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第六届中国细胞生物学学会HIPPO年会暨大连医科大学2016年生命科学学术交流会

作者：孙立梅李采张晨旭王靖宇赵莹高颖大连医科大学基础医学院生化教研室辽宁省医学细胞分子生物学重点实验室

动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是严重威胁人类健康的慢性炎症性疾病,其中平滑肌细胞位于管壁中层,是血管中维持管壁张力重要细胞.平滑肌细胞的病变是动脉粥样硬化疾病发生发展的重要环节.因此,研究平滑肌细胞增殖和迁移尤为重要.miR... 详细信息

动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是严重威胁人类健康的慢性炎症性疾病,其中平滑肌细胞位于管壁中层,是血管中维持管壁张力重要细胞.平滑肌细胞的病变是动脉粥样硬化疾病发生发展的重要环节.因此,研究平滑肌细胞增殖和迁移尤为重要.miRNA-3568是近年新发现的一种单链小分子RNA基因,长度约为22个核苷酸.miRNA通常被认为是通过与靶标mRNA的3'-非翻译区(3'-UTR)之间的不完全配对,有效抑制mRNA翻译成靶标基因从而发挥生物学作用的.近年来Nature、Science等多篇论文研究表明miRNAs与心血管疾病尤其是动脉粥样硬化疾病的发生发展越来越密切.

关键词： AS miR-3568 平滑肌细胞 PDGF

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***-ING4和PTEN对白血病细胞株抑癌作用

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内科理论与实践 2016年第2期11卷 95-102页

作者：韩亚丽王家融杨吉成盛伟华缪竞诚上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心血液肿瘤科上海200127 苏州大学医学部细胞与分子生物学教研室江苏苏州215123

目的：构建RGD修饰的生长抑制因子4（ING4）和（或）10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因（PTEN）单、双基因重组腺病毒载体,以研究其对白血病细胞株的感染效率和抑瘤作用的可行性。方法：在本科室已成功构建的p Ad Track-巨细... 详细信息

目的：构建RGD修饰的生长抑制因子4（ING4）和（或）10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因（PTEN）单、双基因重组腺病毒载体,以研究其对白血病细胞株的感染效率和抑瘤作用的可行性。方法：在本科室已成功构建的p Ad Track-巨细胞病毒（CMV）-多腺苷酸（poly A）启动子腺病毒载体上,通过常规的分子生物学方法,获得RGD修饰的ING4和（或）PTEN单、双基因重组腺病毒,将其与未经RGD修饰的基因重组腺病毒同时感染QBI-293A细胞,检测和比较病毒的效价,并以10、50、100、200感染复数（MOI）不同剂量感染不同肿瘤细胞和人胚肺正常二倍体细胞系WI-38,培养48 h后在荧光显微镜下观察和用流式细胞仪检测,通过比较各组细胞中绿色荧光蛋白（GFP）阳性细胞比例来检测其对不同肿瘤细胞的感染效率。结果：经荧光显微镜观察各组重组腺病毒可见GFP的表达,反转录（RT）-PCR鉴定结果表明均可产生预期大小750 bp的ING4和1 209 bp的PTEN PCR产物,基因测序结果与预期序列相一致。RGD修饰的基因重组腺病毒载体效价分别比未经修饰的基因重组腺病毒效价高3～4倍（P=0.027）。流式细胞仪检测显示RGD修饰的基因重组腺病毒比未经修饰的基因重组腺病毒载体对各组肿瘤靶细胞有更高的GFP表达,感染效率明显提高,尤其对人白血病细胞系K562、Thp-1、MEG-01差异最为明显,未经改造的腺病毒载体感染白血病细胞后GFP阳性率仅3.16%～5.01%,而带有RGD的腺病毒载体感染后GFP阳性率可达到23.11%～31.58%（P=0.001 3）。结论：成功构建了RGD修饰的ING4和（或）PTEN单、双基因重组腺病毒载体。RGD修饰的ING4和（或）PTEN基因重组腺病毒明显提高了腺病毒的效价,在各种肿瘤细胞感染效率中以白血病细胞系K562、Thp-1、MEG-01最为明显。

关键词： RGD 白血病细胞株生长抑制因子4 10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因基因治疗

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***-ING4或/和PTEN对白血病细胞株抑癌作用的可行性研究

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第十三届江浙沪儿科学术会议暨2016年浙江省医学会儿科学学术年会

作者：韩亚丽王家融杨吉成盛伟华缪竞诚上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心血液肿瘤科苏州大学医学部细胞与分子生物学教研室

目的:构建RGD修饰的生长抑制因子4(ING-4)和(或)10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)单、双基因重组腺病毒载体,以研究其对白血病细胞株的感染效率和抑瘤作用的可行性。方法:在本科室已成功构建的pAdTrack-巨细胞病毒(CMV... 详细信息

目的:构建RGD修饰的生长抑制因子4(ING-4)和(或)10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)单、双基因重组腺病毒载体,以研究其对白血病细胞株的感染效率和抑瘤作用的可行性。方法:在本科室已成功构建的pAdTrack-巨细胞病毒(CMV)-polyA启动子腺病毒载体上,通过常规的分子生物学方法,在多克隆酶切位点(MCS)上插入相应基因,并与RGD-4C修饰的腺病毒骨架质粒***同源重组。在QBI-293A细胞中包装和扩增获得RGD修饰的ING4和(或)PTEN单、双基因重组腺病毒,将其与未经RGD修饰的基因重组腺病毒同时感染QBI-293A细胞,检测和比较病毒的效价,并以10、50、100、200感染复数(MOI)不同剂量感染不同肿瘤细胞和人胚肺正常二倍体细胞系WI-38,培养48 h后在荧光显微镜下观察和用流式细胞仪检测,通过比较各组细胞中绿色荧光蛋白(GFP)阳性细胞比例来检测其对不同肿瘤细胞的感染效率。结果:经荧光显微镜观察各组重组腺病毒可见GFP的表达,RT-PCR鉴定结果表明均可产生预期大小的750 bp的ING-4和1 209 bp的PTEN PCR产物,基因测序结果与预期序列相一致。RGD修饰的基因重组腺病毒载体效价分别比未经修饰的基因重组腺病毒效价高3～4倍,用荧光显微镜和流式细胞仪检测,RGD修饰的基因重组腺病毒比未经修饰的基因重组腺病毒载体对各组肿瘤靶细胞有更高的GFP荧光蛋白表达,感染效率明显提高,尤其对人白血病细胞系K562、Thp-1、MEG-01差异最为明显,未经改造的腺病毒载体感染白血病细胞后GFP阳性率仅3.16-5.01%,而带有RGD的腺病毒载感染后GFP阳性率可达到23.11-31.58%。结论:成功构建了RGD修饰的ING-4和(或)PTEN单、双基因重组腺病毒载体。RGD修饰的ING4和(或)PTEN基因重组腺病毒明显提高了腺病毒的效价,在各种肿瘤细胞感染效率中以白血病细胞系K562、Thp-1、MEG-01最为明显。

关键词： RGD 白血病细胞株 ING-4 10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因基因治疗

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***-ING4或/和PTEN对白血病细胞株抑癌作用的可行性研究

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2016年全国小儿血液病专题论坛

作者：韩亚丽王家融杨吉成盛伟华缪竞诚 200127 上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心血液肿瘤科 215123 苏州大学医学部细胞与分子生物学教研室

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***-ING4对人鼻咽癌细胞CNE抑癌增效及其机制的研究

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临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2014年第6期28卷 410-415页

作者：王奕鸿盛伟华杨吉成刘济生苏州大学附属第一医院耳鼻咽喉科苏州215006 苏州大学基础医学院细胞与分子生物学教研室

目的:研究带RGD的腺病毒介导的ING4对人鼻咽癌细胞CNE生长、凋亡及细胞周期的影响并探讨其可能调节机制。方法:以***-ING4及腺病毒空载体感染CNE细胞,RT-PCR法检测ING4基因的表达水平,Western blot法检测目的蛋白的表达。用MTT试验检测I... 详细信息

目的:研究带RGD的腺病毒介导的ING4对人鼻咽癌细胞CNE生长、凋亡及细胞周期的影响并探讨其可能调节机制。方法:以***-ING4及腺病毒空载体感染CNE细胞,RT-PCR法检测ING4基因的表达水平,Western blot法检测目的蛋白的表达。用MTT试验检测ING4对CNE细胞生长情况的影响,用Annexin V-PE/7-AAD双染色测定ING4对CNE细胞凋亡的影响,用PI单染色检测ING4对CNE细胞细胞周期的影响。RT-PCR检测p21、Bcl-2、Bax基因的表达水平的差异,Western blot法检测Survivin蛋白、Cleaved-caspase3蛋白表达的差异。结果:CNE细胞感染***-ING4 72h后,ING4在CNE细胞中过表达,CNE细胞的生长受到明显抑制,细胞凋亡率明显升高,G2/M期出现明显阻滞。RT-PCR结果显示,感染***-ING4的CNE细胞中Bcl-2表达下降,p21、Bax表达升高,差异具有统计学意义(均P<0.01)。Western blot结果显示Survivin蛋白表达下降,Cleaved-caspase3蛋白表达升高。结论:***-ING4可以对鼻咽癌细胞株CNE的起到抑癌增效作用,这一作用可能是通过下调Bcl-2、Survivin表达及上调p21、Bax、caspase3实现的。

关键词： Ad RGD-ING4 鼻咽肿瘤 MTT 凋亡

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构建靶向性载脂蛋白E修饰脂质体介导的HSVtk/丙氧鸟苷系统

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中国组织工程研究 2015年第5期19卷 788-793页

作者：张悦红高然朋于保锋王惠珍张栋弓韬郭睿王海龙程牛亮解军牛凯秦琴徐钧山西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室山西省太原市030001 山西医科大学细胞生理学省部共建教育部重点实验室山西省太原市030001 山西医科大学附属山西省人民医院普外科山西省太原市030012

背景:自杀基因系统无选择性,不仅能杀伤癌细胞,对正常细胞也有同样作用,所以构建靶向性基因治疗载体成为迫切需要解决的问题。目的:评价载脂蛋白E修饰脂质体(apo E-lipoplexes)介导TK/丙氧鸟苷自杀基因质粒转染对Li-7肝癌细胞的杀伤效... 详细信息

背景:自杀基因系统无选择性,不仅能杀伤癌细胞,对正常细胞也有同样作用,所以构建靶向性基因治疗载体成为迫切需要解决的问题。目的:评价载脂蛋白E修饰脂质体(apo E-lipoplexes)介导TK/丙氧鸟苷自杀基因质粒转染对Li-7肝癌细胞的杀伤效果。方法:apo E-lipoplexes包裹p AFP-TK-IRES2-EGFP真核表达质粒转染Li-7细胞,筛选HSVtk稳定表达细胞克隆(Li-7-tk),荧光显微镜观察增强型绿色荧光蛋白表达,Western blotting检测HSVtk基因表达,MTT法评价HSVtk/丙氧鸟苷系统对Li-7肝癌细胞的杀伤作用。结果与结论:自杀基因质粒转染Li-7细胞经筛选得到稳定克隆(Li-7-tk),HSVtk/丙氧鸟苷系统作用于Li-7细胞后,细胞凋亡明显增加(P<0.01)。在甲胎蛋白阳性的Li-7肝癌细胞中,自杀基因载体稳定表达并有效杀灭癌细胞。

关键词：实验动物组织工程脂质体甲胎蛋白启动子单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶肝癌细胞增强型绿色荧光蛋白国家自然科学基金

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智能手机App在高等医学临床和教学中的应用

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继续医学教育 2015年第12期29卷 18-19页

作者：叶海虹霍春月吉正国韩玉英首都医科大学基础医学院医学遗传学与发育生物学学系北京100069 首都医科大学燕京医学院生化分子生物学与细胞教研室北京101300 首都医科大学附属北京友谊医院泌尿科北京100050

分析目前智能手机App的模式特点及其在我国高等医学教育中的应用现状,深入分析了智能手机App在高等医学临床实践以及和高等医学院校教学科研中的实践和应用。由于高等医学教育的特殊性和局限性,解析智能手机App在高等医学教育中的优势... 详细信息

分析目前智能手机App的模式特点及其在我国高等医学教育中的应用现状,深入分析了智能手机App在高等医学临床实践以及和高等医学院校教学科研中的实践和应用。由于高等医学教育的特殊性和局限性,解析智能手机App在高等医学教育中的优势和挑战。

关键词：智能手机App 高等医学教育应用

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三维培养诱导人脂肪间充质干细胞微球的成软骨分化能力

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中国组织工程研究 2015年第1期19卷 24-29页

作者：毕晓娟郭晨明李亮段显琳江明新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院干细胞研究室、新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830054 新疆医科大学第一附属医院乳腺外科新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830054 新疆医科大学第一附属医院血液病中心、新疆维吾尔自治区血液病研究所新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市830054

背景:关节软骨损伤后修复结果不满意,需要新的手段,而脂肪间充质干细胞较适宜做种子细胞诱导软骨,然而怎么能够使诱导的软骨具有功能需要研究。目的:采用三维培养体系诱导人脂肪间充质干细胞微球向软骨分化。方法:无菌切取吸脂术后脂肪... 详细信息

背景:关节软骨损伤后修复结果不满意,需要新的手段,而脂肪间充质干细胞较适宜做种子细胞诱导软骨,然而怎么能够使诱导的软骨具有功能需要研究。目的:采用三维培养体系诱导人脂肪间充质干细胞微球向软骨分化。方法:无菌切取吸脂术后脂肪组织,分离培养人脂肪间充质干细胞,传至第3代进行流式细胞术分析,成骨成脂肪诱导等鉴定,同时也给予合适的培养条件用三维培养的方式向软骨细胞诱导,并行阿利辛蓝染色鉴定糖胺多糖的合成,苏木精-伊红染色进行组织学分析,免疫荧光检测Ⅱ型胶原表达,称质量测量软骨硬度。结果与结论:分离的人脂肪间充质干细胞CD105,CD44,CD29均高表达,而CD45,CD34低表达,并且成骨成脂诱导后细胞茜素红染色和油红O染色均为阳性。三维培养法诱导的软骨细胞可表达大量糖胺多糖及Ⅱ型胶原。结果证实,三维培养法诱导人脂肪间充质细胞向软骨分化后,具有软骨细胞的特性。

关键词：组织工程干细胞间质干细胞软骨脂肪干细胞三维培养体系软骨微球诱导分化间充质干细胞脂肪源间充质干细胞人脂肪间充质干细胞无支架微球培养条件优化软骨诱导

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腺病毒介导的IL-24增强紫杉醇对A549肺腺癌细胞生长的抑制作用

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细胞与分子免疫学杂志 2014年第11期30卷 1150-1153,1158页

作者：徐明菊李敏敏杨吉成郭锦锦孙万邦遵义医学院珠海校区贵州省免疫学研究生教育创新基地广东珠海519041 苏州大学医学部细胞与分子生物学教研室江苏苏州215123

目的探讨腺病毒介导的白细胞介素24(Ad-IL-24)联合紫杉醇对体外培养的人肺腺癌A549细胞生长的影响。方法用Ad-IL-24、紫杉醇、Ad-IL-24联合紫杉醇处理A549细胞,以CCK-8法测定细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡和周期的变化。结果 A... 详细信息

目的探讨腺病毒介导的白细胞介素24(Ad-IL-24)联合紫杉醇对体外培养的人肺腺癌A549细胞生长的影响。方法用Ad-IL-24、紫杉醇、Ad-IL-24联合紫杉醇处理A549细胞,以CCK-8法测定细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡和周期的变化。结果 Ad-IL-24可明显抑制人肺腺癌A549细胞生长并诱导细胞凋亡,与紫杉醇联合处理后,其抑制肺癌细胞生长及诱导细胞凋亡作用明显优于单用紫杉醇组及Ad-IL-24组,并引起G2/M期阻滞。结论 Ad-IL-24感染肺癌A549细胞可增强紫杉醇对肿瘤细胞生长的抑制作用。

关键词：重组腺病毒白细胞介素24 紫杉醇肺癌细胞细胞生长

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腺病毒介导的ING4基因对人肺腺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其分子机制

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中国肺癌杂志 2014年第2期17卷 142-147页

作者：黄锦宏杨吉成凌春华赵大国谢宇锋由振华常熟市第二人民医院呼吸内科常熟215500 苏州大学医学部基础医学与生物科学学院细胞与分子生物学教研室苏州215123 苏州大学附属第一医院呼吸内科苏州215006

背景与目的肿瘤生长抑制因子4(inhibitor of growth 4,ING4)基因是一种重要的肿瘤抑制因子,研究发现ING4基因对多种肿瘤细胞具有抑癌作用。本研究旨在探讨ING4基因对人肺腺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其潜在的作用机制。方法采用SPC-A... 详细信息

背景与目的肿瘤生长抑制因子4(inhibitor of growth 4,ING4)基因是一种重要的肿瘤抑制因子,研究发现ING4基因对多种肿瘤细胞具有抑癌作用。本研究旨在探讨ING4基因对人肺腺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其潜在的作用机制。方法采用SPC-A1细胞株建立肺腺癌裸鼠移植瘤模型,15只荷瘤裸鼠随机等分为PBS组、腺病毒组(Ad-GFP组)、腺病毒介导的ING4组(Ad-ING4组),上述各组进行局部干预用药,动态测量肿瘤体积,治疗结束后摘取瘤体称重并计算瘤重抑瘤率;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测瘤体内细胞凋亡情况,免疫组织化学SP法检测天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、环氧化酶-2(COX-2)、Fas与FasL的表达。结果 Ad-ING4组的肿瘤体积、瘤重均呈现明显下降,与Ad-GFP组抑瘤率(1.31%±0.31%)比较,差异有统计学意义(P<0.05),其抑瘤率为(33.17%±5.24%);Ad-ING4组的凋亡指数为(69.23%±6.53%),与PBS组(17.04%±1.10%)、Ad-GFP组(18.81%±1.93%)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。SP法检测结果显示,Ad-ING4可明显上调Caspase-3、Fas与FasL表达,下调COX-2表达。结论 ING4具有抑制肺腺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用,该作用机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关。

关键词：生长抑制因子4 肺肿瘤移植瘤

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