检索结果-内蒙古大学图书馆

中国药科大学学报 2024年第2期55卷 147-157页

作者：姚春露张惟杰张云龙邓朝霞王梦灵张左玲王琛宋沁馨邹秉杰中国药科大学药物质量与安全预警教育部重点实验室南京210009

单细胞蛋白质的差异化表达及其亚细胞定位同机体的生理状态和病理机制密切相关。单细胞蛋白质原位成像方法的发展为空间单细胞蛋白质组学研究以及单细胞蛋白图谱绘制提供了强有力的工具。本文对近几年开发的基于抗体有序多轮孵育的循环... 详细信息

单细胞蛋白质的差异化表达及其亚细胞定位同机体的生理状态和病理机制密切相关。单细胞蛋白质原位成像方法的发展为空间单细胞蛋白质组学研究以及单细胞蛋白图谱绘制提供了强有力的工具。本文对近几年开发的基于抗体有序多轮孵育的循环免疫荧光成像、基于金属元素标签抗体的质谱成像、基于抗体DNA条形码的荧光成像、基于基因编码的荧光蛋白成像、基于拉曼光谱或X射线的光谱成像等单细胞蛋白质成像方法进行了总结,并对它们的成像原理作简要说明。文章重点关注了这些方法的多重性能、成像分辨率以及信号放大性能,并分析了它们在实际科研和临床工作中的应用特点,希望为新的单细胞蛋白质成像方法的开发提供参考,并为生物医学和精准医学的发展提供助力。

关键词：单细胞蛋白质免疫荧光质谱成像荧光蛋白光谱成像进展

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基于CRISPR/Cas9系统的原位生物成像方法进展

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中国药科大学学报 2025年

作者：张惟杰尹王文康冯家洛沈玥赵羿王琛邹秉杰宋沁馨中国药科大学药物质量与安全预警教育部重点实验室

原位生物成像技术为直接观察细胞内核酸或蛋白质生物靶标的定位、表达和相互作用提供了强有力的工具，对于深入理解细胞功能和疾病机制至关重要。CRISPR/Cas9系统作为一种革命性的基因编辑工具，近年来也被用于开发高效的原位成像工具... 详细信息

原位生物成像技术为直接观察细胞内核酸或蛋白质生物靶标的定位、表达和相互作用提供了强有力的工具，对于深入理解细胞功能和疾病机制至关重要。CRISPR/Cas9系统作为一种革命性的基因编辑工具，近年来也被用于开发高效的原位成像工具。本文综述了近年来发展的基于Cas9蛋白、工程化引导RNA（sgRNA）及其偶联荧光标签的CRISPR/Cas9原位成像方法，并对其在活细胞与固定细胞中的应用特点进行了比较分析。文章重点关注了这些方法的特异性、信号放大效率和多重成像能力，并结合当前的研究进展进行了深入讨论。本文旨在为基于CRISPR/Cas9系统的原位生物成像技术提供更全面的见解和参考概述，并为相关领域的研究提供参考和指导。

关键词： CRISPR/Cas9 工程化sgRNA 原位成像荧光标签

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脂肪酸代谢在肾脏疾病中的作用及中药干预研究进展

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中国药科大学学报 2023年第5期54卷 527-535页

作者：郑志茹张尊建许风国张培中国药科大学药物质量与安全预警教育部重点实验室南京210009

脂肪酸代谢主要包括脂肪酸氧化(fatty acid oxidation,FAO)和脂肪酸合成,其在信号转导、能量产生及炎症调节等过程均发挥重要作用。急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)、慢性肾病(chronic kidney disease,CKD)与肾癌(renal cell carci... 详细信息

脂肪酸代谢主要包括脂肪酸氧化(fatty acid oxidation,FAO)和脂肪酸合成,其在信号转导、能量产生及炎症调节等过程均发挥重要作用。急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)、慢性肾病(chronic kidney disease,CKD)与肾癌(renal cell carcinoma,RCC)是典型的肾脏疾病,发病机制复杂、易诱发多种并发症且临床尚无特异性干预措施。现有研究揭示,脂肪酸代谢与多种肾脏疾病的发生发展密切相关。文章综述了肾脏中脂肪酸的代谢特征、脂肪酸代谢失调与AKI、CKD及RCC等肾脏疾病的内在关系,总结了靶向脂肪酸代谢通路缓解肾脏疾病的中药及相关活性成分,为深入研究肾脏疾病脂肪酸代谢相关机制、寻找靶向干预手段提供理论参考。

关键词：脂肪酸代谢急性肾损伤慢性肾病肾癌中药

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单管闭管多重PCR检测技术的发展

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中国生物化学与分子生物学报 2025年

作者：胡婷婷张云龙邹秉杰中国药科大学药物质量与安全预警教育部重点实验室

核酸检测技术因快速、灵敏和特异等特点，在病原体检测等领域广泛应用。因疾病相关的核酸标志物众多，多重核酸检测需求渐增。多重聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）可对多种靶标同时扩增，但扩增后分析过程存在开管易... 详细信息

核酸检测技术因快速、灵敏和特异等特点，在病原体检测等领域广泛应用。因疾病相关的核酸标志物众多，多重核酸检测需求渐增。多重聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）可对多种靶标同时扩增，但扩增后分析过程存在开管易污染和技术要求高等问题。随着检测技术的不断进步，一系列简便和可靠且无需开管处理的单管多重PCR检测技术相继出现。常见的技术有基于荧光探针的单管闭管多重PCR检测方法，主要利用不同荧光标记对多种靶标进行区分，与不同的特异性酶切反应结合，能够实现肿瘤罕见突变的多重检测以及单核苷酸特异性分型。此外，基于熔解温度差异的单色熔解曲线分析方法，在单个荧光通道内实现了多靶标并行检测，若在多个荧光通道内进行则称为多色熔解曲线分析方法，可将检测靶标数量提升至数十种，显著突破了荧光通道数量对检测重数的限制。同时，利用荧光标记进行不同组合的荧光编码方法，也为单管闭管多重PCR检测提供了新的思路，包括编码同一靶标对应的不同荧光标记产生信号的先后顺序、利用2种荧光标记组合识别特定靶标、控制不同靶标荧光信号幅度等方式，也能够提高检测重数。本文从原理、应用及方法优缺点等多个维度出发，对近年来单管闭管多重PCR检测技术的研究进展进行概括并展望，为此后的科研探索与应用提供有价值的参考。

关键词：核酸检测多重核酸检测聚合酶链式反应单管反应检测方法

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基于两步衍生化-HPLC-MS的体内游离脂肪酸定性分析研究

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中国现代应用药学 2024年第20期41卷 2789-2798页

作者：肖雯任海慧田媛张尊建中国药科大学药物质量与安全预警教育部重点实验室南京210009

目的建立两步衍生化-高效液相色谱质谱联用方法,对生物样本中的游离脂肪酸进行定性分析,重点区分双键位置异构体。方法采用间氯过氧苯甲酸和N,N-二乙基乙二胺对6种具有不同饱和度的代表性游离脂肪酸进行两步衍生化,采用高效液相色谱串... 详细信息

目的建立两步衍生化-高效液相色谱质谱联用方法,对生物样本中的游离脂肪酸进行定性分析,重点区分双键位置异构体。方法采用间氯过氧苯甲酸和N,N-二乙基乙二胺对6种具有不同饱和度的代表性游离脂肪酸进行两步衍生化,采用高效液相色谱串联三重四极杆质谱检测。结果经标准品验证,证明采用质谱裂解数据回溯游离脂肪酸结构的分析思路可行、可靠;从比格犬血浆中共鉴定出游离脂肪酸38种,其中单不饱和的13种,多不饱和的17种,饱和的8种;可区分双键位置异构体10种,并准确定位低丰度的二十二碳六烯酸双键位置。结论建立的两步衍生化-高效液相色谱质谱联用方法为体内游离脂肪酸的定性分析,特别是区分双键位置异构方面提供了新的思路,也为相关代谢组学、脂质组学研究提供了方法学支撑。

关键词：游离脂肪酸衍生化高效液相色谱-质谱法

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基于平行人工膜模型的高渗工具药物筛选研究

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中国新药杂志 2024年第22期33卷 2338-2345页

作者：关皓月刘雪婧黄韩韩刘倩张尊建牛剑钊中国食品药品检定研究院中国药科大学药物质量与安全预警教育部重点实验室

目的:本研究旨在建立以平行人工膜（parallel artificial membrane permeation assay, PAMPA）为模型的药物体外渗透性测定方法，筛选和验证高渗透性分类工具药物。方法:采用μDissTM型光纤药物溶解渗透性测试系统和Caco-2细胞模型转运... 详细信息

目的:本研究旨在建立以平行人工膜（parallel artificial membrane permeation assay, PAMPA）为模型的药物体外渗透性测定方法，筛选和验证高渗透性分类工具药物。方法:采用μDissTM型光纤药物溶解渗透性测试系统和Caco-2细胞模型转运实验，结合PAMPA模型，对8种已知人体生物利用度数据的高渗透性模型药物进行了有效渗透速率（Pe）及表观渗透速率(Papp)的测定。筛选出适用于体内外渗透评估的高渗透性评价工具药物，并进一步应用于富马酸喹硫平（高渗透性药物）和卡托普利（低渗透性药物）的渗透性研究，以验证工具药物的适用性。结果:8种模型药物通过PAMPA评价结果显示均为高渗[Pe(Papp)>10-6cm·s-1]且以被动转运为主要吸收方式（外排率<2）;本研究建立的PAMPA测定方法测得的5种药物Pe与文献报道的人体空肠Pe基本一致（相关系数0.919 6）。结论:研究表明，苯妥英、盐酸普萘洛尔、酒石酸美托洛尔、卡马西平、米诺地尔5种药物可作为高渗分类工具药物。本研究结果为药物的渗透性评价提供了新的工具和方法，有助于药物高通量筛选以及渗透性评价。

关键词：渗透分类工具药物平行人工膜 Caco-2细胞有效渗透速率表观渗透速率

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非酒精性脂肪性肝病细胞模型中胆固醇代谢紊乱机制

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中国药科大学学报 2023年第4期54卷 490-500页

作者：章玉婷王安慧杨晋妮林佳纯田媛董海娟张尊建宋瑞中国药科大学药物质量与安全预警教育部重点实验室南京210009 中国药科大学公共实验室平台南京210009

肝脏胆固醇代谢紊乱在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的发生发展中具有重要作用。为揭示饱和脂肪酸诱导肝细胞胆固醇稳态失衡的分子机制,采用棕榈酸诱导HepG2细胞,通过油红O染色、试剂盒测定细胞内甘油三酯(TG)和胆固醇(TC)含量评估脂质累积... 详细信息

肝脏胆固醇代谢紊乱在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的发生发展中具有重要作用。为揭示饱和脂肪酸诱导肝细胞胆固醇稳态失衡的分子机制,采用棕榈酸诱导HepG2细胞,通过油红O染色、试剂盒测定细胞内甘油三酯(TG)和胆固醇(TC)含量评估脂质累积;采用RT-qPCR和Western blot检测与胆固醇稳态相关基因和蛋白表达水平;LC-MS/MS检测细胞胆汁酸和线粒体氧甾醇水平。结果发现,棕榈酸处理后,细胞内脂滴明显累积且TG与TC含量显著升高(P<0.0001);胆固醇合成和摄取相关基因表达无明显变化,但ABCG5和LXRα蛋白表达显著下调,表明胆固醇外排减少;负责胆汁酸替代合成的限速酶STARD1和CYP7B1基因表达显著增强,线粒体中胆固醇、27-羟基胆固醇(27-OHC)以及细胞中鹅去氧胆酸(CDCA)水平明显升高。本研究结果表明,棕榈酸刺激后可能通过抑制胆固醇外排和促进胆汁酸合成扰乱胆固醇稳态。

关键词：非酒精性脂肪性肝病胆固醇代谢氧甾醇胆汁酸 STARD1

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基于荧光素酶生物发光检测方法的研究及其应用进展

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中国药科大学学报 2023年第4期54卷 389-398页

作者：刘琳胡婷婷王梦灵聂耀张惟杰王琛邹秉杰宋沁馨周国华中国药科大学药物质量与安全预警教育部重点实验室南京210009 南京大学生命分析化学国家重点实验室南京210093 东部战区总医院临床药学科南京210002

生物发光现象广泛存在于自然界中,不管是在陆地或是海洋都有发光生物的踪迹。其中基于荧光素酶的生物发光系统被广泛研究,启发着人类在基因、表观遗传等方面进行探索,并且开发出一系列相关的检测方法,用于体内体外各方面研究。本文从生... 详细信息

生物发光现象广泛存在于自然界中,不管是在陆地或是海洋都有发光生物的踪迹。其中基于荧光素酶的生物发光系统被广泛研究,启发着人类在基因、表观遗传等方面进行探索,并且开发出一系列相关的检测方法,用于体内体外各方面研究。本文从生物发光系统、荧光素酶的种类以及荧光素酶生物发光检测方法的开发与应用这几个方面进行总结,简要概括近年来基于荧光素酶生物发光检测的研究进展。

关键词：生物发光反应荧光素荧光素酶检测方法进展

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Box-Behnken设计-响应面法优化明胶胶皮处方

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中国医药工业杂志 2023年第5期54卷 773-778页

作者：王佳徐学凡孙宁云张尊建药物质量与安全预警教育部重点实验室(中国药科大学) 江苏南京210009 上海上药信谊药厂有限公司上海201206

采用加热明胶、部分脱水山梨醇、甘油和水的混合物来制备明胶胶液,并加入遮光剂等其他成分制备明胶胶皮。以明胶种类、部分脱水山梨醇与甘油质量比、二氧化钛比例为自变量,以物质迁移率、平衡溶胀量、水蒸气透过率、透光率和崩解时间为... 详细信息

采用加热明胶、部分脱水山梨醇、甘油和水的混合物来制备明胶胶液,并加入遮光剂等其他成分制备明胶胶皮。以明胶种类、部分脱水山梨醇与甘油质量比、二氧化钛比例为自变量,以物质迁移率、平衡溶胀量、水蒸气透过率、透光率和崩解时间为因变量,采用Box-Behnken设计-响应面法优化胶皮处方,所得优化处方为:采用冻力150 g骨明胶,部分脱水山梨醇与甘油的质量比为2.3∶10,二氧化钛占明胶比例为1.18%。采用优化处方制备了3批胶皮,质量评价结果显示,其物质迁移率、平衡溶胀量、透光率的预测值与实测值偏差均≤1.7%,批间RSD均≤0.36%,表明所建立的优化处方准确性高、重现性好、稳定性良好。该研究为软胶囊工业化生产的改进提供了方法学参考。

关键词：软胶囊明胶甘油部分脱水山梨醇二氧化钛 Box-Behnken设计

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多重聚合酶链式反应偶联核酸侵入反应用于多重人类乳头状瘤病毒可视化分型检测

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分析化学 2023年第7期51卷 1132-1151页

作者：梁艳华周欣洁杜熙钦徐晓筱翁吉雪马雪萍初亚男邹秉杰宋沁馨周国华中国药科大学药物质量与安全预警教育部重点实验室东部战区总医院临床药学科南方医科大学第一临床医学院南京大学医学院生命分析化学国家重点实验室

本研究针对不同亚型人类乳头状瘤病毒（HPV）-DNA L1基因区域的序列差异设计相应的特异性扩增引物及探针，在单管多重聚合酶链式反应（PCR）扩增后偶联核酸侵入反应及纳米金探针杂交显色，结合集约化的分管检测方案判读分型检测结果，... 详细信息

本研究针对不同亚型人类乳头状瘤病毒（HPV）-DNA L1基因区域的序列差异设计相应的特异性扩增引物及探针，在单管多重聚合酶链式反应（PCR）扩增后偶联核酸侵入反应及纳米金探针杂交显色，结合集约化的分管检测方案判读分型检测结果，同时考察方法的检测灵敏度和特异性，并应用于临床宫颈拭子样本的分型检测以评价方法的临床适用性，建立了一种通过6个检测管实现15种HPV亚型可视化分型检测的方法。本方法检测灵敏度高，3种亚型（HPV56、HPV66和HPV45）检测灵敏度可达1 copy/reaction, 7种亚型（HPV73、HPV59、HPV18、HPV39、HPV6、HPV58和HPV31）检测灵敏度为10 copy/reaction, 5种亚型（HPV68、HPV35、HPV51、HPV16和HPV11）的检测灵敏度为100 copy/reaction；检测特异性好，不同亚型分型检测时无交叉反应，不相互干扰。27例实际样本的分型结果与临床采用的HPV分型检测试剂盒（PCR-反向斑点杂交法）结果一致（27/27, 100%）。所建立的HPV多重可视化分型检测方法灵敏度高、特异性好，通过分型检测管的显色结果指示具体亚型，肉眼即可判读结果，无需特殊仪器，具有应用于临床HPV分型检测的潜力，可在宫颈癌及癌前病变的早期筛查诊断中提供指导，尤其适用于资源有限地区。

关键词：人类乳头瘤状病毒可视化检测核酸侵入反应多重聚合酶链式反应纳米金探针

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