隆连接到重组表达载体后,用无细胞麦芽体外蛋白合成系统进行重组表达并纯化,用纯化的重组蛋白免疫小鼠制备免疫血清,并用免疫斑点实验(Western blot)和免疫荧光抗体实验(IFA)检测该血清对恶性疟蛋白的特异性反应。结果成功克隆的重组质粒能在无细胞麦芽体外蛋白合成系统中生成大小相符的GST融合蛋白,并能较好地纯化。免疫斑点实验中,用该重组蛋白制备的免疫血清能检测到重组蛋白和恶性疟目标蛋白,免疫荧光抗体实验显示该免疫血清能成功地标记恶性疟目标蛋白所在部位。结论无细胞麦芽体外蛋白合成系统可应用于恶性疟原虫蛋白的重组表达,获得的免疫血清能特异性识别疟原虫蛋白。

关键词：无细胞蛋白合成恶性疟原虫重组表达免疫血清

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候选抑癌基因ING4的研究进展

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中国现代药物应用 2007年第3期1卷 69-72页

作者：刘铁连张海锋杨吉成苏州大学基础医学系细胞与分子生物学教研室苏州215123

ING4基因是近年来发现的一个ING(生长抑制因子家族)新成员,可能通过抑制细胞生长,增强其化学敏感性、增强P53的活性、抑制HIF活性、抑制肿瘤血管增生等途径抑制肿瘤的生长。ING4基因在正常组织中表达丰富,而在肿瘤组织中表达异常与发生... 详细信息

ING4基因是近年来发现的一个ING(生长抑制因子家族)新成员,可能通过抑制细胞生长,增强其化学敏感性、增强P53的活性、抑制HIF活性、抑制肿瘤血管增生等途径抑制肿瘤的生长。ING4基因在正常组织中表达丰富,而在肿瘤组织中表达异常与发生突变,但其在肿瘤发生、发展过程中的确切作用尚不清楚。

关键词： ING4 抑癌基因 P53

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全龟酶解液抗疲劳的初步研究

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实验动物与比较医学 2007年第4期27卷 255-256页

作者：顾范博吴士良苏州大学医学院基础医学系机能实验室苏州215123 苏州大学医学院生化与分子生物学教研室苏州215123

目的初步探索全龟水解液的耐疲劳作用。方法利用酶降解全龟酸抽提物,采用DABS-C1柱前衍生HPLC法,测定全龟酶水解液的游离氨基酸组份,以Folin-酚试剂法测定全龟抽提液的蛋白质与部分微量元素的含量,并观察了服用了全龟酶解液的小鼠耐疲... 详细信息

目的初步探索全龟水解液的耐疲劳作用。方法利用酶降解全龟酸抽提物,采用DABS-C1柱前衍生HPLC法,测定全龟酶水解液的游离氨基酸组份,以Folin-酚试剂法测定全龟抽提液的蛋白质与部分微量元素的含量,并观察了服用了全龟酶解液的小鼠耐疲劳效果。结果全龟酸抽提液含较高的蛋白质和钙,酶降解液含丰富的二十种氨基酸。结论全龟酶解液富含丰富的氨基酸,具有明显的抗疲劳作用。

关键词：龟 HPLC 酶解液氨基酸

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