检索结果-内蒙古大学图书馆

中国免疫学杂志 2006年第12期22卷 1086-1091页

作者：谢宇锋盛伟华缪竞诚杨吉成苏州大学医学院细胞和分子生物学教研室苏州215123

目的:构建重组原核表达载体pGEX-5X-3/hIL-17F,使其在大肠杆菌中表达,获得GST-hIL-17F融合蛋白,并研究其生物学活性。方法:利用PCR法从自行构建的含hIL-17F基因的pUCm-T/hIL-17F载体中扩增其成熟肽基因序列,亚克隆于pGEX-5X-3中,构建原... 详细信息

目的:构建重组原核表达载体pGEX-5X-3/hIL-17F,使其在大肠杆菌中表达,获得GST-hIL-17F融合蛋白,并研究其生物学活性。方法:利用PCR法从自行构建的含hIL-17F基因的pUCm-T/hIL-17F载体中扩增其成熟肽基因序列,亚克隆于pGEX-5X-3中,构建原核表达载体pGEX-5X-3/hIL-17F,并在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导表达包涵体融合蛋白,经纯化后进行Westernblot鉴定。MTT法分析GST-hIL-17F纯品蛋白对人脐静脉内皮细胞ECV304的生长抑制作用,ELISA法检测对ECV304内皮细胞表达IL-6、IFN-γ和TNF-α的生物学作用,并采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)法分析其对血管形成的影响结果:GST-hIL-17F融合蛋白在大肠杆菌BL21中获得了高效表达,约占菌体总蛋白的55%,能产生约41kD的融合蛋白,且Westernblot证实确为GST-hIL-17F目的蛋白。GST-hIL-17F具有明显抑制ECV304内皮细胞增殖和上调表达IL-6的生物学效应,并具有显著的抗血管形成活性。结论:hIL-17F重组原核表达和血管形成抑制效应的初步研究已获成功,为进一步研究rhIL-17F的抗血管形成机制和临床应用奠定了基础。

关键词：白细胞介素17F GST-融合蛋白生长抑制血管形成

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重组人IL-18在大肠杆菌中的表达及其抗肿瘤作用

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中国免疫学杂志 2006年第2期22卷 141-144页

作者：张海峰盛伟华缪竞诚谢宇锋李丽娥马丽丽庄文卓杨吉成苏州大学医学院细胞和分子生物学教研室苏州215007

目的:获取rhIL-18原核表达产物并研究其活性。方法:用本室构建的含基因重组表达载体PBV220-IL-18的大肠杆菌DH5α,经42℃热诱导表达和包涵体提取纯化后获取rhIL-18蛋白;采用ELISA试剂盒检测rhIL-18刺激PBMC分泌IFN-γ的活性及MTT法检测... 详细信息

目的:获取rhIL-18原核表达产物并研究其活性。方法:用本室构建的含基因重组表达载体PBV220-IL-18的大肠杆菌DH5α,经42℃热诱导表达和包涵体提取纯化后获取rhIL-18蛋白;采用ELISA试剂盒检测rhIL-18刺激PBMC分泌IFN-γ的活性及MTT法检测其对NK细胞杀伤K562细胞自然杀伤活性;同时用荷瘤小鼠模型检测其体内抗瘤功能。结果:诱导含重组表达载体PBV220-IL-18的大肠杆菌DH5α后,蛋白电泳显示出一条相对分子量(Mr)为18 000的蛋白条带;10μgrhIL-18蛋白体外刺激PBMC后,其分泌IFN-γ的能力与对照组相比提高了8倍,细胞毒性提高3倍;同时rhIL-18蛋白能明显抑制肿瘤生长和延长荷瘤鼠生存期。结论:获得了有免疫调节功能和抗肿瘤活性的rhIL-18蛋白,为今后IL-18重组产物的研制和开展肿瘤的生物治疗提供了实验依据。

关键词：白介素18 基因表达免疫调节功能抗肿瘤活性

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人多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2基因反义RNA表达质粒的构建及其功能的初步研究

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中国生物化学与分子生物学报 2006年第1期22卷 43-48页

作者：仇灏金美芳周迎会孙其昌刘可人沈宏杰吴士良苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室苏州215007

反义封闭人多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(pp-GalNAc-T2)的基因表达,对胃癌细胞SGC7901中转化生长因子-β1(TGF-β1)与基质金属蛋白酶2(MMP2)基因表达及细胞增殖有影响.在对几株肿瘤细胞的pp-GalNAc-T2基因表达水平进行分析后,以高表达pp... 详细信息

反义封闭人多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(pp-GalNAc-T2)的基因表达,对胃癌细胞SGC7901中转化生长因子-β1(TGF-β1)与基质金属蛋白酶2(MMP2)基因表达及细胞增殖有影响.在对几株肿瘤细胞的pp-GalNAc-T2基因表达水平进行分析后,以高表达pp-GalNAc-T2的人胃癌细胞株SGC7901的总RNA为模板,利用RT-PCR方法扩增两段不同长度pp-GalNAc-T2基因片段,构建反义表达载体转染胃癌细胞SGC7901,通过G418筛选,建立一系列旨在封闭胃癌细胞SGC7901ppGalNAc-T2基因表达的亚细胞克隆.通过流式细胞术、荧光显微镜、RT-PCR及Western印迹检测反义封闭pp-GalNAc-T2基因RNA表达后胃癌细胞SGC7901增殖以及TGF-β1、MMP2表达水平的变化.反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达后,胃癌细胞SGC7901 pp-GalNAc-T2的表达水平明显降低,细胞分裂增殖减慢,表明反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达对胃癌细胞SGC7901的生长增殖有影响.结果还显示,反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达可使TGF-β1、MMP2基因在mRNA与蛋白质表达水平均增加,提示pp-GalNAc-T2基因表达可能对胃癌细胞SGC7901浸润转移产生影响.以上结果表明,pp-GalNAc-T2基因在肿瘤细胞中广泛表达,并可能与肿瘤的增殖及浸润转移相关.

关键词：多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶基质金属蛋白酶转化生长因子-β1 SGC7901细胞

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ING4的原核表达及多克隆抗体的制备

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苏州大学学报（医学版） 2006年第6期26卷 930-932,935页

作者：王金志缪竞诚盛伟华谢宇锋杨吉成苏州大学医学院基础医学系细胞与分子生物学教研室江苏苏州215123

目的在原核系统中表达并纯化ING4蛋白,制备多克隆抗体。方法构建表达载体pET-21a(+)-ING4,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳检测。结果构建的表达载体pET-21a(+)-hGDNF经酶切、PCR鉴定均出现750 bp左右的条带,测序结... 详细信息

目的在原核系统中表达并纯化ING4蛋白,制备多克隆抗体。方法构建表达载体pET-21a(+)-ING4,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳检测。结果构建的表达载体pET-21a(+)-hGDNF经酶切、PCR鉴定均出现750 bp左右的条带,测序结果正确,用IPTG诱导转化菌有30KD大小的目的条带,表达的目的蛋白占菌体总蛋白10%以上,以包涵体形式存在,纯化后其纯度可达70%以上。用纯化的ING4蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。结论制备的多克隆抗体为下阶段的研究提供了重要的实验材料。

关键词：原核表达抗体 ING4

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抗果蝇paf1复合体抗体的制备及其特性(英文)

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生理学报 2006年第6期58卷 521-528页

作者：魏文祥杨吉成庄文卓白艳艳盛伟华缪竞诚苏州大学医学院细胞与分子生物学教研室苏州215123新泽西医学及齿科大学苏州大学医学院细胞与分子生物学教研室美国浩伍得·休斯医学研究所匹斯卡韦08854 罗伯特·伍得·约翰医学院生物化学系核酸酶研究室

Paf1复合体已在酵母菌被发现,并阐明了其在转录及RNA加工过程中发挥功能。我们在果蝇基因组数据库中鉴定出paf1的三个同源成分:paf1,CDC73和RTF1。应用纯化的重组蛋白,我们制备了抗果蝇paf1,CDC73和RTF1的抗体。这些抗体不但能够检测出... 详细信息

Paf1复合体已在酵母菌被发现,并阐明了其在转录及RNA加工过程中发挥功能。我们在果蝇基因组数据库中鉴定出paf1的三个同源成分:paf1,CDC73和RTF1。应用纯化的重组蛋白,我们制备了抗果蝇paf1,CDC73和RTF1的抗体。这些抗体不但能够检测出果蝇内源性paf1成分,而且能检测出人类的paf1复合体的亚基。在多线染色体上,这些抗体所检测到的paf1复合体均位于转录的活性位点,并且与磷酸化的RNA聚合酶重合,表明果蝇paf1复合体参与了转录及其相关的分子活动。

关键词： paf1复合体 paf1 CDC73 RTF1 转录

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mING基因的腺病毒载体的构建与表达

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苏州大学学报（医学版） 2006年第4期26卷 547-549,567页

作者：章春花张海峰盛伟华王金志叶震敏杨吉成缪竞诚苏州大学医学院细胞与分子生物学教研室江苏苏州215123

目的构建鼠ING4(肿瘤生长抑制因子4)的腺病毒载体,获得鼠ING4(mING4)重组腺病毒子,为ING4进行肿瘤的基因治疗奠定基础。方法以pcDNA3.0-mING4重组质粒为模板,PCR扩增mING4,酶切连接到带有GFP标记的pAdTrack-CMV质粒上,PmeI线性化重组质... 详细信息

目的构建鼠ING4(肿瘤生长抑制因子4)的腺病毒载体,获得鼠ING4(mING4)重组腺病毒子,为ING4进行肿瘤的基因治疗奠定基础。方法以pcDNA3.0-mING4重组质粒为模板,PCR扩增mING4,酶切连接到带有GFP标记的pAdTrack-CMV质粒上,PmeI线性化重组质粒pAdTrack-CMV-mING4,与腺病毒质粒pAdeasy-1共转化BJ5183细菌,获得重组腺病毒表达载体pAdeasy-1-pAdTrack-CMV-mING4,经PacI线性化后转染293细胞,收获腺病毒重组病毒子,RT-PCR鉴定,并用MTT法检测mING4对肝癌细胞SMMC7721的作用。结果成功构建mING4的重组腺病毒表达载体pAdeasy-1-pAdTrack-CMV-mING4,获得了mING4重组病毒子。结论mING4的重组腺病毒表达载体可抑制SMMC7721细胞的生长。

关键词：鼠ING4 腺病毒载体构建鉴定

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rhIL-18在不同原核表达系统中的表达和活性比较

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苏州大学学报（医学版） 2006年第1期26卷 4-6页

作者：张海峰李丽娥盛伟华缪竞诚谢宇锋王金志杨吉成苏州大学医学院细胞和分子生物学教研室江苏苏州215007

目的研究rhIL-18包涵体、可溶性(His融合型)两种形式蛋白的生物学活性。方法从已构建的pBV220-IL-18重组质粒中双酶切获取IL-18基因,回收后重组至pLHis质粒构建重组载体。42℃热诱导pBV220-IL-18表达,产生rhIL-18包涵体,IPTG诱导pLHis-I... 详细信息

目的研究rhIL-18包涵体、可溶性(His融合型)两种形式蛋白的生物学活性。方法从已构建的pBV220-IL-18重组质粒中双酶切获取IL-18基因,回收后重组至pLHis质粒构建重组载体。42℃热诱导pBV220-IL-18表达,产生rhIL-18包涵体,IPTG诱导pLHis-IL-18表达,产生可溶性rhIL-18蛋白。两者分别刺激人外周血单个核细胞,ELISA法检测上清中IFN-γ的含量。结果两种重组表达载体均表达产生了rhIL-18,且均可刺激人PMBC上清产生IFN-γ,可溶性rhIL-18刺激人外周血产生IFN-γ的能力高于包涵体形式的rhIL-18。结论可溶性rhIL-18具有比包涵体形式的rhIL-18更强的活性,这为IL-18原核表达基因工程药物的开发提供了新思路。

关键词： IL-18 包涵体可溶性蛋白 IFN-γ

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裂解型腺病毒Ad-E1A对人脐静脉内皮细胞的影响

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生物工程学报 2006年第3期22卷 397-402页

作者：叶震敏汪小华钟江缪竞诚盛伟华谢宇锋王金志杨吉成苏州大学医学院细胞与分子生物学教研室苏州215123 复旦大学生命科学院微生物系上海210003

以QBI-293A细胞基因组DNA为模板,PCR扩增E1A基因,酶切连接到pAdTrack-CMV转移质粒上,pAdTrack-CMV-E1A经PmeI线性化后,与pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183,筛选重组腺病毒质粒pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-E1A,经PacI线性化,脂质体转染QBI-293A细胞,获得裂解型腺病毒Ad-E1A。裂解型腺病毒Ad-E1A在ECV304细胞内复制裂解,抑制细胞的生长,并可以降低VEGF的表达,探讨了Ad-E1A可能通过抑制ECV304细胞NF-κB的激活而引起细胞生长抑制的机制,说明Ad-E1A具有抑制肿瘤转移的功能。

关键词：裂解型腺病毒,Ad-E1A,人脐静脉内皮细胞

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重组人白细胞介素24对肺癌A549细胞生长和肿瘤血管生成影响的实验研究

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中华结核和呼吸杂志 2006年第3期29卷 203-205页

作者：朱晔涵叶震敏盛伟华蒋军红黄建安胡华成杨吉成苏州大学附属第一医院呼吸科 215007 苏州大学医学院细胞和分子生物学教研室苏州大学附属第二医院呼吸科

白细胞介素24(IL-24)即黑色素瘤分化相关基因7(mda-7),除具有免疫刺激应答功能外,还有抑制肿瘤细胞生长、促进其凋亡和抑制肿瘤血管生成的作用,被认为是一种新的抑癌基因.本研究观察了pET-21a-IL-24重组质粒表达系统的表达产物--部分纯... 详细信息

白细胞介素24(IL-24)即黑色素瘤分化相关基因7(mda-7),除具有免疫刺激应答功能外,还有抑制肿瘤细胞生长、促进其凋亡和抑制肿瘤血管生成的作用,被认为是一种新的抑癌基因.本研究观察了pET-21a-IL-24重组质粒表达系统的表达产物--部分纯化人重组IL-24(rhIL-24)蛋白,在体内外对肺癌A549细胞、瘤体生长的抑制作用和抗肿瘤血管生成作用.

关键词：抑制肿瘤细胞生长抑制肿瘤血管生成白细胞介素24 A549细胞重组人肺癌实验研分化相关基因血管生成作用黑色素瘤

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肿瘤基因治疗的研究进展

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临床肿瘤学杂志 2006年第2期11卷 147-151,158页

作者：张海峰杨吉成苏州大学医学院细胞与分子生物学教研室

肿瘤是当今社会影响人类健康的主要疾病之一,近年来,随着人们对肿瘤免疫、肿瘤病因及分子机制等研究的深入,肿瘤基因治疗获得突飞猛进的发展,并逐渐走向成熟,批准进入临床试验的基因治疗药物逐年增多。肿瘤基因治疗原理是将目的:基因用... 详细信息

肿瘤是当今社会影响人类健康的主要疾病之一,近年来,随着人们对肿瘤免疫、肿瘤病因及分子机制等研究的深入,肿瘤基因治疗获得突飞猛进的发展,并逐渐走向成熟,批准进入临床试验的基因治疗药物逐年增多。肿瘤基因治疗原理是将目的:基因用基因转移技术导入靶细胞,使其获得特定的功能,继而执行或介导对肿瘤的杀伤和抑制作用,或保护正常细胞免受化学治疗与放射治疗的严重伤害。针对各种肿瘤发生、发展机制,肿瘤基因治疗大致从以下几个方面着手,包括抑制癌基因的表达活性、[第一段]

关键词：肿瘤基因治疗靶基因

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