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中华血液学杂志 2013年第9期34卷 812-815页

作者：潘芝娟何军苏州大学附属第一医院、江苏省血液研究所卫生部血栓与止血重点实验室215006

近期有研究表明异基因造血干细胞移植（allo—HSCT）患者体内存在抗供者特异性抗体（donor-specific antibodies，DSA），尤其是抗人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）抗体。HLA是影响造血干细胞移植物植入、造血重建时间... 详细信息

近期有研究表明异基因造血干细胞移植（allo—HSCT）患者体内存在抗供者特异性抗体（donor-specific antibodies，DSA），尤其是抗人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）抗体。HLA是影响造血干细胞移植物植入、造血重建时间延缓和存活最重要因素之一，特别是抗供者特异性HLA抗体（DSHA）与供受者HLA错配allo—HSCT失败密切相关，

关键词：异基因造血干细胞移植抗HLA抗体人类白细胞抗原供者特异性预后干细胞移植物特异性抗体 HLA错配

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无关供者造血干细胞移植治疗Ph阳性急性淋巴细胞白血病的预后因素分析

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中华器官移植杂志 2013年第10期34卷 611-615页

作者：叶凡唐晓文周倩兰岑建农姚莉常伟荣孙爱宁吴德沛苏州大学附属第一医院血液科江苏省血液研究所卫生部血栓与止血重点实验室 215006

目的分析无关供者造血干细胞移植（HSCT）联合伊马替尼治疗Ph＋急性淋巴细胞白血病（PhtALL）的预后及其影响因素。方法2002年2月至2012年2月间，25例行无关供者HSCT的Ph＋-ALL患者纳入研究，其中移植前处于第1次完全缓解（CRl）期18例... 详细信息

目的分析无关供者造血干细胞移植（HSCT）联合伊马替尼治疗Ph＋急性淋巴细胞白血病（PhtALL）的预后及其影响因素。方法2002年2月至2012年2月间，25例行无关供者HSCT的Ph＋-ALL患者纳入研究，其中移植前处于第1次完全缓解（CRl）期18例，≥第2次完全缓解（CR2）期7例；BCR／ABL融合基因为MajorBCR／ABL型（M型）9例，minorBCR／ABL型（m型）16例。移植前均给予伊马替尼治疗。术后采用环孢素A、甲氨蝶呤、吗替麦考酚酯及抗胸腺细胞球蛋白预防移植物抗宿主病（GVHD）。结果中位随访时间为20．5个月，HSCT后中性粒细胞和血小板植活的中位时间分别是12d（10--20d）及12．5d（10--36d）。移植后30d所有患者均为完全供者嵌合型。2年的总体存活率（OS）和无白血病存活率（LFS）分别为（55．3＋10．9）％和（49．1＋12．2）％，2年的累计复发率（RI）和急性GVHD的累计发生率分别为（29．6＋9．4）％和（48．0＋10．6）％。单因素分析提示，CRl的患者OS明显高于非CRl患者（77．1％和20％，P=0．028），LFS也高于非CRl患者（74．1％和0，P=0．030）；BCR／ABL融合基因M型的患者OS比m型患者低（22．2％和80．2％，P=0．010）；LFS也比m型患者低（13．9％和78．3％，P=0．015）；而年龄、性别、初诊白细胞数、预处理方案、干细胞来源、HLA相合情况、急性GVHD等对生存无明显影响。多因素分析提示，移植前缓解状态及BCR／ABL融合基因类型是OS的危险因素[P=0．038，Exp（B）=3．823；P=0．023，Exp（B）=4．8291。结论移植前缓解状态及BCR／ABL融合基因类型是影响无关供者HSCT预后的主要因素，患者处于CRl期进行移植获得的效果更佳，应密切监测融合基因M型患者移植后状态。

关键词：造血干细胞移植费城染色体白血病,淋巴细胞,急性预后融合蛋白质类,bcr-abl

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人血管性血友病因子裂解蛋白酶pEGFP-N1真核表达载体的构建及其在HeLa细胞中的表达

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中国实验血液学杂志 2013年第1期21卷 126-129页

作者：凌婧马珍妮苏建阮长耿苏州大学附属第一医院、江苏省血液研究所、卫生部血栓与止血重点实验室江苏苏州215006

本研究旨在构建人血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS13)的pEGFP-N1真核表达载体,为进一步研究ADAMTS13在细胞内合成及其分泌提供有力工具。通过PCR方法获取目的基因片段,并在目的基因两端加上限制性酶切位点。限制性内切酶酶切后,连接... 详细信息

本研究旨在构建人血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS13)的pEGFP-N1真核表达载体,为进一步研究ADAMTS13在细胞内合成及其分泌提供有力工具。通过PCR方法获取目的基因片段,并在目的基因两端加上限制性酶切位点。限制性内切酶酶切后,连接至pEGPF-N1真核表达载体。连接后获得质粒进行酶切鉴定及DNA测序验证,并转染HeLa细胞。通过荧光显微镜检测绿色荧光蛋白表达,Western blot方法鉴定所得蛋白。结果表明,酶切鉴定及DNA测序确认目的基因与载体正确连接,在荧光显微镜下观察到绿色荧光。Western blot显示,转染后HeLa细胞表达ADAMTS13蛋白。结论:成功构建了ADAMTS13-pEGFP-N1真核表达载体,为进一步研究ADAMTS13合成、分泌及其代谢的生理学机制提供了研究工具。

关键词： ADAMTS13 pEGFP-N1载体载体构建 HeLa细胞

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15例成人Ph染色体和/或BCR-ABL阳性混合表型急性白血病的临床及实验室特征分析

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中国实验血液学杂志 2013年第5期21卷 1116-1120页

作者：颜灵芝陈苏宁平娜娜王琴荣刘红丁子轩朱明清梁建英刘丹丹岑建农潘金兰仇惠英孙爱宁吴德沛苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所卫生部血栓与止血重点实验室江苏苏州215006

本研究总结成人Ph染色体和/或BCR-ABL融合基因阳性的混合表型急性白血病(Ph+MPAL)患者的临床和实验室特征。回顾性分析2009年1月-2012年9月在我院诊治的15例Ph+MPAL的特征及细胞形态学、免疫学、细胞遗传学和分子生物学检测以及临床随... 详细信息

本研究总结成人Ph染色体和/或BCR-ABL融合基因阳性的混合表型急性白血病(Ph+MPAL)患者的临床和实验室特征。回顾性分析2009年1月-2012年9月在我院诊治的15例Ph+MPAL的特征及细胞形态学、免疫学、细胞遗传学和分子生物学检测以及临床随访结果。Ph+MPAL的诊断采用WHO-2008分类标准。结果表明,Ph+在同时期总MPAL群体中的检出率为17.2%(15/87)。15例患者中男性7例、女性8例;中位年龄为51(16-81)岁;初诊时中位WBC计数为69(12.7-921)×109/L。形态学检查显示为急性髓系白血病(AML)者2例(13.3%),急性淋巴细胞白血病(ALL)者6例(40.0%)、杂合型白血病(HAL)者7例(46.7%)。免疫学分析表明,此15例患者均为B淋系和髓系混合表达,93.3%患者的白血病细胞表面有CD34的表达,其中64.3%(9/14)的患者CD34表达率在60%以上。染色体R显带技术检测显示,正常核型者2例(13.3%),单纯Ph+者8例(53.3%),Ph+伴附加异常者5例(33.3%)。附加的染色体异常分别为-7(2例)、+Ph(1例)、dic(7;9)(1例)、i(8q)和-16(1例);有残余正常分裂相者4例。多重巢式PCR检测发现,e1a2型融合基因6例(40.0%)、b2a2或b3a2型共9例(60.0%)。7例Ph+MPAL患者中有4例检测到IKZF1基因缺失。本组中10例患者诱导治疗一疗程后完全缓解(CR)率为70.0%,其中联合酪氨酸激酶抑制剂(TKI)组的CR率(83.3%;5/6),优于单纯化疗组(50.0%;2/4),但差异无统计学意义(P>0.05)。随访至今,6例患者由于疾病复发或进展而死亡(60.0%;6/10)。异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)组患者总生存优于单纯化疗组(P=0.004)。结论:Ph+MPAL主要为B淋系和髓系混合表达,多数年龄较大,高表达CD34抗原。在BCR-ABL融合基因亚型和基因突变方面类似于Ph+急性白血病。初诊时WBC计数是独立的预后因素,复发进展仍是此类患者死亡的主要原因。联合TKI和allo-HSCT或许能改善预后,有必要进行前瞻性、多中心的临床试验来验证。

关键词： Ph染色体 BCR-ABL融合基因混合表型急性白血病

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移植和一些临床因素对弥漫大B细胞淋巴瘤患者预后影响

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中国实验血液学杂志 2013年第3期21卷 623-627页

作者：赵世香韩悦朱倩王倩张文娟陈晓晨孙爱宁金正明仇惠英唐晓文傅琤琤何广胜苗瞄马骁吴德沛苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所卫生部血栓与止血重点实验室江苏苏州215006

本研究回顾性分析经正规R-CHOP方案治疗弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者的生存状况,探讨自体造血干细胞移植(auto-HSCT)、病理类型、国际预后指数(IPI)等因素对预后的影响。收集2004-2011年在本院接受R-CHOP21≥6次化疗的DLBCL患者116例... 详细信息

本研究回顾性分析经正规R-CHOP方案治疗弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者的生存状况,探讨自体造血干细胞移植(auto-HSCT)、病理类型、国际预后指数(IPI)等因素对预后的影响。收集2004-2011年在本院接受R-CHOP21≥6次化疗的DLBCL患者116例。分析单纯化疗及化疗联合自体造血干细胞移植取得的疗效,以及不同免疫病理类型、临床观察指标如IPI、超敏C反应蛋白(HSCRP)、a-羟丁酸脱氨酶(HBDH)等因素对DLBCL患者预后的影响,包括对总体生存率(OS)、无进展生存率(PFS)的系统观察。结果表明,接受R-CHOP21方案治疗的116例DLBCL患者5年OS为72.4%,其中30例患者接受自体造血干细胞移植(Ann Arbor分期均为Ⅲ-Ⅳ期)。30例移植组患者预后较86例单纯化疗组好(5年OS为82.5%vs 69.0%,5年PFS为77.1%vs 68.3%)(P<0.05);生发中心(GCB)型组患者预后较活化亚型(ABC)组好(P<0.05);IPI 3-5分、年龄≥60岁、B症状、LDH升高、HSCRP升高、HBDH升高是预后不良因素(P<0.05),其中LDH升高、年龄≥60岁、B症状是本研究患者的独立危险因素(P<0.05)。结论:自体造血干细胞移植联合R-CHOP治疗方案能明显改善DLBCL患者的预后,GCB型患者预后优于ABC型,B症状、IPI评分、LDH、HSCRP、HBDH是预后的影响因素。

关键词：弥漫大B细胞淋巴瘤自体造血干细胞移植 R-CHOP方案

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骨髓增生异常综合征病态造血的流式细胞术检测

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中国实验血液学杂志 2013年第4期21卷 1069-1072页

作者：李锦何广胜苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所卫生部血栓与止血重点实验室江苏苏州215006

骨髓增生异常综合征(MDS)是一组异质性疾病,以病态造血及无效造血为主要表现,病态造血在MDS的诊断中具有重要作用,但骨髓细胞形态学异常并不只出现在MDS中,且当形态学以及细胞遗传学评估不能提供足够的MDS诊断信息时,流式细胞术(FCM)对... 详细信息

骨髓增生异常综合征(MDS)是一组异质性疾病,以病态造血及无效造血为主要表现,病态造血在MDS的诊断中具有重要作用,但骨髓细胞形态学异常并不只出现在MDS中,且当形态学以及细胞遗传学评估不能提供足够的MDS诊断信息时,流式细胞术(FCM)对MDS免疫表型的分析所提供的信息就显得尤为重要。通过多参数评估髓系和单核系细胞成熟和抗原表达模式有助于识别MDS中髓系形态异常情况;以免疫表型评价红系的病态造血存在困难,但评价胞浆内铁代谢相关蛋白,MDS红系显示出"铁超负荷",表现为铁蛋白含量增加而转铁蛋白受体下降,与红系的病态造血紧密相关联;CD34+细胞比例增高,表面抗原异常表达亦很有意义。本文就应用流式细胞术检测骨髓增生异常综合征病态造血的研究进行综述。

关键词：骨髓增生异常综合征流式细胞术病态造血

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EBV特异性细胞毒性T淋巴细胞体外诱导培养及杀伤效果鉴定

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中国实验血液学杂志 2013年第6期21卷 1597-1601页

作者：陈广华顾斌陈峰王荧乔曼刘慧文冯宇锋戴丽君朱子玲吴德沛苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所卫生部血栓与止血重点实验室江苏苏州215006

本研究旨在探讨EB病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞(EBV-CTL)体外诱导和扩增培养的方法,并检测其特异性杀伤的效果。采集EBV血清抗体阳性的6例正常供体的外周血单个核细胞(PBMNC),用EBV转化的B淋巴细胞系(BLCL)作为抗原递呈细胞及抗原刺激剂... 详细信息

本研究旨在探讨EB病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞(EBV-CTL)体外诱导和扩增培养的方法,并检测其特异性杀伤的效果。采集EBV血清抗体阳性的6例正常供体的外周血单个核细胞(PBMNC),用EBV转化的B淋巴细胞系(BLCL)作为抗原递呈细胞及抗原刺激剂,经辐照灭活后不断刺激培养自体PBMNC,诱导产生EBV-CTL,并将其扩增培养;采用流式细胞仪鉴定其免疫表型,然后检测不同效靶细胞比例条件下EBV-CTL对自体BLCL(autoBLCL)、自体植物血凝素培养的B淋巴母细胞(PHA-blast)、HLA不合供体的BLCL(alloBLCL)、K562细胞株的杀伤效果。结果表明,6例EBV血清抗体阳性正常供体来源的PBMNC在体外成功筛选并扩增培养了EBV-CTL,扩增效率为PBMNC数的18.6-55.0倍。刺激10次培养后的EBV-CTL对autoBLCL在20∶1、10∶1、5∶1三种效靶细胞比例条件下特异性杀伤效率的平均值分别为59.4%、43.2%、29.0%;对PHA-blast、alloBLCL、K562的非特异性杀伤率在上述三种效靶细胞比例下平均值依次为7.1%、9.4%、10.3%(P<0.05),6.6%、8.3%、8.1%(P<0.05),5.4%、7.3%、6.3%(P<0.05)。结论:EBV-CTL能有效在体外筛选培养并扩增,并能有效杀伤HLA相合的BLCL,可望成为EBV相关性移植后淋巴细胞增殖性疾病的过继免疫治疗的有效方法。

关键词： EB病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞移植后淋巴细胞增殖性疾病

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调节性B细胞与免疫相关性疾病的关系

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中华微生物学和免疫学杂志 2013年第11期33卷 877-881页

作者：刘立民吴德沛苏州大学附属第一医院血液科、江苏省血液研究所、卫生部血栓与止血重点实验室 215006

近些年来，人们发现B细胞除具有产生各种抗体、发挥体液调节作用之外，还存在一种类似于调节性T细胞（regulatory T cell，Treg）的、可以调节免疫应答的细胞亚群--调节性 B 细胞（ regulatory B cell， Breg ）。最近研究表明，与 Treg... 详细信息

近些年来，人们发现B细胞除具有产生各种抗体、发挥体液调节作用之外，还存在一种类似于调节性T细胞（regulatory T cell，Treg）的、可以调节免疫应答的细胞亚群--调节性 B 细胞（ regulatory B cell， Breg ）。最近研究表明，与 Treg 的亚型（ Tr1、Tr3、T FoxP3＋）相对应， Breg 亦具有 Br1、Br3、B FoxP3＋亚型［1］。 Breg通过产生抑制性细胞因子（白细胞介素-10， IL-10；转化生长因子-β， TGF-β）或分泌抑制性抗体影响其他免疫细胞，在免疫调节中发挥作用［2］。 Breg与免疫耐受、自身免疫性疾病、过敏性疾病、肿瘤、感染等具有重要关系，本文将对Breg与免疫相关性疾病的关系做一综述。

关键词：调节性T细胞免疫相关性疾病 B细胞抑制性细胞因子白细胞介素-10 转化生长因子-β 自身免疫性疾病 FoxP3

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阵发性睡眠性血红蛋白尿症的临床进展

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中国实验血液学杂志 2013年第6期21卷 1627-1630页

作者：龚亚文何广胜苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所卫生部血栓与止血重点实验室江苏苏州215006

随着FLAER高灵敏度流式细胞仪诊断技术和补体C5单克隆抗体的应用,许多学者对阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)的认识发生了改变。这些新的研究成果表明,人源型抗C5单克隆抗体的治疗能改变PNH的自然病史,能从根本上减少血栓栓塞、控制血管... 详细信息

随着FLAER高灵敏度流式细胞仪诊断技术和补体C5单克隆抗体的应用,许多学者对阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)的认识发生了改变。这些新的研究成果表明,人源型抗C5单克隆抗体的治疗能改变PNH的自然病史,能从根本上减少血栓栓塞、控制血管内溶血、减少或消除输血的需求,减少了疾病相关的死亡率。本文对PNH和骨髓衰竭症之间的关系、抗C5单克隆抗体治疗PNH的长期疗效、控制PNH血管内和血管外溶血的新治疗策略进行综述。

关键词：抗C5单克隆抗体溶血阵发性睡眠性血红蛋白尿症再生障碍性贫血

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七例以难治性缺铁性贫血为首发表现的阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者临床特征分析

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中华血液学杂志 2013年第1期34卷 69-70页

作者：孙莺心朱明清何广胜苗瞄王秀丽方宝枝路丛刘真真吴倩杨永吴德沛孙爱宁苏州大学附属第一医院血液科、江苏省血液研究所、卫生部血栓与止血重点实验室 215006

阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）是一种血管内溶血性疾病，以贫血及血红蛋白尿为主要临床表现。长期慢性血管内溶血，血红蛋白和（或）含铁血黄素随尿液排出，将引发缺铁性贫血（IDA）。部分PNH所致IDA患者由于PNH病情隐匿，缺铁原因... 详细信息

阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）是一种血管内溶血性疾病，以贫血及血红蛋白尿为主要临床表现。长期慢性血管内溶血，血红蛋白和（或）含铁血黄素随尿液排出，将引发缺铁性贫血（IDA）。部分PNH所致IDA患者由于PNH病情隐匿，缺铁原因持续存在，补铁治疗多不易奏效，甚至由于补铁而加重PNH病情[1-2]。我们分析7例以难治性IDA为首发表现的PNH患者临床资料，现报告如下。

关键词：阵发性睡眠性血红蛋白尿症缺铁性贫血首发表现难治性临床特征患者血管内溶血补铁治疗

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