检索结果-内蒙古大学图书馆

生物技术通讯 2010年第3期21卷 359-362页

作者：刘安玲赵莉贾春宏李明南方医科大学基因工程研究所基础医学院细胞生物学教研室广东广州510515

目的:构建40S核糖体蛋白S6的原核表达载体,表达并纯化S6蛋白,将其作为底物用于S6激酶(S6K)的体外活性测定。方法:采用RT-PCR方法从人胚肾细胞HEK293中获取S6 cDNA,将扩增产物克隆至大肠杆菌表达载体中,进行酶切及测序鉴定;IPTG诱导GST-S... 详细信息

目的:构建40S核糖体蛋白S6的原核表达载体,表达并纯化S6蛋白,将其作为底物用于S6激酶(S6K)的体外活性测定。方法:采用RT-PCR方法从人胚肾细胞HEK293中获取S6 cDNA,将扩增产物克隆至大肠杆菌表达载体中,进行酶切及测序鉴定;IPTG诱导GST-S6融合蛋白在大肠杆菌中表达,用谷胱甘肽亲和层析纯化GST-S6,免疫沉淀法检测该蛋白是否可作为底物用于S6K的体外激酶活性测定。结果:酶切及测序鉴定表明构建了S6原核表达载体,并表达及纯化出GST-S6融合蛋白,相对分子质量为55×103。该蛋白可用于S6K的体外激酶活性测定,特异性强。结论:S6蛋白的克隆、表达与纯化成功,可用于S6K的体外激酶活性测定,为研究S6K的功能奠定了基础。

关键词：核糖体蛋白S6 S6激酶原核表达体外激酶活性测定

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α干扰素-2bHis^58的分子构建、表达及纯化

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中国医科大学学报 2008年第5期37卷 600-602,606页

作者：王秀刘金毅牛晓霞杨轶金颖彭秀娟王艳中国医科大学基础医学院生理学教研室沈阳110001 北京三元基因工程有限公司北京102600

目的通过定点突变,构建α干扰素-2bHis58(IFNα-2bHis58),以期获得高效的新型药物分子。方法采用PCR体外定点突变技术,使α干扰素-2b基因的第58位密码子由GAA突变为CAC。将扩增片段克隆入pET23b表达载体,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)... 详细信息

目的通过定点突变,构建α干扰素-2bHis58(IFNα-2bHis58),以期获得高效的新型药物分子。方法采用PCR体外定点突变技术,使α干扰素-2b基因的第58位密码子由GAA突变为CAC。将扩增片段克隆入pET23b表达载体,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)。表达的IFNα-2bHis58经包涵体变复性、DEAE层析和CM层析纯化后,用WISH-VSV系统进行生物活性测定。结果IFNα-2bHis58主要以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上。纯化后,IFNα-2bHis58的纯度>95%,比活性>3.4×108IU/mg。结论构建了IFNα-2bHis58的表达载体,并成功在大肠杆菌中表达,获得了高活性突变分子IFNα-2bHis58,建立了IFNα-2bHis58的纯化工艺。

关键词： α干扰素-2b 定点突变蛋白表达蛋白纯化高效

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多中心多肽合成技术筛选人脑乙酰胆碱酯酶C-末端抗原表位

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免疫学杂志 2008年第5期24卷 601-601,603页

作者：张兴梅陈明钟志海南方医科大学基础医学院神经生物学教研室广州510515 南方医科大学基因工程研究所广州510515

乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,ACHE)是神经系统的重要水解酶类,在神经生物学和毒理学中占重要地位。抗原表位(epitope)是仅次于酶活性中心的又一重要功能域。我们已确定人AChE前十个抗原表位的位置和氨基酸序列,但其C-末端(546－... 详细信息

乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,ACHE)是神经系统的重要水解酶类,在神经生物学和毒理学中占重要地位。抗原表位(epitope)是仅次于酶活性中心的又一重要功能域。我们已确定人AChE前十个抗原表位的位置和氨基酸序列,但其C-末端(546－583位)的抗原表位不清楚。所以我们采用多中心多肽技术合成这部分序列的十肽肽库并对其进行筛选,此研究有助于阐明AChE的结构和功能。[第一段]

关键词：乙酰胆碱酯酶表位酶联免疫分析肽库

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巢式逆转录-聚合酶链反应扩增人骨形成蛋白2全长cDNA及其真核表达载体的构建

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第14期11卷 2702-2704页

作者：俞莉敏党耕町杨吉成郑祖根北京大学第三医院骨科北京市100083 苏州大学基础医学院基因工程教研室江苏省苏州市215007 苏州大学附属第二医院骨科江苏省苏州市215004

目的:利用巢式逆转录-聚合酶链反应扩增的方法,从肌肉组织中扩增人骨形成蛋白2全长cDNA并构建真核表达载体系统。方法:实验于2003-10/2005-10在苏州大学基因工程教研室和北京大学第三医院骨科实验室完成。提取成人肌肉组织内的总RNA,设... 详细信息

目的:利用巢式逆转录-聚合酶链反应扩增的方法,从肌肉组织中扩增人骨形成蛋白2全长cDNA并构建真核表达载体系统。方法:实验于2003-10/2005-10在苏州大学基因工程教研室和北京大学第三医院骨科实验室完成。提取成人肌肉组织内的总RNA,设计内外两对引物以巢式逆转录-聚合酶链反应扩增方法分两次扩增出人骨形成蛋白2全长1188bp基因,经T-A克隆装入pUCM-T质粒载体内,测序验证后,将克隆质粒以Hind Ⅲ和Xba Ⅰ双酶切后与pcDNA3.0载体相连接,构建真核表达载体系统。结果:利用巢式逆转录-聚合酶链反应扩增方法能从成人肌肉组织内扩增出1188bp的人骨形成蛋白2全长cDNA基因,其测序结果显示与Genebank报道序列完全相符。将扩增序列双酶切后与pcDNA3.0载体相连接,经电泳验证,能构建人骨形成蛋白2全长基因的真核表达系统。结论:巢式逆转录-聚合酶链反应扩增方法能从成人肌肉组织内扩增出人骨形成蛋白2全长cDNA基因,并克隆构建真核表达载体系统,为下一步基因组织工程人工骨实验奠定基础。

关键词：人骨形态发生蛋白基因克隆巢式RT-PCR

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β3GalT7基因的小干扰RNA筛选及其表达载体构建

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江苏大学学报（医学版） 2007年第2期17卷 93-96页

作者：朱琍燕仇灏岳爱环马珍妮吴艳胡鹤娟吴士良苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室生化工程研究所江苏苏州215123

目的:以β3GalT7(人β1,3-半乳糖基转移酶7)基因为研究对象,运用RNA干扰技术平台,筛选出该基因的有效小干扰siRNA并构建该基因的RNA干扰表达载体,建立其下调表达模型。方法:通过PCR方法筛选针对β3GalT7基因的有效小干扰siRNA,并合成带... 详细信息

目的:以β3GalT7(人β1,3-半乳糖基转移酶7)基因为研究对象,运用RNA干扰技术平台,筛选出该基因的有效小干扰siRNA并构建该基因的RNA干扰表达载体,建立其下调表达模型。方法:通过PCR方法筛选针对β3GalT7基因的有效小干扰siRNA,并合成带有荧光标记的RNA oligo进一步验证其有效性,进而构建该基因的RNA干扰表达载体建立其下调表达模型。结果:成功筛选到β3GalT7基因的有效小干扰siRNA,并进一步成功构建β3GalT7的RNA干扰真核表达载体。结论:成功构建β3GalT7的真核干扰表达载体,继而可以获得β3GalT7表达受抑制的人胃癌细胞SGC7901克隆,为研究该基因在肿瘤发生发展中的作用提供实验模型。

关键词：人β1,3-半乳糖基转移酶7基因小干扰RNA RNA干扰表达载体

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人多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2)RNA干扰载体的构建及鉴定

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江苏大学学报（医学版） 2007年第2期17卷 102-104,110页

作者：仇灏刘可人朱琍燕吴士良苏州大学医学院生化工程研究所基础医学系生物化学与分子生物学教研室江苏苏州215123

目的:构建稳定的转染人多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2)基因的RNA i载体。方法:遵循RNA干扰目标序列的选取原则,对ppGalNAc-T2基因mRNA序列设计五条可能的小干扰RNA(siRNA),PCR方法扩增得到siRNA内源表达系统,转染至人胃癌... 详细信息

目的:构建稳定的转染人多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2)基因的RNA i载体。方法:遵循RNA干扰目标序列的选取原则,对ppGalNAc-T2基因mRNA序列设计五条可能的小干扰RNA(siRNA),PCR方法扩增得到siRNA内源表达系统,转染至人胃癌细胞株SGC7901,运用RT-PCR方法检测筛选得到其中能高效引起ppGal-NAc-T2基因表达沉默的siRNA;化学合成带荧光标记的该段RNA O ligo,转染细胞并用荧光显微镜观察转染情况,进一步鉴定该siRNA对ppGalNAc-T2的抑制作用;构建ppGalNAc-T2的RNA干扰真核表达载体,酶切及测序鉴定后转染SGC7901细胞并经G418筛选得到稳定的ppGalNAc-T2基因敲减细胞株,RT-PCR方法检测该转染细胞株ppGalNAc-T2表达水平。结果:采用RNA i技术,将高表达ppGalNAc-T2的SGC7901细胞的T2表达水平明显降低。结论:成功构建稳定的ppGalNAc-T2基因敲减细胞株,为今后进一步深入研究ppGalNAc-T2的生物学功能奠定了基础。

关键词：多肽 N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2) RNAi SGC7901细胞

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一个中国雄性激素不敏感综合征大家系中AR-Arg^(840)Cys突变的生物学效应

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中国生物化学与分子生物学报 2007年第2期23卷 160-166页

作者：王明华叶璐夷蒋东吴士良赵志民王久存苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室苏州大学附属第一人民医院胸外科贵阳中医学院第一附属医院普外科复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室上海200433

雄性激素不敏感综合征在中国有一个患者大家系.遗传分析表明,雄性激素受体(AR)的Arg840Cys突变是引起本家系疾病的原因.家系中的患者个体呈现高度变异的表型特征.选择具有显著代表性的3个患者个体,成功建立了这些个体的生殖器皮肤成纤... 详细信息

雄性激素不敏感综合征在中国有一个患者大家系.遗传分析表明,雄性激素受体(AR)的Arg840Cys突变是引起本家系疾病的原因.家系中的患者个体呈现高度变异的表型特征.选择具有显著代表性的3个患者个体,成功建立了这些个体的生殖器皮肤成纤维细胞系(GSF),并研究了各细胞系的生长动力曲线和生长周期的分布,发现这些指标和个体病症的严重程度呈一定的正相关性.通过比较野生型与突变性AR的空间结构变化以及转激活能力的变化,结合个体表型的差异性,推测由于个体的基因背景差异,相关AR辅调控因子的表达也会存在着差异,可能最终导致该家系患者显著的表型变化.目前,已利用蛋白质双向电泳,观察到个体间差异表达的蛋白,并在其中寻找AR的辅调控因子,以期进一步阐明AR-Arg840Cys突变一因多效性的机制.

关键词：雄性激素不敏感综合征生殖器皮肤成纤维细胞辅调控因子转激活

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O-糖基化位点预测及糖基化酶催化特点

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生命的化学 2006年第1期26卷 25-27页

作者：刘可人金美芳吴士良苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室苏州大学生化工程研究所苏州215123

O-糖链维持所连接蛋白质部分的空间构象。O-糖基化作为生物体内重要的生物过程,其起始步骤具有复杂的高度选择性,迄今为止还未发现固定的模式。人们通过比较已知O-糖基化部位周围的氨基酸序列,推测出O-糖基化位点的一些规律及其酶的催... 详细信息

O-糖链维持所连接蛋白质部分的空间构象。O-糖基化作为生物体内重要的生物过程,其起始步骤具有复杂的高度选择性,迄今为止还未发现固定的模式。人们通过比较已知O-糖基化部位周围的氨基酸序列,推测出O-糖基化位点的一些规律及其酶的催化特性。

关键词： O-糖基化黏蛋白脯氨酸串联重复 ppGaNTases

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一张适用于总结物质代谢途径的代谢联络图

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生命的化学 2006年第2期26卷 186-188页

作者：方振伟麦荫乔南方医科大学基因工程研究所生物化学教研室广州510515 白求恩医科大学基础医学院生物化学教研室长春130041

介绍了一张适用于总结物质代谢途径之间相互联系的代谢联络图。通过此图可让学生对营养物质代谢、能量代谢及其彼此之间的联系有一个整体的认识,还可显现出各条代谢途径间的枢纽性物质,以总结归纳这些物质的来源和去路,并在分子水平上... 详细信息

介绍了一张适用于总结物质代谢途径之间相互联系的代谢联络图。通过此图可让学生对营养物质代谢、能量代谢及其彼此之间的联系有一个整体的认识,还可显现出各条代谢途径间的枢纽性物质,以总结归纳这些物质的来源和去路,并在分子水平上阐明与代谢有关的某些疾病的原因。

关键词：生物化学代谢途径代谢联络图

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腺病毒载体介导的RNAi对SK-BR-3细胞c-Met表达的影响

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解剖学杂志 2006年第5期29卷 549-552页

作者：赵慧陈东袁振华王忠山吴小兵吉林大学基础医学院组织学与胚胎学教研室长春130021 广东医学院组织学与胚胎学教研室湛江524023 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室北京100052 吉林大学基础医学院细胞生物学教研室长春130021

目的:通过腺病毒载体介导的RNA干扰技术抑制乳腺癌细胞HGF受体c-Met的表达,抑制乳腺癌细胞增殖、诱导细胞凋亡。方法:PCR法获得人U6启动子及带有c-Met反向互补靶序列的片段HU6shmet;利用腺病毒载体将其传递至SK-BR-3细胞;RNA狭缝杂交检... 详细信息

目的:通过腺病毒载体介导的RNA干扰技术抑制乳腺癌细胞HGF受体c-Met的表达,抑制乳腺癌细胞增殖、诱导细胞凋亡。方法:PCR法获得人U6启动子及带有c-Met反向互补靶序列的片段HU6shmet;利用腺病毒载体将其传递至SK-BR-3细胞;RNA狭缝杂交检测SK-BR-3细胞c-Met mRNA水平,Western印迹检测c-Met蛋白水平。结果:获得了带有人U6启动子及c-Met反向互补靶序列的重组腺病毒载体rAdUshmet1和rAdUshmet2。转导了重组腺病毒的SK-BR-3细胞的c-Met mRNA和蛋白相对表达量均有所下降。结论:腺病毒载体rAdUshmet通过抑制HGF受体c-Met表达,能在一定程度上阻断HGF-c-Met信号转导通路,有可能成为对乳腺癌进行基因治疗的有效载体。

关键词： c—Met 肝细胞生长因子腺病毒 RNA干扰

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