检索结果-内蒙古大学图书馆

全国转基因技术开发应用与安全管理交流研讨会

作者：杨吉成苏州大学医学院基础医学系细胞分子生物学教研室 215123

介绍了人白细胞介素-24 (hIL-24)基因重组抗肿瘤药物蛋白(rhIL-24)项目简介，hIL-24腺病毒载体(Ad- hIL-24)肿瘤基因治疗项目简介，ING4腺病毒载体(Ad-ING4)肿瘤基因治疗项目简介，双基因表达腺病毒肿瘤基因治疗载体项目简介。

关键词：抗肿瘤基因重组药物腺病毒基因治疗载体产业化转让项目

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多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞免疫调节功能异常及其在骨髓瘤骨病中的作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第9期30卷 853-859页

作者：李炳宗庄文卓陈萍张宏黄海雯傅晋翔苏州大学附属第二医院血液科 215004 苏州大学基础医学系细胞与分子生物学教研室

目的探讨多发性骨髓瘤（MM）患者骨髓间充质干细胞（MSCs）免疫调节功能及其对骨髓瘤骨病的影响.方法分离MM患者和正常对照MSCs,流式细胞技术比较二者的免疫表型.Real-time PCR检测实验组及对照组MSCs的TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、I... 详细信息

目的探讨多发性骨髓瘤（MM）患者骨髓间充质干细胞（MSCs）免疫调节功能及其对骨髓瘤骨病的影响.方法分离MM患者和正常对照MSCs,流式细胞技术比较二者的免疫表型.Real-time PCR检测实验组及对照组MSCs的TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、IL-6、IL-3、TNF-α、FasL和NF-κB配体的受体激活物（RANKL）表达量.共培养系统与流式细胞术检测MSCs对T细胞增殖、凋亡和早期活化标志CD25和CD69表达的影响.Von kossa染色、real-time PCR和Western blot等技术检测T细胞对正常对照MSCs向成骨细胞分化的影响.结果 MM来源和正常对照MSCs具有相似的形态学和免疫表型.MM来源的MSCs表达TGF-β1、IL-6、IL-3、TNF-α和RANKL较正常对照MSCs增加,而TGF-β2、TGF-β3和FasL的表达下降.MM来源的MSCs对T细胞增殖的抑制作用明显减弱.正常对照MSCs较MM来源MSCs使更多T细胞静止于G0/G1期.正常对照MSCs明显促进T细胞凋亡,而MM来源的MSCs对T细胞的促凋亡作用减弱.正常对照MSCs明显抑制T细胞活化分子表达,而MM患者的MSCs此抑制作用明显降低.与MM患者的MSCs共培养后的T细胞以及直接来源于MM患者的T细胞均可以明显抑制正常对照MSCs向成骨细胞分化.结论 MM患者的MSCs免疫调节功能较正常对照MSCs降低,主要表现为抑制T细胞活化的功能减弱,而活化的T细胞可抑制MSCs向成骨细胞分化,此可能为骨髓瘤骨病发病机制之一.

关键词：多发性骨髓瘤间充质干细胞 T细胞免疫调节功能骨髓瘤骨病

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VEGF165基因重组腺病毒载体的构建及其促血管形成作用

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中国血液流变学杂志 2010年第1期20卷 22-26页

作者：贾红亮谢宇锋杨吉成盛伟华孙凌吕海涛苏州大学附属儿童医院心内科江苏苏州215003 苏州大学基础医学系细胞与分子生物学教研室江苏苏州215123

目的构建携带人血管内皮细胞生长因子165（VEGF165）基因的腺病毒表达载体（Ad—VEGF165），并观察其感染QBI．293A靶细胞后目的基因的表达及促进血管形成的作用。方法以含有VEGF165基因片段的pSV-K3-VEGF165质粒为模板，PCR扩增获得的V... 详细信息

目的构建携带人血管内皮细胞生长因子165（VEGF165）基因的腺病毒表达载体（Ad—VEGF165），并观察其感染QBI．293A靶细胞后目的基因的表达及促进血管形成的作用。方法以含有VEGF165基因片段的pSV-K3-VEGF165质粒为模板，PCR扩增获得的VEGF165目的片段（XhoI、EcoRV）亚克隆至GFP标记的pAdTrack—CMV载体中构建重组转移质粒***165，行PCR、双酶切和DNA测序鉴定。将测序正确的pAdTrack—***65质粒经PmeI线性化后与腺病毒骨架质粒pAdEasy．1共转化BJ5183细菌，获得同源重组腺病毒质粒***165（***165），再经PacI线性化后用脂质体转染QBI．293A包装细胞，通过多轮扩增和氯化铯密度梯度离心纯化获得***65重组腺病毒。***和ELISA检测腺病毒介导的外源性VEGFl65基因在QB｜．293A细胞中的转录和表达。将孵育8d的生长状态良好的鸡胚随机分成Ad空载体腺病毒组、Ad—VEGFI65重组腺病毒组、NS组。采用鸡胚尿囊膜（CAM）法检测VEGF165重组腺病毒促进尿囊膜血管形成活性。结果PCR、双酶切和测序鉴定结果证实成功构建了***—VEGF165重组转移质粒，并获得了高滴度的***165重组腺病毒，其病毒效价可达2×10^10pfu／mL。Ad-VEGFl65感染后，QBI．293A细胞中的VEGF165含量较QBI．293A细胞对照组和Ad空病毒感染组均明显升高（P〈0．05）。Ad-VEGF165组与Ad．空载体组和NS组比较，CAM三级分支血管生长更旺盛，毛细血管更丰富（P〈0．05）。结论成功获得了携带人VEGF165基因的腺病毒表达载体，具有明显的促CAM血管形成活性，为进一步开展VEGF165基因修饰干细胞的应用研究奠定了实验基础。

关键词：血管内皮生长因子1 65 腺病毒载体表达

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Ad-hING4联合^(125)Ⅰ粒子对裸鼠胰腺癌移植瘤的抑癌增效作用

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核技术 2009年第12期32卷 940-946页

作者：翟红彦杨吉成盛伟华谢宇锋法逸华苏成海苏州大学附属第一医院核医学科苏州215006 苏州大学基础医学系细胞与分子生物学教研室苏州215006

本工作探讨腺病毒介导的人ING4基因(Ad-hING4)联合125I粒子对裸鼠胰腺癌移植瘤的抑癌增效作用及其可能的机制。将本室构建的Ad-hING4腺病毒感染QBI-293A细胞,扩增后获得高滴度的病毒。建立25只裸鼠胰腺癌PANC-1皮下移植瘤模型,分成PBS... 详细信息

本工作探讨腺病毒介导的人ING4基因(Ad-hING4)联合125I粒子对裸鼠胰腺癌移植瘤的抑癌增效作用及其可能的机制。将本室构建的Ad-hING4腺病毒感染QBI-293A细胞,扩增后获得高滴度的病毒。建立25只裸鼠胰腺癌PANC-1皮下移植瘤模型,分成PBS对照组、空病毒Ad组、125I粒子近距离放疗组、Ad-hING4基因治疗组、125I粒子和Ad-hING4联合治疗组,进行抑瘤治疗实验;此后每5天测量1次肿瘤体积,20天后处死,计算抑瘤率和金氏q值。常规病理切片观察细胞生长形态、组织损伤程度和范围,并进行凋亡细胞计数(AI);免疫组化SP法检测肿瘤标本中微血管密度(MVD)、生存素Survivin和活化的Caspase-3凋亡相关蛋白的表达。结果发现,125I粒子组、Ad-hING4组、联合治疗组抑瘤率分别达到34.19%(P<0.01)、31.50%(P<0.01)、67.15%(P<0.01),联合治疗组抑瘤率明显高于125I粒子和Ad-hING4治疗组(P<0.01);病理切片检查显示近粒子处肿瘤细胞变性坏死,远离粒子处可见存活肿瘤细胞;三个治疗组凋亡指数(AI)、Caspase-3阳性细胞数明显高于PBS组(P<0.05),且联合治疗组明显高于125I粒子和Ad-hING4治疗组(P<0.01);三个治疗组MVD值、Survivin阳性细胞明显低于PBS组(P<0.05),且联合治疗组明显低于125I粒子和Ad-hING4治疗组(P<0.01);Ad组与PBS组的各指标无显著性差异(P>0.05)。可见125I粒子、Ad-hING4可显著抑制裸鼠PANC-1胰腺癌移植瘤的生长,两者联用具有抑癌增效的协同作用,Ad-hING4有望作为一种新的放疗增敏剂;其抑瘤机制可能是通过下调Survivin和上调Caspase3的表达,以诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤血管形成。

关键词： 125I粒子近距离治疗 hING4 胰腺肿瘤裸鼠基因治疗放疗增敏剂机制

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抗肿瘤基因重组药物和腺病毒基因治疗载体的产业化转让项目

抗肿瘤基因重组药物和腺病毒基因治疗载体的产业化转让项目

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第六届长三角科技论坛生物产业发展分论坛

作者：杨吉成谢宇锋盛伟华缪竞诚苏州大学医学部基础医学系细胞分子生物学教研室苏州 215123

本文分别介绍了人白细胞介素-24 (hIL-24)基因重组抗肿瘤药物蛋白(rhIL-24)项目，hIL-24腺病毒载体(Ad- hIL-24)肿瘤基因治疗项目、ING4腺病毒载体(Ad-ING4)肿瘤基因治疗项目、双基因表达腺病毒肿瘤墓因治疗载体项目的项目研究以及项目... 详细信息

本文分别介绍了人白细胞介素-24 (hIL-24)基因重组抗肿瘤药物蛋白(rhIL-24)项目，hIL-24腺病毒载体(Ad- hIL-24)肿瘤基因治疗项目、ING4腺病毒载体(Ad-ING4)肿瘤基因治疗项目、双基因表达腺病毒肿瘤墓因治疗载体项目的项目研究以及项目产业发展前景。

关键词：抗肿瘤基因重组药物腺病毒基因治疗载体产业化转让

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抑瘤素M的研究进展

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上海医学 2008年第8期31卷 602-604页

作者：胡志清缪竞诚苏州大学基础医学系细胞与分子生物学教研室 215123

抑瘤素M(OSM)最初是1986年Zarling等从U937组织型淋巴瘤细胞(histiocytic lymphomacells)培养上清液中分离的一种对A375黑色素瘤细胞有生长抑制作用的因子^[1]。OSM主要由活化的T淋巴细胞、单核细胞和巨噬细胞分泌,这种诱导分泌过程可... 详细信息

抑瘤素M(OSM)最初是1986年Zarling等从U937组织型淋巴瘤细胞(histiocytic lymphomacells)培养上清液中分离的一种对A375黑色素瘤细胞有生长抑制作用的因子^[1]。OSM主要由活化的T淋巴细胞、单核细胞和巨噬细胞分泌,这种诱导分泌过程可以出现在机体的大多数组织中。OSM属于白细胞介素(IL)-6家族成员,[第一段]

关键词：抑瘤素M 生长抑制作用黑色素瘤细胞淋巴瘤细胞培养上清液 T淋巴细胞白细胞介素 U937

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抑制缺氧诱导因子-1α仪表达对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞裸鼠体内成瘤性的影响

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中华血液学杂志 2008年第4期29卷 247-251页

作者：李炳宗庄文卓陈萍傅晋翔苏州大学附属第二医院血液科 215004 苏州大学基础医学系细胞与分子生物学教研室

目的利用RNA干扰（RNAi）技术抑制多发性骨髓瘤（MM）细胞系RPMI8226细胞中缺氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor，HIF-1α）表达，探讨对RPMI8226细胞在裸鼠体内成瘤性的影响。方法利用短发夹RNA（shRNA）表达载体pSilencer2．1... 详细信息

目的利用RNA干扰（RNAi）技术抑制多发性骨髓瘤（MM）细胞系RPMI8226细胞中缺氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor，HIF-1α）表达，探讨对RPMI8226细胞在裸鼠体内成瘤性的影响。方法利用短发夹RNA（shRNA）表达载体pSilencer2．1-U6 hygro构建RNAi载体，在RPMI8226细胞中抑制HIF-1α的表达。应用RT—PCR技术和Western blot方法，鉴定RNAi后HIF-1α的表达。ELISA法测定细胞上清中血管内皮生长因子（VEGF）表达的改变。流式细胞术检测RNAi前后细胞周期的改变。研究缺氧（PO2 为1％）条件下，抑制HIF-1α的表达对其靶基因VEGF和葡萄糖转运蛋白（Glut-1）表达的影响。利用异种移植瘤模型观察HIF-1α干扰后对肿瘤生长的影响。结果RNAi后，HIF-1α的表达在mRNA和蛋白水平均明显降低。常氧条件下，RNAi组（RPMI8226-i1和RPMI8226-i2）和未干扰组（RPMI8226-c和RPMI8226）细胞上清中VEGF浓度无明显差异；缺氧条件下四组细胞上清中VEGF浓度分别为（506．0±53．2）、（494．7±63．1）、（984．4±61．9）和（938．2±62．2）pg／ml。RPMI8226-i1和RPMI8226-i2组较RPMI8226-c和RPMI8226组明显降低（P〈0．05）。G0／G1期累积受到抑制，S期细胞比例增加。缺氧条件下VEGF和Glut-1等靶基因的表达明显下调（P〈0．05）。裸鼠皮下成瘤性实验表明，抑制HIF-1α的表达，能够明显抑制肿瘤的生长。结论RNAi抑制RPMI8226细胞HIF-1α表达，可能通过抑制肿瘤的血管新生和糖代谢过程来发挥肿瘤抑制作用。

关键词： RNA干扰缺氧诱导因子-1α RPMI8226细胞成瘤性

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TNF-α抑制多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞成骨潜能

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江苏医药 2008年第1期34卷 42-44页

作者：李炳宗庄文卓傅晋翔苏州大学附属第二医院血液病科 215004 苏州大学基础医学系细胞与分子生物学教研室

目的探讨多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓间充质干细胞(MSCs)成骨潜能变化,以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)对MSCs成骨潜能的影响。方法分离培养MM患者和正常人的MSCs,鉴定其生物学特性。体外成骨诱导后,实时RT-PCR检测其成骨指标的变化,VonKossa... 详细信息

目的探讨多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓间充质干细胞(MSCs)成骨潜能变化,以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)对MSCs成骨潜能的影响。方法分离培养MM患者和正常人的MSCs,鉴定其生物学特性。体外成骨诱导后,实时RT-PCR检测其成骨指标的变化,VonKossa染色测定其钙质沉积,ELISA法检测MM患者和正常人骨髓血清中TNF-α的浓度。MSCs成骨体系中加入TNF-α,2周后检测MSCs成骨指标mRNA表达量及其钙质沉积程度。结果MM患者的MSCs成骨潜能较正常人降低,其骨髓血清中的TNF-α浓度较正常人高。TNF-α可以抑制MSCs成骨潜能。结论TNF-α抑制MSCs成骨潜能可能参与骨髓瘤骨病发病机制。

关键词：骨髓瘤间充质干细胞肿瘤坏死因子α 成骨

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Ad-ING4、IL-24的肿瘤基因治疗

Ad-ING4、IL-24的肿瘤基因治疗

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第16次全国干扰素及细胞因子学术会议

作者：杨吉成苏州大学医学部基础医学系细胞分子生物学教研室

针对各种肿瘤发生、发展机制，肿瘤基因治疗大致从以下几个方面着手，包括抑制癌基因的表达活性，补偿肿瘤抑制基因的活性，抑制血管生成，免疫基因治疗，自杀基因疗法，肿瘤多药耐药基因治疗等。本文介绍了肿瘤基因治疗的策略，对目前... 详细信息

针对各种肿瘤发生、发展机制，肿瘤基因治疗大致从以下几个方面着手，包括抑制癌基因的表达活性，补偿肿瘤抑制基因的活性，抑制血管生成，免疫基因治疗，自杀基因疗法，肿瘤多药耐药基因治疗等。本文介绍了肿瘤基因治疗的策略，对目前肿瘤基因治疗研究面临的主要问题及展望进行了论述，并就ING4,hIL24的肿瘤基因治疗情况进行了简述。

关键词： Ad-ING4 IL-24 肿瘤基因治疗细胞因子基因表达

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用无细胞蛋白合成系统重组表达恶性疟原虫蛋白的研究

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中国人兽共患病学报 2008年第9期24卷 816-819,823页

作者：曹俊金子修坪井敬文鸟居本美诸葛洪祥夏超明高琪苏州大学医学院基础医学系苏州215123 日本长崎大学热带病研究所日本爱媛大学无细胞技术研究中心日本爱媛大学分子寄生虫教研室江苏省血吸虫寄生虫病防治研究所卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室江苏省寄生虫分子生物学重点实验室

目的探索无细胞麦芽体外蛋白合成系统重组表达恶性疟原虫蛋白可行性,并检测用重组蛋白制备的免疫血清对原虫蛋白的特异性反应。方法将目的蛋白PfRON2的部分片断克隆连接到重组表达载体后,用无细胞麦芽体外蛋白合成系统进行重组表达并纯... 详细信息

目的探索无细胞麦芽体外蛋白合成系统重组表达恶性疟原虫蛋白可行性,并检测用重组蛋白制备的免疫血清对原虫蛋白的特异性反应。方法将目的蛋白PfRON2的部分片断克隆连接到重组表达载体后,用无细胞麦芽体外蛋白合成系统进行重组表达并纯化,用纯化的重组蛋白免疫小鼠制备免疫血清,并用免疫斑点实验(Western blot)和免疫荧光抗体实验(IFA)检测该血清对恶性疟蛋白的特异性反应。结果成功克隆的重组质粒能在无细胞麦芽体外蛋白合成系统中生成大小相符的GST融合蛋白,并能较好地纯化。免疫斑点实验中,用该重组蛋白制备的免疫血清能检测到重组蛋白和恶性疟目标蛋白,免疫荧光抗体实验显示该免疫血清能成功地标记恶性疟目标蛋白所在部位。结论无细胞麦芽体外蛋白合成系统可应用于恶性疟原虫蛋白的重组表达,获得的免疫血清能特异性识别疟原虫蛋白。

关键词：无细胞蛋白合成恶性疟原虫重组表达免疫血清

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