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第17届全国干扰素及细胞因子学术会议

作者：凌春华黄锦宏赵大国谢宇锋盛伟华杨吉成苏州大学附属第一医院呼吸内科，苏州 215000 苏州大学基础医学院细胞与分子生物学教研室．苏州 215123

目的：研究用polyA-promoter构建的人肿瘤生长抑制因子4(ING4)和白细胞介素24(IL-24)双基因共表达腺病毒载体Ad-ING4-polyA-promoter-IL-24(简称Ad-ING4-IL-24)对人SPC-Al肺腺癌细胞体内外放疗的增敏作用及潜在的作用机制。方法：将Ad-ING4-IL-24感染SPC-Al细胞，用RT-PCR法及Westem blotting法检测IL-24或/和ING4在SPC-A1细胞中的转录和表达;MTT法和流式细胞仪(FCM)检测PBS组、AdV(空病毒)组、Ad-ING4-IL-24、放疗及Ad-ING4-IL-24加放疗组(联合组)对SPC-Al肺癌细胞的生长抑制作用和凋亡率。采用SPC-Al细胞株建立人肺腺癌裸鼠模型，然后按上述各组进行瘤体内局部注射干预用药，动态测量肿瘤体积，并计算瘤重抑瘤率和Q值：免疫组化检测bax、bcl-2、Survivin、VEGF等基因的表达。结果：Ad-ING4-IL-24作用SPC-Al细胞后，RT-PCR、Westernblotting结果显示目的基因在SPC-AI细胞中成功转录及表达，MIT法和FCM法检测结果示联合组对SPC-Al肺癌细胞的生长抑制率和细胞凋亡率均明显高于Ad-ING4-IL-24组和放疗组(P<0.05)，具有放疗增敏协同作用(Q=1.16)。体内联合组能显著抑制肿瘤生长，瘤重抑瘤率达79.2％，具放疗增敏协同效应(Q值=1.20)，免疫组化结果示联合组能明显上调bax、Caspase-3等基因表达，和下调bcl-2、Survivin、VEGF等基因的表达。结论：本研究结果显示Ad-ING4-IL-24具有放疗增敏的作用，是理想的放疗增敏剂，该作用机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡和抑制血管形成有关。

关键词： ING4基因 IL-24基因放射疗法肺腺癌放疗增敏作用机制

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利培酮和齐拉西酮对精神分裂症病人血浆CK影响

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齐鲁医学杂志 2011年第6期26卷 515-516页

作者：薛晓斌缪竞诚苏州大学基础医学与生物科学学院细胞与分子生物学教研室江苏苏州215100 青岛市精神卫生中心六病房

目的观察精神分裂症病人血浆细胞因子（CK）水平的变化,探讨利培酮和齐拉西酮对病人CK水平的影响。方法采用酶联免疫吸附法,检测50例精神分裂症病人治疗前后白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平,... 详细信息

目的观察精神分裂症病人血浆细胞因子（CK）水平的变化,探讨利培酮和齐拉西酮对病人CK水平的影响。方法采用酶联免疫吸附法,检测50例精神分裂症病人治疗前后白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平,以50名健康人作为对照。结果治疗前后利培酮和齐拉西酮组IL-2、IL-6和TNF-α的水平均高于正常对照组,差异有显著性（F=74.73-140.53,q=14.72-45.06,P〈0.01）;经利培酮及齐拉西酮治疗8周后,IL-2、IL-6和TNF-a水平均明显降低,与治疗前比较差异有显著意义（t=3.34-19.43,P〈0.01）。结论精神分裂症存在CK介导的免疫功能障碍,利培酮和齐拉西酮对CK具有调节作用。

关键词：精神分裂症利培酮齐拉西酮白细胞介素2 白细胞介素6 肿瘤坏死因子α

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腺病毒介导的生长抑制基因4对ECV304细胞体外生长及分泌血管内皮生长因子的影响

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蚌埠医学院学报 2011年第9期36卷 931-935页

作者：张海峰盛伟华缪竞诚陈卫东杨吉成蚌埠医学院第一附属医院肾内科安徽蚌埠233004 苏州大学医学院细胞与分子生物学教研室江苏苏州215123

目的:检测腺病毒介导的生长抑制基因4(adenovirus-mediated inhibitor of growth family member 4,Ad-ING4)感染后ECV304细胞体外生长及分泌血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响,探讨ING4抑制肿瘤生长的可能机制。方法:构建ING4腺病毒载体,用MTT法检测Ad-ING4感染后ECV304细胞体外生长影响,ELISA检测VEGF的分泌情况。结果:Ad-ING4感染后第3天和第4天ECV304细胞体外生长均受到抑制(P<0.01),第4天时抑制率达63.6%,VEGF分泌受到抑制。结论:ING4能抑制ECV304细胞生长及VEGF分泌。Ad-ING4能抑制血管内皮细胞生长和血管的生成,从而可抑制体内肿瘤的生长。

关键词：腺病毒感染生长抑制基因4 血管内皮生长因子血管生成

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华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶基因克隆表达和血清学诊断效果

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中国血吸虫病防治杂志 2011年第6期23卷 682-686页

作者：江文才金小林沈明学曹汉钧徐祥珍蒋岗陶志勇高琪江苏省寄生虫病防治研究所卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室江苏省寄生虫分子生物学重点实验室江苏省寄生虫病学重点学科无锡214064 苏州大学基础医学院寄生虫学教研室

目的克隆、表达华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶(CSCP),并评价其免疫学诊断效果。方法根据已知的CSCP(Gen Bank序列号:AF093242)基因序列设计引物,从华支睾吸虫成虫总cDNA中扩增该目的片段,克隆入真核表达载体pPIC9K,转化至巴斯德毕赤酵母(Pic... 详细信息

目的克隆、表达华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶(CSCP),并评价其免疫学诊断效果。方法根据已知的CSCP(Gen Bank序列号:AF093242)基因序列设计引物,从华支睾吸虫成虫总cDNA中扩增该目的片段,克隆入真核表达载体pPIC9K,转化至巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中,甲醇诱导表达、纯化;采用Westernblot技术鉴定该重组蛋白;用纯化的重组CSCP(rCSCP)免疫小鼠,ELISA法检测抗体效价;应用DotELISA法和Western blot法评估该重组蛋白的诊断效果。结果从华支睾吸虫成虫cDNA中扩增获得长度为927bp的CSCP基因,并成功进行了真核表达、纯化,纯化的rCSCP免疫小鼠后的血清能被华支睾吸虫成虫可溶性抗原识别,其血清抗体效价达1∶64000;采用该重组蛋白建立的DotELISA法检测华支睾吸虫病人的敏感性为91.7%(55/60),检测正常人的特异性为97.6%(82/84);Western blot分析显示,rCSCP与日本血吸虫病人血清无交叉反应,与卫氏并殖吸虫病人交叉反应率为20.0%(2/10)。结论 rCSCP具有较好的诊断效果,是华支睾吸虫重组蛋白中一个有潜在诊断价值的抗原。

关键词：华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶克隆表达免疫诊断效果评价

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pp-GalNAc-T4表达载体的构建

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医药论坛杂志 2011年第24期32卷 131-133页

作者：李喆郭向红吴士良苏州市中医医院药剂科江苏苏州215007 苏州工业园区娄葑医院内科苏州大学基础医学及生物科学学院生物化学与分子生物学教研室

目的构建pp-GalNAc-T4的正义表达载体。方法采用质粒转染法构建真核表达载体。结果构建了pp-GalNAc-T4的正义表达载体,并得到了鉴定。结论构建了pp-GalNAc-T4的正义表达载体,研究发现了在pp-GalNAc-T4c DNA转染NB4细胞株后,在mRNA水平... 详细信息

目的构建pp-GalNAc-T4的正义表达载体。方法采用质粒转染法构建真核表达载体。结果构建了pp-GalNAc-T4的正义表达载体,并得到了鉴定。结论构建了pp-GalNAc-T4的正义表达载体,研究发现了在pp-GalNAc-T4c DNA转染NB4细胞株后,在mRNA水平及蛋白水平能稳定上调pp-GalNAc-T4的表达,可以用于以后的研究。

关键词： pp-GalNAc-T4 载体构建

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RMP基因沉默对肝癌SMMC-7721细胞增殖和迁移能力的影响

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肿瘤 2010年第1期30卷 15-20页

作者：连晓宁杨慧翠曹锴李敏盛伟华王晓婷郭云兰魏文祥苏州大学基础医学与生物科学学院细胞分子生物学教研室苏州215123

目的:建立RMP(RPB5-mediating protein)基因沉默的稳定细胞株,研究RMP小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和迁移的抑制作用。方法:首先,体外合成3条RMP基因的siRNA,并转染到SMMC-7721细胞中,RT-PCR检测3条siRNA对RMP基因表达的抑制作用,筛选出最佳干扰序列;然后,pGPU6-Neo-RMP-484真核表达载体转染,G418筛选出稳定干扰RMP基因的细胞株,RT-PCR法检测该稳定细胞株中RMP基因的干扰效率,MTT法检测RMP-siRNA对SMMC-7721细胞增殖及细胞黏附能力的影响,划痕实验检测细胞迁移能力的变化。结果:利用RNA干扰技术成功建立了RMP基因下调的稳定细胞株,与SMMC-7721细胞对照组比较,其RMP mRNA表达水平下调了(83.67±2.56)%。稳定转染siRNA的细胞株细胞增殖受到抑制,增殖抑制率可达(74.33±0.58)%。稳定转染细胞株的细胞黏附能力有所增加,迁移率则相应降低。结论:成功筛选出了稳定转染RMP-siRNA重组载体的细胞株。pGPU6-Neo-RMP-484重组载体能有效抑制RMP基因在肝癌SMMC-7721细胞内的表达,可作为RMP分子机制研究的细胞模型。RMP基因的下调能有效抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖,使其黏附率增加,同时细胞的迁移率降低。

关键词：癌,肝细胞 RNA干扰细胞增殖细胞运动 RPB5调节蛋白

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多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞免疫调节功能异常及其在骨髓瘤骨病中的作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第9期30卷 853-859页

作者：李炳宗庄文卓陈萍张宏黄海雯傅晋翔苏州大学附属第二医院血液科 215004 苏州大学基础医学系细胞与分子生物学教研室

目的探讨多发性骨髓瘤（MM）患者骨髓间充质干细胞（MSCs）免疫调节功能及其对骨髓瘤骨病的影响.方法分离MM患者和正常对照MSCs,流式细胞技术比较二者的免疫表型.Real-time PCR检测实验组及对照组MSCs的TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、I... 详细信息

目的探讨多发性骨髓瘤（MM）患者骨髓间充质干细胞（MSCs）免疫调节功能及其对骨髓瘤骨病的影响.方法分离MM患者和正常对照MSCs,流式细胞技术比较二者的免疫表型.Real-time PCR检测实验组及对照组MSCs的TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、IL-6、IL-3、TNF-α、FasL和NF-κB配体的受体激活物（RANKL）表达量.共培养系统与流式细胞术检测MSCs对T细胞增殖、凋亡和早期活化标志CD25和CD69表达的影响.Von kossa染色、real-time PCR和Western blot等技术检测T细胞对正常对照MSCs向成骨细胞分化的影响.结果 MM来源和正常对照MSCs具有相似的形态学和免疫表型.MM来源的MSCs表达TGF-β1、IL-6、IL-3、TNF-α和RANKL较正常对照MSCs增加,而TGF-β2、TGF-β3和FasL的表达下降.MM来源的MSCs对T细胞增殖的抑制作用明显减弱.正常对照MSCs较MM来源MSCs使更多T细胞静止于G0/G1期.正常对照MSCs明显促进T细胞凋亡,而MM来源的MSCs对T细胞的促凋亡作用减弱.正常对照MSCs明显抑制T细胞活化分子表达,而MM患者的MSCs此抑制作用明显降低.与MM患者的MSCs共培养后的T细胞以及直接来源于MM患者的T细胞均可以明显抑制正常对照MSCs向成骨细胞分化.结论 MM患者的MSCs免疫调节功能较正常对照MSCs降低,主要表现为抑制T细胞活化的功能减弱,而活化的T细胞可抑制MSCs向成骨细胞分化,此可能为骨髓瘤骨病发病机制之一.

关键词：多发性骨髓瘤间充质干细胞 T细胞免疫调节功能骨髓瘤骨病

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Ad-ING4抑制人A549肺癌细胞及其裸鼠移植瘤的生长

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江苏医药 2010年第5期36卷 541-545页

作者：杜贤荣杨吉成谢宇锋盛伟华朱晔涵苏州大学附属第一医院呼吸病科 215006 苏州大学基础医学院细胞与分子生物学教研室

目的研究腺病毒介导的ING4基因(Ad-ING4)对肺癌体内外的抑制作用及其潜在的分子机制。方法体外采用50 MOI的Ad-ING4感染A549肺癌细胞,并用MTT法检测Ad-ING4对A549细胞的抑制作用,流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡率。采用A549细胞株建立人... 详细信息

目的研究腺病毒介导的ING4基因(Ad-ING4)对肺癌体内外的抑制作用及其潜在的分子机制。方法体外采用50 MOI的Ad-ING4感染A549肺癌细胞,并用MTT法检测Ad-ING4对A549细胞的抑制作用,流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡率。采用A549细胞株建立人肺癌裸鼠模型,瘤体局部注射干预用药,每隔5天测量一次肿瘤体积,并计算瘤重抑瘤率;瘤块免疫组化检测ING4、生存素(survivin)、CD34、HIF-1等基因的表达。结果Ad-ING4感染A549细胞抑制率可达47.62%;72 h凋亡率为18.5%;荷瘤裸鼠经治疗后,Ad-ING4组和顺铂(DDP)组的肿瘤体积、瘤重均明显缩小,其抑瘤率分别达到42.43%和46.47%,DDP组出现不良反应;免疫组化检测Ad-ING4组和DDP组与对照组比较,生存素、CD34、HIF-1的表达下调(P<0.01)。结论Ad-ING4对人A549肺癌细胞及其裸鼠移植瘤的生长具有明显的抑制作用。其抑瘤机制可能与下调生存素、CD34、HIF-1的基因表达进而诱导肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤血管形成等有关。

关键词： Ad-ING4 肺癌裸鼠移植瘤生长抑制

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IRES/polyA-promoter介导的Ang-1与VEGF165双基因表达效率的对比分析

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中国生物工程杂志 2010年第12期30卷 10-19页

作者：陈瑶缪竞诚韩亚丽盛伟华包婉蓉田丽娜张凤娟吕海涛杨吉成苏州大学医学部基础医学与生物科学学院细胞与分子生物学教研室苏州215123 苏州大学附属儿童医院苏州215006

目的：构建IRES及polyA-promoter介导人血管生成素-1（Angiogenin-1,Ang-1）和人血管内皮生长因子165（vascular endothelial growth factor165,VEGF165）双基因共表达的腺病毒载体,比较IRES与polyA-promoter不同表达模式及其对位于二者前后基因的表达效率和诱导兔角膜新生血管的形成功能,为今后构建双基因或多基因高效共表达载体提供实验依据。方法：以pAdTrack-CMV-Ang-1-IRES-VEGF165质粒为模板,PCR扩增人VEGF165及Ang-1基因片段,分别将其亚克隆至改建的pAdTrack-CMV-PolyA-promoter及pAdTrack-CMV-IRES转移质粒中,构建pTrack-CMV-Ang-1-polyA-promoter-VEGF165、pTrack-CMV-VEGF165-polyA-promoter-Ang-1、pTrack-CMV-VEGF165-IRES-Ang-1基因重组转移质粒,再与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细菌中同源重组,然后经PacI线性化后转染QBI-293A人胚肾成纤维细胞（简称293A细胞）,收获腺病毒重组病毒子Ad-Ang-1-polyA-promoter-VEGF165及Ad-VEGF165-polyA-promoter-Ang-1,Ad-VEGF165-IRES-Ang-1,RT-PCR检测Ang-1和VEGF165在QBI-293A细胞中的转录,ELISA法分别检测不同腺病毒载体目的基因的表达量,比较分析Ang-1与VEGF165基因在IRES和polyA-promoter介导的不同腺病毒表达载体中的表达能力,及在同一腺病毒表达载体中前后不同位置的表达效率。并进一步于兔角膜缘注射Ad-Ang-1-polyA-promoter-VEGF165,Ad-VEGF165-polyA-promoter-Ang-1,Ad-VEGF165-IRES-Ang-1,Ad-Ang-1-IRES-VEGF165,检测角膜新生血管的面积,并比较其诱导血管形成能力的差异。结果：测序显示Ang-1和VEGF165序列正确,不同重组腺病毒载体均获得成功包装,病毒效价可达2~5×1010pfu/m l,RT-PCR检测Ang-1和VEGF165均能有效转录,ELISA法检测结果表明Ang-1、VEGF165基因不仅均能在细胞中有效表达,而且IRES介导的Ang-1及VEGF165基因,无论在IRES上游或下游,其表达量均低于polyA-promoter相同位置的Ang-1及VEGF165基因表达量,大约降低60%~70%左右,同时Ang-1/VEGF165在同一载体上、下游不同位置,其下游基因的表达量均明显低于上游基因表达量,大约降低30%~40%左右。角膜血管形成动物实验的结果表明Ad-VEGF165-PolyA-promoter-Ang-1及Ad-VEGF165-IRES-Ang-1诱导角膜新生血管形成面积和血管密度的能力相对较强,且前者比后者效果更为显著。结论：在腺病毒表达载体中,由IRES/polyA-promoter介导的Ang-1与VEGF165双基因均能在细胞中成功表达,并具血管诱导性,但polyA-promoter比IRES介导的双基因表达效率高,诱导血管形成能力强;同时两者下游基因的表达量及血管诱导性能均明显低于上游基因。

关键词：血管生成素-1 血管内皮生长因子 IRES PolyA-promoter 构建

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双基因共表达的重组腺病毒载体对人A549肺癌细胞的抑癌增效作用

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中华结核和呼吸杂志 2010年第12期33卷 943-945页

作者：朱晔涵杜贤荣陈华昕谢宇锋盛伟华黄建安杨吉成苏州大学附属第一医院呼吸内科 215006 苏州大学附属第一医院基础医学院细胞与分子生物学教研室 215006

生长抑制因子4（inhibitor of growth 4,ING4）基因是近年来新发现的一种肿瘤抑制因子,广泛参与肿瘤的发生及发展过程,并可增强化疗药物的敏感性.ING4主要在细胞内发挥抑癌作用.

关键词：双基因共表达抑癌作用重组腺病毒载体增效作用肺癌细胞 A549 肿瘤抑制因子生长抑制因子

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