检索结果-内蒙古大学图书馆

南京医科大学学报（自然科学版） 2008年第10期28卷 1221-1228页

作者：陆向东杨吉成谭洁程晓赪周俊东李汉冲南京医科大学附属苏州医院血液肿瘤科江苏苏州215001 苏州大学医学院细胞与分子生物学教研室江苏苏州215123

目的:研究肿瘤生长抑制基因4(inhibitor of growth family4,ING4)体外对胃癌细胞SGC-7901的生长抑制及其分子机制。方法:将携带有人ING4基因的重组复制缺陷型腺病毒(Ad-hING4)感染胃癌细胞SGC-7901,RT-PCR法检测腺病毒介导的外源性hING... 详细信息

目的:研究肿瘤生长抑制基因4(inhibitor of growth family4,ING4)体外对胃癌细胞SGC-7901的生长抑制及其分子机制。方法:将携带有人ING4基因的重组复制缺陷型腺病毒(Ad-hING4)感染胃癌细胞SGC-7901,RT-PCR法检测腺病毒介导的外源性hING4基因的转录,MTT法检测hING4基因对SGC-7901细胞的生长抑制作用,激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察hING4基因诱导SGC-7901细胞凋亡的形态学改变,流式细胞仪(FACS)检测hING-4基因诱导胃癌细胞SGC-7901的凋亡率及细胞周期改变,免疫细胞化学分析凋亡相关因子bcl-2和bax的改变。结果:Ad-hING4感染SGC-7901细胞后,RT-PCR结果提示有hING4目的基因的转录,该基因表达可以显著抑制SGC-7901细胞的生长,诱导S期减少、G2/M期阻滞和凋亡,hING4基因能使SGC-7901细胞中bcl-2的表达下调和bax的表达上调。结论:重组腺病毒Ad-hING4对胃癌细胞SGC-7901具有显著的生长抑制及凋亡诱导作用,其作用机制可能与下调bcl-2基因和上调bax基因的表达有关。

关键词： ING4 腺病毒载体基因治疗胃癌细胞凋亡

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(m→h)ING4腺病毒载体构建和对A549肺癌细胞体内外生长的抑制效应

(m→h)ING4腺病毒载体构建和对A549肺癌细胞体内外生长的抑制效应

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第16次全国干扰素及细胞因子学术会议

作者：张海峰章春花盛伟华王金志谢宇锋缪竞诚杨吉成苏州大学医学院细胞与分子生物学教研室苏州 215123

研究携带人源化改造的(m→h)ING-4(肿瘤生长抑制因子4)基因的腺病毒表达载体对A549肺癌细胞体内外生长的抑制效应,为进一步开展肿瘤临床基因治疗奠定基础.以pcDNA3.0-mING-4重组质粒为模板,通过定点突变技术构建携带人源化改造的(m→h)I... 详细信息

研究携带人源化改造的(m→h)ING-4(肿瘤生长抑制因子4)基因的腺病毒表达载体对A549肺癌细胞体内外生长的抑制效应,为进一步开展肿瘤临床基因治疗奠定基础.以pcDNA3.0-mING-4重组质粒为模板,通过定点突变技术构建携带人源化改造的(m→h)ING-4基因的腺病毒表达载体,采用腺病毒载体的基因重组和体外包装技术获得表达人ING-4氨基酸序列的重组腺病毒子[Ad-(m→h)ING4],体外用MTT法检测Ad-(m→h)ING4对A549肺癌细胞的生长抑制作用,体内通过建立荷瘤裸鼠模型,检测Ad-(m→h)ING4对A549肺癌细胞移植瘤体内生长的影响,结果显示体内及体外生长抑制率分别达55％和60％.因此我们成功构建了Ad-(m→h)ING4腺病毒载体,抗肿瘤实验结果表明能在体内外抑制A549肺癌细胞及其移植瘤的生长。

关键词： ING-4 干扰素腺病毒载体抗肿瘤肺癌细胞生长抑制基因治疗

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rhIFN-Epsilon在大肠杆菌中的高效表达和纯化

rhIFN-Epsilon在大肠杆菌中的高效表达和纯化

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第16次全国干扰素及细胞因子学术会议

作者：单云波盛伟华谢宇锋杨吉成苏州大学医学院细胞与分子生物学教研室 215123

目的:构建人干扰素Epsilon(hlFN-ε)蛋白重组质粒并在BL21大肠杆菌中表达,经纯化获得高纯度的产物,为研究其生物活性和功能奠定基础。方法:采用PCR方法从重组质粒pcDNA3.1A-hIFN-ε中扩增出人1FN-ε基因片段,定位克隆入pET30a(+)中... 详细信息

目的:构建人干扰素Epsilon(hlFN-ε)蛋白重组质粒并在BL21大肠杆菌中表达,经纯化获得高纯度的产物,为研究其生物活性和功能奠定基础。方法:采用PCR方法从重组质粒pcDNA3.1A-hIFN-ε中扩增出人1FN-ε基因片段,定位克隆入pET30a(+)中;重组表达载体pET30a-6his-hIFN-F转化BL21,经PCR、酶切和测序鉴定后,将不同时间诱导的表达产物进行SDS-PAGE凝胶电泳分析,确定最佳诱导时间,表达产物经Ni-TA亲和层析纯化。结果:已成功构建了重组原核表达质粒pET30a-6his-hIFN-ε,在0.5mmol/LIPTG下诱导7h左右目的蛋白在大肠杆菌中表达量最高,并以包涵体形式呈现,占总菌体蛋白的37.1％,经亲和层析纯化,获得了纯度达到95.1％左右的rhIFN-Epsilon蛋白。结论:rhIFN-Epsilon在大肠杆菌中获得了高效表达,并获得了高纯度的rhIFN-ε蛋白产物。

关键词：干扰素Ⅰ型蛋白重组质粒包涵体大肠杆菌基因表达分离纯化

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腺病毒介导的ING4对A549肺癌细胞体外转移浸润及MMP2、MMP9mRNA表达的影响

腺病毒介导的ING4对A549肺癌细胞体外转移浸润及MMP2、MMP9mRNA表...

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第16次全国干扰素及细胞因子学术会议

作者：张海峰章春花盛伟华王金志谢宇锋缪竞诚杨吉成苏州大学医学院细胞与分子生物学教研室苏州 215123

目的:检测Ad-ING4感染后对A549肺癌细胞体外转移浸润及MMP2、MMPgmRNA表达影响,探讨ING4抗肿瘤的可能机制. 方法:侵袭小室检测Ad-ING4感染后A549肺癌细胞体外转移浸润情况,荧光定量PCR技术检测MMP-2和MMP-9 mRNA表达的变化. 结果:... 详细信息

目的:检测Ad-ING4感染后对A549肺癌细胞体外转移浸润及MMP2、MMPgmRNA表达影响,探讨ING4抗肿瘤的可能机制. 方法:侵袭小室检测Ad-ING4感染后A549肺癌细胞体外转移浸润情况,荧光定量PCR技术检测MMP-2和MMP-9 mRNA表达的变化. 结果:Ad-ING4感染后A549肺癌细胞体外转移浸润受到抑制,MMP-2和MMP-9 mRNA表达下降. 结论:ING4能抑制A549肺癌细胞体外转移浸润及MMP2、MMP9mRNA表达.

关键词：腺病毒介导干扰素肺癌细胞体外转移浸润 MMP2 MMP9 RNA表达抗肿瘤机制

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腺病毒介导的ING4对A549肺癌细胞分泌VEGF和IL-6、IL-8的影响

腺病毒介导的ING4对A549肺癌细胞分泌VEGF和IL-6、IL-8的影响

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第16次全国干扰素及细胞因子学术会议

作者：张海峰章春花盛伟华王金志谢宇锋缪竞诚杨吉成苏州大学医学院细胞与分子生物学教研室苏州 215123

目的:检测Ad-ING4感染后A549肺癌细胞分泌VEGF和IL-6、IL-8的变化,探讨ING4抑制肿瘤生长的可能机制. 方法:用ELISA法检测Ad-ING4感染后A549肺癌细胞分泌VEGF和IL-6、IL-8的变化,并用荧光定量PCR检测了IL-6、IL-8mRNA表达情况. 结... 详细信息

目的:检测Ad-ING4感染后A549肺癌细胞分泌VEGF和IL-6、IL-8的变化,探讨ING4抑制肿瘤生长的可能机制. 方法:用ELISA法检测Ad-ING4感染后A549肺癌细胞分泌VEGF和IL-6、IL-8的变化,并用荧光定量PCR检测了IL-6、IL-8mRNA表达情况. 结果:Ad-ING4感染后A549肺癌细胞分泌IL-6、IL-8大为减少,IL-6、IL-8mRNA表达下降.VEGF无明显改变. 结论:ING4能下调IL-6、IL-8表达,ING4可能通过影响IL-6、IL-8的表达影响A549肺癌细胞的生长、浸润转移、及肿瘤血管生成.

关键词：腺病毒介导肺癌细胞分泌 ING4 VEGF IL-6 IL-8 抗肿瘤生长

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RMP在肝癌细胞基因组稳定性和凋亡中的作用

RMP在肝癌细胞基因组稳定性和凋亡中的作用

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华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会

作者：李敏杨慧翠杨吉成盛伟华连晓宁曹锴魏文祥苏州大学基础医学与生物科学学院细胞与分子生物学教研室

研究RPB5调节蛋白（RMP）在正常肝细胞及肝癌细胞基因组稳定性中的作用,并探讨其与细胞凋亡的相关性。采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）从mRNA水平检测正常细胞系及多种肿瘤细胞系中RMP的表达。不同剂量Coγ射线照射SMMC-7721细胞和... 详细信息

研究RPB5调节蛋白（RMP）在正常肝细胞及肝癌细胞基因组稳定性中的作用,并探讨其与细胞凋亡的相关性。采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）从mRNA水平检测正常细胞系及多种肿瘤细胞系中RMP的表达。不同剂量Coγ射线照射SMMC-7721细胞和正常肝细胞HL-7702细胞,RT-PCR法检测RMP的表达,流式细胞技术检测照射后肝癌细胞周期变化及细胞凋亡。应用RNA干扰技术研究RMP在肝癌细胞基因组稳定性中的作用。正常细胞系及多种肿瘤细胞系中RMP基因均有不同程度的表达。经Coγ射线诱导的肝癌细胞及正常肝细胞RMP表达水平明显升高,且有一定剂量依赖性。随着照射剂量增加细胞凋亡明显增多,细胞周期G期增高,而S期明显降低。RMP被干扰后,电子显微镜观察细胞形态发送明显改变,p21基因表达减弱。RMP具有维持细胞基因组稳定性的潜在作用。RMP的表达与p53、p21等具有一定相关性,可能与后者协同调节细胞凋亡过程。

关键词：肝癌细胞 RNA干扰 RMP基因放疗基因组稳定性

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延长因子的过表达引发293T细胞的G1期阻滞及生长抑制

延长因子的过表达引发293T细胞的G1期阻滞及生长抑制

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华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会

作者：魏文祥孙冬梅李敏杨惠翠杨吉成缪竞诚苏州大学基础医学与生物科学学院细胞与分子生物学教研室

延长因子复合体(Elongator complex)与磷酸化的RNA聚合酶Ⅱ相结合,参与了转录的延长阶段及RNA的处理(RNA prosessing)等过程。为了研究延长因子复合体对细胞生长的影响,我们建立了ELP3和ELP4稳定表达的细胞株。应用免疫沉淀方法我们从E... 详细信息

延长因子复合体(Elongator complex)与磷酸化的RNA聚合酶Ⅱ相结合,参与了转录的延长阶段及RNA的处理(RNA prosessing)等过程。为了研究延长因子复合体对细胞生长的影响,我们建立了ELP3和ELP4稳定表达的细胞株。应用免疫沉淀方法我们从ELF3稳定表达的细胞株中纯化了ELP1/ELP2/ELP3的核心复合物(core Elongator),而在ELP4稳定表达的细胞株只分离得到游离的ELP4,表明ELP3和ELP4并不存在于同一复合体中。流式细胞技术显示ELP3的过度表达致使大部分的293T细胞被阻滞在G1期,表明延长因子复合体参与了细胞周期限制点的调节。ELP3可以提高VP16的激活转录。ELP4对激活转录没有明显的作用,但却能与ELP3协调提高激活转录。

关键词： ELP 稳定表达复合体细胞株延长因子生长抑制

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Ad-ING4、IL-24的肿瘤基因治疗

Ad-ING4、IL-24的肿瘤基因治疗

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第16次全国干扰素及细胞因子学术会议

作者：杨吉成苏州大学医学部基础医学系细胞分子生物学教研室

针对各种肿瘤发生、发展机制，肿瘤基因治疗大致从以下几个方面着手，包括抑制癌基因的表达活性，补偿肿瘤抑制基因的活性，抑制血管生成，免疫基因治疗，自杀基因疗法，肿瘤多药耐药基因治疗等。本文介绍了肿瘤基因治疗的策略，对目前... 详细信息

针对各种肿瘤发生、发展机制，肿瘤基因治疗大致从以下几个方面着手，包括抑制癌基因的表达活性，补偿肿瘤抑制基因的活性，抑制血管生成，免疫基因治疗，自杀基因疗法，肿瘤多药耐药基因治疗等。本文介绍了肿瘤基因治疗的策略，对目前肿瘤基因治疗研究面临的主要问题及展望进行了论述，并就ING4,hIL24的肿瘤基因治疗情况进行了简述。

关键词： Ad-ING4 IL-24 肿瘤基因治疗细胞因子基因表达

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IL-31重组腺病毒载体的构建及鉴定

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临床和实验医学杂志 2008年第6期7卷 17-19页

作者：黄俊琼张海峰章春花胡永林遵义医学院附属医院检验科贵州遵义563003 苏州大学医学院细胞与分子生物学教研室江苏苏州215123

目的构建并鉴定人白细胞介素31(IL-31)重组腺病毒Ad-IL-31,为下一步IL-31功能研究奠定基础。方法以pGEM-T-IL-31为模板扩增IL-31基因,将其克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,PmeⅠ线性化后与腺病毒骨架质粒共转化BJ5183细菌,获得重组腺... 详细信息

目的构建并鉴定人白细胞介素31(IL-31)重组腺病毒Ad-IL-31,为下一步IL-31功能研究奠定基础。方法以pGEM-T-IL-31为模板扩增IL-31基因,将其克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,PmeⅠ线性化后与腺病毒骨架质粒共转化BJ5183细菌,获得重组腺病毒质粒pAd-IL-31,经PacⅠ线性化后转染QBI-293A细胞,荧光显微镜下观察细胞内荧光,测定病毒效价,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹(westernblot)分析细胞内IL-31信使核糖核酸(mRNA)和蛋白质的表达。结果经双酶切及基因扩增仪鉴定,重组穿梭质粒和重组腺病毒质粒均见500bp插入片段,测序结果和基因库中的基因序列一致;重组病毒效价为2.6×108pfu/ml;重组病毒感染后,QBI-293A细胞中有IL-31mRNA和蛋白质表达。结论成功构建IL-31重组腺病毒载体,并在QBI-293A细胞中表达,为进一步研究IL-31的功能奠定了基础。

关键词： IL-31 重组腺病毒构建表达

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N-乙酰氨基半乳糖转移酶2对胃癌细胞SGC7901黏附迁移能力的影响

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江苏大学学报（医学版） 2008年第3期18卷 223-226,I0002页

作者：岳爱环行书丽唐春花徐岚吴士良苏州大学基础医学与生物科学学院生化与分子生物学教研室生化工程研究所江苏苏州215123

目的:探讨N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(Polypeptide:N-acetylgalactosam inytransferases 2,ppGalNAc-T2)对胃癌细胞SGC7901黏附迁移的影响。方法:将ppGalNAc-T2正义载体(pEGFP-C1-T2)、空载体(pEGFP-C1)及干扰载体(pS ilenC irc le)转染SGC7901细胞,采用反转录PCR方法检测其在mRNA水平表达,分别通过细胞黏附实验和穿膜实验检测其黏附力和迁移力变化。结果:转染正义ppGalNAc-T2的SGC7901细胞比转染干扰载体的SGC7901细胞对纤连蛋白、基质胶和透明质酸的黏附能力低,但其侵袭迁移能力没有变化。结论:ppGalNAc-T2低表达可能与肿瘤浸润转移具有相关性。

关键词： N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2) 胃癌细胞SGC7901 黏附迁移

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