检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：梁华杨军平李柏青江西中医药大学附属医院检验科江西南昌330006 蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030

目的:检测结核病患者和健康人外周血中分泌IL-22和IL-17的γδT细胞亚群比例的变化，以探讨分泌不同细胞因子的γδT细胞亚群在抗结核感染免疫反应中的作用。方法:取肝素抗凝全血，加培养液等体积混匀，依次加入佛波醇酯和离子霉素... 详细信息

目的:检测结核病患者和健康人外周血中分泌IL-22和IL-17的γδT细胞亚群比例的变化，以探讨分泌不同细胞因子的γδT细胞亚群在抗结核感染免疫反应中的作用。方法:取肝素抗凝全血，加培养液等体积混匀，依次加入佛波醇酯和离子霉素，37℃,5％CO2培养2h，再加入蛋白转运抑制剂莫能菌素继续培养4h，收集细胞后先加抗入CD3-APC，和TCR-γδTC,4℃避光反应20min，经溶血、洗涤、固定后，0.1%皂素透膜10分钟，最后加入抗人IL-22-PE和IL-17-FITC抗体，4℃ 30分钟，洗涤后2%PFA重悬细胞，应用流式细胞仪和CellQuest软件检测和分析结果，同时设置同型对照。结果:健康对照组(n=8)分泌IL-22和IL-17的γδT细胞在所有γδT细胞中的比例分别为(1.50±0.56)%和(0.25±0.19)%，结核病患者组(n=15)分泌IL-22和IL-17的γδT细胞在所有γδT细胞中的比例分别为(3.09±1.74)%和(0.72±0.51)%，后者均明显高于前者(p<0.05);而共分泌IL-22和IL-17的γδT细胞比例在健康对照组为(0.31±0.20)%，在结核病患者组为(0.44±0.33)%，二者比较差异无统计学意义(p>0.05)。结论:γδT细胞中存在单独分泌IL-22、IL-17和共分泌IL-22和IL-17的不同细胞亚群，活动性肺结核病患者外周血中分泌IL-22的γδT细胞比例增高，其增高并非与分泌IL-17的γδT细胞比例增高引起有关。

关键词：肺结核外周血白细胞介素-22 白细胞介素-17 γδT细胞亚群免疫反应

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结核分枝杆菌感染对THP-1细胞CD14表达的影响

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蚌埠医学院学报 2012年第2期37卷 131-133页

作者：金齐力韦莉李柏青蚌埠医学院第二附属医院检验科安徽蚌埠233040 蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院病原生物学教研室安徽蚌埠233030

目的:探讨结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染THP-1细胞后对细胞表面白细胞分化抗原14(CD14)表达的影响。方法:Mtb以10∶1感染佛波醇酯(PMA)分化的THP-1细胞,建立Mtb感染THP-1细胞的模型。采用流式细胞术检测THP-1细胞、... 详细信息

目的:探讨结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染THP-1细胞后对细胞表面白细胞分化抗原14(CD14)表达的影响。方法:Mtb以10∶1感染佛波醇酯(PMA)分化的THP-1细胞,建立Mtb感染THP-1细胞的模型。采用流式细胞术检测THP-1细胞、PMA分化的THP-1细胞及Mtb感染THP-1细胞CD14的表达。结果:THP-1细胞和PMA分化的THP-1细胞表面表达CD14的阳性率分别为5.5%和21.6%,对Mtb的吞噬率分别为7.7%和93.0%;Mtb感染的THP-1细胞表面表达CD14的阳性率为27.5%。结论:PMA分化后的THP-1细胞表面CD14的表达增加,Mtb感染后CD14的表达进一步增加,对Mtb的吞噬率增加。

关键词：结核分枝杆菌 THP-1细胞白细胞分化抗原14

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结核分枝杆菌蛋白抗原T细胞表位的研究进展

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蚌埠医学院学报 2011年第4期36卷 421-426页

作者：彭美玉李柏青山东万杰医学院医学检验教研室山东淄博255213 蚌埠医学院免疫学教研室感染与免疫安徽省重点实验室安徽蚌埠233030

结核分枝杆菌（Mtb）的蛋白抗原根据所处细胞位置的不同,可分为分泌性蛋白、胞质内蛋白和膜脂蛋白三类。其中Mtb分泌性蛋白对抗结核菌感染的免疫作用最为重要。因此,目前研究较深入的Mtb抗原均集中在Mtb的分泌性蛋白,如ESAT-6、CFP-10、... 详细信息

结核分枝杆菌（Mtb）的蛋白抗原根据所处细胞位置的不同,可分为分泌性蛋白、胞质内蛋白和膜脂蛋白三类。其中Mtb分泌性蛋白对抗结核菌感染的免疫作用最为重要。因此,目前研究较深入的Mtb抗原均集中在Mtb的分泌性蛋白,如ESAT-6、CFP-10、MPT64、38kDa和Ag85复合物等。

关键词：结核分枝杆菌抗原 T细胞表位综述

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白介素-9产生细胞在不同淋巴细胞亚群中的比例

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蚌埠医学院学报 2011年第5期36卷 437-440页

作者：梁友宝梁华李柏青蚌埠医学院免疫学教研室感染与免疫安徽省重点实验室安徽蚌埠233030 安徽省蚌埠市第一人民医院检验科 233000

目的：应用流式细胞术测定胞内细胞因子,检测不同T淋巴细胞亚群和其他淋巴细胞亚群中白介素-9（IL-9）产生细胞的比例。方法：23名健康成年人外周抗凝血加等量1640培养液后,加佛波酯、离子霉素及莫能霉素培养6 h。收集细胞后,先用不同... 详细信息

目的：应用流式细胞术测定胞内细胞因子,检测不同T淋巴细胞亚群和其他淋巴细胞亚群中白介素-9（IL-9）产生细胞的比例。方法：23名健康成年人外周抗凝血加等量1640培养液后,加佛波酯、离子霉素及莫能霉素培养6 h。收集细胞后,先用不同荧光素标记的抗人CD3、抗人CD8和抗人T细胞抗原受体γδ（TCRγδ）单抗,或抗人CD19和抗CD56单抗作细胞表面染色,再经过溶血,固定和透膜处理后,加抗胞内细胞因子的抗IL-9和IL-17的荧光抗体作胞内染色,用流式细胞仪检测和分析IL-9产生细胞在不同T淋巴细胞亚群和其他淋巴细胞亚群中的分布频率。结果：IL-9产生细胞在总T细胞（CD3＋T）、CD4＋T细胞、CD8＋T细胞和γδT细胞中的百分比分别为0.35±0.31、0.22±0.13、0.31±0.29和1.07±1.05。γδT细胞中的IL-9产生细胞明显高于其他淋巴细胞亚群（P〈0.01）。同时也发现自然杀伤细胞（NK细胞）中也有少量IL-9产生细胞。另外还发现,共表达IL-9和IL-17的细胞在CD3＋T及其亚群CD4＋T和CD8＋T细胞中的比例很低（0.03%~0.06%）,但在γδT细胞中的比例可达（0.28±0.34）%,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：用流式细胞术测定单细胞水平胞内细胞因子的技术发现,不仅CD4＋T细胞中,而且CD8＋T细胞和γδT细胞以及NK细胞中均存在产生IL-9的细胞。

关键词：流式细胞术白介素-9 细胞因子 T淋巴细胞亚群

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抗结核杆菌耐热抗原单克隆抗体杂交瘤细胞的建立及其特性的初步鉴定

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蚌埠医学院学报 2010年第10期35卷 976-978页

作者：彭美玉李柏青山东万杰医学院医学检验学教研室山东淄博255213 蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030

目的:建立针对结核杆菌耐热抗原(Mtb-HAg)的单克隆杂交瘤细胞株,并对其产生的单克隆抗体的特异性和生物学活性作初步鉴定。方法:BALB/C小鼠用Mtb-HAg免疫3次后,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0以10∶1比例在50%PEG作用下细胞融合,随后在... 详细信息

目的:建立针对结核杆菌耐热抗原(Mtb-HAg)的单克隆杂交瘤细胞株,并对其产生的单克隆抗体的特异性和生物学活性作初步鉴定。方法:BALB/C小鼠用Mtb-HAg免疫3次后,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0以10∶1比例在50%PEG作用下细胞融合,随后在HAT培养液中进行选择性培养,常规有限稀释法筛选克隆和亚克隆化;用间接ELISA法测定单抗效价和特异性鉴定。结果:在细胞融合2次,筛选杂交瘤细胞3次和亚克隆化后,获得了3株杂交瘤细胞株,ⅠC12、ⅡE4、ⅡG8,效价分别为1∶32 000、1∶16 000、1∶16 000。其中ⅠC12杂交瘤株分泌的抗体仅与Mtb-HAg的蛋白峰Ⅰ有阳性反应,但ⅠC12单抗对Mtb-HAg激活人γδT细胞的活性没有明显影响。ⅡE4和ⅡG8杂交瘤株分泌的抗体与Mtb-HAg蛋白峰Ⅰ、峰Ⅱ、峰Ⅲ均无反应。结论:应用杂交瘤技术获得了三株能稳定分泌高滴度抗Mtb-HAg的单克隆抗体细胞株,其中ⅠC12对蛋白峰I有特异性。

关键词：结核杆菌抗原 Mtb-HAg 杂交瘤细胞株单克隆抗体

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蛋白激酶Cθ信号途径在结核分枝杆菌抗原激活人γδT细胞增殖和分化中的作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第10期28卷 934-938页

作者：朱安友陈礼文王凤超李兴武葛鑫唐洁李柏青蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室 233030 蚌埠医学院第一附属医院检验科

目的研究蛋白激酶Cθ（protein kinase Cθ，PKCθ）信号途径在结核分枝杆菌抗原（Mycobacterium tubemulosis antigen，Mtb—Ag）激活人γδT细胞增殖和分化中的作用。方法健康人外周血单个核细胞（PBMC）用Mtb—Ag和IL-2优势刺激和扩... 详细信息

目的研究蛋白激酶Cθ（protein kinase Cθ，PKCθ）信号途径在结核分枝杆菌抗原（Mycobacterium tubemulosis antigen，Mtb—Ag）激活人γδT细胞增殖和分化中的作用。方法健康人外周血单个核细胞（PBMC）用Mtb—Ag和IL-2优势刺激和扩增γδT细胞，或预先用5．0umol／L Rottlerin（楸毒素）预处理，培养不同时间后，用流式细胞术（FCM）检测γδT细胞表面活化分子和细胞因子表达；同时采用活体染料羧基荧光素乙酰乙酸（CFSE）标记细胞，流式细胞术分析Mtb—Ag刺激γδT细胞后的增殖和各子代细胞百分率。结果PBMC经Mtb—Ag刺激后3d，γδT细胞CD69和CD25表达分别为46．2％和45．6％，而Rottlerin预处理显著地抑制了CD69和CD25表达（P〈0．01）；PBMC经Mtb—Ag激活培养5、10和15d，培养扩增细胞中的γδT细胞比例分别为9．6％、54．6％和82．4％，其中第5天已有少部分1趼细胞发生增殖，第10天和第15天时几乎全部γδT细胞分裂都在6代以上，用Rotderin预处理，显著抑制了γδT细胞增殖反应，但在培养第10天后仍有少部分γδT细胞发生增殖反应；同时在培养第7天、14天和21天，用PMA（佛波酯）＋Ionomyein（离子霉素）再刺激后，产生IFN-γ的γδT细胞均在80％左右；培养21d时，有2．6％的γδT细胞表达IL-4。在Rottlerin预处理组产生TH1型细胞因子IFN-γ的γδT细胞均显著减少（P〈0．05），而γδT细胞表达TH2型细胞因子IL-4则几乎完全抑制（P〈0．01）。结论PKCθ信号途径在Mtb—Ag刺激γδT细胞的增殖和分化中均起重要作用。

关键词： γδT细胞蛋白激酶Cθ 增殖结核分枝杆菌抗原

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