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细胞色素P450 3A4基因C239S突变体稳定表达Flp-In^(TM)CHO细胞系的建立

贵州医科大学学报 2023年第12期48卷 1454-1458页

作者：何俊奇陆定艳陈帅帅李勇军王永林郑江刘亭贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室&省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 凤冈县妇幼保健院药剂科贵州凤冈564299 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004

目的构建稳定表达细胞色素P450家族3亚家族A成员4(CYP3A4)的C239S突变体(CYP3A4-C239S)的Flp-In^(TM)CHO细胞系。方法使用Lipofectamine2000转染试剂将pcDNA5/FRT-CYP3A4-C239S突变型重组质粒和pcDNA5/FRT-空质粒转染至Flp-In TM CHO细胞,潮霉素B(500 g/L)进行稳定筛选,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白质免疫印迹(Western blot)检测细胞中CYP3A4-C239S的mRNA和蛋白表达,采用黄曲霉素B1(AFB1)细胞毒性实验检测细胞活性。结果与Flp-In^(TM)CHO-空质粒组相比,Flp-In^(TM)CHO-3A4-C239S组的CYP3A4-C239S mRNA和蛋白表达水平均显著增加(P<0.001),AFB1细胞毒性实验显示,CYP3A4-C239S细胞组对AFB1的毒性敏感度显著增加(P<0.001)。结论成功构建了稳定表达CYP3A4-C239S的Flp-In^(TM)CHO细胞系,且为后续研究CYP3A4突变对药物代谢的影响支撑基础。

关键词：细胞色素P4503A4 黄曲霉毒素B1 突变体稳定表达 Flp-In^(TM)CHO细胞

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细胞色素P4502E1稳定转染Flp-In^(TM)CHO细胞模型的建立

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贵州医科大学学报 2022年第12期47卷 1390-1395页

作者：赵永龙郭玮钰龙昌兰陆定艳陈帅帅李勇军刘亭贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室&省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004

目的构建稳定表达细胞色素P450家族2亚家族E成员1(CYP2E1)的Flp-In^(TM)CHO细胞系,并进行药物相互作用筛选。方法利用Lipofectamine■2000转染试剂将pcDNA5/FRT-CYP2E1重组质粒和pcDNA5/FRT-空质粒-并转染Flp-In^(TM)CHO细胞,采用潮霉素B(500 mg/L)进行稳定性筛选、聚合酶链式反应(PCR)检测细胞中是否成功插入能够表达CYP2E1酶的目的基因、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中CYP2E1 mRNA和蛋白表达,采用对乙酰氨基酚(APAP)检测CYP2E1酶对APAP的毒性敏感性。结果与Flp-In^(TM)CHO空质粒组比较,PCR结果显示Flp-In^(TM)CHO-CYP2E1细胞分别在2000 bp、200 bp左右有CYP2E1酶目的基因的明显条带;qRT-PCR和Western blot结果显示,Flp-In^(TM)CHO-CYP2E1细胞的CYP2E1 mRNA和蛋白表达水平均明显增加(P<0.001);APAP检测结果显示CYP2E1酶对APAP的毒性敏感性也显著增强。结论成功构建了稳定表达CYP2E1的Flp-In^(TM)CHO细胞模型,且表达的CYP2E1酶对APAP的毒性敏感性增强。

关键词：细胞色素P450家族2亚家族E成员1 稳定表达 Flp-In^(TM)CHO细胞蛋白免疫印迹法实时荧光定量PCR 转染

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汉桃叶的化学成分研究

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中药材 2021年第7期44卷 1631-1635页

作者：杨婷李小双黄勇郑林马雪蒋礼李勇军贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室贵州贵阳550004

目的:研究汉桃叶的化学成分。方法:运用D-101大孔树脂柱层析、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶、正相硅胶柱等色谱技术进行分离,并运用MS、NMR技术对分离得到的化合物进行结构鉴定。结果:从汉桃叶的70%乙醇提取物中分离得到15个化合物,分别鉴... 详细信息

目的:研究汉桃叶的化学成分。方法:运用D-101大孔树脂柱层析、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶、正相硅胶柱等色谱技术进行分离,并运用MS、NMR技术对分离得到的化合物进行结构鉴定。结果:从汉桃叶的70%乙醇提取物中分离得到15个化合物,分别鉴定为:芥子醛(1)、香草醛(2)、咖啡酸乙酯(3)、(+)-syringaresinol(4)、erythro-guaiacyl-glycerol-β-coniferyl aldehyde ether(5)、ω-hydro-xypropioguaiacone(6)、5-hydroxymethyl-furfural(7)、对苯二酚(8)、3,4-dihydroxybenzaldehyde(9)、threo-1,2-bis-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-propane-1,3-diol(10)、erythro-1,2-bis-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-propane-1,3-diol(11)、coniferaldehyd(12)、3-表-白桦脂酸(13)、3-表-齐墩果酸(14)、kobophenol A(15)。结论:其中,化合物1、3~12、15为首次从鹅掌柴属植物中分离得到。

关键词：汉桃叶化学成分结构鉴定

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钩毛茜草的化学成分研究

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中药材 2021年第4期44卷 853-857页

作者：刘理燕廖永娥何燕玲王军伟马雪李月婷李勇军贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室贵州贵阳550004

目的:研究钩毛茜草Rubia oncotricha Hand.-Mazz.的化学成分。方法:运用正反相硅胶、D-101大孔树脂、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶与Toyopearl HW-40F凝胶等柱色谱法进行分离纯化,并通过NMR及MS技术进行结构鉴定。结果:从钩毛茜草乙酸乙酯... 详细信息

目的:研究钩毛茜草Rubia oncotricha Hand.-Mazz.的化学成分。方法:运用正反相硅胶、D-101大孔树脂、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶与Toyopearl HW-40F凝胶等柱色谱法进行分离纯化,并通过NMR及MS技术进行结构鉴定。结果:从钩毛茜草乙酸乙酯萃取物中分离纯化得到13个化合物,分别鉴定为:rubiprasin A(1)、burselignan(2)、2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-3-(2-hydroxy-5-methoxyphenyl)-3-oxo-1-propanol(3)、lirioresinol A(4)、落叶松脂醇(5)、acetylwikstresinol(6)、大黄素(7)、大黄素甲醚(8)、甘草素(9)、9-acetoxyisolariciresinol(10)、(+)-isolariciresinol(11)、2-exo,3-endo-camphanediol(12)、(-)-(7R,8S)-dihydrodehydrodiconiferyl alcohol(13)。结论:以上13个化合物均为首次从该植物中分离得到,其中,化合物3、6、10、12、13为首次从茜草属植物中分离得到。

关键词：钩毛茜草化学成分结构鉴定

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艾迪注射液对H22肝癌模型小鼠组织中阿霉素和阿霉醇分布的影响

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贵州医科大学学报 2022年第3期47卷 249-254,267页

作者：王艳丽朱晓青孙佳李勇军刘春花陆苑贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室&省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004

目的研究艾迪注射液(ADI)对阿霉素(DOX)及其活性代谢产物阿霉素醇(DOXol)在H22肝癌模型小鼠体内组织分布的影响。方法建立H22肝癌移植瘤小鼠模型,将模型小鼠随机分成DOX单次给药组(SDOX组)、DOX多次给药组(MDOX组)和ADI联合MDOX组(AMDOX... 详细信息

目的研究艾迪注射液(ADI)对阿霉素(DOX)及其活性代谢产物阿霉素醇(DOXol)在H22肝癌模型小鼠体内组织分布的影响。方法建立H22肝癌移植瘤小鼠模型,将模型小鼠随机分成DOX单次给药组(SDOX组)、DOX多次给药组(MDOX组)和ADI联合MDOX组(AMDOX组)。三组小鼠均造模15d,于造模结束2 h时收集各组小鼠的血液、肿瘤、心、肝、肾、肺组织,样本处理后,采用超高效液相串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定DOX和DOXol浓度,比较各组小鼠DOX和DOXol的组织分布情况。结果与SDOX组比较,MDOX组小鼠各组织中DOX和DOXol的含量均显著增加,差异有统计学意义(P<0.05);联合用药后,DOX和DOXol除了在肿瘤部位的积累量明显增加外,在其余组织中均表现出不同程度的降低趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。结论ADI可能是通过增加肿瘤中DOX和DOXol浓度增强抗肿瘤能力,并且通过降低心脏中DOX和DOXol浓度、降低DOX的心脏毒性。

关键词：艾迪注射液 H22肝癌模型阿霉素阿霉素醇组织分布

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毛大丁草的化学成分研究

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中药材 2021年第8期44卷 1870-1874页

作者：薛靖怡吴莹莹马雪刘春花孙佳李勇军王永林贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室贵州贵阳550004

目的:研究毛大丁草Gerbera piloselloides(L.)Cass.的化学成分。方法:采用硅胶、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶、Toyopearl HW-40等色谱技术对毛大丁草70%乙醇提取物进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果:从毛大... 详细信息

目的:研究毛大丁草Gerbera piloselloides(L.)Cass.的化学成分。方法:采用硅胶、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶、Toyopearl HW-40等色谱技术对毛大丁草70%乙醇提取物进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果:从毛大丁草中分离得到18个化合物,分别鉴定为:路路通内酯(1)、白桦脂酸(2)、2,4-二羟基苯乙酮(3)、2,5-二羟基苯甲醛(4)、2,5-二羟基苯乙酮(5)、白桦脂醇(6)、7-羟基-8-甲氧基香豆素(7)、8-甲氧基补骨脂素(8)、伞形花内酯(9)、去氢吐叶醇(10)、gerberlin B(11)、芹菜素(12)、木犀草素(13)、对苯二酚(14)、5-羟甲基-糠醛(15)、异紫花前胡内酯(16)、紫花前胡苷(17)、瑞香素-8-O-葡萄糖苷(18)。结论:其中,化合物11为首次从该植物中分离得到,化合物1~7、10、12~15为首次从该属植物中分离得到。

关键词：毛大丁草化学成分分离鉴定

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西南鬼灯檠的研究进展

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中国民族民间医药 2022年第12期31卷 72-81页

作者：谢家丽孙佳陆苑张旭李勇军刘春花贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004

西南鬼灯檠Rodgersia sambucifolia Hemsl.以干燥根茎入药,又称岩陀、毛青冈等,具有清热解毒、祛风除湿、收敛的功效,常用于治疗感冒头痛、风湿骨痛、外伤出血,具有较好的临床应用价值。目前关于西南鬼灯檠的研究已经有一定的积累。通... 详细信息

西南鬼灯檠Rodgersia sambucifolia Hemsl.以干燥根茎入药,又称岩陀、毛青冈等,具有清热解毒、祛风除湿、收敛的功效,常用于治疗感冒头痛、风湿骨痛、外伤出血,具有较好的临床应用价值。目前关于西南鬼灯檠的研究已经有一定的积累。通过对相关文献进行归纳总结,综述了西南鬼灯檠在生药学研究、化学成分、药理作用、临床应用和质量控制等方面的研究现状,以期为西南鬼灯檠的进一步开发利用提供数据参考。

关键词：西南鬼灯檠生药学研究质量控制药理作用化学成分

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UHPLC-ESI-Q-TOF-MS快速分析荭草中化学成分

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中国民族民间医药 2022年第10期31卷 23-30页

作者：李容杨淑婷潘洁刘春花陆苑王永林孙佳贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室贵州贵阳550004

目的:建立超高压液相色谱-电喷雾-四级杆-飞行时间串联质谱技术(UHPLC-ESI-Q-TOF-MS)分析荭草提取物中主要化学成分的方法。方法:采用Agilent Eclipse Plus C18 RRHD(2.1 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱;流动相为0.1%甲酸水(A)-0.1%甲酸... 详细信息

目的:建立超高压液相色谱-电喷雾-四级杆-飞行时间串联质谱技术(UHPLC-ESI-Q-TOF-MS)分析荭草提取物中主要化学成分的方法。方法:采用Agilent Eclipse Plus C18 RRHD(2.1 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱;流动相为0.1%甲酸水(A)-0.1%甲酸乙腈(B)进行梯度洗脱;以0.25 mL/min流速进行梯度洗脱。使用ESI离子源,正、负离子模式进行质谱检测,电压分别为4 kV、3.5 kV。结果:通过结合对照品、查阅相关文献及相关质谱数据,对荭草提取物中化学成分进行结构分析,初步鉴定了21个化学成分,主要结构多为黄酮类化合物。结论:UHPLC-ESI-Q-TOF-MS可以提高中药民族药的分析效率,有利于化合物结构的分析,可作为荭草药材化学成分的分析方法。

关键词：荭草黄酮类 UHPLC-ESI-Q-TOF-MS

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Caco-2细胞模型中头花蓼提取液对左氧氟沙星吸收的影响

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中国药业 2022年第8期31卷 37-42页

作者：蒙文莎袁丽王朴郑林巩仔鹏李月婷王爱民黄勇贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室·药用植物功效与利用国家重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学药学院贵州贵阳550004 贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心贵州贵阳550004

目的探讨Caco-2细胞模型中头花蓼提取液对左氧氟沙星吸收的影响。方法取直肠腺癌Caco-2细胞,培养至屏障模型形成。以0.5,1.0,2.0,4.0,8.0,16.0 mg/mL的头花蓼提取液和5,10,20,40,80,160,320,640µmol/mL左氧氟沙星溶液分别作用Caco-... 详细信息

目的探讨Caco-2细胞模型中头花蓼提取液对左氧氟沙星吸收的影响。方法取直肠腺癌Caco-2细胞,培养至屏障模型形成。以0.5,1.0,2.0,4.0,8.0,16.0 mg/mL的头花蓼提取液和5,10,20,40,80,160,320,640µmol/mL左氧氟沙星溶液分别作用Caco-2细胞24 h,采用细胞增殖检测法检测细胞活力。以筛选出的上述2种药液最大安全浓度分别及同时作用于Caco-2细胞1 h,采用超高效液相色谱串联质谱法检测细胞中头花蓼提取液所含没食子酸、原儿茶酸及左氧氟沙星的含量。结果头花蓼提取液和左氧氟沙星的最大安全浓度分别为1 mg/mL和160µmol/mL。两药合用时左氧氟沙星的细胞摄取量为(3.903±0.394)µg/g,显著少于其单用时的(5.895±0.663)µg/g(P<0.01);两药合用时没食子酸和原儿茶酸细胞摄取量分别为(0.076±0.015)µg/g和(0.060±0.008)µg/g,分别少于两药单用时的(0.094±0.022)µg/g和(0.074±0.018)µg/g,但无显著差异(P>0.05)。结论头花蓼提取液能显著减少左氧氟沙星在Caco-2细胞中的吸收,而左氧氟沙星对头花蓼提取液的吸收无显著影响。

关键词： Caco-2细胞超高效液相色谱串联质谱法头花蓼提取液左氧氟沙星吸收

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金骨莲胶囊对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的抑制作用及机制

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中国实验方剂学杂志 2021年第24期27卷 78-83页

作者：邱剑飞杨珏张知音刘务玲宋辉吴小森李静李艳梅贵州医科大学省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室贵阳550014 贵州医科大学大学城医院贵阳550025 贵航贵阳医院贵阳550027 湖南省湘西自治州烟草公司永顺县分公司湖南湘西自治州416000

目的:研究金骨莲胶囊对人三阴性乳腺癌(TNBC)细胞MDA-MB-231增殖的影响,探讨金骨莲胶囊对TNBC的治疗作用机制。方法:利用超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS/MS)技术,对金骨莲胶囊的成分进行分析鉴定。通过用噻唑蓝(MTT)比色法观察金骨莲... 详细信息

目的:研究金骨莲胶囊对人三阴性乳腺癌(TNBC)细胞MDA-MB-231增殖的影响,探讨金骨莲胶囊对TNBC的治疗作用机制。方法:利用超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS/MS)技术,对金骨莲胶囊的成分进行分析鉴定。通过用噻唑蓝(MTT)比色法观察金骨莲胶囊(0.125,0.25,0.5,1,2 g·L^(-1))对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖抑制作用。采用Hoechst33258染色检测金骨莲胶囊处理MDA-MB-231细胞24 h后的细胞核凋亡形态学的变化。采用流式细胞仪检测金骨莲胶囊不同质量浓度和作用时间对MDA-MB-231细胞凋亡及周期分布情况。通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP),原癌基因蛋白(c-Myc),细胞周期蛋白B1(cyclin B1)和磷酸化胞外信号调节激酶(p-ERK)的蛋白表达水平。结果:该研究利用UPLC-MS/MS技术鉴定了金骨莲胶囊提取物中113个化合物成分。MTT比色法显示,与空白组比较,金骨莲胶囊组(0.125,0.25,0.5,1,2 g·L^(-1))细胞抑制率显著增加(P<0.01),半数抑制浓度(IC50)为(0.13±0.02)g·L^(-1);流式细胞术结果显示,与空白组比较,金骨莲胶囊组(1 g·L^(-1))细胞凋亡率显著升高(P<0.01),金骨莲胶囊组(0.5,1 g·L^(-1))细胞处于S期的数量明显增加(P<0.05,P<0.01);Western blot结果显示,与空白组比较,金骨莲胶囊组(0.5,1 g·L^(-1))细胞中的PARP,c-Myc,cyclin B1蛋白表达水平显著降低(P<0.01),金骨莲胶囊组(1 g·L^(-1))p-ERK蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论:金骨莲胶囊可抑制MDA-MB-231细胞增殖,使细胞周期阻滞于S期,并诱导其凋亡,其机制可能与其抑制MDA-MB-231细胞MAPK信号通路有关。

关键词：金骨莲胶囊 MDA-MB-231细胞凋亡 S期阻滞

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