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华中科技大学学报（医学版） 2022年第5期51卷 631-636页

作者：冀彩丽王梓璇李帆庞洪源苏浩宇华梦晴宋传旺蚌埠医学院检验医学院免疫学教研室蚌埠233030 蚌埠医学院慢性疾病免疫学基础与临床安徽省重点实验室蚌埠233030 蚌埠医学院口腔医学院蚌埠233030

目的探讨Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)对肺泡巨噬细胞(alveolar macrophages,AMs)吞噬功能的影响及相关机制。方法通过鼻滴脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)构建急性肺损伤(ALI)小鼠模型,24 h后经支气管肺泡灌洗获取原代AMs,采用Western blot检测原代AMs中YAP的表达;使用200 ng/mL的TNF-α刺激肺泡巨噬细胞株MH-S,24 h后检测YAP蛋白表达情况。MH-S细胞经YAP siRNA干扰表达或经Verteporfin抑制YAP活性48 h后再与***共孵育1 h,流式细胞术检测MH-S细胞吞噬率变化。MH-S细胞经MARCO阻断抗体(MARCO Ab)作用6 h后,检测其吞噬***能力的变化。YAP siRNA干扰MH-S细胞YAP表达48 h后,检测MARCO受体的表达情况。结果与对照组相比,ALI小鼠AMs总蛋白(P<0.05)和胞质蛋白(P<0.01)中YAP的表达均下降;TNF-α刺激后的MH-S细胞,其总蛋白和胞质蛋白中YAP蛋白水平均下降(均P<0.05)。与干扰对照组(Sc siRNA组)相比,YAP siRNA组MH-S细胞吞噬能力降低(P<0.01);与对照组相比,YAP活性抑制组MH-S细胞的吞噬率明显下降(P<0.01)。用MARCO Ab阻断MARCO受体后,MH-S吞噬率降低(P<0.01)。与Sc siRNA组相比,YAP siRNA组MH-S细胞MARCO受体表达降低(P<0.01)。结论ALI小鼠AMs中YAP蛋白表达下降,YAP的下调可以导致AMs表面MARCO受体表达降低和吞噬***能力减弱。

关键词：急性肺损伤肺泡巨噬细胞肿瘤坏死因子-α MARCO受体吞噬作用

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结核分枝杆菌PPE15蛋白的原核表达、鉴定及其兔多克隆抗体的制备

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细胞与分子免疫学杂志 2022年第1期38卷 78-83页

作者：许涛李敏英王楚彤常先友钱中清李柏青汪洪涛蚌埠医学院检验医学院临床检验诊断学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院免疫学教研室慢性疾病免疫学基础与临床安徽省重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院检验医学实验中心安徽蚌埠233030 蚌埠市第五人民医院感染科安徽蚌埠233030

目的克隆、表达和纯化结核分枝杆菌脯氨酸-脯氨酸-谷氨酸15(PPE15)蛋白,制备并鉴定PPE15蛋白兔多克隆抗体。方法通过PCR从结核分枝杆菌H37Rv株基因组扩增PPE15基因,利用同源重组克隆技术构建原核表达组氨酸标签PPE15蛋白的pET28a-PPE1... 详细信息

目的克隆、表达和纯化结核分枝杆菌脯氨酸-脯氨酸-谷氨酸15(PPE15)蛋白,制备并鉴定PPE15蛋白兔多克隆抗体。方法通过PCR从结核分枝杆菌H37Rv株基因组扩增PPE15基因,利用同源重组克隆技术构建原核表达组氨酸标签PPE15蛋白的pET28a-PPE15载体。将pET28a-PPE15转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导PPE15蛋白表达,通过SDS-PAGE鉴定PPE15蛋白表达。用亲和层析法Ni-NTA柱纯化PPE15蛋白,用复性纯化后的PPE15蛋白免疫新西兰大白兔,制备和纯化多克隆抗体。Western blot法鉴定PPE15蛋白与人血清和多克隆抗体结合特异性,间接ELISA检测多克隆抗体效价。结果成功构建pET28a-PPE15重组表达载体,PPE15蛋白主要以包涵体形式存在,纯化后在相对分子质量(M;)38 000位置处有单一条带。纯化后PPE15蛋白与结核病患者和多克隆抗体发生特异性反应,多克隆抗体效价达1∶1 300 480以上。结论成功表达和纯化重组PPE15蛋白,并制备出高效价兔源性多克隆抗体,为进一步研究PPE15蛋白的功能提供了实验基础。

关键词：结核分枝杆菌脯氨酸-脯氨酸-谷氨酸15(PPE15) Rv1040c 多克隆抗体

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nanos1基因在日本血吸虫不同发育时期的定位

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安徽医科大学学报 2020年第2期55卷 215-221页

作者：华梦晴邵延靖刘淼沈际佳蚌埠医学院检验医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 安徽医科大学基础医学院寄生虫学教研室合肥230032

目的探讨nanos1基因在日本血吸虫的定位以及不同发育时期的表达情况。方法在NCBI上搜索日本血吸虫nanos1基因,PCR扩增、测序并将其全长序列经BLAST软件分析,利用DNAMAN6.0和ClustalX2.0.9进行多重序列比对,利用MAGA 5.05构建进化树进行... 详细信息

目的探讨nanos1基因在日本血吸虫的定位以及不同发育时期的表达情况。方法在NCBI上搜索日本血吸虫nanos1基因,PCR扩增、测序并将其全长序列经BLAST软件分析,利用DNAMAN6.0和ClustalX2.0.9进行多重序列比对,利用MAGA 5.05构建进化树进行系统进化分析。体外转录地高辛(DIG)标记的RNA探针,并将其用于日本血吸虫感染后第18、24和42天3个发育时期的雌雄虫整体原位杂交,以确定nanos1基因在日本血吸虫的定位。结果PCR扩增获得日本血吸虫nanos1基因,生物信息学分析结果表明其编码的蛋白与曼氏血吸虫nanos2蛋白同源性最高。体外转录成功的RNA探针用于日本血吸虫整体原位杂交,在感染后第24、42天雌虫的卵巢和卵黄腺以及18天雌虫的卵巢检测到阳性杂交信号,而各个发育阶段的雄虫均未观察到明显阳性杂交信号。结论日本血吸虫nanos1基因高表达于感染后第18天雌虫的卵巢以及第24、42天雌虫的卵巢和卵黄腺。该研究初步揭示了日本血吸虫nanos1基因的表达模式,为研究nanos1基因的功能提供了重要线索。

关键词：日本血吸虫 nanos1 进化分析整体原位杂交

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survivin抗肺癌细胞凋亡的分子机制

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中华肿瘤杂志 2006年第6期28卷 413-417页

作者：陈余清李伟周继红李殿明夏雪梅黄礼年李柏青蚌埠医学院第一附属医院呼吸科安徽省卫生厅临床重点专科 233004 蚌埠医学院生物化学与分子生物学教研室免疫学教研室安徽省教育厅重点实验室

目的研究survivin反义寡核苷酸(ASODN)诱导肺癌细胞凋亡的作用,探讨survivin抗肺癌细胞凋亡的分子机制。方法在脂质体介导下,分别以100 mmol/L、300 mmol/L和500 mmol/L浓度的survivin ASODN,作用于肺癌细胞株NCI-H446 24 h、48 h和72 h... 详细信息

目的研究survivin反义寡核苷酸(ASODN)诱导肺癌细胞凋亡的作用,探讨survivin抗肺癌细胞凋亡的分子机制。方法在脂质体介导下,分别以100 mmol/L、300 mmol/L和500 mmol/L浓度的survivin ASODN,作用于肺癌细胞株NCI-H446 24 h、48 h和72 h后,用RT-PCR和Western blot检测survivin mRNA及蛋白表达,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡；Rh123染色法检测细胞线粒体膜电位(△Ψm)变化；ELISA法检测胞浆细胞色素C(cyt C)浓度；比色法检测胞浆内天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-9(caspase-9)、caspase-3的活性；Western blot检测caspase-8蛋白表达；加入环孢霉素A (CsA)后,以FCM检测细胞凋亡。结果与各对照组相比,survivin ASODN显著下调了survivin mRNA表达,且呈时间和浓度依赖性,其中以500 mmol/L作用72 h时效果最佳,抑制率达62．7%,其蛋白表达也显著下调。NCI-H446细胞的凋亡指数(AI)为48．35%,明显高于对照组(3．75%)、空脂质体组(3．41%)、无义寡核苷酸(NSODN)组(4．69%)、100和300 mmol/L ASODN组(19．85%和34．39%)；增殖指数(PI)为24．38%,明显低于上述各组(75．54%、73．12%、71．76%、51．03%和38．94%,P均＜0．01)。survivin ASODN导致细胞△Ψm逐渐下降,并相继引起cyt C的释放、caspase-9和caspase-3的激活,而caspase-8酶原无变化。CsA显著抑制了survivin ASODN诱导的细胞凋亡。结论survivin通过调控线粒体凋亡途径发挥抗肺癌细胞凋亡作用；survivin ASODN能够显著下调survivin mRNA及蛋白表达,诱导肺癌细胞凋亡,抑制细胞增殖。

关键词： survivin 肺癌,细胞系细胞凋亡

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谷跗线螨交叉反应性变应原的定位

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昆虫学报 2011年第7期54卷 848-852页

作者：赵学影赵振富孙新刘志刚吕艳思蚌埠医学院病原生物学教研室感染与免疫安徽省重点实验室安徽蚌埠233030 深圳大学过敏反廊与免疫学研究所广东深圳518060

为明确谷跗线螨Tarsonemus granarius交叉反应性变应原在体内的定位,制作谷跗线螨石蜡切片,HE染色后光镜观察其内部形态结构;选用对尘螨过敏患者的阳性血清特异性IgE抗体作探针,免疫组织化学染色分析其交叉反应性抗原存在位置。HE染色... 详细信息

为明确谷跗线螨Tarsonemus granarius交叉反应性变应原在体内的定位,制作谷跗线螨石蜡切片,HE染色后光镜观察其内部形态结构;选用对尘螨过敏患者的阳性血清特异性IgE抗体作探针,免疫组织化学染色分析其交叉反应性抗原存在位置。HE染色显示谷跗线螨的消化系统占据其体腔的大部分,包括口咽部、中肠、后肠、肛门和唾液腺等结构。免疫组织化学染色显示谷跗线螨的口咽部、中肠、肠内容物、肠壁及生殖腺等均有阳性反应。谷跗线螨体内存在可诱发人体IgE抗体的变应原,变应原在其体内的分布格局与屋尘螨Dermatophagoides pteronyssinus基本一致。

关键词：谷跗线螨跗线螨科变应原抗原定位免疫组织化学 HE染色交叉反应性

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利用sgRNA串联表达框架编辑恶性疟原虫K13和NUP116基因的研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2017年第3期35卷 197-201页

作者：孟令文赵月蒙夏惠方强张青锋蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 同济大学医学院上海200092

目的利用单链引导RNA(sg RNA)串联表达框架编辑恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)K13和NUP116基因。方法根据恶性疟原虫K13和NUP116基因序列设计引物,PCR扩增K13和NUP116基因的同源臂,并引入突变位点。PCR串联基因K13和NUP116的sg RNA... 详细信息

目的利用单链引导RNA(sg RNA)串联表达框架编辑恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)K13和NUP116基因。方法根据恶性疟原虫K13和NUP116基因序列设计引物,PCR扩增K13和NUP116基因的同源臂,并引入突变位点。PCR串联基因K13和NUP116的sg RNA,将同源臂和串联的sg RNA与载体p L6cs连接,构建用于电击转染实验的载体p L6-K13-NUP116,将其与表达Cas9蛋白的质粒一同通过电击转染法,转入恶性疟原虫体内,利用成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9(CRISPR/Cas9)系统对基因进行编辑修饰,通过筛选药物二氢叶酸还原酶抑制剂(WR)和杀稻瘟菌素(BSD)筛选转基因疟原虫,提取转基因疟原虫的基因组,对其进行PCR检测,最终通过测序鉴定K13和NUP116基因是否成功被突变修饰。结果 PCR扩增出K13和NUP116串联的同源臂(K13全长557 bp,NUP116全长569 bp)以及串联的sg RNA,与载体p L6cs连接后成功获得用于电击转染实验的表达载体p L6-K13-NUP116。电击转染后通过药物筛选转基因疟原虫,培养至第28天涂片镜检发现疟原虫。PCR检测结果显示,转基因疟原虫K13和NUP116基因突变修饰成功。测序表明,K13和NUP116基因的目标位点被成功突变。结论基于CRISPR/Cas9编辑技术的串联sg RNA表达载体可同时对恶性疟原虫K13和NUP116基因进行编辑。

关键词：恶性疟原虫 CRISPR/Cas9系统基因编辑

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芍药苷对MRL/lpr狼疮小鼠肺损伤的保护作用

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四川大学学报（医学版） 2018年第3期49卷 394-398页

作者：谢长好李志军陈琳洁赵萍张佳佳白善旺沈桐贺文欣王元元蚌埠医学院第一附属医院风湿免疫科蚌埠233000 蚌埠医学院临床医学院蚌埠233000 蚌埠医学院组织学与胚胎学教研室蚌埠233000 蚌埠医学院安徽省组织移植重点实验室蚌埠233000

目的探讨芍药苷对MRL/lpr狼疮小鼠肺损伤的影响。方法将系统性红斑狼疮MRL/lpr小鼠随机分为MRL/lpr组、MRL/lpr+地塞米松(1.5mg/kg)组,MRL/lpr+芍药苷(20mg/kg)组,MRL/lpr+芍药苷(40mg/kg)组,每组10只,给药7d;另取10只野生型C57BL/6小鼠作为正常对照组。第8天采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和血清炎症因子白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;采用HE染色检测肺部病理改变,采用蛋白质免疫印迹(Western blot)技术检测各组小鼠肺组织中磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶(P-PI3K)、磷酸化丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(P-Akt)、磷酸化核因子κB p65(P-NF-κBp65)、磷酸化NF-κB抑制蛋白α(P-IκBα)蛋白的表达。结果芍药苷能显著降低血清MDA含量;提高血清SOD、CAT、GSH-PX水平,减少血清炎症因子水平,改善肺组织病理改变,并能显著抑制P-PI3K、P-Akt、P-NF-κBp65、P-IκBα蛋白表达。结论芍药苷对MRL/lpr狼疮小鼠肺损伤起到保护作用。

关键词：系统性红斑狼疮芍药苷肺组织炎症

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结核病患者中性粒细胞L选择素的表达及意义

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中国老年学杂志 2015年第14期35卷 3941-3942页

作者：姜丽娜姚春艳金齐力李柏青蚌埠医学院病理生理学教研室安徽蚌埠233030 感染与免疫安徽省重点实验室

目的检测结核病患者外周血中性粒细胞(PMN)体外感染结核分枝杆菌(***)前后L选择素(CD62L)的表达情况,并探讨CD62L在结核病的发展过程中的作用。方法应用流式细胞术检测结核病患者PMN表面CD62L的表达,同时检测正常人PMN的CD62L表达率;体... 详细信息

目的检测结核病患者外周血中性粒细胞(PMN)体外感染结核分枝杆菌(***)前后L选择素(CD62L)的表达情况,并探讨CD62L在结核病的发展过程中的作用。方法应用流式细胞术检测结核病患者PMN表面CD62L的表达,同时检测正常人PMN的CD62L表达率;体外感染***后,再检测结核病患者和正常人PMN的CD62L表达率。结果结核病患者PMN表面高表达CD62L,与正常人PMN表面CD62L表达无明显差异;感染***后,结核病患者和正常人PMN表面CD62L表达率显著降低(P<0.05)。结论结核病患者PMN表面CD62L参与了PMN的趋化过程,在结核炎症反应中发挥重要作用,推动结核病的发展过程。

关键词：结核中性粒细胞 L选择素(CD62L)

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蠕虫及其衍生产物治疗自身免疫性疾病的临床进展

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细胞与分子免疫学杂志 2023年第12期39卷 1132-1140页

作者：吴心悦高宏宇段姝瑶丁文博杨小迪安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院第一附属医院安徽蚌埠233030 蚌埠医学院病原生物学教研室安徽蚌埠233030

自身免疫性疾病传统治疗自身免疫性疾病的药物会产生诸多不良反应,且目前治疗的方式多侧重于症状的控制而不是治愈,给人们造成了巨大的健康问题和经济负担。近年来,临床研究证明某些蠕虫及其衍生产物治疗自身免疫性疾病具有明显的治疗效... 详细信息

自身免疫性疾病传统治疗自身免疫性疾病的药物会产生诸多不良反应,且目前治疗的方式多侧重于症状的控制而不是治愈,给人们造成了巨大的健康问题和经济负担。近年来,临床研究证明某些蠕虫及其衍生产物治疗自身免疫性疾病具有明显的治疗效果,而其作为一种近天然的免疫调节剂,作用相较于治疗自身免疫性疾病的广谱免疫抑制剂和皮质类固醇更加温和。但不同的蠕虫及其衍生产物治疗自身免疫性疾病的机制与效果也不尽相同。本文主要总结了蠕虫及其衍生产物治疗炎症性肠病、多发性硬化症和自闭症谱系障碍的临床进展,以提供新的临床治疗思路。

关键词：蠕虫自身免疫性疾病临床进展综述

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子痫前期患者血清细胞因子表达谱及其临床意义

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生殖与避孕 2009年第10期29卷 683-687页

作者：钱中清曾耀英朱斌季煜华何芳黄秀燕暨南大学组织移植与免疫实验中心广州510632 蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染免疫重点实验室蚌埠232001 广州市番禺区何贤纪念医院产科广州510632

目的:研究子痫前期患者血清中细胞因子表达谱的变化及其临床意义。方法:①以Luminex液相芯片技术检测子痫前期患者(A组)16例、正常妊娠妇女(B组)19例、正常非孕妇(C组)12例3组人群血清IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IFN-γ、TNF-α、MCP-1... 详细信息

目的:研究子痫前期患者血清中细胞因子表达谱的变化及其临床意义。方法:①以Luminex液相芯片技术检测子痫前期患者(A组)16例、正常妊娠妇女(B组)19例、正常非孕妇(C组)12例3组人群血清IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IFN-γ、TNF-α、MCP-1、VEGF、NT-proBNP等细胞因子表达水平,并进行比较;②收集、整理和分析3组对象血压、白细胞计数、尿蛋白及尿酸等临床常规检查指标,并与细胞因子表达谱的变化间进行对比分析。结果:①与B比,A组血清中IL-8、MCP-1、IL-6、TNF-α和VEGF5种细胞因子表达水平升高,有统计学差异(P<0.05),与疾病严重程度无明显相关性;②与B比,轻度(A1组)和重度(A2组)子痫前期者白细胞计数、尿酸水平均升高,有统计学差异(P<0.05或0.01);A1组与A2组间比较,尿酸水平有统计学差异(P<0.05),而白细胞计数水平则无统计学差异(P>0.05)。结论:子痫前期患者血清细胞因子表达呈炎症及血管损伤特征,尿酸水平可作为其疾病严重程度的监控指标。

关键词：子痫前期细胞因子 Luminex

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