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第十届全国免疫学学术大会

作者：陈策唐洁刘震天江京娣李柏青蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室

研究背景:已知磷酸类抗原可直接与γδTCR结合,特征性激活γδT细胞增殖。但不同的磷酸类抗原在刺激人PBMC后,T细胞亚群产生IFN-γ的差异,未见报道。目的 :检测磷酸类抗原(IPP、DMAPP)在刺激人外周血PBMC后,T细胞亚群产生IFN-γ的差异... 详细信息

研究背景:已知磷酸类抗原可直接与γδTCR结合,特征性激活γδT细胞增殖。但不同的磷酸类抗原在刺激人PBMC后,T细胞亚群产生IFN-γ的差异,未见报道。目的 :检测磷酸类抗原(IPP、DMAPP)在刺激人外周血PBMC后,T细胞亚群产生IFN-γ的差异。方法 :采集10例健康人新鲜外周血,分离PBMC置48孔培养板中(5-7.5×105细胞/孔),加IPP或DMAPP(终浓度均为20μmol/L)培养14小时后,加Monensin培养6小时收集细胞。加荧光单抗进行表面分子染色,透膜处理后再加荧光标记抗IFN-γ单抗作胞内染色,在流式细胞仪上检测γδT细胞、αβT细胞、CD4T细胞和CD8T细胞中表达IFN-γ的细胞比例。另设阴性对照组,不加抗原刺激仅加Monensin;以加PHA为阳性对照组。结果:IPP组,γδT细胞、αβT细胞、CD4T细胞和CD8T细胞中IFN-γ+细胞比例为7.568%、0.012%、0.005%和0.029%;DMAPP组分别为3.127%、0.016%、0.007%和0.021%;阴性对照组分别为0.257%、0.031%、0.005%和0.002%;阳性对照组分别为1.882%、0.687%、0.641%和0.773%。IPP组和DMAPP组中,γδT细胞中产生IFN-γ+细胞比例明显高于αβT细胞中的比例,IPP组γδT细胞中产生IFN-γ细胞比例明显高于DMAPP组,以上差异均有统计学意义(P<0.05)。IPP组、DMAPP和阴性对照组之间αβT细胞、CD4T细胞和CD8T细胞中产生IFN-γ细胞比例的差异进行比较,无统计学意义(P>0.05)。结论 :磷酸类抗原刺激人外周血PBMC,可特征性诱导γδT细胞产生IFN-γ,而αβT细胞几乎不产生。IPP诱导γδT细胞产生IFN-γ的活性明显强于DMAPP。

关键词：磷酸类抗原 T细胞亚群 IFN-γ γδT细胞

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健康人与肺结核患者外周血PBMC中γδT细胞亚群免疫表型的比较

健康人与肺结核患者外周血PBMC中γδT细胞亚群免疫表型的比较

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中国免疫学会第十届全国免疫学学术大会

作者：刘震天李柏青陈策江京娣唐洁安徽省蚌埠医学院免疫学教研室感染与免疫安徽省重点实验室

研究背景：T细胞亚群和免疫表型的研究中，健康人与肺结核患者γδT细胞各亚群免疫表型之间的差异，未见报道。目的：检测健康人与肺结核患者外周血PBMC中γδT细胞亚群免疫表型的差异。

关键词： T细胞亚群 γδT细胞免疫表型

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健康人与肺结核患者外周血PBMC中γδT细胞亚群免疫表型的比较

健康人与肺结核患者外周血PBMC中γδT细胞亚群免疫表型的比较

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第十届全国免疫学学术大会

作者：刘震天李柏青陈策江京娣唐洁安徽省蚌埠医学院免疫学教研室感染与免疫安徽省重点实验室

研究背景:T细胞亚群和免疫表型的研究中,健康人与肺结核患者γδT细胞各亚群免疫表型之间的差异,未见报道。目的 :检测健康人与肺结核患者外周血PBMC中γδT细胞亚群免疫表型的差异。方法 :采集健康人和肺结核患者新鲜外周血,分离PBMC,... 详细信息

研究背景:T细胞亚群和免疫表型的研究中,健康人与肺结核患者γδT细胞各亚群免疫表型之间的差异,未见报道。目的 :检测健康人与肺结核患者外周血PBMC中γδT细胞亚群免疫表型的差异。方法 :采集健康人和肺结核患者新鲜外周血,分离PBMC,荧光单抗进行表面分子染色,其中Tnave为CD45RA+CCR7+,Tcm为CD45RA-CCR7+,Tem为CD45RA-CCR7-,Temra为CD45RA+CCR7-,流式细胞仪检测分析Vδ1,Vδ2及Vδ3-8亚群不同免疫表型的百分率,并将健康人组与肺结核患者组进行比较。结果:γδT细胞中Tnaive,Tcm,Tem和Temra亚群的百分率在健康人(n=15)的Vδ1 T细胞中分别是98±32.63,13.14±8.67,1.90±3.36和32.45±33.33;Vδ2 T细胞中分别是12.27±10.67,48.01±31.44,21.33±19.99和18.38±18.81;Vδ3-8 T细胞中分别是36.10±25.29,14.87±9.84,6.98±6.81和37.73±28.51。在肺结核患者(n=7)的Vδ1T细胞中分别是92.71±5.00,2.27±2.84,0±0和3.07±5.05;Vδ2 T细胞中分别是25.60±10.19,11.30±17.82,8.70±13.09和54.40±29.86;Vδ3-8 T细胞中分别是71.57±22.31,14.76±19.46,1.15±1.26和12.51±9.76。以上健康人与肺结核患者γδT细胞亚群免疫表型的百分率的差异,除Vδ2亚群Tem和Vδ3-8亚群Tcm外,均具有统计学意义(P<0.05)。结论 :健康人与肺结核患者外周血PBMC中γδT细胞亚群免疫表型的百分率具有差异性。如Vδ2亚群中,健康人Tcm亚群明显高于肺结核患者,而Temra则相反。

关键词： T细胞亚群 γδT细胞免疫表型

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磷酸类抗原刺激人外周血PBMC后T细胞亚群产生IFN-γ的比较

磷酸类抗原刺激人外周血PBMC后T细胞亚群产生IFN-γ的比较

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中国免疫学会第十届全国免疫学学术大会

作者：陈策唐洁刘震天江京娣李柏青蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室 233030

研究背景：已知磷酸类抗原可直接与γδTCR结合,特征性激活γδT细胞增殖。但不同的磷酸类抗原在刺激人PBMC后,T细胞亚群产生IFN-γ的差异,未见报道。目的：检测磷酸类抗原(IPP、DMAPP)在刺激人外周血PBMC后,T细胞亚群产生IFN-γ的差异。

关键词：磷酸类抗原 T细胞亚群 IFN-γ γδT细胞

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金丝桃素和β-环糊精结合常数的测定

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河西学院学报 2015年第2期31卷 25-30页

作者：张晖薛洪宝李柏青梁丽丽陶兆林蚌埠医学院化学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院感染与免疫安徽省重点实验室安徽蚌埠233030

采用微量热泳动法和分子荧光光谱法分别测定金丝桃素与β-环糊精的包合物和结合常数,并对实验数据进行Hill拟合.实验表明:β-环糊精对金丝桃素有一定程度的包合.两种方法测得的金丝桃素和β-环糊精包合物中金丝桃素、β-环糊精的分子个... 详细信息

采用微量热泳动法和分子荧光光谱法分别测定金丝桃素与β-环糊精的包合物和结合常数,并对实验数据进行Hill拟合.实验表明:β-环糊精对金丝桃素有一定程度的包合.两种方法测得的金丝桃素和β-环糊精包合物中金丝桃素、β-环糊精的分子个数比分别为1:5和1:7,微观解离常数KA分别为1.82ng·L-1和3.72ng·L-1,平衡解离常数Kd分别为76.92和1120.23.该方法快速、简便、试验结果相对可靠.

关键词：金丝桃素 β-环糊精结合常数微量热泳动法分子荧光光谱法

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MicroRNA在血吸虫病致病机制中的作用

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国际医学寄生虫病杂志 2015年第2期42卷 109-111,117页

作者：蒲广斌杨小迪孙新蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室

MicroRNA （miRNA）是一类大小约21～25 nt,广泛存在于真核生物和各种病毒体内的非蛋白编码单链小分子RNA,是转录后水平的细胞调控因子.miRNA广泛参与真核生物细胞的生长、发育、代谢、凋亡等生理活动.miRNA也广泛参与血吸虫生长发育及... 详细信息

MicroRNA （miRNA）是一类大小约21～25 nt,广泛存在于真核生物和各种病毒体内的非蛋白编码单链小分子RNA,是转录后水平的细胞调控因子.miRNA广泛参与真核生物细胞的生长、发育、代谢、凋亡等生理活动.miRNA也广泛参与血吸虫生长发育及生理代谢过程,在血吸虫感染早期,miRNA在血吸虫和宿主之间起到了非常重要的作用.该文就miRNA在血吸虫病致病机制中的作用作一综述.

关键词：血吸虫血吸虫病 miRNA 肝纤维化

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10-23型脱氧核酶对乙肝病毒C基因体外转录产物的切割作用

10-23型脱氧核酶对乙肝病毒C基因体外转录产物的切割作用

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第十届全国免疫学学术大会

作者：江京娣张晓洁吕静竹钱中清蚌埠医学院免疫学教研室感染与免疫安徽省重点实验室蚌埠医学院生物化学与分子生物学教研室

研究背景:10-23型脱氧核酶因其特异、高效切割RNA且自身较稳定、成本低、易制备等优点受到关注。乙型肝炎病毒(HBV)既是DNA病毒,也是逆转录病毒,因此如果10-23型脱氧核酶能特异性切割HBV RNA,既能减少HBV的复制,亦能减少HBV蛋白的表达... 详细信息

研究背景:10-23型脱氧核酶因其特异、高效切割RNA且自身较稳定、成本低、易制备等优点受到关注。乙型肝炎病毒(HBV)既是DNA病毒,也是逆转录病毒,因此如果10-23型脱氧核酶能特异性切割HBV RNA,既能减少HBV的复制,亦能减少HBV蛋白的表达。目的 :探讨10-23型脱氧核酶对乙肝病毒C基因RNA的体外特异性切割作用。方法 :构建含有包括HBV C基因的克隆载体,体外转录获得相对应的HBV RNA。合成针对HBV C基因RNA A2320UC和G2342UU的10-23型脱氧核酶,分别命名为Dzhbvc-AU1、Dzhbvc-GU1。设计空白对照组,反义寡脱氧核苷酸组,10-23型脱氧核酶组。在有效的体外切割体系下(10ul体系,10m M Mg Cl2,50m M Tris-HCl,10-23型脱氧核酶:10p mol,RNA:0.69p mol),37℃水浴,反应完成后加入0.5M EDTA 4ul,再加入14ul的2×RNA Loading Dye,混匀后90℃/10min,迅速放入冰中冷却后上样,1.5%琼脂糖电泳分析0.5,1,2,4小时后切割效率,切割效率=切割后两条片段的光密度值之和/(未切割的底物光密度值+切割后两条片段的光密度值和)×100%。结果 :通过体外转录获得的用于切割反应的底物RNA大小为1413nt。Dzhbvc-AU1、Dzhbvc-GU1均能对相应的底物RNA进行有效的特异性切割,空白对照组及反义寡脱氧核苷酸组未见切割现象。在0.5小时、1小时、2小时、4小时,Dzhbvc-AU1的切割效率分别为48.63%、51.18%、53.02%、53.98%,Dzhbvc-GU1的切割效率分别为70.61%、71.25%、73.40%、74.00%。结论 :在体外,10-23型脱氧核酶对乙肝病毒C基因相应的转录产物有特异性切割作用。

关键词：脱氧核酶乙肝病毒体外切割基因治疗

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10-23型脱氧核酶对乙肝病毒C基因体外转录产物的切割作用

10-23型脱氧核酶对乙肝病毒C基因体外转录产物的切割作用

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中国免疫学会第十届全国免疫学学术大会

作者：江京娣张晓洁吕静竹钱中清蚌埠医学院免疫学教研室感染与免疫安徽省重点实验室蚌埠医学院生物化学与分子生物学教研室

研究背景：10-23型脱氧核酶因其特异、高效切割RNA且自身较稳定、成本低、易制备等优点受到关注。乙型肝炎病毒(HBV)既是DNA病毒,也是逆转录病毒,因此如果10-23型脱氧核酶能特异性切割HBV RNA,既能减少HBV的复制,亦能减少HBV蛋白的表达。

关键词：脱氧核酶乙肝病毒体外切割基因治疗

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旋毛虫感染诱导的Th免疫偏移对小鼠胶原性关节炎的影响

旋毛虫感染诱导的Th免疫偏移对小鼠胶原性关节炎的影响

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十五次全国学术会议暨第六次国际寄生虫学学术研讨会

作者：朱伟李江艳李倩王小莉杨小迪夏惠方强蚌埠医学院病原生物学教研室感染与免疫安徽省重点实验室

目的:观察旋毛虫感染对CIA模型小鼠的疾病发生、病情的影响并探讨旋毛虫感染对CIA模型小鼠可能的免疫调控机制。方法:建立小鼠胶原性关节炎(CIA)模型,以旋毛虫肌幼虫分别于CIA造模前2W、造模同时、造模后2W感染小鼠。观察小鼠关节炎的... 详细信息

目的:观察旋毛虫感染对CIA模型小鼠的疾病发生、病情的影响并探讨旋毛虫感染对CIA模型小鼠可能的免疫调控机制。方法:建立小鼠胶原性关节炎(CIA)模型,以旋毛虫肌幼虫分别于CIA造模前2W、造模同时、造模后2W感染小鼠。观察小鼠关节炎的发病情况,判断旋毛虫不同时期感染对CIA小鼠的影响。首次CⅡ免疫6W后处死小鼠,取小鼠足爪和膝关节部位进行病理切片,观察其不同组间病理变化。ELISA法检测小鼠血清CⅡ胶原特异Ig G及其亚类抗体Ig G1、Ig G2a水平。3H-Td R掺入法检测脾淋巴细胞增殖反应。流式细胞术检测小鼠脾淋巴细胞中Th1、Th2、Th17、Terg细胞亚群比例。结果:与CIA模型对照组相比较,CIA造模前2W感染旋毛虫组,能显著减轻CIA小鼠关节炎的病情,减轻病理损伤;血清中CⅡ胶原特异性Ig G、Ig G2a水平显著降低,Ig G1水平升高。脾淋巴细胞对Con A多克隆刺激及CⅡ抗原特异性刺激诱发的增值反应明显降低。CIA造模同时感染旋毛虫组对病情和发病率,脾淋巴细胞增殖以及血清CⅡ胶原Ig G及其亚类未有明显影响。CIA造模后2W感染旋毛虫组则加重了关节炎病情及病理损伤,但对脾淋巴细胞增殖和血清CⅡ胶原Ig G及其亚类未有明显影响。与CIA模型对照组相比,CIA造模前2W感染旋毛虫组IFN-γ+CD4+T和IL-17+CD4+T细胞亚群比例显著降低,IL-4+CD4+T和Treg细胞亚群比例显著升高。CIA造模同时感染旋毛虫组及CIA造模后2W感染旋毛虫组的IFN-γ+CD4+T、IL-17+CD4+T、IL-4+CD4+T和Treg细胞亚群比例较CIA模型对照组无显著性差异。结论:预先感染旋毛虫能够减轻CIA小鼠的临床症状及病理损伤,这有赖于造模前预先感染旋毛虫启动Th2、Treg优势应答来抑制异种Ⅱ型胶原诱发的致病性Th1和Th17应答。

关键词：旋毛虫免疫调节 Th细胞胶原性关节炎

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miR-20b对小鼠RAW264.7细胞血管内皮生长因子表达的调控作用

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上海交通大学学报（医学版） 2014年第4期34卷 501-506页

作者：宋传旺陶象男唐洁申林蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 蚌埠医学院科研中心蚌埠233030

目的探讨miR-20b对小鼠RAW264．7细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法以不同浓度（1、10、50、100、200ng／mL）TNF-α刺激小鼠RAW264．7细胞24h，ELISA法检测上清中VEGF的分泌情况。TNF-α（50ng／mL）刺激RAW264．7细胞6h，... 详细信息

目的探讨miR-20b对小鼠RAW264．7细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法以不同浓度（1、10、50、100、200ng／mL）TNF-α刺激小鼠RAW264．7细胞24h，ELISA法检测上清中VEGF的分泌情况。TNF-α（50ng／mL）刺激RAW264．7细胞6h，Real-TimePCR检测miR．20b和VEGFmRNA的表达。使用PicTar算法预测VEGF是否为miR-20b的调控靶点。利用脂质体Lipofectamine2000介导miR-20b模拟物及其对照转染RAW264．7细胞，用TNF-α（100ng／mL）刺激24h，ELISA法检测VEGF的产生情况。结果TNF-α能够诱导小鼠RAW264．7细胞分泌VEGF，50-100ng／mLTNF-α．是最适合的刺激浓度；50ng／mLTNF-α刺激RAW264．7细胞6h，VEGFmRNA的相对表达量升高至对照组的（1．60±0．85）倍，而miR-20b的相对表达量降至对照组（0．55±0．33）倍。PicTar算法表明，小鼠VEGF的3’-UTR区含有miR-20b种子区域AAAGUGC的互补序列GCACUUU。转染miR-20b模拟物后，TNF-α诱导的VEGF蛋白表达升高被完全抑制（P〈0．01），但转染miR-20b模拟物对照对VEGF的产生无明显影响（P〉0．05）。结论小鼠RAW264．7细胞中miR-20b负性调节VEGF的表达。

关键词： miR 20b 血管内皮生长因子 RAW264 7细胞

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