检索结果-内蒙古大学图书馆

紫花前胡苷通过抑制肠上皮细胞焦亡改善2,4,6-三硝基苯磺酸诱导的小鼠实验性结肠炎

南方医科大学学报 2025年第2期45卷 261-268页

作者：黄菊殷丽霞牛民主耿志军左芦根李静胡建国蚌埠医科大学第一附属医院中心实验室安徽蚌埠233003 蚌埠医科大学第一附属医院炎症相关性疾病基础与转化研究安徽省重点实验室安徽蚌埠233003 蚌埠医科大学第一附属医院检验科安徽蚌埠233003 蚌埠医科大学第一附属医院胃肠外科安徽蚌埠233003 蚌埠医科大学检验医学院免疫学教研室安徽蚌埠233000

目的探讨天然植物单体紫花前胡苷(Nod)对克罗恩病(CD)样结肠炎的影响及其作用机制。方法建立脂多糖和三磷酸腺苷(ATP)联合诱导的结肠类器官焦亡模型,通过检测焦亡关键调节因子、通透性和促炎因子,探讨Nod对细胞焦亡、肠道屏障功能和炎... 详细信息

目的探讨天然植物单体紫花前胡苷(Nod)对克罗恩病(CD)样结肠炎的影响及其作用机制。方法建立脂多糖和三磷酸腺苷(ATP)联合诱导的结肠类器官焦亡模型,通过检测焦亡关键调节因子、通透性和促炎因子,探讨Nod对细胞焦亡、肠道屏障功能和炎症反应的影响。以2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)干预小鼠为CD动物模型,通过检测体质量、DAI评分、组织病理学分析、炎症评分、肠屏障功能和肠上皮细胞焦亡,探讨Nod对CD样结肠炎的治疗效果。通过网络药理学和体内、体外实验验证探索Nod保护肠上皮细胞焦亡的潜在机制。结果脂多糖和ATP诱导的结肠类器官经Nod干预后显著抑制NLRP3、GSDMD-N、cleaved caspase-1和caspase-11的表达,改善肠道FITC-dextran(FD4,4000)通透性,以及降低IL-1β和IL-18水平(P<0.05)。在TNBS诱导的结肠炎小鼠中,Nod治疗后能缓解小鼠体质量下降幅度、降低DAI评分、改善炎症细胞浸润和炎症评分(P<0.05),并降低血清中FD4、I-FABP的含量与细菌移位至肠系膜淋巴结、脾和肝脏中比例(P<0.05)。Nod可抑制小鼠肠黏膜中NLRP3、GSDMD-N、cleaved caspase-1和caspase-11的表达(P<0.05)。网络药理学预测分析显示,Nod抗结肠炎可能与PI3K/Akt通路有关;体内外实验证实,Nod抑制PI3K/Akt通路的激活,且PI3K/Akt通路的激活剂(IGF-1)逆转了Nod对肠上皮细胞焦亡和肠屏障功能的保护作用(P<0.05)。结论Nod至少部分通过抑制PI3K/Akt信号传导拮抗肠上皮细胞的焦亡,从而保护肠屏障功能和改善CD样结肠炎,有望成为一种新的CD治疗药物。

关键词：克罗恩病紫花前胡苷细胞焦亡肠上皮细胞 PI3K/Akt

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H_2O_2促进中性粒细胞对人脐静脉血管内皮细胞的黏附和损伤

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生理学报 2012年第4期64卷 412-416页

作者：钱中清何小燕吕静竹汪洪涛方芳蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染免疫重点实验室蚌埠233003

本文旨在探讨H2O2对中性粒细胞(polymorphonuclear neutrophils,PMNs)黏附和损伤人脐静脉血管内皮细胞(humanum bilical vein endothelial cells,HUVECs)的促进作用。应用相差显微镜和扫描电镜,以未经H2O2处理的PMNs与HUVECs共培养为对照,观察H2O2预处理的PMNs对HUVECs的黏附和损伤,并计数其黏附率;应用流式细胞仪检测H2O2预处理的PMNs对HUVECs表达细胞间黏附分子1(intercellular adhesion molecule1,ICAM-1)和Apo2.7水平的影响。结果显示,外源性H2O2预处理的PMNs与HUVECs共培养后,相差显微镜下可见圆形PMNs黏附于HUVECs表面,HUVECs细胞形态呈圆形或椭圆形,体积变小;扫描电镜下,细胞微绒毛变短或消失,部分细胞胞膜结构破坏,甚至有细胞碎片形成;H2O2预处理的PMNs对HUVECs的黏附率为(57.74±9.18)%,显著高于对照组[(23.12±6.43)%,P<0.01,n=8];HUVECs表达黏附分子ICAM-1及凋亡相关分子Apo2.7的百分率分别为(44.69±1.52)%和(39.29±1.81)%,显著高于对照组[(21.79±1.43)%和(9.79±1.43)%](P<0.01,n=8)。以上结果表明H2O2可促进PMNs对HUVECs的黏附和损伤。

关键词：过氧化氢中性粒细胞血管内皮细胞细胞间黏附分子1

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多肽类结核杆菌抗原激活的γδ T细胞表达抗原提呈细胞表型和功能

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第7期25卷 588-591页

作者：王婧李柏青蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030

目的:观察用多肽类结核杆菌耐热抗原(Mtb-HAg)激活的人外周血γδT细胞是否具有抗原提呈细胞的表型和抗原提呈作用。方法:外周血单个核细胞(PBMC)经贴壁法获取单核细胞,加GM-CSF,IL-4和LPS培养诱导为成熟DC。PBMC用Mtb-HAg优势扩增γδ... 详细信息

目的:观察用多肽类结核杆菌耐热抗原(Mtb-HAg)激活的人外周血γδT细胞是否具有抗原提呈细胞的表型和抗原提呈作用。方法:外周血单个核细胞(PBMC)经贴壁法获取单核细胞,加GM-CSF,IL-4和LPS培养诱导为成熟DC。PBMC用Mtb-HAg优势扩增γδT细胞后用流式分选纯化γδT(Vδ2+)细胞。PBMC经尼龙毛柱法获得纯化T细胞,用CFSE标记后单独加Mtb分泌性抗原(Mtb-SAg),或加单核细胞和Mtb-SAg共同培养,或与经Mtb-SAg预处理的成熟DC或活化γδT细胞共同培养。第11天时用流式细胞术检测CD4+T细胞的增殖。Mtb-HAg活化的γδT细胞与FITC标记的Mtb-SAg孵育不同时间后用流式细胞术和激光共聚焦显微镜检测摄入情况。结果:Mtb-HAg活化的γδT细胞CD80,CD86和MHC-Ⅱ类分子的表达显著增加。Mtb-SAg预处理活化的γδT细胞诱导初始T细胞增殖数和CD4+T细胞增殖指数的活性与成熟DC相似。Mtb-HAg活化的γδT细胞能摄入FITC标记的Mtb-SAg。结论:用多肽类Mtb-HAg激活的γδT细胞具有抗原提呈细胞的表型,并具有摄入和提呈可溶性抗原给初始T淋巴细胞的能力。

关键词：结核分枝杆菌抗原提呈 T细胞亚群流式细胞术激光共聚焦显微镜

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胰岛素样生长因子1对小鼠肺泡上皮细胞吞噬功能和白细胞介素10产生的影响

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上海交通大学学报（医学版） 2019年第3期39卷 253-257页

作者：吴凤娇母迷迷何晶马华郭术俊宋传旺蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030

目的·探讨胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor 1,IGF-1)对小鼠肺泡上皮细胞株MLE-12细胞吞噬功能和白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)产生的影响。方法·体外培养的MLE-12细胞,在有或无磷脂酰肌醇-3-激酶(phospha... 详细信息

目的·探讨胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor 1,IGF-1)对小鼠肺泡上皮细胞株MLE-12细胞吞噬功能和白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)产生的影响。方法·体外培养的MLE-12细胞,在有或无磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)抑制剂wortmannin存在下用IGF-1刺激48 h;加入荧光微球孵育2 h后,流式细胞术检测细胞吞噬荧光微球情况。酶联免疫吸附试验检测IGF-1刺激MLE-12细胞24 h后上清液中IL-10的含量。IGF-1预处理2 h后,脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激MLE-12细胞24 h,Western blotting检测细胞质中磷酸化信号转导与转录激活因子3(phosphorylated signal transduction and activator of transcription 3,p-STAT3)的表达情况。结果·随着IGF-1刺激浓度的增加,MLE-12细胞吞噬荧光微球的能力增强;在50 ng/mL的IGF-1的刺激下,MLE-12细胞吞噬荧光微球的能力达到峰值。wortmannin阻断PI3K/蛋白激酶B(Akt)途径,IGF-1促进MLE-12细胞吞噬荧光微球的能力消失。IGF-1促进MLE-12细胞分泌IL-10并抑制LPS诱导的STAT3激活。结论·IGF-1通过PI3K/Akt途径促进MLE-12细胞的吞噬作用,并具有一定的抗炎作用。

关键词：胰岛素样生长因子1 MLE-12细胞吞噬功能白细胞介素10 信号转导与转录激活因子3

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转录因子T-bet和Eomes对不同亚类人T细胞产生IFN-γ的调控作用

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细胞与分子免疫学杂志 2010年第1期26卷 31-34页

作者：汪洪涛葛晓松薛祝平李柏青蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030

目的:探讨转录因子T-bet和Eomes对不同亚类人T细胞产生IFN-γ的调控作用。方法:化学合成针对人T-bet和Eomes基因的小干扰RNA(siRNA),转染体外培养的CD3单克隆抗体(mAb)活化的αβT细胞和Mtb-Ag活化的γδT细胞,利用流式细胞仪分选纯化C... 详细信息

目的:探讨转录因子T-bet和Eomes对不同亚类人T细胞产生IFN-γ的调控作用。方法:化学合成针对人T-bet和Eomes基因的小干扰RNA(siRNA),转染体外培养的CD3单克隆抗体(mAb)活化的αβT细胞和Mtb-Ag活化的γδT细胞,利用流式细胞仪分选纯化CD4+、CD8+T细胞和γδT细胞,半定量RT-PCR检测CD4+、CD8+T淋巴细胞中T-bet和EomesmRNA的表达变化,流式细胞术(FCM)检测转染前后IFN-γ产生的变化情况。结果:经过连续2次转染,siRNA-FAM+细胞可达50%。转染T-bet-siRNA后,CD4+T细胞IFN-γ+细胞率(18.46±6.86)%,比阴性对照组(50.20±5.91)%,明显降低(P<0.01),而CD8+T细胞转染T-bet-siRNA,IFN-γ+细胞率(74.18±9.33)%,与阴性对照组(76.51±6.49)%无统计学意义;转染Eomes-siRNA,CD4+T细胞IFN-γ+细胞率(50.92±6.78)%,与对照组无统计学意义;而CD8+T细胞IFN-γ+细胞率(25.37±7.11)%,比阴性对照组(76.51±6.49)%,明显降低(P<0.01)。MtbAT转染T-bet-siRNA和Eomes-siRNA后,γδT细胞IFN-γ+细胞率分别为(56.57±6.67)%和(42.53±5.13)%,比阴性对照组(76.52±2.58)%均明显降低(P<0.01)。结论:在转录因子水平,T-bet和Eomes分别是调控CD4+、CD8+T淋巴细胞IFN-γ产生的重要转录因子,而两者可能同时参与了γδT细胞IFN-γ产生的调节。

关键词： siRNA t-bet IFN-γ 淋巴细胞

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miR-20b对小鼠RAW264.7细胞血管内皮生长因子表达的调控作用

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上海交通大学学报（医学版） 2014年第4期34卷 501-506页

作者：宋传旺陶象男唐洁申林蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 蚌埠医学院科研中心蚌埠233030

目的探讨miR-20b对小鼠RAW264．7细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法以不同浓度（1、10、50、100、200ng／mL）TNF-α刺激小鼠RAW264．7细胞24h，ELISA法检测上清中VEGF的分泌情况。TNF-α（50ng／mL）刺激RAW264．7细胞6h，... 详细信息

目的探讨miR-20b对小鼠RAW264．7细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法以不同浓度（1、10、50、100、200ng／mL）TNF-α刺激小鼠RAW264．7细胞24h，ELISA法检测上清中VEGF的分泌情况。TNF-α（50ng／mL）刺激RAW264．7细胞6h，Real-TimePCR检测miR．20b和VEGFmRNA的表达。使用PicTar算法预测VEGF是否为miR-20b的调控靶点。利用脂质体Lipofectamine2000介导miR-20b模拟物及其对照转染RAW264．7细胞，用TNF-α（100ng／mL）刺激24h，ELISA法检测VEGF的产生情况。结果TNF-α能够诱导小鼠RAW264．7细胞分泌VEGF，50-100ng／mLTNF-α．是最适合的刺激浓度；50ng／mLTNF-α刺激RAW264．7细胞6h，VEGFmRNA的相对表达量升高至对照组的（1．60±0．85）倍，而miR-20b的相对表达量降至对照组（0．55±0．33）倍。PicTar算法表明，小鼠VEGF的3’-UTR区含有miR-20b种子区域AAAGUGC的互补序列GCACUUU。转染miR-20b模拟物后，TNF-α诱导的VEGF蛋白表达升高被完全抑制（P〈0．01），但转染miR-20b模拟物对照对VEGF的产生无明显影响（P〉0．05）。结论小鼠RAW264．7细胞中miR-20b负性调节VEGF的表达。

关键词： miR 20b 血管内皮生长因子 RAW264 7细胞

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miR-20b抑制哮喘小鼠的气道炎症

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南方医科大学学报 2015年第10期35卷 1463-1466页

作者：马华罗玉岚郭术俊申林宋传旺蚌埠医学院免疫学教研室//安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠医学院科研中心安徽蚌埠233030

目的探讨miR-20b对哮喘小鼠气道炎症的影响。方法 BALB/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘组、哮喘+miR-20b模拟物处理组、哮喘+miR-20b模拟物对照处理组。卵清白蛋白(OVA)致敏和激发构建哮喘模型小鼠,miR-20b模拟物及其对照采用鼻滴的方... 详细信息

目的探讨miR-20b对哮喘小鼠气道炎症的影响。方法 BALB/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘组、哮喘+miR-20b模拟物处理组、哮喘+miR-20b模拟物对照处理组。卵清白蛋白(OVA)致敏和激发构建哮喘模型小鼠,miR-20b模拟物及其对照采用鼻滴的方式给药干预。实验流程的第49天检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中的细胞总数和分类计数,肺组织进行HE染色观察病理学变化,ELISA检测BALF中血管内皮生长因子(VEGF)的浓度。结果哮喘小鼠经miR-20b模拟物处理后,BALF中细胞总数及中性粒细胞、嗜酸性粒细胞的分类计数明显降低(P<0.01),并且气道黏膜增厚减轻,气道腔内粘液分泌及支气管周围炎性细胞的浸润减少。与哮喘组BALF中VEGF的含量28.55±3.42 pg/m L相比,哮喘+miR-20b模拟物处理组的含量18.19±3.67 pg/m L明显降低(P<0.01)。结论 miR-20b对哮喘小鼠气道炎症产生抑制作用,这一效应可能是通过降低VEGF的表达来介导。

关键词： miR-20b 哮喘气道炎症血管内皮生长因子

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结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6的构建、鉴定及免疫效应评价

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南方医科大学学报 2013年第7期33卷 945-950页

作者：王雪梅王英薛玉芹陈勇陶志勇夏惠唐洁方强蚌埠医学院病原生物学教研室蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院蚌埠医学院免疫学教研室安徽蚌埠233030

目的构建结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6并探讨其诱导的免疫效应。方法将扩增自结核杆菌基因组的ESAT-6基因装入pVAX1载体构建pVAX1/ESAT-6重组质粒;经酶切、测序鉴定后,利用阳离子聚合物介导将重组质粒pVAX1/ESAT-6转染Hela细胞,分别以RT-... 详细信息

目的构建结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6并探讨其诱导的免疫效应。方法将扩增自结核杆菌基因组的ESAT-6基因装入pVAX1载体构建pVAX1/ESAT-6重组质粒;经酶切、测序鉴定后,利用阳离子聚合物介导将重组质粒pVAX1/ESAT-6转染Hela细胞,分别以RT-PCR法检测ESAT-6 mRNA的表达、间接免疫荧光法检测ESAT-6蛋白表达。重组质粒经体内电转染免疫小鼠后,采用ELISA法测定小鼠血清中IFN-γ及抗ESAT-6特异性抗体IgG的水平;流式细胞术检测小鼠淋巴细胞增殖水平;ELISPOT检测产生IFN-γ的淋巴细胞频数。结果构建的重组质粒pVAX1/ESAT-6经双酶切于3000 bp和300 bp处各见1条带,测序结果显示插入序列与ESAT-6基因序列无差异。重组质粒转染Hela细胞后,RT-PCR产物经琼脂糖凝胶电泳于约300 bp处见目的条带,间接免疫荧光检测显示特异性绿色荧光。重组质粒免疫小鼠后,血清中抗ESAT-6特异性抗体IgG水平较对照组(空质粒组和生理盐水对照组)明显升高;血清中IFN-γ水平、小鼠脾淋巴细胞增殖水平及产生IFN-γ的淋巴细胞数明显均高于对照组(空质粒组和生理盐水对照组)。结论成功构建了结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6,该疫苗可有效诱导小鼠产生特异性细胞免疫和体液免疫效应。

关键词：结核分枝杆菌 ESAT-6 DNA疫苗细胞免疫体液免疫

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结核分枝杆菌抗原B细胞表位肽对人外周γδT细胞的特异性激活作用

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中国免疫学杂志 2015年第7期31卷 884-889页

作者：王充李柏青(指导) 蚌埠医学院免疫学教研室感染与免疫安徽省重点实验室蚌埠233030

目的：探讨结核分枝杆菌（Mtb）抗原中B细胞多肽表位能否特异性刺激γδT细胞的活化和增殖。方法：选择文献报道的Mtb抗原中B细胞识别的多肽表位（BP）序列,人工合成6条多肽（BP1~BP6）和本实验室筛选的γδT细胞识别的2条表位多肽（TP... 详细信息

目的：探讨结核分枝杆菌（Mtb）抗原中B细胞多肽表位能否特异性刺激γδT细胞的活化和增殖。方法：选择文献报道的Mtb抗原中B细胞识别的多肽表位（BP）序列,人工合成6条多肽（BP1~BP6）和本实验室筛选的γδT细胞识别的2条表位多肽（TP）,包被24孔培养板,采集健康成年人外周血分离获取PBMC,经CFSE染色后放入分别包被BP1至BP6和TP14、15的培养板中刺激培养。以Mtb耐热抗原（Mtb-HAg）作为阳性对照,以IL-2作为阴性对照。培养12 d后,收集扩增细胞,用流式细胞术检测γδT细胞百分率及增殖指数（PI）。结果：用Wilcoxon符号秩检验将各组与阴性对照进行配对样本比较,发现14例的γδT细胞百分率在BP2、BP4、TP14、TP15组和Mtb-HAg组的增加具有统计学意义（P〈0.05）;7例的γδT细胞增殖指数在BP2、BP4、BP5、BP6、TP14组和TP15组的增加具有统计学意义（P〈0.05）。结论：Mtb抗原中B细胞表位肽片段,与γδT细胞的表位肽类似,在体外能刺激人PBMC中γδT细胞的增殖。虽然对γδT细胞刺激增殖和活化有个体差异性,但仍有力提示B细胞表位肽可特异性激活γδT细胞。

关键词： Mtb 抗原 γδT细胞 B细胞表位

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重组猪单链IL-12的构建及真核表达

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南方医科大学学报 2011年第10期31卷 1687-1692页

作者：王雪梅袁远英方强夏惠孙新李柏青蚌埠医学院病原生物学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院免疫学教研室安徽蚌埠233030

目的克隆猪IL-12(pIL-12)p35和p40亚单位cDNA,构建含有重组猪单链IL-12(pscIL-12)融合基因的真核表达质粒并进行表达。方法分别从正常成年肉猪的外周血单个核细胞(PBMCs)和脾淋巴细胞中提取总RNA,经RT-PCR分别获得pIL-12 p35和p40亚单... 详细信息

目的克隆猪IL-12(pIL-12)p35和p40亚单位cDNA,构建含有重组猪单链IL-12(pscIL-12)融合基因的真核表达质粒并进行表达。方法分别从正常成年肉猪的外周血单个核细胞(PBMCs)和脾淋巴细胞中提取总RNA,经RT-PCR分别获得pIL-12 p35和p40亚单位编码序列的cDNA,应用重叠延伸PCR技术通过一柔性接头(linker)(Gly4Ser)3串联这两个亚基构建融合基因pscIL-12,将融合基因pscIL-12插入pcDNA3.1(+)真核表达载体,通过阳离子聚合物介导转染CHO-K1细胞进行表达,RT-PCR鉴定pscIL-12融合基因在真核细胞中的表达。结果所克隆的pIL-12 p35亚基和p40亚基的编码基因序列和构建的融合基因pscIL-12序列均经PCR、酶切、测序得以证实;融合基因pscIL-12在CHO-K1细胞中成功转录。结论成功构建了pcDNA3.1(+)-pscIL-12融合基因的真核表达质粒;pcDNA3.1(+)-pscIL-12在CHO-K1细胞中成功转录,为进一步探讨pscIL-12融合蛋白的生物学活性和疫苗佐剂效应奠定了基础。

关键词：白细胞介素-12 单链猪分子克隆真核表达 CHO-K1细胞

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