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miR-30e-5p过表达促进结直肠癌细胞的增殖和迁移:基于下调PTEN激活CXCL12轴

南方医科大学学报 2023年第7期43卷 1081-1092页

作者：魏可石纪雯肖雨寒王文锐杨清玲陈昌杰蚌埠医学院癌症转化医学安徽省重点实验室安徽蚌埠233000 蚌埠医学院肿瘤基础研究与临床检验诊断重点实验室安徽蚌埠233000 蚌埠医学院生物技术教研室安徽蚌埠233000 蚌埠医学院生物化学与分子生物学教研室安徽蚌埠233000

目的探讨miR-30e-5p通过PTEN/CXCL12轴对结直肠癌生物学活性的影响及机制。方法实验设置空白对照、阴性对照、miR-30e-5p mimics组、miR-30e-5p inhibitor组及共转染miR-30e-5p mimics+LV-PTEN(PTEN过表达)组或miR-30e-5p inhibitor+si-PTEN(PTEN干扰)组。生物信息学分析miR-30e-5p在结直肠癌组织和正常组织中的表达差异;qRT-PCR检测miR-30e-5p在肠上皮细胞和结直肠癌细胞中的差异表达;生物信息学和双荧光素酶实验预测并验证miR-30e-5p与PTEN的靶向关系;平板克隆、CCK-8增殖、细胞周期、细胞凋亡、划痕愈合和Transwell实验检测癌细胞的生物学活性;Western blotting检测癌细胞PTEN、CXCL12表达情况;小鼠体内实验检测miR-30e-5p(miR-NC、miR-30e-5p inhibitor组)对结直肠癌发生发展的影响。结果生信分析结直肠癌组织miR-30e-5p较癌旁组织表达升高(P<0.01);在癌细胞中miR-30e-5p较肠上皮细胞表达升高(P<0.01);双荧光素酶实验证实miR-30e-5p与PTEN存在靶向关系(P<0.05);相对于Control组,miR-30e-5p mimics能增强癌细胞增殖、转移能力并抑制凋亡(P<0.05),共转染miR-30e-5p mimics+LV-PTEN能够逆转miR-30e-5p mimics的作用(P<0.05);miR-30e-5p mimics能抑制PTEN表达,增强CXCL12表达(P<0.01);然而miR-30e-5p inhibitor与mimics效果相反,将细胞阻滞在G0/G1期,共转染miR-30e-5p inhibitor+si-PTEN能逆转miR-30e-5p inhibitor的作用(P<0.05);体内实验发现相对于miR-NC组,miR-30e-5p inhibitor可抑制肿瘤发生发展。结论miR-30e-5p过表达通过下调PTEN激活CXCL12轴,从而促进结直肠癌细胞的增殖和迁移。

关键词：结直肠癌 miR-30e-5p PTEN CXCL12

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miR-16-5p通过靶向YWHAQ调控乳腺癌耐药细胞的凋亡与迁移能力

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南方医科大学学报 2022年第10期42卷 1476-1485页

作者：朱海涛毛慧兰陶爽王文锐陈昌杰杨清玲蚌埠医学院癌症转化医学安徽省重点实验室安徽蚌埠233000 蚌埠医学院肿瘤基础研究与临床检验诊断重点实验室安徽蚌埠233000 蚌埠医学院生物技术教研室安徽蚌埠233000 蚌埠医学院生物化学与分子生物学教研室安徽蚌埠233000

目的探究miR-16-5p对乳腺癌紫杉醇耐药细胞生物学活性的影响及分子机制。方法以人乳腺癌亲本细胞(SKBR-3)与乳腺癌紫杉醇耐药细胞(SKBR-3/PR)为研究对象。实验设空白对照组、阴性对照组、miR-16-5p类似物组(miR-16-5p mimics)、miR-16... 详细信息

目的探究miR-16-5p对乳腺癌紫杉醇耐药细胞生物学活性的影响及分子机制。方法以人乳腺癌亲本细胞(SKBR-3)与乳腺癌紫杉醇耐药细胞(SKBR-3/PR)为研究对象。实验设空白对照组、阴性对照组、miR-16-5p类似物组(miR-16-5p mimics)、miR-16-5p抑制剂组(miR-16-5p inhibitor),YWHAQ干扰组(si-YWHAQ),以及联合组(miR-16-5p mimics+si-YWHAQ)。利用qRT-PCR检测乳腺癌组织与癌旁组织、SKBR-3与SKBR-3/PR间miR-16-5p的表达水平。使用生信数据对miR-16-5p的靶基因做预测,双荧光素酶实验验证靶向结合。免疫印迹检测细胞YWHAQ、Bcl-2和Bax表达。CCK-8和Transwell检测细胞增殖迁移能力。流式细胞术检测耐药细胞周期凋亡改变。结果 qRT-PCR显示乳腺癌组织中miR-16-5p水平低于癌旁组织(-1.19±1.90 vs 1.59±1.76,P<0.01)。生物信息预测YWHAQ是miR-16-5p的靶基因,荧光素酶实验证实miR-16-5p能够靶向调节YWHAQ(P<0.01)。相对于SKBR-3细胞,SKBR-3/PR细胞中miR-16-5p表达水平降低(P<0.01),YWHAQ表达水平增高(P<0.05)。Western blot结果显示miR-16-5p类似物能够抑制YWHAQ表达,miR-16-5p抑制剂能够促进YWHAQ表达(P<0.01)。相对于对照组,miR-16-5p类似物能够将耐药细胞阻滞在G0/G1期[(55.61±1.99)%vs(43.06±1.53)%,P<0.01],抑制细胞增殖和迁移能力(P<0.01),促进细胞凋亡[(10.37±0.23)%vs(3.81±0.88)%,P<0.01],YWHAQ干扰组细胞迁移能力下降,凋亡率升高,miR-16-5p类似物组与YWHAQ干扰组细胞的Bax蛋白表达增加,YWHAQ与Bcl-2蛋白水平降低。相对于miR-16-5p类似物组,联合组细胞迁移能力被抑制(75.75±29.85 vs 181.11±11.71,P<0.01),凋亡率显著升高[(24.20±2.43)%vs(14.10±4.47)%,P<0.01]。结论 miR-16-5p能够通过靶向调节YWHAQ调控Bcl-2/Bax的表达,从而改变乳腺癌紫杉醇耐药细胞的生物学活性。

关键词：乳腺癌耐药 miR-16-5p YWHAQ

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miR-372-5p促进结直肠癌细胞的转移:通过靶向PTEN调控PI3K/AKT/CXCL12信号通路

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南方医科大学学报 2022年第8期42卷 1191-1197页

作者：时秀茹魏可吴雨伦王文锐杨清玲陈昌杰蚌埠医学院癌症转化医学安徽省重点实验室安徽蚌埠233000 蚌埠医学院肿瘤基础研究与临床检验诊断重点实验室安徽蚌埠233000 蚌埠医学院生物技术教研室安徽蚌埠233000 蚌埠医学院生物化学与分子生物学教研室安徽蚌埠233000

目的探讨miR-372-5p通过靶向PTEN调控PI3K/AKT/CXCL12信号通路对结直肠癌细胞迁移能力的影响及机制。方法qRT-RCR检测miR-372-5p在结直肠癌和癌旁组织及结直肠癌细胞和正常肠上皮细胞中的表达;生物信息学和双荧光素酶实验验证miR-372-5p... 详细信息

目的探讨miR-372-5p通过靶向PTEN调控PI3K/AKT/CXCL12信号通路对结直肠癌细胞迁移能力的影响及机制。方法qRT-RCR检测miR-372-5p在结直肠癌和癌旁组织及结直肠癌细胞和正常肠上皮细胞中的表达;生物信息学和双荧光素酶实验验证miR-372-5p与PTEN的靶向关系;Western blotting检测转染inhibitor-NC/mimics-NC(miR-372-5p抑制剂/类似物的阴性对照)、miR-inhibitor(miR-372-5p抑制剂)、miR-mimics(miR-372-5p类似物)以及共转染miR-inhibitor+si-PTEN(PTEN干扰)、miR-mimics+PI3K抑制剂对PTEN、CXCL12表达和PI3K/AKT信号通路激活水平的影响;Transwell实验、划痕实验检测以上各组、共转染miR-mimics+si-CXCL12(CXCL12干扰)以及转染mimics-NC、miR-mimics后的HCT116条件培养基对细胞迁移能力的影响。结果结直肠癌组织中miR-372-5p较癌旁组织表达升高,相对于NCM460,HCT116较SW620中miR-372-5p表达上调更显著(P<0.01);双荧光素酶实验证实PTEN是miR-372-5p的潜在靶基因(P<0.05)。相较于NC组,miR-mimics可降低PTEN蛋白表达水平,增加CXCL12蛋白表达水平和AKT磷酸化水平,提高HCT116迁移能力;而miR-inhibitor则导致相反的结果(P<0.05),si-PTEN可中和miR-inhibitor的作用(P<0.01);PI3K抑制剂可降低CXCL12的蛋白表达水平,并抑制HCT116迁移能力(P<0.05),而miR-mimics可中和这一作用(P<0.01);miR-mimics转染HCT116的条件培养基可提高NCM460的迁移能力(P<0.01),联合si-CXCL12可逆转miR-mimics对HCT116转移的促进作用(P<0.01)。结论miR-372-5p通过靶向PTEN激活PI3K/AKT信号通路,上调CXCL12的表达,从而促进结直肠癌细胞的迁移能力。

关键词：结直肠癌转移 miR-372-5p CXCL12

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AMPK介导线粒体融合与裂变在丁苯酞抗小鼠脑缺血/再灌注损伤中的作用

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中国新药杂志 2022年第19期31卷 1929-1935页

作者：陈蕾王雪如黄杰胡淼童旭辉董淑英蚌埠医学院药学院药理学教研室安徽省生化药物工程技术研究中心蚌埠医学院心脑血管疾病基础与临床重点实验室

目的:脑缺血/再灌注损伤(ischemia/reperfusion, I/R)是缺血性卒中发生后的一种复杂的病理过程。目前，治疗脑I/R损伤的药物疗效尚不理想。我国Ⅰ类新药丁苯酞(dl-3-N-butylphthalide, NBP)被批准用于治疗缺血性脑卒中，有研究报道，NB... 详细信息

目的:脑缺血/再灌注损伤(ischemia/reperfusion, I/R)是缺血性卒中发生后的一种复杂的病理过程。目前，治疗脑I/R损伤的药物疗效尚不理想。我国Ⅰ类新药丁苯酞(dl-3-N-butylphthalide, NBP)被批准用于治疗缺血性脑卒中，有研究报道，NBP具有减轻脑I/R损伤的作用，但其确切机制仍有待进一步研究。本研究从线粒体融合与裂变的角度探讨NBP抗小鼠脑I/R损伤的作用及机制。方法:将ICR小鼠随机分为假手术组(Sham)、I/R组、I/R+NBP组、I/R+NBP+dorsomorphin组。采用线栓法制备小鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)模型。Longa五分法评定小鼠神经功能损伤情况；TTC染色法检测脑梗死体积；透射电镜观察线粒体形态；Western blot检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)、线粒体融合蛋白2(Mfn2)、线粒体裂变相关蛋白(Drp1,p-Drp1)的表达。结果:与Sham组相比，I/R组小鼠发生线粒体损伤，表现出线粒体裂变的典型特征，小鼠神经行为学评分、脑梗死体积增加(均P<0.01),p-Drp1/Drp1比值增加(P<0.05),p-AMPK/AMPK比值、Mfn2蛋白表达降低(均P<0.01);在I/R组的基础上使用NBP后，小鼠线粒体损伤有所改善，小鼠神经行为学评分、脑梗死体积降低(均P<0.01),p-Drp1/Drp1比值降低(P<0.01),p-AMPK/AMPK比值和Mfn2蛋白表达增加(均P<0.01),而dorsomorphin(AMPK抑制剂)可明显降低NBP的上述保护作用。结论:NBP具有减轻小鼠脑I/R损伤的作用，其作用机制可能与通过AMPK调节线粒体融合与裂变有关。

关键词：脑缺血/再灌注丁苯酞线粒体融合与裂变腺苷酸活化蛋白激酶

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CRISPR-Cas系统在病原核酸检测中的研究进展

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合成生物学 2024年第1期5卷 202-216页

作者：杜瑶高宏丹刘家坤刘孝荣邢志浩张涛马东礼蚌埠医学院检验医学院安徽蚌埠233030 深圳市儿童医院儿科研究所广东深圳518034 中国科学院深圳先进技术研究所深圳合成生物研究所广东深圳518055 深圳市海微生物科技有限公司广东深圳518057 蚌埠医学院病原生物学教研室安徽蚌埠233030

CRISPR-Cas系统作为原核生物获得性免疫系统,由簇状规则间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)和CRISPR相关蛋白(CRISPR-associated proteins,Cas)构成,因其识别和切割特定DNA或RNA序列,而成为分子诊断领域研究的热点。研究人员利用Cas蛋白(Cas12、Cas13、Cas14、Cas3等)结合信号放大和转化技术(荧光法、电位法、比色法、侧向流动技术等),开发了许多高灵敏度、高特异性、低成本的诊断平台,为病原核酸检测提供了新途径。本文介绍了CRISPR-Cas系统的生物学机制及分类,总结现有的基于Cas蛋白反式切割活性开发的病原核酸检测技术,描述其特点、功能和应用场景,并对该系统的未来应用前景进行展望,期望CRISPR-Cas系统成为包括核酸检测在内的多靶标的理想检测平台。

关键词： CRISPR-Cas系统 Cas12和Cas13 病原体核酸检测生物传感

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新医科背景下医学院校研究生生物学核心课程在线教学改革和教学团队建设

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科教导刊（电子版） 2023年第5期 133-135页

作者：王文锐陈昌杰杨清玲周继红汤必奎郭俣蚌埠医学院生命科学学院生物技术教研室安徽蚌埠 233030 蚌埠医学院检验医学院生物化学与分子生物学教研室安徽蚌埠 233030

"新医科"提出要探索培养素质高、创新能力强的复合型医科人才的新要求.文章以蚌埠医学院研究生生物学核心课程建设为具体实例,对医学院校开展研究生生物学核心课程教学改革和教学团队建设进行着重阐述.挖掘医药学专业实施研... 详细信息

"新医科"提出要探索培养素质高、创新能力强的复合型医科人才的新要求.文章以蚌埠医学院研究生生物学核心课程建设为具体实例,对医学院校开展研究生生物学核心课程教学改革和教学团队建设进行着重阐述.挖掘医药学专业实施研究生生物类课程过程中存在的问题,从目标及意义、存在的问题等方面论证建设研究生生物学核心课程的必要性及具体实施路径.

关键词：新医科生物学课程改革教学团队

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层状双氢氧化物在干细胞治疗中的应用进展

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包头医学院学报 2023年第7期39卷 86-90页

作者：庞思妍张世文陈昌杰杨清玲王文锐蚌埠医学院癌症转化医学安徽省重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院生命科学学院生物化学与分子生物学教研室蚌埠医学院生物技术教研室

干细胞作为机体终生存在的细胞,可以进行自我更新并且具有分化为多种不同类型细胞的潜能,目前已广泛应用于组织修复、肿瘤治疗等相关领域。本文总结了层状双氢氧化物(layered double hydroxides,LDHs)在干细胞基础研究与临床治疗中的作... 详细信息

干细胞作为机体终生存在的细胞,可以进行自我更新并且具有分化为多种不同类型细胞的潜能,目前已广泛应用于组织修复、肿瘤治疗等相关领域。本文总结了层状双氢氧化物(layered double hydroxides,LDHs)在干细胞基础研究与临床治疗中的作用,如LDHs纳米材料可以维持胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)特性,并运用于降低化疗药物毒性,且通过改变离子组合可改善LDHs治疗效率;LDHs纳米材料可促进成体干细胞(adult stem cells,ASCs)分化,在促进骨再生与皮肤愈合、牙科治疗及神经再生治疗等方面表现出优越性,展望了LDHs在干细胞治疗方面的应用前景及所面临的挑战。

关键词：层状双氢氧化物干细胞自我更新

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代谢重编程在非小细胞肺癌表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂耐药中的作用

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中南大学学报（医学版） 2021年第5期46卷 545-551页

作者：伍宇高薇刘浩蚌埠医学院药学院药理教研室安徽省生化药物工程技术研究中心安徽蚌埠233030

表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor,EGFRTKI)能够有效地抑制EGFR基因突变驱动型非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的生长,但NSCLC患者在经过长时间持续的EGFR-TKI治疗后往往会发生严重的耐药。研究表明肿瘤细胞能量代谢紊乱对EGFR-TKI耐药的产生具有重要的诱导作用。在药物、基因突变等多种因素的作用下肿瘤细胞会发生代谢重编程,上调肿瘤细胞的代谢速率和强度,促进肿瘤对糖、脂肪、谷氨酰胺等营养物质的摄入和利用,并形成有利于肿瘤生长的微环境,促进肿瘤细胞的旁路激活、表型转化、异常增殖等,从而抑制免疫细胞的活性和肿瘤细胞的凋亡,导致肿瘤细胞对EGFR-TKI产生耐药性。

关键词：表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂非小细胞肺癌细胞代谢肿瘤代谢重编程耐药机制

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T-PACS结合案例式教学法在医学影像诊断学实训教学中的优势

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中国卫生产业 2024年第16期21卷 169-171页

作者：聂泽花包静文尚珍王荣德宋泽王栋河西学院医学院医学影像教研室甘肃张掖734000 河西学院信息技术与传媒学院网络工程教研室甘肃张掖734000

目的探讨影像医学教学系统(teaching-picture archiving and communication system,T-PACS)结合案例式教学法运用于医学影像诊断学实训课教学中的优势。方法选取2022年3—6月河西学院医学院2019级医学影像技术专业的59名本科生为对照组,... 详细信息

目的探讨影像医学教学系统(teaching-picture archiving and communication system,T-PACS)结合案例式教学法运用于医学影像诊断学实训课教学中的优势。方法选取2022年3—6月河西学院医学院2019级医学影像技术专业的59名本科生为对照组,2023年3—6月本校医学院2020级医学影像技术专业的60名本科生为观察组,前者采用T-PACS系统PPT教学法,后者采用T-PACS结合案例式教学法。比较两组教学总满意度、理论及阅片技能成绩。结果观察组教学满意度为95.00%(57/60),高于对照组的81.36%(48/59),差异有统计学意义(χ^(2)=5.335,P<0.05)。观察组学生理论成绩、阅片技能成绩均高于对照组,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论T-PACS系统案例教学法应用于医学影像诊断实训教学中能有效提高学生学习成绩。

关键词：医学影像诊断学影像医学教学系统案例式教学法教学效果

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层状双氢氧化物纳米剂型诱导乳腺癌细胞凋亡和铁死亡的协同作用研究

层状双氢氧化物纳米剂型诱导乳腺癌细胞凋亡和铁死亡的协同作用研...

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泛环渤海、华东六省一市生物化学与分子生物学会联盟2023年学术交流会暨研究生教育论坛

作者：庞思妍耿晨晨陈昌杰杨清玲王文锐蚌埠医学院癌症转化医学安徽省重点实验室蚌埠医学院生命科学学院生物化学与分子生物学教研室蚌埠医学院生物技术教研室

乳腺癌已成为发病率最高的恶性癌症,耐药和高转移性使其治疗变得棘手,新的治疗方案应运而生,其中诱导细胞铁死亡与凋亡的联合疗法逐渐成为研究热点。本文构建的纳米药物递送系统旨在通过铁基层状双氢氧化物（Mg-Fe-LDHs）有效递送抗癌... 详细信息

乳腺癌已成为发病率最高的恶性癌症,耐药和高转移性使其治疗变得棘手,新的治疗方案应运而生,其中诱导细胞铁死亡与凋亡的联合疗法逐渐成为研究热点。本文构建的纳米药物递送系统旨在通过铁基层状双氢氧化物（Mg-Fe-LDHs）有效递送抗癌药物辛伐他汀（Simvastatin, SIM）,协同诱导细胞铁死亡与细胞凋亡达到高效治疗乳腺癌的目的。首先通过水热共沉淀法完成纳米药物递送系统（Mg-Fe-LDHs-SIM）的合成,并通过马尔文粒度分析仪、透射电镜、X射线衍射（XRD）、傅里叶红外检测（FITR）等手段对其进行表征。在利用激光共聚焦显微镜观察到纳米系统成功被细胞摄取并通过溶酶体途径逃逸后,在体外,我们探讨了Mg-Fe-LDHs-SIM诱导MDA-MB-231和SKBR-3细胞增殖抑制,细胞凋亡和铁死亡的抗肿瘤作用。结果表明,Mg-Fe-LDHs-SIM通过抑制HMGCR的表达,诱导癌细胞中的铁死亡,从而下调甲羟戊酸途径（MVA）和谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）。此外,Mg-Fe-LDHs-SIM可以通过释放Fe和消耗GSH来促进Fe在细胞中的积累,从而增强铁死亡效应。本研究通过对材料设计的微调,通过协同铁死亡和细胞凋亡效应来改善癌症治疗,提供了有希望的新愿景。

关键词：纳米药物递送系统乳腺癌细胞凋亡层状双氢氧化物

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