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Ad-ING4对人大细胞肺癌NCI-H460细胞移植瘤抑癌效应的体内实验研究

中华实验外科杂志 2021年第7期38卷 1295-1299页

作者：梁光辉丁志丹李振轩杨吉成赵军邢文群郑州大学附属肿瘤医院胸外科 450008 郑州大学第一附属医院胸外科 450052 苏州大学基础医学院细胞与分子生物学教研室 215123 苏州大学附属第一医院心胸外科 215000

目的:探讨腺病毒介导的ING4基因表达对NCI-H460肺癌细胞裸鼠移植瘤的抑癌增效作用及分子机制。方法:用Ad-ING4重组腺病毒在裸鼠NCI-H460移植瘤的瘤体内注射治疗,观察肿瘤生长变化,治疗结束后3 d处死裸鼠、摘取瘤体并称瘤体重量;免疫组... 详细信息

目的:探讨腺病毒介导的ING4基因表达对NCI-H460肺癌细胞裸鼠移植瘤的抑癌增效作用及分子机制。方法:用Ad-ING4重组腺病毒在裸鼠NCI-H460移植瘤的瘤体内注射治疗,观察肿瘤生长变化,治疗结束后3 d处死裸鼠、摘取瘤体并称瘤体重量;免疫组织化学检测瘤体组织中B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、生存素(Survivin)等相关因子的表达。组间数据比较采用t检验。结果:动物实验结果表明,Ad-ING4组的平均体积明显低于磷酸盐缓冲液(phosphate buffer saline,PBS)对照组(720.20±23.51,t=30.64,P<0.05)和Ad-GFP空病毒组(469.90±32.57,t=14.43,P<0.05),差异有统计学意义;平均瘤体重量明显低于Ad-GFP组(0.732±0.068,t=9.26,P<0.01)和PBS组(0.757±0.049,t=15.32,P<0.05),差异有统计学意义;Ad-ING4重组腺病毒能显著抑制裸鼠NCI-H460移植瘤的生长,瘤重的抑制率达32.69%,与空病毒载体Ad-GFP组和细胞对照PBS组比较差异有统计学意义(P<0.05);免疫组织化学结果显示Ad-ING4重组腺病毒能明显上调bax和Caspase-3蛋白的表达水平,下调bcl-2和Survivin蛋白的表达水平。结论:腺病毒介导的IL-24基因可明显抑制人肺癌细胞NCI-H460移植瘤的生长,诱导其凋亡,其分子机制可能与上调bax、Caspase-3等促凋亡因子的表达,下调bcl-2、Survivin等凋亡抑制因子的表达有关。

关键词：肺癌腺病毒载体肿瘤抑制

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一株人肠源性高效尿酸降解菌的分离、鉴定及降尿酸条件优化

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现代生物医学进展 2023年第21期23卷 4013-4019,4006页

作者：梁美婷杨珊珊贺怡玛依娜·卡哈尔陈邬锦李瑞孙玉萍新疆第二医学院基础医学部病理学教研室新疆克拉玛依834000 新疆医科大学第五附属医院检验科新疆乌鲁木齐830000 新疆第二医学院基础医学部细胞生物学与遗传学教研室新疆克拉玛依834000 新疆医科大学基础医学院新疆乌鲁木齐830000 新疆医科大学基础医学院微生物教研室新疆乌鲁木齐830000 新疆医科大学基础医学院形态中心新疆乌鲁木齐830000 新疆医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室新疆乌鲁木齐830000 新疆医科大学新疆地方病分子生物学重点实验室新疆乌鲁木齐830000

目的:肠道作为人体的重要消化器官,其内定植的微生物在尿酸合成和代谢过程中发挥着重要作用,本研究利用含尿酸靶向培养基筛选正常人群肠道内具有降尿酸功能的细菌并鉴定。方法:依据尿酸的摩尔质量制备含不同浓度尿酸的BHI培养基,液体培... 详细信息

目的:肠道作为人体的重要消化器官,其内定植的微生物在尿酸合成和代谢过程中发挥着重要作用,本研究利用含尿酸靶向培养基筛选正常人群肠道内具有降尿酸功能的细菌并鉴定。方法:依据尿酸的摩尔质量制备含不同浓度尿酸的BHI培养基,液体培养基扩增并驯化肠道粪便微生物,固体培养基分离和纯化具有尿酸降解功能的细菌。挑取固体培养基上形态一致的单个菌落进行革兰氏染色和镜检,筛选出已纯化菌株,在需氧和厌氧培养条件下测定尿酸降解率,选取降解率≥50%以上的菌株为高效尿酸降解菌的候选菌株,再测定不同温度和pH值条件下的尿酸降解率,进行降尿酸条件优化。利用16S r DNA序列测定法对尿酸降解菌进行鉴定,药敏实验测定该菌对抗生素的敏感性。结果:正常人群粪便微生物中分离获得一株高效尿酸降解菌B5C,第5天需氧条件下的尿酸降解率均>50%,与初始尿酸浓度相比具有统计学意义(P<0.05)。优化降尿酸条件后,在37℃、pH7.0时,降解率可达88.7%,经鉴定为粪肠球菌,对常见的抗生素如阿莫西林、氨苄西林和青霉素G等具有较高的敏感性。结论:本研究利用含不同尿酸浓度的靶向培养基驯化、分离和鉴定出一株人肠源性细菌,在需氧条件下也具有较高的尿酸降解率,可为今后临床降尿酸微生物制剂的开发和利用提供新的菌种资源。

关键词：肠道微生物尿酸降解菌尿酸降解率

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胰岛素样生长因子1受体抑制剂NVP-AEW541对ESCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制

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吉林大学学报（医学版） 2021年第5期47卷 1131-1138页

作者：曹雅杰包晓红李书珍耿海营蔡曾晓瑞代春美李宁锦州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室辽宁锦州121001 台州学院医学院基础医学部细胞生物学学科浙江台州318000 锦州医科大学药物研究所辽宁锦州121001 锦州医科大学生物人类学研究所辽宁锦州121001 辽宁省人类表型组重点研究实验室辽宁锦州121001

目的:探讨胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)抑制剂NVP-AEW541对3种食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞KYSE30、KYSE450和TE-1增殖、迁移和侵袭的影响,初步阐明其作用机制。方法:体外培养的KYSE30、KYSE450和TE-1 ESCC细胞作为实验对象,分为对照组[0... 详细信息

目的:探讨胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)抑制剂NVP-AEW541对3种食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞KYSE30、KYSE450和TE-1增殖、迁移和侵袭的影响,初步阐明其作用机制。方法:体外培养的KYSE30、KYSE450和TE-1 ESCC细胞作为实验对象,分为对照组[0μmol·L^(-1) NVP-AEW541,1 mLRPMI 1640完全培养基+1μL二甲亚砜(DMSO)]和实验组(2、4、6、8和10μmol·L^(-1) NVP-AEW541),对照组和实验组细胞处理48 h后,CCK-8法检测各组细胞存活率;对照组和实验组(4和6μmol·L^(-1) NVP-AEW541)细胞处理0、6、12和24 h后,细胞划痕实验检测各组细胞迁移率;对照组和实验组(6μmol·L^(-1) NVP-AEW541)细胞处理48 h后,Transwell实验检测侵袭细胞数;对照组和实验组(2、4和6μmol·L^(-1) NVP-AEW541)细胞处理48 h后,Western blotting法检测各组细胞中磷酸化IGF-1R(p-IGF-1R)和上皮-间质转化(EMT)相关蛋白N-Cadherin和Snail-1的蛋白表达水平。结果:与对照组比较,实验组KYSE30、KYSE450和TE-1细胞存活率均随NVP-AEW541浓度增加而降低(P<0.05),实验组(10μmol·L^(-1))KYSE30、KYSE450和TE-1细胞存活率明显降低(P<0.01),实验组(6μmol·L^(-1))KYSE30、KYSE450和TE-1细胞迁移率随NVP-AEW541浓度增加而降低(P<0.01),实验组(6μmol·L^(-1))KYSE30、KYSE450和TE-1细胞侵袭细胞数明显减少(P<0.01),且实验组细胞中p-IGF-1R、N-Cadherin和Snail-1蛋白的表达水平均明显降低(P<0.01)。结论:NVP-AEW541能够明显抑制ESCC细胞增殖,通过抑制N-Cadherin和Snail-1蛋白表达,阻碍EMT,抑制ESCC细胞迁移和侵袭。

关键词： NVP-AEW541 食管鳞癌细胞细胞增殖细胞迁移细胞侵袭

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RBL教学模式培养“5+3”一体化医学生科研思维的探索

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基础医学教育 2021年第9期23卷 609-611页

作者：杨晓勤高上上吴华苏州大学基础医学与生物科学学院生物信息学教研室苏州215123 苏州大学基础医学与生物科学学院生物化学与分子生物学教研室苏州大学基础医学与生物科学学院病理学与病理生理学教研室

大数据时代对全面培养和提升医学“5+3”一体化专业学生的科研素养提出了全新的要求。通过构建以解决医学问题为中心,设计性综合性数据分析实验为载体,学生主动参与和教师辅助指导相结合的RBL教学模式,旨在更好地满足医学“5+3”一体化... 详细信息

大数据时代对全面培养和提升医学“5+3”一体化专业学生的科研素养提出了全新的要求。通过构建以解决医学问题为中心,设计性综合性数据分析实验为载体,学生主动参与和教师辅助指导相结合的RBL教学模式,旨在更好地满足医学“5+3”一体化专业教学模式发展的新趋势,探索提高医学生综合素质和竞争力的新模式。

关键词：生物信息学 RBL教学科研思维

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人脐带间充质干细胞诱导的胰岛样细胞不同途径移植治疗1型糖尿病鼠

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中国组织工程研究 2021年第1期25卷 78-83页

作者：郭璇解军索金荣李英蕊黄磊马牧南李静静傅松涛山西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室山西省太原市030001 山西宾大干细胞科技有限公司山西省太原市030001 山西省生物医药健康研究生教育创新中心山西省太原市030001

背景:人脐带间充质干细胞诱导的胰岛样细胞移植于1型糖尿病鼠体内,会使血糖降低,糖尿病症状有所改善,但腹腔移植的方式少有报道。目的:观察不同途径移植人脐带间充质干细胞诱导的胰岛样细胞对于1型糖尿病小鼠的治疗效果。方法:选采用组... 详细信息

背景:人脐带间充质干细胞诱导的胰岛样细胞移植于1型糖尿病鼠体内,会使血糖降低,糖尿病症状有所改善,但腹腔移植的方式少有报道。目的:观察不同途径移植人脐带间充质干细胞诱导的胰岛样细胞对于1型糖尿病小鼠的治疗效果。方法:选采用组织块贴壁法分离培养人脐带间充质干细胞,然后将其定向分化为胰岛样细胞。从15只雄性C57BL/6J小鼠中随机取3只小鼠做正常组,其余12只小鼠腹腔注射链脲佐菌素制备1型糖尿病模型。造模成功9只小鼠随机分为糖尿病组、尾静脉-胰岛样细胞组、腹腔-胰岛样细胞组,每组3只。造模10 d后,正常组和糖尿病组不予处理,尾静脉-胰岛样细胞组经尾静脉注射0.4 mL胰岛样细胞悬液(含5×10^5个细胞),腹腔-胰岛样细胞组经腹腔注射0.4 mL胰岛样细胞悬液(含5×10^5个细胞)。移植后每周检测2次血糖,移植后28 d进行葡萄糖耐量实验,移植后42 d检测胰岛素水平。结果与结论:①与糖尿组相比,尾静脉-胰岛样细胞组在移植后第10天开始血糖明显下降,一直维持到31 d,胰岛素水平升高,葡萄糖耐量改善,差异有显著性意义(P<0.05);腹腔-胰岛样细胞组血糖、胰岛素水平、葡萄糖耐量未见明显改善;②结果提示,应用人脐带间充质干细胞诱导的胰岛样细胞治疗1型糖尿病鼠,尾静脉注射是一种比较理想的移植方式,腹腔注射的效果不佳。

关键词：人脐带间充质干细胞 1型糖尿病胰岛样细胞腹腔静脉移植鼠实验

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基于网络药理学分析的中药治疗硬皮病常用药团的分子机制研究

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辽宁中医杂志 2021年第4期48卷 145-150,I0006页

作者：王浩臻卢琛马振中杨宝瑜李洋陆子音芦秀丽高兵辽宁大学生命科学院生物化学与分子生物学教研室辽宁沈阳110036 沈阳医学院基础医学院细胞生物与遗传学教研室辽宁沈阳110034

系统性硬化症(又称硬皮病)是一种病因不明的慢性多系统疾病,目前临床虽然有一些方法可用于该病的治疗,但是尚未找到特效药物。中药治疗硬皮病已经有很长的历史,基于数据挖掘方法的研究发现,中药治疗硬皮病的常用药团(commonly-used comb... 详细信息

系统性硬化症(又称硬皮病)是一种病因不明的慢性多系统疾病,目前临床虽然有一些方法可用于该病的治疗,但是尚未找到特效药物。中药治疗硬皮病已经有很长的历史,基于数据挖掘方法的研究发现,中药治疗硬皮病的常用药团(commonly-used combination,CUC)为桂枝、甘草、黄芪和党参,但其治疗硬皮病的潜在分子机制尚不清楚。本研究采用网络药理学方法筛选桂枝、甘草、黄芪和党参的主要活性成分并系统研究其治疗硬皮病的分子机制。利用中药系统药理学分析平台(TCMSP)数据库,构建了由桂枝、甘草、黄芪和党参的131种活性成分及其作用的267个药物靶点组成的化合物-药物靶点数据库。使用疾病靶点预测平台DisGeNET预测硬皮病相关靶点,对化合物-靶点-疾病网络进行构建和分析。化合物-靶点-疾病网络图分析显示,与硬皮病靶点作用最多的成分是1-甲氧基菜豆啶素(1-Methoxyphaseollidin)和异鼠李素(isorhamnetin),受活性成分影响最多的药物靶点为过氧化物合成酶2(PTGS2),暗示桂枝、甘草、黄芪和党参可能主要是通过这些靶点治疗硬皮病。最后,我们对9个关键疾病靶点进行了基因本体(gene ontology,GO)富集分析和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路分析。GO分析结果显示,关键疾病靶点主要富集在核质运输的正调控、对温度刺激的反应、一氧化氮的生物合成和代谢过程等。KEGG分析结果显示,靶点主要富集在IL-17信号通路,黄体酮介导的卵母细胞成熟相关通路等。综上所述,我们的结果暗示,由桂枝、甘草、黄芪、党参组成的治疗硬皮病的中药常用药团可以通过作用于多个靶标有效治疗硬皮病,这些过程包括纤维化调节,神经变性,氧化应激和炎性免疫等。

关键词：硬皮病中药常用药团网络药理学多靶标分子机制

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TRIM21通过泛素化稳定细胞骨架蛋白质促进下咽癌分化

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中国生物化学与分子生物学报 2021年第6期37卷 790-797页

作者：牛艳芳柴芳玉庞文会张继生杨涛山西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室太原030001 青岛大学附属医院耳鼻咽喉头颈外科青岛266003 青岛大学附属医院医学研究中心青岛266003 山西医科大学细胞生理学教育部重点实验室太原030001

E3泛素化连接酶TRIM21(tripartite motif containing 21)在不同类型肿瘤中扮演癌基因或抑癌基因的角色,从而影响细胞功能及临床预后。然而,TRIM21在下咽癌中的生物学功能和分子机制尚不清楚。本文采用RT-PCR和Western印迹技术检测了TRI... 详细信息

E3泛素化连接酶TRIM21(tripartite motif containing 21)在不同类型肿瘤中扮演癌基因或抑癌基因的角色,从而影响细胞功能及临床预后。然而,TRIM21在下咽癌中的生物学功能和分子机制尚不清楚。本文采用RT-PCR和Western印迹技术检测了TRIM21在下咽癌组织中的表达水平,采用基因过表达和RNA干扰技术分析了TRIM21过表达和基因沉默对细胞增殖、迁移和分化的影响,利用蛋白质免疫共沉淀联合质谱鉴定TRIM21互作蛋白质,并进一步研究TRIM21影响下咽癌分化的分子机制。结果表明,TRIM21在中高分化下咽癌中高表达,提示TRIM21可能调控肿瘤细胞分化。在FaDu细胞中,过表达或shRNA干扰TRIM21可分别抑制和促进细胞增殖和迁移。此外,过表达TRIM21后,分化标志分子角蛋白10(keratin 10,KRT10)、内披蛋白(involucrin,IVL)和谷氨酰胺转氨酶1(transglutaminase 1,TGM1)蛋白质表达水平增高,而shRNA干扰TRIM21后,上述蛋白质表达下降。质谱鉴定及蛋白质生物信息分析提示,TRIM21可能与细胞骨架蛋白质调控密切相关。进一步验证表明,TRIM21与角蛋白10相互作用。蛋白质合成抑制剂环己酰亚胺处理细胞后,与对照相比,TRIM21过表达细胞中角蛋白10表达增高,且过表达TRIM21可升高角蛋白10的泛素化水平。综上所述,我们的研究表明,TRIM21可能通过介导细胞骨架蛋白质泛素化修饰,提高蛋白质稳定性促进下咽癌分化。

关键词：下咽癌 TRIM21 泛素化分化

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Ad-生长抑制因子4-polyA-promoter-白细胞介素-24对NCI-H460肺癌细胞抑癌增效作用的体内实验研究

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中华实验外科杂志 2020年第6期37卷 1093-1098页

作者：梁光辉丁志丹袁东风杨吉成赵军邢文群郑州大学附属肿瘤医院胸外科 450008 郑州大学第一附属医院胸外科 450052 苏州大学基础医学院细胞与分子生物学教研室 215123 苏州大学附属第一医院心胸外科 215000

目的探讨腺病毒介导的生长抑制因子4(ING4)和白细胞介素(IL)-24双基因共表达对NCI-H460肺癌细胞裸鼠移植瘤的抑癌增效作用及分子机制。方法根据腺病毒携带基因类型,把实验分5组,PBS、Ad、Ad-IL-24、Ad-ING4、Ad-ING4-IL-24组。以50的感... 详细信息

目的探讨腺病毒介导的生长抑制因子4(ING4)和白细胞介素(IL)-24双基因共表达对NCI-H460肺癌细胞裸鼠移植瘤的抑癌增效作用及分子机制。方法根据腺病毒携带基因类型,把实验分5组,PBS、Ad、Ad-IL-24、Ad-ING4、Ad-ING4-IL-24组。以50的感染复数(MOI)各重组腺病毒分别感染NCI-H460细胞(苏州大学基础医学院细胞和分子生物学教研室提供),蛋白质印迹法(Western blot)鉴定ING4和/或IL-24基因在NCI-H460细胞中的表达;噻唑蓝(MTT)法检测各重组腺病毒对NCI-H460细胞的生长抑制作用;各重组腺病毒注入裸鼠瘤体内进行抗肿瘤实验,观察各组瘤体体积变化;治疗15 d后处死裸鼠、摘取瘤体并称瘤体质量;免疫组织化学检测瘤体组织中B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、生存素(Survivin)等相关因子的表达。统计学采用单因素方差分析。结果动物实验结果表明,腺病毒介导白细胞介素-24(Ad-IL-24)、腺病毒介导生长抑制因子4(Ad-ING4)、腺病毒介导白细胞介素-24及生长抑制因子4(Ad-ING4-IL-24)组的肿瘤平均体积明显低于腺病毒(Ad)组[(559.880±43.704)mm3,t=12.811,P<0.01;(573.720±42.019)mm3,t=13.654,P<0.01;(834.700±44.948)mm3,t=18.570,P<0.01]和磷酸盐缓冲液(PBS)组[(-710.210±32.608)mm3,t=21.780,P<0.01;(724.050±30.313)mm3,t=23.886,P<0.01;(-985.030±34.257)mm3,t=28.754,P<0.01],平均瘤体重量明显低于Ad组[(0.547±0.080)g,t=6.812,P<0.01;(0.607±0.082)g,t=7.433,P<0.01;(0.919±0.082)g,t=11.221,P<0.01]和PBS组[(0.572±0.067)g,t=8.597,P<0.01;(0.632±0.068)g,t=9.260,P<0.01;(0.944±0.069)g,t=13.775,P<0.01],差异均有统计学意义;Ad-ING4-IL-24组对裸鼠NCI-H460肺癌移植瘤的抑癌作用明显优于Ad-IL-24、Ad-ING4单基因组(0.302±0.048,t=6.213,P<0.01;0.250±0.053,t=4.685,P<0.01),差异有统计学意义,呈现抑癌增效相加作用(Q=0.940)。ING4和/或IL-24能够上调bax、Caspase-3等因子的表达,下调bcl-2、Survivin等因子的表达,且Ad-ING4-IL-24组优于Ad-IL-24、Ad-ING4单基因组(0.263±0.055,t=4.286,P<0.01),差异有统计学意义。结论Ad-ING4-IL-24双基因共表达在体内对NCI-H460细胞裸鼠移植瘤均具有抑癌增效作用,其分子机制可能与上调bax、Caspase-3等促凋亡因子的表达,下调bcl-2、Survivin等凋亡抑制因子的表达有关。

关键词：生长抑制因子4 白细胞介素-24 腺病毒肺癌抑癌增效

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鼹科长吻鼩鼹和库氏长吻鼹的首次转录组分析

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兽类学报 2020年第6期40卷 615-622页

作者：王琳琳丘银彬万韬王霞周鸿艳蒋学龙潘星华何锴南方医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室广东省单细胞技术与应用重点实验室陕西师范大学生命科学学院

现生的鼹科动物分布于欧亚大陆和北美大陆,包括54种已知物种。鼹科动物有丰富的生态类型,是研究适应性进化的较好模型。本研究通过二代测序的方法分别获得了长吻鼩鼹和库氏长吻鼹两个物种心脏和肺脏以及脾脏和肺脏的转录组数据。这两个... 详细信息

现生的鼹科动物分布于欧亚大陆和北美大陆,包括54种已知物种。鼹科动物有丰富的生态类型,是研究适应性进化的较好模型。本研究通过二代测序的方法分别获得了长吻鼩鼹和库氏长吻鼹两个物种心脏和肺脏以及脾脏和肺脏的转录组数据。这两个物种分别代表了分布于中国西南部、缅甸北部的没有特化的原始类群鼩鼹亚科以及高度适应地下生活的鼹亚科鼹族。我们首次报道了库氏长吻鼹在中国的分布。通过从头拼接,分别获得长吻鼩鼹和库氏长吻鼹197 092个和225 956个转录本,以及125 427个和94 023个unigene。通过与GenBank中的基因组注释文件比对,得到鼹科物种同源基因家族8 376个,及鼹科鼩鼱科同源基因家族8 114个。差异表达基因的各组织高表达基因中均找到10个以上组织特异性基因。然而BUSCO分析确定完整单拷贝基因在两个物种中分别为43.0%和56.6%,提示死亡后mRNA迅速降解并影响转录组拼接。比较两个物种肺部基因的表达差异发现库氏长吻鼹335个相对高表达的基因,其中包括HMGB1、HSPD1、SF3B1、COL3A1、SUMO1和JUNB等,已有报道表明上述基因可能与低氧或高海拔适应有关。

关键词：长吻鼩鼹库氏长吻鼹转录组测序从头组装

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Ad-生长抑制因子4-polyA-promoter-白细胞介素-24对NCI-H460肺癌细胞抑癌增效作用的体外实验研究

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中华实验外科杂志 2020年第7期37卷 1267-1271页

作者：梁光辉丁志丹袁东风李振轩杨吉成赵军邢文群郑州大学附属肿瘤医院胸外科 450008 郑州大学第一附属医院胸外科 450052 苏州大学基础医学院细胞与分子生物学教研室 215123 苏州大学附属第一医院心胸外科 215000

目的探讨腺病毒介导的生长抑制因子4(ING4)和白细胞介素(IL)-24双基因共表达对NCI-H460肺癌细胞抑癌增效作用及其机制。方法以50感染复数(MOI)各重组腺病毒分别感染NCI-H460细胞,蛋白质印迹法(Western blot)鉴定ING4和/或IL-24基因在NCI... 详细信息

目的探讨腺病毒介导的生长抑制因子4(ING4)和白细胞介素(IL)-24双基因共表达对NCI-H460肺癌细胞抑癌增效作用及其机制。方法以50感染复数(MOI)各重组腺病毒分别感染NCI-H460细胞,蛋白质印迹法(Western blot)鉴定ING4和/或IL-24基因在NCI-H460细胞中的表达;噻唑蓝(MTT)法检测各重组腺病毒对NCI-H460细胞的生长抑制作用;经膜联蛋白V-藻红蛋白(Annexin V-PE)/7-氨基放线菌素D(7-AAD)染色后流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率变化;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测NCI-H460细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、生存素(Survivin)等因子的表达,Western blot法检测其中裂解的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)因子的表达。结果 ING4和/或IL-24基因在NCI-H460细胞中能够有效表达;96 h时相点生长抑制率Ad-IL-24、Ad-ING4、Ad-ING4-IL-24组对NCI-H460细胞的生长抑制率明显高于Ad组(27.800±4.271,t=6.508,P<0.01)、(27.130±3.341,t=8.121,P<0.01)、(50.767±2.671,t=19.005,P<0.01),差异有统计学意义;Ad-ING4-IL-24组对NCI-H460细胞的生长抑制率明显优于Ad-IL-24(22.967±4.933,t=4.655,P<0.01)、Ad-ING4(23.633±4.154,t=5.689,P<0.01)单基因组,差异有统计学意义,并呈现抑癌增效相加作用(Q=0.93)。FCM检测结果表明,Ad-IL-24、Ad-ING4、Ad-ING4-IL-24组作用于NCI-H460细胞72 h的诱导细胞凋亡率明显高于磷酸盐缓冲液(PBS)组(16.440±0.896,t=18.340,P<0.01)、(14.000±1.562,t=13.255,P<0.01)、(29.660±1.519,t=19.522,P<0.01)和Ad组(14.450±1.058,t=13.660,P<0.01)、(12.010±1.196,t=1.040,P<0.01)、(27.670±1.620,t=17.082,P<0.01),差异有统计学意义,其中Ad-ING4-IL-24组中NCI-H460细胞的细胞凋亡率明显高于Ad-IL-24(15.660±1.773,t=8.834,P<0.01)、Ad-ING4(13.220±1.628,t=7.858,P<0.01)单基因组,差异有统计学意义;Ad-ING4-IL-24组可明显上调bax、Caspase-3等因子的表达,下调bcl-2、Survivin等因子的表达。结论 Ad-ING4-IL-24双基因共表达在体外对NCI-H460细胞具有抑癌增效作用,其分子机制可能与上调bax、Caspase-3等促凋亡因子的表达,下调bcl-2、Survivin等凋亡抑制因子的表达有关。

关键词：生长抑制因子4 白细胞介素-24 腺病毒肺癌抑癌增效

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