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重组日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂可通过调节炎症微环境对“二次打击”脓毒症小鼠发挥治疗作用

南方医科大学学报 2025年第1期45卷 110-117页

作者：多文娟王怡祥王家兴许鑫龙李林献杨栋臣申启利杨立春刘晓静金启旺褚亮杨小迪蚌埠医科大学基础医学院安徽蚌埠233030 安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医科大学第二附属医院普外科安徽蚌埠233030 南京紫金医院江苏南京210000

目的探讨重组日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(rSj-Cystatin)对“二次打击”脓毒症小鼠的干预作用。方法64只C57BL/6雄性小鼠随机分为假手术组(A组)、蛋白组(B组)、“二次打击”造模组(C组)、蛋白干预组(D组),16只/组。A组和B组小鼠首... 详细信息

目的探讨重组日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(rSj-Cystatin)对“二次打击”脓毒症小鼠的干预作用。方法64只C57BL/6雄性小鼠随机分为假手术组(A组)、蛋白组(B组)、“二次打击”造模组(C组)、蛋白干预组(D组),16只/组。A组和B组小鼠首先腹腔注射PBS(100μL/只),24 h后开腹探查盲肠,但不进行盲肠结扎和穿刺(CLP),术后30 min,分别腹腔注射PBS(100μL/只)或含25μg rSj-Cystatin蛋白的PBS(100μL/只);C组和D组小鼠首先腹腔注射含LPS(5 mg/kg)的PBS(100μL/只),24 h后行CLP手术,术后30 min,分别腹腔注射PBS(100μL/只)或含25μg rSj-Cystatin蛋白的PBS(100μL/只)。每组随机抽取6只,造模12 h后取小鼠血清、脾、肝、肺和肾组织。肝、肺和肾组织HE染色观察其病理损伤并进行评分;酶联免疫吸附实验(ELISA)检验血清和肝、肺、肾组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)和转化生长因子-β(TGF-β)水平以及组织中巨噬细胞极化标志物iNOS和Arg-1水平;流式细胞术检测脾脏CD3+CD4+CD25+Foxp3+T的比例变化;剩余小鼠造模后记录72 h生存率并观察小鼠状态。结果与A、B组(100%)相比,C组(0%)72 h生存率降低,经rSj-Cystatin蛋白治疗后,D组生存率较C组增高(20%)。与A、B两组相比,C组肝、肺、肾组织切片病理损伤加重,血清和组织匀浆中TNF-α、IL-6水平明显升高(P<0.05);经蛋白治疗后,病理损伤程度减轻,血清和组织匀浆中TNF-α、IL-6水平降低(P<0.05),调节因子IL-10、TGF-β水平明显升高(P<0.05),同时CD3+CD4+CD25+Foxp3+T比例升高(P<0.05);与A、B两组相比,C组各器官组织中iNOS水平均升高,而Arg-1水平呈差异性,仅在肾中呈下降趋势(P<0.01);与C组相比,D组iNOS水平下降(P<0.05),Arg-1水平升高(P<0.001)。结论rSj-Cystatin可通过调节炎症微环境进而对“二次打击”脓毒症起到明显的治疗作用。

关键词：重组日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂脂多糖盲肠结扎穿刺脓毒症免疫调节因子

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灵芝多糖通过Akt/mTOR通路调控肝母细胞瘤细胞凋亡及自噬的机制研究

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中国中药杂志 2025年

作者：葛洋高航覃云鹏沈瑞吴华彰叶婷宋航安徽中医药大学中西医结合学院张家界学院医学院蚌埠医学院安徽省癌症转化医学重点实验室

通过探讨灵芝多糖（Ganoderma lucidum polysaccharide， GLP）对肝母细胞瘤HepG2、Huh6细胞模型及KM小鼠原位移植瘤模型的作用机制，以期为GLP的临床应用提供理论依据。采用CCK-8法检测细胞活力；BeyoClickTMEdU-488实验检测细胞增殖... 详细信息

通过探讨灵芝多糖（Ganoderma lucidum polysaccharide， GLP）对肝母细胞瘤HepG2、Huh6细胞模型及KM小鼠原位移植瘤模型的作用机制，以期为GLP的临床应用提供理论依据。采用CCK-8法检测细胞活力；BeyoClickTMEdU-488实验检测细胞增殖能力；Hochest 33258染色检测细胞凋亡情况；Mrfp-GFP-LC3双荧光染色检测细胞自噬情况；采用HepG2细胞建立原位移植瘤动物模型，分别用生理盐水及100、200、300 mg·kg-1GLP处理小鼠，分析取材后肿瘤数目和大小的变化；苏木精-伊红（hematoxylin-eosin，HE）染色观察肿瘤组织及主要脏器（心、肝、脾、肺、肾）组织病理情况；Western blot法检测细胞中肿瘤抑制蛋白53（tumor protein P53， P53）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（B-cell lymphoma-2， Bcl-2）、Bcl-2关联X蛋白（Bcl-2-associated X protein， Bax）、裂解半胱氨酸蛋白酶蛋白-3（cleaved-caspase-3）、苄氯素-1（Beclin-1）、自噬相关蛋白-5（autophagy related protein-5， Atg-5）、微管相关蛋白轻链-3Ⅰ（microtubule-associated protein-light chain-3Ⅰ， LC3Ⅰ）/LC3Ⅱ、自噬衔接蛋白62（autophagy adapter protein 62， P62）、蛋白激酶B（protein kinase B， Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin， mTOR）、磷酸化mTOR（p-mTOR）的蛋白表达。体外实验结果显示，与对照组相比，GLP处理后肿瘤细胞活力显著降低，细胞凋亡比例呈剂量依赖性增高，且自噬流被抑制。在体内实验中，与模型组相比，GLP处理后小鼠的肿瘤数目和大小显著下降；Western blot结果显示，与对照组或模型组相比，GLP处理后P53、Bax、cleaved-caspase-3、Beclin-1、Atg-5、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ水平显著升高，Bcl-2、P62、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR水平显著降低。这些结果表明GLP能够通过调控Akt/mTOR途径诱导肝母细胞瘤细胞凋亡与自噬。

关键词：灵芝多糖肝母细胞瘤凋亡自噬 Akt/mTOR信号通路

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紫花前胡苷通过抑制肠上皮细胞焦亡改善2,4,6-三硝基苯磺酸诱导的小鼠实验性结肠炎

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南方医科大学学报 2025年第2期45卷 261-268页

作者：黄菊殷丽霞牛民主耿志军左芦根李静胡建国蚌埠医科大学第一附属医院中心实验室安徽蚌埠233003 蚌埠医科大学第一附属医院炎症相关性疾病基础与转化研究安徽省重点实验室安徽蚌埠233003 蚌埠医科大学第一附属医院检验科安徽蚌埠233003 蚌埠医科大学第一附属医院胃肠外科安徽蚌埠233003 蚌埠医科大学检验医学院免疫学教研室安徽蚌埠233000

目的探讨天然植物单体紫花前胡苷(Nod)对克罗恩病(CD)样结肠炎的影响及其作用机制。方法建立脂多糖和三磷酸腺苷(ATP)联合诱导的结肠类器官焦亡模型,通过检测焦亡关键调节因子、通透性和促炎因子,探讨Nod对细胞焦亡、肠道屏障功能和炎... 详细信息

目的探讨天然植物单体紫花前胡苷(Nod)对克罗恩病(CD)样结肠炎的影响及其作用机制。方法建立脂多糖和三磷酸腺苷(ATP)联合诱导的结肠类器官焦亡模型,通过检测焦亡关键调节因子、通透性和促炎因子,探讨Nod对细胞焦亡、肠道屏障功能和炎症反应的影响。以2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)干预小鼠为CD动物模型,通过检测体质量、DAI评分、组织病理学分析、炎症评分、肠屏障功能和肠上皮细胞焦亡,探讨Nod对CD样结肠炎的治疗效果。通过网络药理学和体内、体外实验验证探索Nod保护肠上皮细胞焦亡的潜在机制。结果脂多糖和ATP诱导的结肠类器官经Nod干预后显著抑制NLRP3、GSDMD-N、cleaved caspase-1和caspase-11的表达,改善肠道FITC-dextran(FD4,4000)通透性,以及降低IL-1β和IL-18水平(P<0.05)。在TNBS诱导的结肠炎小鼠中,Nod治疗后能缓解小鼠体质量下降幅度、降低DAI评分、改善炎症细胞浸润和炎症评分(P<0.05),并降低血清中FD4、I-FABP的含量与细菌移位至肠系膜淋巴结、脾和肝脏中比例(P<0.05)。Nod可抑制小鼠肠黏膜中NLRP3、GSDMD-N、cleaved caspase-1和caspase-11的表达(P<0.05)。网络药理学预测分析显示,Nod抗结肠炎可能与PI3K/Akt通路有关;体内外实验证实,Nod抑制PI3K/Akt通路的激活,且PI3K/Akt通路的激活剂(IGF-1)逆转了Nod对肠上皮细胞焦亡和肠屏障功能的保护作用(P<0.05)。结论Nod至少部分通过抑制PI3K/Akt信号传导拮抗肠上皮细胞的焦亡,从而保护肠屏障功能和改善CD样结肠炎,有望成为一种新的CD治疗药物。

关键词：克罗恩病紫花前胡苷细胞焦亡肠上皮细胞 PI3K/Akt

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阿福豆苷对2,4,6-三硝基苯磺酸诱导的小鼠结肠炎的作用

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中国医学科学院学报 2025年第2期47卷 207-218页

作者：耿志军殷丽霞牛民主杨晶晶张小凤李静蚌埠医科大学第一附属医院中心实验室安徽蚌埠233003 蚌埠医科大学炎症相关性疾病基础与转化研究安徽省重点实验室安徽蚌埠233003 蚌埠医科大学第一附属医院检验科安徽蚌埠233003 蚌埠医科大学检验医学院免疫学教研室安徽蚌埠233003 蚌埠医科大学第一附属医院胃肠外科安徽蚌埠233003

目的探讨阿福豆苷(AFZ)在克罗恩病样结肠炎中的作用机制。方法建立2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的小鼠模型,体内评估AFZ对实验性结肠炎小鼠的作用;体外建立肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的Caco-2模型,评估AFZ对肠屏障功能、肠上皮细胞... 详细信息

目的探讨阿福豆苷(AFZ)在克罗恩病样结肠炎中的作用机制。方法建立2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的小鼠模型,体内评估AFZ对实验性结肠炎小鼠的作用;体外建立肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的Caco-2模型,评估AFZ对肠屏障功能、肠上皮细胞凋亡和线粒体功能的影响。体内外研究验证腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/沉默调节蛋白1(SIRT1)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活子1α(PGC-1α)通路在AFZ治疗结肠炎中的调控作用。结果AFZ显著改善TNBS小鼠的疾病活动指数(P=0.003)、体重下降(P<0.001)、结肠缩短(P<0.001)、结肠炎症评分(P=0.002)和促炎因子(白细胞介素-6:P<0.001;TNF-α:P=0.010)水平,以及肠屏障通透性(异硫氰酸荧光素葡聚糖4:P<0.001;肠型脂肪酸结合蛋白:P=0.013)、结肠上皮电阻(P=0.001)、细菌移位(P<0.001)和紧密连接蛋白[闭锁小带蛋白1(P=0.005)和紧密连接蛋白-1(P=0.024)]的定位与表达。在TNF-α诱导的Caco-2模型中,AFZ对肠上皮细胞的通透性(P=0.017)、跨上皮电阻(P=0.014)和紧密连接蛋白[闭锁小带蛋白1(P=0.014)和紧密连接蛋白-1(P=0.006)]的定位与表达具有保护作用。体外和体内研究结果证实,AFZ减少肠上皮细胞的凋亡比例(P<0.001,P=0.013)、裂解型半胱氨酸蛋白酶3(P=0.028,P=0.004)和Bax(P=0.004,P=0.020)的表达,且上调Bcl2(P=0.020,P=0.006)的水平。AFZ增加肠上皮细胞中线粒体数量和线粒体膜电位,增加线粒体DNA拷贝数(P=0.007),增强线粒体呼吸链复合体Ⅰ(P=0.005)和Ⅳ(P=0.001)的活性。AMPK/SIRT1/PGC-1α通路的激活参与了AFZ对肠上皮细胞线粒体功能和凋亡的保护作用。结论AFZ可改善肠屏障功能障碍和实验性结肠炎,这与其激活AMPK/SIRT1/PGC-1α通路保护肠上皮细胞免受线粒体功能障碍和细胞凋亡有关。

关键词：克罗恩病阿福豆苷肠屏障功能线粒体功能

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盐酸伐地那非片在健康人体生物等效性研究

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中国医院药学杂志 2025年

作者：马宜明张文张峰赵胜龙许龙曹阳谢晶周焕黄顺旺安徽医科大学第一附属医院药剂科合肥创新医药技术有限公司创新药物药学研究与临床评价安徽省联合共建学科重点实验室蚌埠医学院第一附属医院临床试验研究中心

目的：在空腹和餐后条件下，评价健康受试者单剂量口服盐酸伐地那非片受试制剂（T）和参比制剂（R）的生物等效性。方法：空腹试验与餐后试验各入组44名和62名受试者，采用随机、开放、单剂量、两周期、双交叉生物等效性试验设计，每周... 详细信息

目的：在空腹和餐后条件下，评价健康受试者单剂量口服盐酸伐地那非片受试制剂（T）和参比制剂（R）的生物等效性。方法：空腹试验与餐后试验各入组44名和62名受试者，采用随机、开放、单剂量、两周期、双交叉生物等效性试验设计，每周期在空腹或餐后状态下服用受试制剂或参比制剂1片，按要求采集静脉血。采用LC-MS / MS 法测定血浆中的伐地那非浓度，采用Phoenix WinNonlin8.1和SAS9.4软件计算药动学参数，进行生物等效性评价。结果：空腹试验1例受试者因不良事件退出试验，43例受试者完成试验；餐后试验1例受试者主动退出试验，61例受试者完成试验。空腹口服受试制剂和参比制剂的t1/2分别为（3.847±1.431）和（4.110±1.515）h，Tmax中位数分别为（0.856±0.553）和（0.766±0.351）h，Cmax分别为（30.995±17.449）和（31.319±17.010 ）ng·mL-1，AUC0-t分别为（90.778±58.293）和（90.917±65.530 ）h·ng·mL-1，AUC0-∞分别为（94.364±61.688）和（94.502±70.142）h·ng·mL-1；受试者的主要药动学参数Cmax、AUC0-t和AUC0-∞的90% CI的统计结果分别为89.96%～109.82%、94.30%～108.35%和94.66%～108.38% ，均在80.00%～125.00%范围内；餐后口服给药受试制剂和参比制剂的t1/2分别为（3.996±1.240 ）和（4.107±1.272）h，Tmax中位数分别为（1.880±1.267）和（1.761±0.962）h，Cmax分别为（19.769±10.736）和（20.736±15.362）ng·mL-1，AUC0-t分别为（82.698±46.894）和（84.491±51.709）h·ng·mL-1，AUC0-∞分别为（85.731±48.827）和（87.506±54.130）h·ng·mL-1；Cmax、AUC0-t和AUC0-∞的90% CI的统计结果分别为89.59%～108.36%、94.10%～104.25%和94.40%～104.15%，均在80.00%～125.00% 范围内。结论：在空腹与餐后的单次口服给药条件下，2种盐酸伐地那非片具有较好的生物等效性。

关键词：盐酸伐地那非片药代动力学生物等效性

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虫草素对人舌癌细胞凋亡、自噬的影响及其分子机制

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南方医科大学学报 2018年第4期38卷 390-394页

作者：郑庆委高淑娴吕杰陈登宇陈杰李慧慧管俊昌蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030

目的研究虫草素对人舌癌TCA-8113细胞的细胞周期、凋亡和自噬的影响并探讨虫草素抑制舌癌发生的作用机制。方法用CCK-8法检测虫草素对TCA-8113细胞增殖的作用;用流式细胞术检测不同浓度药物对细胞周期、细胞凋亡的影响;用荧光定量PCR和W... 详细信息

目的研究虫草素对人舌癌TCA-8113细胞的细胞周期、凋亡和自噬的影响并探讨虫草素抑制舌癌发生的作用机制。方法用CCK-8法检测虫草素对TCA-8113细胞增殖的作用;用流式细胞术检测不同浓度药物对细胞周期、细胞凋亡的影响;用荧光定量PCR和Western blot的方法检测凋亡相关基因Caspase-3,Caspase-9,Bcl-2、Bax;免疫组化方法检测自噬相关蛋白LC-3β,P62,p-mTOR,AMPK。结果 CCK-8细胞增殖检测结果表明,虫草素能明显抑制TCA-8113细胞的增殖,24 h时IC50为3.548 mg/mL;48 h时IC50为1.185 mg/mL;流式细胞结果显示,诱导细胞周期阻滞与S期,虫草素能显著的诱导TCA-8113细胞凋亡,并且呈浓度依赖性。荧光定量PCR和Westen blot结果表明,虫草素可诱导促凋亡基因Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达,抑制抗凋亡基因Bcl-2的表达(P<0.05);免疫组化的结果表明,虫草素可促进LC-3β和AMPK的表达,抑制P62和p-mTOR的表达(P<0.05)。结论虫草素对TCA-8113细胞的抑制并促进细胞凋亡,同时通过AMPK/mTOR通路诱导细胞自噬。

关键词：虫草素自噬凋亡增殖

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表面等离子共振测定CD45-FITC抗体与蛋白A特异性结合常数

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中山大学学报（自然科学版） 2018年第4期57卷 145-149页

作者：张晖薛洪宝陈飞剑王杰王充李柏青蚌埠医学院化学教研室安徽蚌埠233030 感染与免疫安徽省重点实验室∥蚌埠医学院安徽蚌埠233030

运用表面等离子共振(SPR)平台建立测定CD45-FITC抗体与蛋白A特异性结合常数的方法。当偶联蛋白A的传感芯片上流过CD45-FITC抗体溶液时,双通道SPR仪实时监测CD45-FITC抗体与蛋白A特异性结合过程,获得了该反应不同温度下的结合速率常数k_... 详细信息

运用表面等离子共振(SPR)平台建立测定CD45-FITC抗体与蛋白A特异性结合常数的方法。当偶联蛋白A的传感芯片上流过CD45-FITC抗体溶液时,双通道SPR仪实时监测CD45-FITC抗体与蛋白A特异性结合过程,获得了该反应不同温度下的结合速率常数k_a、解离速率常数k_d和结合平衡常数K_a,以及该反应的活化能E_a和焓变△H。结果表明该特异性结合比较适宜的条件是:中性或微碱性、较高的离子强度和较高的温度。该方法操作步骤简单、快速、灵敏度高、消耗样品少,是研究分析免疫球蛋白IgG抗体和蛋白A等生物分子相互作用比较理想的方法之一。

关键词：表面等离子共振 CD45-FITC抗体蛋白A 特异性结合常数

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miR-20b对小鼠RAW264.7细胞血管内皮生长因子表达的调控作用

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上海交通大学学报（医学版） 2014年第4期34卷 501-506页

作者：宋传旺陶象男唐洁申林蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 蚌埠医学院科研中心蚌埠233030

目的探讨miR-20b对小鼠RAW264．7细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法以不同浓度（1、10、50、100、200ng／mL）TNF-α刺激小鼠RAW264．7细胞24h，ELISA法检测上清中VEGF的分泌情况。TNF-α（50ng／mL）刺激RAW264．7细胞6h，... 详细信息

目的探讨miR-20b对小鼠RAW264．7细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法以不同浓度（1、10、50、100、200ng／mL）TNF-α刺激小鼠RAW264．7细胞24h，ELISA法检测上清中VEGF的分泌情况。TNF-α（50ng／mL）刺激RAW264．7细胞6h，Real-TimePCR检测miR．20b和VEGFmRNA的表达。使用PicTar算法预测VEGF是否为miR-20b的调控靶点。利用脂质体Lipofectamine2000介导miR-20b模拟物及其对照转染RAW264．7细胞，用TNF-α（100ng／mL）刺激24h，ELISA法检测VEGF的产生情况。结果TNF-α能够诱导小鼠RAW264．7细胞分泌VEGF，50-100ng／mLTNF-α．是最适合的刺激浓度；50ng／mLTNF-α刺激RAW264．7细胞6h，VEGFmRNA的相对表达量升高至对照组的（1．60±0．85）倍，而miR-20b的相对表达量降至对照组（0．55±0．33）倍。PicTar算法表明，小鼠VEGF的3’-UTR区含有miR-20b种子区域AAAGUGC的互补序列GCACUUU。转染miR-20b模拟物后，TNF-α诱导的VEGF蛋白表达升高被完全抑制（P〈0．01），但转染miR-20b模拟物对照对VEGF的产生无明显影响（P〉0．05）。结论小鼠RAW264．7细胞中miR-20b负性调节VEGF的表达。

关键词： miR 20b 血管内皮生长因子 RAW264 7细胞

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miR-20b抑制哮喘小鼠的气道炎症

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南方医科大学学报 2015年第10期35卷 1463-1466页

作者：马华罗玉岚郭术俊申林宋传旺蚌埠医学院免疫学教研室//安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠医学院科研中心安徽蚌埠233030

目的探讨miR-20b对哮喘小鼠气道炎症的影响。方法 BALB/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘组、哮喘+miR-20b模拟物处理组、哮喘+miR-20b模拟物对照处理组。卵清白蛋白(OVA)致敏和激发构建哮喘模型小鼠,miR-20b模拟物及其对照采用鼻滴的方... 详细信息

目的探讨miR-20b对哮喘小鼠气道炎症的影响。方法 BALB/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘组、哮喘+miR-20b模拟物处理组、哮喘+miR-20b模拟物对照处理组。卵清白蛋白(OVA)致敏和激发构建哮喘模型小鼠,miR-20b模拟物及其对照采用鼻滴的方式给药干预。实验流程的第49天检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中的细胞总数和分类计数,肺组织进行HE染色观察病理学变化,ELISA检测BALF中血管内皮生长因子(VEGF)的浓度。结果哮喘小鼠经miR-20b模拟物处理后,BALF中细胞总数及中性粒细胞、嗜酸性粒细胞的分类计数明显降低(P<0.01),并且气道黏膜增厚减轻,气道腔内粘液分泌及支气管周围炎性细胞的浸润减少。与哮喘组BALF中VEGF的含量28.55±3.42 pg/m L相比,哮喘+miR-20b模拟物处理组的含量18.19±3.67 pg/m L明显降低(P<0.01)。结论 miR-20b对哮喘小鼠气道炎症产生抑制作用,这一效应可能是通过降低VEGF的表达来介导。

关键词： miR-20b 哮喘气道炎症血管内皮生长因子

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多肽类结核杆菌抗原激活的γδ T细胞表达抗原提呈细胞表型和功能

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第7期25卷 588-591页

作者：王婧李柏青蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030

目的:观察用多肽类结核杆菌耐热抗原(Mtb-HAg)激活的人外周血γδT细胞是否具有抗原提呈细胞的表型和抗原提呈作用。方法:外周血单个核细胞(PBMC)经贴壁法获取单核细胞,加GM-CSF,IL-4和LPS培养诱导为成熟DC。PBMC用Mtb-HAg优势扩增γδ... 详细信息

目的:观察用多肽类结核杆菌耐热抗原(Mtb-HAg)激活的人外周血γδT细胞是否具有抗原提呈细胞的表型和抗原提呈作用。方法:外周血单个核细胞(PBMC)经贴壁法获取单核细胞,加GM-CSF,IL-4和LPS培养诱导为成熟DC。PBMC用Mtb-HAg优势扩增γδT细胞后用流式分选纯化γδT(Vδ2+)细胞。PBMC经尼龙毛柱法获得纯化T细胞,用CFSE标记后单独加Mtb分泌性抗原(Mtb-SAg),或加单核细胞和Mtb-SAg共同培养,或与经Mtb-SAg预处理的成熟DC或活化γδT细胞共同培养。第11天时用流式细胞术检测CD4+T细胞的增殖。Mtb-HAg活化的γδT细胞与FITC标记的Mtb-SAg孵育不同时间后用流式细胞术和激光共聚焦显微镜检测摄入情况。结果:Mtb-HAg活化的γδT细胞CD80,CD86和MHC-Ⅱ类分子的表达显著增加。Mtb-SAg预处理活化的γδT细胞诱导初始T细胞增殖数和CD4+T细胞增殖指数的活性与成熟DC相似。Mtb-HAg活化的γδT细胞能摄入FITC标记的Mtb-SAg。结论:用多肽类Mtb-HAg激活的γδT细胞具有抗原提呈细胞的表型,并具有摄入和提呈可溶性抗原给初始T淋巴细胞的能力。

关键词：结核分枝杆菌抗原提呈 T细胞亚群流式细胞术激光共聚焦显微镜

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