检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：陈金明陈桂林韦永新谢学顺孙婷苏作鹏陈雄辉吴庭枫陈三送丁大冬曹广辉王君祥谭卫国冯鸣黄煜伦周幽心杜子威苏州大学附属第一医院神经外科暨脑神经研究室

目的建立稳定表达红色荧光蛋白（RFP）的人脑胶质瘤干细胞。方法用带有红色荧光蛋白基因的慢病毒转染人脑胶质瘤干细胞（SU2）,经流式细胞仪进行克隆筛选,荧光显微镜下观察RFP阳性细胞,PCR及DNA测序鉴定基因组中RFP的整合,并通过细胞荧... 详细信息

目的建立稳定表达红色荧光蛋白（RFP）的人脑胶质瘤干细胞。方法用带有红色荧光蛋白基因的慢病毒转染人脑胶质瘤干细胞（SU2）,经流式细胞仪进行克隆筛选,荧光显微镜下观察RFP阳性细胞,PCR及DNA测序鉴定基因组中RFP的整合,并通过细胞荧光免疫组化CD133,Nestin鉴定干细胞特性,加含胎牛血清培养基诱导干细胞分化,GFAP,S100,A2B5鉴定诱导分化后细胞特性,以及对转染后人脑胶质瘤干细胞形态学检查、细胞增殖能力测定及致瘤性评价等进行了转染人脑胶质瘤干细胞的生物学特性分析。结果慢病毒转染率高达95%以上,10次传代前后RFP表达无明显差异;通过流式细胞仪筛选,建立了一种稳定、长期表达RFP的人脑胶质瘤干细胞;PCR及DNA测序证实RFP基因已成功整合入人脑胶质瘤干细胞;生物学特性分析表明转染前后的人脑胶质瘤干细胞没有明显改变。结论以RFP为生物标记物的人脑胶质瘤干细胞成功建立,可为将来研究人脑胶质瘤干细胞的深入研究提供理想的材料。

关键词：胶质瘤干细胞荧光蛋白转染

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CXCR4/CXCL12在原发中枢神经系统淋巴瘤中的表达及其意义

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临床神经外科杂志 2011年第6期8卷 285-287页

作者：谭卫国冯鸣吴庭枫孙春明邵忠王中周幽心杜子威昆山市中医医院神经外科 215300 苏州大学附属第一医院神经外科暨脑神经研究室

目的探讨趋化因子受体CXCR4及其配体CXCL12在原发中枢神经系统淋巴瘤中的表达水平,分析它们在原发中枢神经系统淋巴瘤的发生、发展过程中的可能作用。方法采用免疫组化EnVision二步法检测CXCR4及CXCL12在5例原发中枢神经系统淋巴瘤、10... 详细信息

目的探讨趋化因子受体CXCR4及其配体CXCL12在原发中枢神经系统淋巴瘤中的表达水平,分析它们在原发中枢神经系统淋巴瘤的发生、发展过程中的可能作用。方法采用免疫组化EnVision二步法检测CXCR4及CXCL12在5例原发中枢神经系统淋巴瘤、10例正常脑组织细胞中的表达。采用半定量RT-PCR检测CXCR4和CXCL12在5例原发中枢神经系统淋巴瘤以及正常脑组织中的表达情况。结果免疫组化EnVision二步法:CXCR4在肿瘤标本中阳性表达率为100%(5/5),在正常脑组织标本中阳性表达率为0%(0/10);CXCL12在肿瘤标本中阳性表达率为100%(5/5),在正常脑组织标本中阳性表达率为100%(10/10)。半定量RT-PCR法检测标本中的CXCR4、CXCL12显示:在肿瘤标本中全部检出,而在正常脑组织标本中仅检出CXCL12的表达。结论 CXCR4/CXCL12信号通路在原发中枢神经系统淋巴瘤的发生、发展过程中起作用。

关键词：原发中枢神经系统淋巴瘤免疫组织化学 RT—PCR

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脑胶质瘤相关的全长新基因PPIL-3的克隆和蛋白质特性的研究

脑胶质瘤相关的全长新基因PPIL-3的克隆和蛋白质特性的研究

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中国医师协会神经外科医师分会第六届全国代表大会

作者：祁震宇惠国桢李瑶顾少华谢毅苏州大学附属第一医院神经外科复旦大学遗传工程国家重点开放实验室

我们运用基因芯片筛选出与胶质瘤相关的新基因。通过大规模cDNA测序,从人胎脑cDNA文库中克隆到两条新的cDNA序列,它们编码蛋白与线虫Cyp-10蛋白同源性分别为52%和72%。cDNA序列分析发现是同一个基因(命名为peptidylproly isomerase(cycl... 详细信息

我们运用基因芯片筛选出与胶质瘤相关的新基因。通过大规模cDNA测序,从人胎脑cDNA文库中克隆到两条新的cDNA序列,它们编码蛋白与线虫Cyp-10蛋白同源性分别为52%和72%。cDNA序列分析发现是同一个基因(命名为peptidylproly isomerase(cyclophilin)-like 3(简称PPIL3))的两个

关键词：胶质瘤新基因 PPIL-3 细胞凋亡过程星形细胞瘤核酸酶编码蛋白基因芯片技术

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人脑胶质瘤细胞的分离、培养、冻存与复苏

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江苏医药 2010年第13期36卷 1541-1543页

作者：施炜王中陈娟吕成林陈洪广陈建南通大学附属医院神经外科外科综合实验室 226001 苏州大学附属第一医院神经外科

目的研究分离、培养人脑胶质瘤细胞方法。方法手术获得切除胶质瘤新鲜标本30例,酶消化法分离培养获得人脑胶质瘤细胞,利用含10%胎牛血清的DMEM培养液进行体外原代培养及传代,观察肿瘤细胞生长特点。运用冻存液冻存培养的胶质瘤细胞,分... 详细信息

目的研究分离、培养人脑胶质瘤细胞方法。方法手术获得切除胶质瘤新鲜标本30例,酶消化法分离培养获得人脑胶质瘤细胞,利用含10%胎牛血清的DMEM培养液进行体外原代培养及传代,观察肿瘤细胞生长特点。运用冻存液冻存培养的胶质瘤细胞,分别于冻存后1、4、8、12、16、20、24周复苏,计数复苏后活细胞比例,进行再培养并观察肿瘤细胞生存情况。结果从脑胶质瘤标本分离出的胶质瘤细胞可进行原代培养及传代。冻存1、4、8、12、16、20、24周后脑胶质瘤细胞复苏的成活比例分别为54%、52%、52%、50%、48%、46%、40%。复苏后再培养的肿瘤细胞生长良好。结论通过分离培养手术切除胶质瘤标本可获得脑胶质瘤细胞株,肿瘤细胞可通过冻存的方式进行保存,冻存后复苏的细胞可再培养。

关键词：胶质瘤细胞

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人脑胶质瘤中IDH1突变的表达及其意义

人脑胶质瘤中IDH1突变的表达及其意义

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中华医学会神经外科学分会第九次学术会议

作者：周幽心王君祥苏作鹏孙婷陈桂林韦永新孙春明邵忠周岱杜子威苏州大学附属第一医院神经外科暨脑神经研究室

目的研究异柠檬酸脱氢酶同工酶1(IDH1)基因突变在不同类型胶质瘤中的表达情况及其临床意义。方法采用基因片段测序的方法检测92例人脑胶质瘤及10例其他中枢神经系统肿瘤的IDH1突变情况。

关键词：人脑胶质瘤星形细胞瘤

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脑胶质瘤相关新基因PKIβ的表达与蛋白质活性研究

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中华实验外科杂志 2009年第9期26卷 1102-1105页

作者：祁震宇王中惠国桢李瑶顾少华谢毅苏州大学附属第一医院神经外科 215006 复旦大学遗传工程国家重点开放实验室

目的应用基因芯片技术获取正常成人脑组织与人脑胶质瘤中差异表达的基因，并对其中1条基因进行克隆和表达。方法抽提正常成人脑组织与人脑胶质瘤组织中的mRNA来制备探针，经杂交、洗涤后，通过计算机观察两者表达谱的差异，对436F11克... 详细信息

目的应用基因芯片技术获取正常成人脑组织与人脑胶质瘤中差异表达的基因，并对其中1条基因进行克隆和表达。方法抽提正常成人脑组织与人脑胶质瘤组织中的mRNA来制备探针，经杂交、洗涤后，通过计算机观察两者表达谱的差异，对436F11克隆子进行了Northern blot、生物信息学分析和蛋白质的表达纯化。结果通过4次基因芯片筛选，获得15条与胶质瘤相关的新基因，经Northern blot证实436F11基因在人正常脑组织中高表达，而在人脑胶质瘤中低表达。BLASTn和BLASTx分析显示，436F11基因为全长新基因，共编码78个氨基酸，其理论相对分子质量为8468Da，等电点为4．69，与鼠PKI69％同源，命名为人PKI。并在大肠杆菌中得到了PKI较高的表达蛋白，经纯化，在SDS—PAGE胶上获得1条清晰的条带。重组的PKIβ-78蛋白和PKIβ—71蛋白均对PKAC距基有明显抑制作用。结论基因芯片筛选正常脑组织与人脑胶质瘤差异表达的基因具有样品用量少，高质量，高速度，高敏感等特性。人PKI可能是与人脑胶质瘤形成有关的一条全长新基因。

关键词：脑胶质瘤基因芯片基因表达

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脑胶质瘤相关的全长新基因PPIL-3的克隆和蛋白质特性的研究

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中华神经外科杂志 2009年第3期25卷 213-217页

作者：祁震宇惠国桢李瑶顾少华谢毅苏州大学附属第一医院神经外科 215006 复旦大学遗传工程国家重点开放实验室

目的运用基因芯片技术获取正常成人脑组织与人脑胶质瘤中差异表达的基因，并对其中一条与脑胶质瘤相关的新基因进行了克隆和表达的研究。方法抽提正常成人脑组织与人脑胶质瘤组织中的mRNA来制备探针，经杂交、洗涤后，通过计算机观察二... 详细信息

目的运用基因芯片技术获取正常成人脑组织与人脑胶质瘤中差异表达的基因，并对其中一条与脑胶质瘤相关的新基因进行了克隆和表达的研究。方法抽提正常成人脑组织与人脑胶质瘤组织中的mRNA来制备探针，经杂交、洗涤后，通过计算机观察二者表达谱的差异情况，对681F05克隆子进行了Northern blot，生物信息学分析和蛋白质的表达。结果通过4次基因芯片筛选，获得15条与胶质瘤相关的新基因，经Northern blot证实681F05基因在人正常脑组织中低表达，而在人脑胶质瘤中高表达。BLASTn和BLASTx分析显示，它们编码蛋白与线虫Cyp-10蛋白同源性分别为52％和72％。cDNA序列分析发现这两个克隆是同一个基因（cyclophilin-like gene，PPIL3）的两个不同的剪切体（PPII_3a和PPIL3b）。并在大肠杆菌中得到了PPIL3a和PPIL3b与GST较好表达的融合蛋白。PPIL3b蛋白具有依赖于Ca2＋／Mg2＋核酸酶活性，其核酸酶活性可被一定浓度的K＋／Na＋抑制。结论基因芯片筛选正常脑组织与人脑胶质瘤差异表达的基因具有样品用量少、高质量、高速度、高敏感等特性。681F05基因可能是与人脑胶质瘤形成有关的一条全长新基因。

关键词：基因芯片神经胶质瘤 PPIL-3 基因

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Tet-off/Tet-on基因工程鼠中脑肿瘤干细胞的克隆与鉴定

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中国肿瘤临床 2009年第2期36卷 106-109,113页

作者：李英斌陈骅夏春林苏州大学衰老与神经疾病实验室及博习临床解剖学研究所江苏省苏州市215123 南京医科大学附属南京第一医院神经外科

目的：Tet—off／Tet—on转基因脑肿瘤小鼠模型中分离鉴定脑肿瘤干细胞，为进一步研究其是否起源于神经干细胞奠定基础。方法：从出现临床症状的转基因小鼠天幕区肉眼可见的肿瘤组织中取材，一部分做冰冻切片；另一部分制成单细胞悬液... 详细信息

目的：Tet—off／Tet—on转基因脑肿瘤小鼠模型中分离鉴定脑肿瘤干细胞，为进一步研究其是否起源于神经干细胞奠定基础。方法：从出现临床症状的转基因小鼠天幕区肉眼可见的肿瘤组织中取材，一部分做冰冻切片；另一部分制成单细胞悬液，培养于含生长因子的无血清培养基和含血清培养基。在光镜下观察常规病理，用相差显微镜和电镜分别观察细胞形态及其超微结构，用流式细胞仪检测Hoechst33342阴性的SP细胞，以及其染色体倍体和细胞周期，免疫荧光染色检测细胞球体及其分化细胞中的神经巢蛋白（Nestin）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、glial fibrillary acidic protein（GFAP）表达情况。结果：肿瘤位置均位于小脑天幕上下约2—3mm的松果体区域内，常规病理诊断为髓母细胞瘤。肿瘤细胞在无血清培养条件下，呈悬浮的球状生长，在含血清培养条件下贴壁分化成瘤性胶质细胞、神经元。电镜见到了核质比高、细胞器不发达、具干细胞特征的细胞。流式细胞仪检测肿瘤细胞球中的SP（side population）细胞为17．27％，异倍体细胞为26．77％。免疫荧光染色发现细胞球中大部分细胞表达干细胞标志物Nestin，少数细胞表达分化标志物GFAP和NSE。与之相反，贴壁细胞大部分表达分化标志物微管相关蛋白2（MAP2）或胶质纤维酸性蛋白（GFAP），同时共表达干细胞标志物Nestin。结论：Tet—off／Tet—on转基因小鼠脑肿瘤组织中存在具有自我更新和多向分化潜能的脑肿瘤干细胞。

关键词：转基因工程鼠胶质瘤肿瘤干细胞

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亚低温对大鼠脑创伤性非断离轴突损伤继发断离的影响

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中华创伤杂志 2009年第4期25卷 314-316页

作者：陈革惠国桢周建宏陆爻忠蒋云召王泳冯淑静李成万无锡市第三人民医院神经外科 214041 无锡市第三人民医院中心实验室 214041 苏州大学附属第一医院神经外科

目的研究亚低温对创伤性非断离轴突损伤（nondisruptive axonal injury，NDAI）继发断离的影响，探讨其治疗价值。方法将16只雄性SD大鼠采用随机数字表法分为亚低温组（32℃，持续6h）和对照组（37．5℃）各8只，液压冲击致大鼠脑弥散... 详细信息

目的研究亚低温对创伤性非断离轴突损伤（nondisruptive axonal injury，NDAI）继发断离的影响，探讨其治疗价值。方法将16只雄性SD大鼠采用随机数字表法分为亚低温组（32℃，持续6h）和对照组（37．5℃）各8只，液压冲击致大鼠脑弥散性损伤，非磷酸化神经丝蛋白（NF68）免疫组化显示肿胀轴突及轴突球，比较两组伤后24h、72h胼胝体区、间脑中脑区、桥脑延脑区和小脑区肿胀轴突及轴突球最大密度变化。结果伤后24h，亚低温组各计数区肿胀轴突及轴突球明显减少（P〈0．05），间脑中脑区、桥脑延脑区、小脑区尤为显著（P〈0．01）；而伤后72h，亚低温组仅在距冲击部位较远的桥脑延脑区、小脑区减少（P〈0．05，P〈0．01），距冲击部位较近的胼胝体区、间脑中脑区不明显（P〉0．05）。结论亚低温早期无论对损伤轻或重的NDAI均可延滞其继发断离的进程，但随着时间推移，这种效应逐渐减弱，仅对损伤较轻的NDAI有效，亚低温可能阻断部分损伤较轻的NDAI的继发断离。

关键词：脑损伤轴突低温

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转基因脑肿瘤小鼠模型中成体神经干细胞与脑肿瘤干细胞的克隆与鉴定

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江苏医药 2009年第10期35卷 1185-1188,F0002页

作者：李英斌陈骅夏春林苏州大学衰老与神经疾病实验室及博习临床解剖学研究所 215123 南京医科大学附属南京第一医院神经外科

目的从Tet-on转基因脑肿瘤小鼠模型中分离鉴定成体神经干细胞和脑肿瘤干细胞。方法分别从转基因小鼠肿瘤和室管膜下区取材,将细胞培养于含生长因子的无或含血清培养基。光镜下观察病理,相差显微镜和电镜下分别观察细胞形态及超微结构,... 详细信息

目的从Tet-on转基因脑肿瘤小鼠模型中分离鉴定成体神经干细胞和脑肿瘤干细胞。方法分别从转基因小鼠肿瘤和室管膜下区取材,将细胞培养于含生长因子的无或含血清培养基。光镜下观察病理,相差显微镜和电镜下分别观察细胞形态及超微结构,流式细胞术检测Hoechst33342阴性的SP细胞、染色体倍体和细胞周期,免疫荧光染色检测细胞球体及分化细胞表面标志物。结果无血清培养条件下,肿瘤细胞和室管膜下区细胞均呈悬浮球状生长,含血清培养条件下贴壁分化。成体神经干细胞球细胞较小,形态相对较规则。电镜下两者均表现核质比高、细胞器不发达、具干细胞特征,但在细胞器发育上有所差异。肿瘤细胞球中异倍体细胞为26.77%,而神经球中细胞均为二倍体。免疫荧光染色两种细胞球中大部分细胞表达干细胞标志物Nestin,少数细胞表达分化标志物GFAP和NSE。贴壁后两者的大部分细胞表达分化标志物,且部分细胞共表达前体细胞标志。结论Tet-on转基因脑肿瘤小鼠中存在具有自我更新和多向分化潜能的脑肿瘤干细胞和神经干细胞。

关键词：转基因工程鼠胶质瘤肿瘤干细胞成体神经干细胞

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