检索结果-内蒙古大学图书馆

中国免疫学杂志 2016年第1期32卷 23-28页

作者：张英杰禹丽郝晓娜郝艳梅李玉云蚌埠医学院医学检验系临床检验诊断学教研室蚌埠233030

目的：探究人脐带源间充质干细胞（MSCs）的分离、培养方法,通过对MSCs与IL-10联合治疗四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化的研究,观察其协同效应,为临床治疗肝纤维化寻找新方法,并阐明其在肝纤维化治疗中的部分机制。方法：自然贴壁法分离、... 详细信息

目的：探究人脐带源间充质干细胞（MSCs）的分离、培养方法,通过对MSCs与IL-10联合治疗四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化的研究,观察其协同效应,为临床治疗肝纤维化寻找新方法,并阐明其在肝纤维化治疗中的部分机制。方法：自然贴壁法分离、纯化人脐带间充质干细胞并进行体外培养和扩增。50只大鼠随机选取5只入选正常对照组（n=5）,其余45只大鼠采用皮下多点注射CCl_4方法制备大鼠肝纤维化模型,造模成功后随机分为模型损伤组（n=15）、细胞移植组（n=15）和联合用药组（n=15）。细胞移植组在模型制备成功后的第1周、第2周、第3周经尾静脉给予1×10~6脐带间充质干细胞治疗;联合治疗组在给予细胞移植组相同的细胞治疗基础上,给予腹腔内注射IL-10（4μg/kg）,每周4次。4周后将大鼠处死,收集各组大鼠血液检测肝功能、肝纤维化指标;摘取肝脏行苏木精-伊红染色,观察病理变化;RT-PCR法检测MMP-2 mRNA表达情况,Western blot法检测TGF-β蛋白的表达。结果：细胞移植组与联合治疗组大鼠肝功能、肝纤维化指标均明显改善,与对照组比较,差异有显著性意义（P〈0.05）,且联合治疗组改善更明显（P〈0.05）;大鼠肝组织苏木精-伊红染色提示,细胞移植组、联合治疗组肝纤维化程度明显改善,联合治疗组肝脏病理更接近于正常;损伤组、细胞移植组MMP-2 mRNA表达明显增高,明显高于正常对照组（P〈0.05）,联合治疗组MMP-2 mRNA表达增高,与正常对照组比较无显著性差异（P〉0.05）;与正常对照组比较,其他组TGF-β蛋白的表达都有所增高（P〈0.05）,其中损伤组TGF-β蛋白的表达增高最明显（P〈0.05）,细胞移植组、联合治疗组TGF-β蛋白的表达较损伤组均有不同程度的降低（P〈0.05）,联合治疗组与细胞移植组比较TGF-β蛋白的表达也有显著降低（P〈0.05）。结论：脐带间充质干细胞单独移植或与IL-10联合治疗均可以改善肝纤维化大鼠外周血液的生化特性和肝的组织学结构,且IL-10联合治疗效果更佳,这可能是由于间充质干细胞与IL-10可下调MMP-2 mRNA的表达,保护肝小叶结构;抑制TGF-β蛋白的表达,减少肝星状细胞的激活等原因。

关键词：脐带源间充质干细胞白细胞介素10 肝纤维化细胞移植

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Livin在白血病耐药细胞系THP-1R的表达

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基础医学与临床 2012年第3期32卷 335-336页

作者：郝艳梅李玉云禹莉张英杰陈乐马芳郑维威蚌埠医学院临床检验诊断学教研室安徽蚌埠233030

Livin是凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein,IAP）家族新成员,在正常组织极少表达,而在多数恶性肿瘤组织细胞中高表达,与肿瘤抗凋亡和耐药性有关。为探讨Livin与白血病细胞耐药的相关性,本实验主要从分子水平研究Livin在人... 详细信息

Livin是凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein,IAP）家族新成员,在正常组织极少表达,而在多数恶性肿瘤组织细胞中高表达,与肿瘤抗凋亡和耐药性有关。为探讨Livin与白血病细胞耐药的相关性,本实验主要从分子水平研究Livin在人急性白血病细胞系THP-1与耐药细胞系THP-1R中的差异表达情况，为Livin在白血病多药耐药（multi-drug resistance，MDR）方面的意义提供实验依据。

关键词：白血病细胞耐药 Livin 耐药细胞系 apoptosis 急性白血病细胞系 protein 白血病多药耐药凋亡抑制蛋白

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三七总皂苷抑制K562细胞mTOR信号通路活性的实验研究

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第三军医大学学报 2015年第12期37卷 1237-1242页

作者：翟玮玮李玉云杨向荣于北凯王露李见蚌埠医学院临床检验诊断学实验中心安徽蚌埠233030 蚌埠医学院临床检验基础教研室安徽蚌埠233030

目的探讨三七总皂苷（Panax notoginseng saponins,PNS）对体外培养K562细胞m TOR信号通路相关分子表达及活性的影响。方法不同浓度的PNS（50~800μg/m L）干预体外培养K562细胞24~72 h后,MTT比色法检测PNS对K562细胞增殖的抑制作用;AO... 详细信息

目的探讨三七总皂苷（Panax notoginseng saponins,PNS）对体外培养K562细胞m TOR信号通路相关分子表达及活性的影响。方法不同浓度的PNS（50~800μg/m L）干预体外培养K562细胞24~72 h后,MTT比色法检测PNS对K562细胞增殖的抑制作用;AO/EB双荧光染色法观察细胞死亡及凋亡状况;RT-PCR检测m TOR、p70S6K、4E-BP1 mRNA表达变化;Western blot检测m TOR、p70S6K、4E-BP1及p-m TOR、p-p70S6K、p-4E-BP1蛋白表达量的变化。结果与对照组相比,浓度为100~800μg/m L的PNS能够抑制K562细胞增殖（P〈0.05）,促进K562细胞凋亡及死亡（P〈0.05）,PNS对K562细胞72 h的IC50为（229.07±2.36）μg/m L;100、200、400μg/m L PNS作用于K562细胞72 h后m TOR蛋白表达量及mRNA表达量降低（P〈0.05）,且磷酸化蛋白p-m TOR（Ser2448）、p-p70S6K（Thr229/389）及p-4E-BP1（Thr37/46）表达水平也随着药物浓度的增加而降低（P〈0.05）。结论 PNS能够抑制K562细胞m TOR信号通路的活性,这可能是PNS抑制K562细胞增殖的机制之一。

关键词：三七总皂苷 K562细胞 m TOR信号通路

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葡萄籽原花青素下调miR-27a表达抑制胰腺癌细胞生长

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中南大学学报（医学版） 2015年第1期40卷 46-52页

作者：马佳方斌斌曾凡鹏庞海杰马聪夏俊蚌埠医学院生化与分子生物学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院临床检验诊断学实验室安徽蚌埠233030

目的:探讨葡萄籽原花青素(grape seed proanthocyanidins extract,GSPE)抑制胰腺癌细胞生长的作用及其可能机制。方法:体外培养人胰腺癌As PC-1细胞,分别采用MTT,Annexin V-FITC/PI双染,Transwell迁移实验等方法检测GSPE对As PC-1细胞... 详细信息

目的:探讨葡萄籽原花青素(grape seed proanthocyanidins extract,GSPE)抑制胰腺癌细胞生长的作用及其可能机制。方法:体外培养人胰腺癌As PC-1细胞,分别采用MTT,Annexin V-FITC/PI双染,Transwell迁移实验等方法检测GSPE对As PC-1细胞的增殖抑制、诱导凋亡及抑制细胞迁移的作用;mi RNA real-time RT-PCR和Western印迹检测GSPE对As PC-1细胞mi R-27a及其下游基因FOXO1表达的影响。转染mi R-27a抑制剂,检测GSPE通过下调mi R-27a调控As PC-1细胞生长、迁移的作用。结果:不同浓度(25,50,75,100μg/m L)GSPE对As PC-1细胞的增殖抑制率分别为8.36%,17.36%,50.42%和60.73%,GSPE≥50μg/m L时,增殖抑制率均显著高于对照组(P<0.05)。对照组及25,50,75μg/m L GSPE组的细胞早期凋亡率依次分别为2.5%,20.0%,42.3%,64.3%。75μg/m L GSPE组的细胞迁移率低于对照组,细胞内mi R-27a的表达亦显著低于对照组(P<0.01)。与对照组相比,mi R-27a抑制剂组、GSPE组、mi R-27a抑制剂+GSPE组的细胞增殖抑制率均显著升高(P<0.01),细胞迁移能力均显著降低(P<0.01),FOXO1蛋白表达增加;且共同处理组上述作用最明显,高于两者单独处理组。结论:GSPE可能通过下调mi R-27a表达来抑制胰腺癌As PC-1细胞生长和迁移。

关键词：葡萄籽原花青素 miR-27a FOXO1 胰腺癌

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结核分枝杆菌hemZ蛋白的生物信息学分析

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中国病原生物学杂志 2021年第12期16卷 1382-1386,1392页

作者：李敏英王楚彤袁美丽李柏青许涛汪洪涛蚌埠医学院慢性疾病免疫学基础与临床安徽省重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院检验医学院免疫学教研室蚌埠医学院检验医学院临床检验诊断学教研室

目的应用生物信息学软件预测结核分枝杆菌hemZ蛋白的结构和功能。方法从NCBI中获得hemZ蛋白编码的基因序列,运用生物信息学软件ORF Finder、MEGA、BLAST、Protparam、ProtScaleon Expasy、TMHMM Server v.2.0、SignalP4.1 Server、NetPhos3.1 Server、NetAcet1.0 Server、NetNGlyc1.0 Server、SOPMA、SWISS-MODEL、ABCpred、STRING、MEGA等工具对Rv1485基因编码蛋白hemZ的结构和功能等相关的生物学信息进行预测。结果hemZ蛋白由Rv1485基因编码,该基因全长1035 bp,有8个开放阅读框,由344个氨基酸组成,等电点为5.69,跨膜氨基酸数为0.07436,无信号肽、乙酰化位点和N-糖基化位点,有23个磷酸化位点;蛋白二级结构中α-螺旋占43.31%,β-折叠占11.63%,β-转角占2.33%,无规则卷曲占42.73%;有10个B细胞抗原表位和14个T细胞抗原表位;hemZ蛋白存在于致病性分枝杆菌中,且在其他分枝杆菌中存在相似序列。结论预测结核分枝杆菌hemZ蛋白具有磷酸化位点及良好的T、B细胞表位,且有多个互作蛋白,可作为结核病多肽疫苗的重要候选蛋白。

关键词： hemZ蛋白结核分枝杆菌 Rv1485 生物信息学分析

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原花青素上调let-7a抑制胰腺癌AsPC-1细胞生长及迁移

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南方医科大学学报 2015年第8期35卷 1110-1115页

作者：马佳方斌斌马聪庞海杰曾凡鹏夏俊蚌埠医学院生化与分子生物学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院临床检验诊断学实验中心安徽蚌埠233030

目的探讨原花青素是否通过上调let-7a表达而抑制胰腺癌细胞生长及迁移。方法体外培养人胰腺癌As PC-1细胞,原花青素处理细胞后,分别用MTT法、Annexin V-FITC/PI双染及Transwell迁移等实验检测细胞增殖率、细胞凋亡率及细胞迁移能力的改... 详细信息

目的探讨原花青素是否通过上调let-7a表达而抑制胰腺癌细胞生长及迁移。方法体外培养人胰腺癌As PC-1细胞,原花青素处理细胞后,分别用MTT法、Annexin V-FITC/PI双染及Transwell迁移等实验检测细胞增殖率、细胞凋亡率及细胞迁移能力的改变;利用mi RNA实时逆转录PCR检测细胞内let-7a表达变化。As PC-1细胞转染let-7a mimics后,MTT法、Transwell迁移实验分别检测细胞增殖率及细胞迁移能力的改变。结果与对照组相比,原花青素处理As PC-1细胞后,细胞增殖率、细胞迁移能力随着原花青素浓度升高而下降,而细胞凋亡率随着药物浓度升高而逐渐升高。与对照组相比,原花青素处理细胞后,let-7a的表达升高。通过脂质体转染let-7a mimics后,细胞的增殖率及迁移能力均低于对照组,且let-7a mimics与原花青素共同作用后,细胞增殖及迁移明显低于let-7a mimics和原花青素单独作用组。结论原花青素具有抑制胰腺癌细胞生长、迁移,及诱导细胞凋亡的作用。原花青素可能是通过上调let-7a表达,从而抑制胰腺癌细胞的生长及迁移。

关键词：原花青素 let-7a 胰腺癌细胞

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慢病毒介导RNA干扰沉默Fas基因在脐带间充质干细胞中的表达

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南方医科大学学报 2014年第10期34卷 1475-1480页

作者：王露翟玮玮杨向荣王芳李见张强李玉云蚌埠医学院临床检验诊断学实验中心安徽蚌埠233030 徐州市第四人民医院检验科江苏徐州221009 蚌埠医学院第一附属医院检验科安徽蚌埠233030 蚌埠医学院临床检验诊断学教研室安徽蚌埠233030

目的应用慢病毒介导的RNA干扰技术,构建Fas基因的siRNA慢病毒表达载体,建立Fas基因稳定干扰的人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)株,为下一步使用低表达Fas基因的UC-MSCs治疗再生障碍性贫血奠定实验基础。方法以人Fas基因mRNA序列作为干扰靶点... 详细信息

目的应用慢病毒介导的RNA干扰技术,构建Fas基因的siRNA慢病毒表达载体,建立Fas基因稳定干扰的人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)株,为下一步使用低表达Fas基因的UC-MSCs治疗再生障碍性贫血奠定实验基础。方法以人Fas基因mRNA序列作为干扰靶点,设计4组靶向Fas的shRNA序列,合成寡核苷酸,与经过BamHI、EcoRI双酶切后的LV3载体连接获得重组慢病毒,通过感染293T细胞对慢病毒进行包装和滴度测定。体外培养人UC-MSCs,使用包装好的慢病毒感染UCMSCs,应用Real time-PCR和Western blotting检测感染后细胞中Fas mRNA及蛋白的表达情况。结果经酶切以及基因测序鉴定证明慢病毒载体构建成功,病毒悬液滴度为3×108TU/ml。Real time-PCR和Western blotting结果显示干扰组细胞的Fas表达水平较对照组显著降低。结论慢病毒介导的SiRNA能有效沉默UC-MSCs中Fas基因的表达。

关键词：慢病毒 siRNA Fas 脐带间充质干细胞

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H37Rv结核分枝杆菌蛋白脯氨酸-谷氨酸8(PE8)的表达及其兔多克隆抗体制备

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细胞与分子免疫学杂志 2020年第6期36卷 549-554页

作者：许涛张丽钱中清李柏青汪洪涛蚌埠医学院检验医学院临床检验诊断学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院检验医学实验中心安徽蚌埠233030 蚌埠医学院免疫学教研室感染与免疫安徽省重点实验室安徽蚌埠233030

目的克隆Rv1040c结核分枝杆菌脯氨酸-谷氨酸8(PE8)基因、构建pET28a-PE8重组载体和表达纯化PE8蛋白,制备抗PE8多克隆抗体。方法利用重组克隆技术,将PE8基因克隆至原核表达载体pET28a,测序鉴定后,转化至大肠杆菌BL21(DE3),用0.5 mmol/L... 详细信息

目的克隆Rv1040c结核分枝杆菌脯氨酸-谷氨酸8(PE8)基因、构建pET28a-PE8重组载体和表达纯化PE8蛋白,制备抗PE8多克隆抗体。方法利用重组克隆技术,将PE8基因克隆至原核表达载体pET28a,测序鉴定后,转化至大肠杆菌BL21(DE3),用0.5 mmol/L异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达、稀释复性与纯化。用纯化PE8蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,间接ELISA和Western blot法进行效价及特异性鉴定。结果成功构建pET28a-PE8原核表达载体,ITPG诱导后PE8蛋白在大肠杆菌主要以包涵体的形式表达,复性后纯化PE8蛋白纯度达90%,纯化多克隆抗体效价为1∶430080以上,能与PE8蛋白发生特异性反应。结论大肠杆菌表达的PE8重组蛋白免疫新西兰大白兔获得高效价的多克隆抗体。

关键词：结核分枝杆菌(MTB)脯氨酸-谷氨酸8(PE8)蛋白 Rv1040c 多克隆抗体

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表达绿色荧光蛋白的重组耻垢分枝杆菌感染THP-1巨噬细胞模型的建立

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细胞与分子免疫学杂志 2022年第9期38卷 789-793页

作者：李敏英王楚彤袁美丽卢思彤钱中清李柏青许涛汪洪涛慢性疾病免疫学基础与临床安徽省重点实验室蚌埠医学院检验医学院免疫学教研室蚌埠医学院检验医学院临床检验诊断学教研室安徽蚌埠233030

目的建立表达绿色荧光蛋白(GFP)的耻垢分枝杆菌感染THP-1巨噬细胞模型,对耻垢分枝杆菌进行快速定位和直观检测,为探究结核发病机制以及研制新型结核疫苗提供一种示踪工具。方法以pEGFP-N1质粒为模板采用PCR扩增出增强型绿色荧光蛋白(EG... 详细信息

目的建立表达绿色荧光蛋白(GFP)的耻垢分枝杆菌感染THP-1巨噬细胞模型,对耻垢分枝杆菌进行快速定位和直观检测,为探究结核发病机制以及研制新型结核疫苗提供一种示踪工具。方法以pEGFP-N1质粒为模板采用PCR扩增出增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因序列,获得EGFP的编码基因,将扩增产物克隆到载体pALACE上,建立重组质粒pALACE-EGFP。利用电穿孔技术将pALACE-EGFP转化到耻垢分枝杆菌中,通过潮霉素抗性筛选重组耻垢分枝杆菌克隆,扩大培养后涂片观察,并进行荧光显微镜镜检。再用重组耻垢分枝杆菌感染THP-1巨噬细胞,观察是否有GFP表达。结果正确构建重组质粒pALACE-EGFP;荧光显微镜下观察重组耻垢分枝杆菌,证实EGFP在重组耻垢分枝杆菌中表达,并且THP-1巨噬细胞被感染后发出绿色荧光。结论表达EGFP蛋白的重组耻垢分枝杆菌的成功建立,为结核分枝杆菌的感染和致病机制研究奠定基础。

关键词：绿色荧光蛋白(GFP) 耻垢分枝杆菌结核病

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糖蛋白Ibα基因VNTR多态性与冠心病的相关性

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中国老年学杂志 2014年第4期34卷 921-923页

作者：马芳刘晓妹郝艳梅张英杰孙红吴俊英蚌埠医学院医学检验系临床检验诊断学教研室临床检验诊断学实验中心安徽蚌埠233030 蚌埠医学院第一附属医院心内科蚌埠医学院第一附属医院检验科蚌埠医学院医学检验系免疫学教研室

目的探讨皖北地区汉族人群血小板糖蛋白(GP)Ibα基因的可变数目串联重复序列(VNTR)多态性与冠心病发病的相关性。方法采用病例对照研究,以多聚酶链反应(PCR)技术,结合琼脂糖凝胶电泳和溴乙锭染色,对皖北地区136例冠心病患者和与病例组... 详细信息

目的探讨皖北地区汉族人群血小板糖蛋白(GP)Ibα基因的可变数目串联重复序列(VNTR)多态性与冠心病发病的相关性。方法采用病例对照研究,以多聚酶链反应(PCR)技术,结合琼脂糖凝胶电泳和溴乙锭染色,对皖北地区136例冠心病患者和与病例组年龄、性别相匹配的155例健康体检者(对照组)的血小板GPIbα基因VNTR多态性进行检测。结果实验仅观察到2种等位基因:B、C,3种基因型:BB、BC和CC。冠心病组VNTR多态性基因型与对照组相比差异有统计学意义(P<0.001),但与冠脉病变严重程度无明显相关性(P>0.05)。多因素Logistic回归分析显示,VNTR CC基因型为冠心病发病的一个独立危险因素(OR=2.744,95%CI:1.122~6.707),而BC基因型为冠心病发病的遗传保护因素(OR=0.299,95%CI:0.127~0.700)。结论皖北地区汉族人群中血小板GPIbα基因VNTR多态性与冠心病的发病明显相关,但VNTR基因型分布与冠脉病变严重程度并无明显相关性。

关键词：血小板糖蛋白Ibα 基因多态性冠心病

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