检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2015年第5期37卷 398-403页

作者：饶青尚伟龙周人杰胡启文张晓鹏杨延成胡珍朱军民饶贤才第三军医大学基础医学部微生物学教研室、重庆市微生物工程实验室重庆400038 第三军医大学新桥医院急救部重庆400037

目的探讨金黄色葡萄球菌XQ株毒力变异的机制。方法以金黄色葡萄球菌ATCC25923为对照,采用动物实验观察临床分离的金葡菌XQ株在体外传代后的毒力改变;通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析菌体及培养上清的蛋白谱变化,应用PCR进行金... 详细信息

目的探讨金黄色葡萄球菌XQ株毒力变异的机制。方法以金黄色葡萄球菌ATCC25923为对照,采用动物实验观察临床分离的金葡菌XQ株在体外传代后的毒力改变;通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析菌体及培养上清的蛋白谱变化,应用PCR进行金葡菌附属调节基因agr扩增并测序,分析菌株毒力变异的机制,并进一步通过qRT-PCR检测XQ株agr调控的毒力因子变化情况。结果动物毒力实验证实XQ株的毒力较对照菌ATCC25923强,体外传代培养后,XQ株第180代菌株（XQ180）的毒力明显下降,SDS-PAGE分析发现毒力下降的XQ株（XQM株）培养上清的蛋白表达谱较XQ株有明显改变,对金葡菌agr基因进行测序分析发现XQM株的agr C基因第443位有一段188 bp的序列插入,而该插入序列就是agr C基因255~442间序列,正是该188 bp重复序列导致Agr C蛋白的截短型突变,引起新桥株的致病性降低,qRT-PCR检测结果证实XQM株中受agr调控的毒力基因表达水平显著下降。结论临床分离的金葡菌XQ株毒力强,在体外传代中易发生毒力变异,这种变异与重复序列导致的agr C突变有关。

关键词：金黄色葡萄球菌致病性动物毒力实验附属调节基因agr 重复序列

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HCVNS3-5B转基因小鼠模型的构建

HCVNS3-5B转基因小鼠模型的构建

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中华医学会2015年医学病毒学大会

作者：赵海卫吕欣雷迎峰姚敏乔卿华韩佩君张芳琳徐志凯尹文第四军医大学基础医学部微生物学教研室

目的：构建表达HCV NS3-5B 蛋白的转基因小鼠模型。方法：显微注射线性化pIRES2-EGFP-NS3-5B 载体到小鼠受精卵，制备并传代筛选HCV NS3-5B 转基因小鼠;通过血清ALT、AST 检测和肝脏HE 染色对6 周龄转基因小鼠进行肝功能评价。

关键词：丙型肝炎病毒复制复合体动物模型

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HCV NS3-5B转基因小鼠模型的构建

HCV NS3-5B转基因小鼠模型的构建

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第六届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛

作者：赵海卫吕欣雷迎峰姚敏乔卿华韩佩君张芳琳徐志凯尹文第四军医大学基础医学部微生物学教研室

目的构建表达HCVNS3-5B蛋白的转基因小鼠模型。方法显微注射线性化pIRES2-EGFP-NS3-5B载体到小鼠受精卵,制备并传代筛选HCV NS3-5B转基因小鼠;通过血清ALT、AST检测和肝脏HE染色对6周龄转基因小鼠进行肝功能评价。结果 PCR、RT-PCR和Wes... 详细信息

目的构建表达HCVNS3-5B蛋白的转基因小鼠模型。方法显微注射线性化pIRES2-EGFP-NS3-5B载体到小鼠受精卵,制备并传代筛选HCV NS3-5B转基因小鼠;通过血清ALT、AST检测和肝脏HE染色对6周龄转基因小鼠进行肝功能评价。结果 PCR、RT-PCR和Western-Blot结果表明HCV NS3-5B转基因小鼠构建成功;6周龄部分转基因小鼠血清ALT和AST值升高,但无统计学意义,肝组织形态无改变。结论成功构建了HCV NS3-5B转基因小鼠模型,为进一步在体研究HCV复制复合体建立了平台。

关键词：丙型肝炎病毒复制复合体动物模型

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疟原虫红内期全虫疫苗在抑制疟疾蚊期传播中的作用机制研究

疟原虫红内期全虫疫苗在抑制疟疾蚊期传播中的作用机制研究

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十五次全国学术会议暨第六次国际寄生虫学学术研讨会

作者：朱锋刘太平赵晨浩徐文岳第三军医大学基础医学部病原微生物学教研室

目的:疟疾是以按蚊为传播媒介的血液传播疾病,每年造成约2亿人口感染并导致其中60多万人死亡。随着疟原虫对抗疟药物和按蚊对杀虫剂抗性的不断增强,传统的药物治疗和药物预防在疟疾防治中日显疲软。鉴此,开发长期高效的抗疟疫苗辅助疟... 详细信息

目的:疟疾是以按蚊为传播媒介的血液传播疾病,每年造成约2亿人口感染并导致其中60多万人死亡。随着疟原虫对抗疟药物和按蚊对杀虫剂抗性的不断增强,传统的药物治疗和药物预防在疟疾防治中日显疲软。鉴此,开发长期高效的抗疟疫苗辅助疟疾治疗或保护接种者免于感染成为实现消除疟疾目标的必需环节。本研究将红内期全虫疫苗模型应用至疟疾蚊期传播阶段,并证实全虫疫苗不仅能保护免疫者遭受再次红内期感染还能抑制疟疾蚊期传播,是一种多效性疫苗。方法:灭活全虫抗原免疫Balb/c小鼠后,收集免疫全血、血清等组分。将上述成分经尾静脉过继至感染疟原虫的Balb/c小鼠,并供按蚊"血餐"叮吸。感染7天后统计按蚊中肠卵囊数量。通过抗体拮抗作用耗竭全血成分中CD4+T细胞和免疫血清中MCP-1、IFN-1成分、protein-a亲和层析纯化特异性Ig G,在此条件下分别通过过继实验探讨各免疫组分在抑制疟原虫蚊期发育中的作用。结果:全虫免疫血清可以使按蚊中肠内卵囊减少60-90%。抗体耗竭实验表明CD4+T细胞和MCP-1、IFN-1等炎症因子并不能有效的抑制疟原虫发育,而特异性Ig G抗体是红内期全虫疫苗抑制蚊期发育的重要原因。同时,除Ig G抗体对疟原虫的直接杀伤作用外,小鼠的免疫成分还能"调理"按蚊,增强按蚊对疟原虫的清除作用。结论:红内期全虫疫苗可以有效抑制蚊期疟原虫发育,其中抗体成分对疟原虫的直接杀伤和免疫血清对按蚊的"调理"是主要作用方式。

关键词：红内期全虫疫苗传播阻断抗体调理作用

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丙型肝炎病毒NS3-5B转基因小鼠模型的构建

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生物技术通讯 2015年第5期26卷 627-631页

作者：赵海卫韩佩君姚敏吕欣雷迎峰杨敬乔卿华翁代慧党品香尹文第四军医大学基础医学部微生物学教研室陕西西安710032 第四军医大学西京医院输血科陕西西安710032

目的:构建表达丙型肝炎病毒(HCV)NS3-5B蛋白的转基因小鼠模型。方法:显微注射线性化p IRES2-EGFP-NS3-5B载体到小鼠受精卵,制备并传代筛选HCV NS3-5B转基因小鼠;通过血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)检测和肝脏HE染色,对6周龄转基... 详细信息

目的:构建表达丙型肝炎病毒(HCV)NS3-5B蛋白的转基因小鼠模型。方法:显微注射线性化p IRES2-EGFP-NS3-5B载体到小鼠受精卵,制备并传代筛选HCV NS3-5B转基因小鼠;通过血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)检测和肝脏HE染色,对6周龄转基因小鼠进行肝功能评价。结果:PCR、RT-PCR和Western印迹结果表明HCV NS3-5B转基因小鼠构建成功;6周龄部分转基因小鼠血清ALT和AST值升高,但差别无统计学意义,肝组织形态无改变。结论:构建了HCV NS3-5B转基因小鼠模型,为进一步在体研究HCV复制复合体建立了平台。

关键词：丙型肝炎病毒 NS3-5B蛋白复制复合体转基因小鼠模型

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重庆地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌主要流行克隆更替的机制研究

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第三军医大学学报 2014年第8期36卷 735-739页

作者：尚伟龙胡启文胡珍朱军民杨杰袁文常程航袁吉振张霞饶青饶贤才第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的探讨重庆地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌株ST239-MRSA-Ⅲ-t030替代ST239-MRSA-Ⅲ-t037克隆的机制。方法选择重庆地区分离的ST239-MRSA-Ⅲ-t030和ST239-MRSA-Ⅲ-t037临床株,检测各菌株的生长曲线,观察菌落形态,分析菌株的药物敏感谱... 详细信息

目的探讨重庆地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌株ST239-MRSA-Ⅲ-t030替代ST239-MRSA-Ⅲ-t037克隆的机制。方法选择重庆地区分离的ST239-MRSA-Ⅲ-t030和ST239-MRSA-Ⅲ-t037临床株,检测各菌株的生长曲线,观察菌落形态,分析菌株的药物敏感谱;再通过体外、体内竞争实验和交叉抑制实验深入探讨ST239-MRSA-Ⅲ-t030替代ST239-MRSA-Ⅲ-t037的机制。结果 ST239-MRSA-Ⅲ-t030菌株较ST239-MRSA-Ⅲ-t037有更短的生长迟缓期,后者在固体培养基上生长的菌落相对较小,且都对复方新诺明耐药,对利福平敏感,这与ST239-MRSA-Ⅲ-t030菌株不同(大多数对复方新诺明敏感,对利福平都耐药)。ST239-MRSA-Ⅲ-t030菌株在体外和体内都表现出比ST239-MRSA-Ⅲ-t037菌株更强的生存竞争优势,但两克隆的菌株间并不存在明显的交叉抑制现象。结论 ST239-MRSA-Ⅲ-t030克隆的生存竞争优势和独特的耐药表型可能是其成功替代ST239-MRSA-Ⅲ-t037而成为第一流行克隆的原因。

关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌克隆替代生长曲线利福平耐药复方新诺明耐药

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表达丙型肝炎病毒核心蛋白的人肝癌稳定转染细胞株的建立与鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2014年第11期30卷 1137-1141页

作者：乔卿华吕欣雷迎峰杨敬姚敏韩佩君党品香赵海卫翁代慧尹文第四军医大学基础医学部微生物学教研室陕西西安710032 中国人民解放军第152医院检验科河南平顶山467000

目的建立能表达丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV core)的人肝癌细胞SMMC-7721的稳定转染细胞株。方法构建含目的基因HCV core的重组质粒,转染HEK293T细胞,包装获得含ZsGreen和HCV core基因的慢病毒后,感染SMMC-7721人肝癌细胞,采用实时荧光定... 详细信息

目的建立能表达丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV core)的人肝癌细胞SMMC-7721的稳定转染细胞株。方法构建含目的基因HCV core的重组质粒,转染HEK293T细胞,包装获得含ZsGreen和HCV core基因的慢病毒后,感染SMMC-7721人肝癌细胞,采用实时荧光定量PCR检测HCV core mRNA表达,采用免疫荧光细胞化学染色和Western blot法检测HCV core蛋白表达,筛选稳定表达HCV core的细胞株。结果质粒酶切和序列测定证实重组载体构建正确;慢病毒包装48 h后可见清晰ZsGreen表达,感染SMMC-7721细胞后筛选获得稳定转染的细胞株,实时荧光定量PCR检测到HCV core mRNA,免疫荧光细胞化学染色和Western blot法均检测出HCV core蛋白表达。结论成功构建了表达HCV core蛋白的SMMC-7721人肝癌细胞的稳定转染细胞株。

关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白肝癌细胞株慢病毒稳定表达

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金黄色葡萄球菌N315T7噬菌体cDNA展示文库的构建

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第三军医大学学报 2014年第13期36卷 1350-1353页

作者：于俊媛周莹冰张雯庆祁琳李萌姜北张骁鹏汪正清饶贤才黎庶胡晓梅第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038 重庆市渝中区疾病预防控制中心重庆400010

目的构建MRSA N315菌株的T7噬菌体cDNA展示文库，以筛选和鉴定影响N315 ccr基因表达的调节因子。方法采用Tripure试剂提取N315总RNA，逆转录合成双链cDNA，经末端修平、接头连接、酶切后柱洗脱等处理后，连接T7Select 10-3载体，体外... 详细信息

目的构建MRSA N315菌株的T7噬菌体cDNA展示文库，以筛选和鉴定影响N315 ccr基因表达的调节因子。方法采用Tripure试剂提取N315总RNA，逆转录合成双链cDNA，经末端修平、接头连接、酶切后柱洗脱等处理后，连接T7Select 10-3载体，体外包装扩增获得N315 T7噬菌体cDNA展示文库；通过双层平板实验鉴定所建原始文库及扩增文库的库容；PCR鉴定文库插入片段质量。结果原始文库重组克隆数为1.335×106 pfu，扩增文库的噬菌体滴度为3.26×1010 pfu/mL。随机PCR扩增显示文库阳性重组率为100%，插入片段在300～1 500 bp之间。结论 MRSA N315的T7噬菌体cDNA展示文库构建成功。

关键词：噬菌体展示 cDNA文库耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 N315

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金黄色葡萄球菌agr基因敲除及其对膜泡毒力影响

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第三军医大学学报 2014年第4期36卷 331-335页

作者：袁吉振杨杰袁文常胡珍尚伟龙张霞朱军民胡启文周人杰饶贤才第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038 第三军医大学新桥医院急诊科重庆400037

目的利用同源重组技术构建金黄色葡萄球菌RN4220附属基因调节系统(agr)的敲除株,探讨agr基因缺失对金黄色葡萄球菌分泌膜泡毒力的影响。方法分别扩增agr基因的上下游同源臂,利用重叠PCR获得agr基因上下游同源臂的融合片段,经酶切后连接... 详细信息

目的利用同源重组技术构建金黄色葡萄球菌RN4220附属基因调节系统(agr)的敲除株,探讨agr基因缺失对金黄色葡萄球菌分泌膜泡毒力的影响。方法分别扩增agr基因的上下游同源臂,利用重叠PCR获得agr基因上下游同源臂的融合片段,经酶切后连接敲除载体PYT3,构建同源重组质粒pYT3::Δagr,电转化至金黄色葡萄球菌RN4220,利用pYT3质粒对温度敏感的特点筛选agr缺失的突变株。分别制备野生菌RN4220和突变株RN4220::Δagr的膜泡,小鼠毒力实验观察agr基因缺失后对金黄色葡萄球菌膜泡毒力的影响。结果同源重组质粒pYT3::Δagr通过酶切鉴定证明构建成功;经PCR及DNA测序证实获得金黄色葡萄球菌RN4220 agr缺失突变株,重组效率为5.6%;agr突变株与野生株相比,其分泌膜泡的毒力大大降低,72 h内小鼠存活率为100%。结论 agr基因缺失后能够显著降低膜泡的毒力。

关键词：金黄色葡萄球菌膜泡同源重组附属基因调节系统

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丙型肝炎病毒(HCV)非结构区NS3-5B蛋白的真核表达载体构建及其在BHK-21细胞中的表达

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科学技术与工程 2013年第36期21卷 10794-10797,10805页

作者：韩佩君雷迎峰吕欣杨敬姚敏乔卿华党品香尹文第四军医大学基础医学部微生物学与病原生物学教研室西安710032

通过PCR方法扩增出HCV NS3-5b全长基因序列,克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP中,构建重组质粒pIRES2-EGFP-NS3-5b。利用脂质体将该质粒转染至BHK-21细胞,通过荧光成像和Western Blot检测NS3-5b基因的表达。结果显示成功构建了真核表达载体... 详细信息

通过PCR方法扩增出HCV NS3-5b全长基因序列,克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP中,构建重组质粒pIRES2-EGFP-NS3-5b。利用脂质体将该质粒转染至BHK-21细胞,通过荧光成像和Western Blot检测NS3-5b基因的表达。结果显示成功构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-NS3-5b,并且NS3/4A蛋白和NS5B蛋白得到特异性表达,为下一步建立HCV RdRp活性的细胞评价系统和动物模型评价系统奠定了实验和理论基础。

关键词：丙型肝炎病毒(hepatitis e virus HCV) NS3-5B蛋白真核表达

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