检索结果-内蒙古大学图书馆

现代生物医学进展 2013年第12期13卷 2244-2248页

作者：刘大伟李伶杨刚毅杨晓敏卢春敏重庆医科大学检验医学院临床生物化学教研室教育部临床检验诊断学重点实验室重庆400042

目的:Visfatin是由内脏脂肪细胞分泌的一种脂肪细胞因子,它能够发挥拟胰岛素作用,并能促进脂肪细胞的分化、合成及积聚,与糖脂代谢有着密切的联系,但其确切生理功能及作用机制仍有待进一步研究。本实验成功构建了visfatin ShRNA腺病毒载... 详细信息

目的:Visfatin是由内脏脂肪细胞分泌的一种脂肪细胞因子,它能够发挥拟胰岛素作用,并能促进脂肪细胞的分化、合成及积聚,与糖脂代谢有着密切的联系,但其确切生理功能及作用机制仍有待进一步研究。本实验成功构建了visfatin ShRNA腺病毒载体,并验证其对Hepal-6细胞visfatin mRNA表达的影响。旨在为进一步研究visfatin在影响糖脂代谢方面的作用机制提供一个简便可行的分子生物学研究平台。方法:将前期构建的pGenesil1.2-visfatin质粒双酶切,得到目的片段mU6-visfatin ShRNA,克隆入穿梭质粒pShuttle-Basic-EGFP,I-CeuI+I-SceI双酶切后转入pAdxsi载体,经筛选、鉴定后,通过脂质体转染HEK293细胞,包装后得到腺病毒Adxsi-GFP-mU6-visfatin,病毒颗粒法(viral particle,VP)和半数组织感染量法(50%tissue culture infective dose,TCID50)测定其滴度。感染hepal-6细胞后,实时定量PCR检测visfatin的mRNA表达。结果:经酶切及测序鉴定,结果与预期一致。VP法检测病毒滴度为3.20×1012VP/mL,TCID50法测得滴度为2×1011PFU/mL。重组病毒感染后,对小鼠Hepal-6细胞visfatin基因mRNA表达抑制率>70%。结论:成功构建了visfatin ShRNA重组腺病毒载体,并能有效抑制小鼠Hepal-6细胞visfatin基因表达,为后期进一步研究visfatin在糖脂代谢方面的作用机制提供了一个基因表达下调的生物学模型。

关键词： visfatin 腺病毒载体 RNA干扰 Hepal-6细胞

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Livin在白血病耐药细胞系THP-1R的表达

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基础医学与临床 2012年第3期32卷 335-336页

作者：郝艳梅李玉云禹莉张英杰陈乐马芳郑维威蚌埠医学院临床检验诊断学教研室安徽蚌埠233030

Livin是凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein,IAP）家族新成员,在正常组织极少表达,而在多数恶性肿瘤组织细胞中高表达,与肿瘤抗凋亡和耐药性有关。为探讨Livin与白血病细胞耐药的相关性,本实验主要从分子水平研究Livin在人... 详细信息

Livin是凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein,IAP）家族新成员,在正常组织极少表达,而在多数恶性肿瘤组织细胞中高表达,与肿瘤抗凋亡和耐药性有关。为探讨Livin与白血病细胞耐药的相关性,本实验主要从分子水平研究Livin在人急性白血病细胞系THP-1与耐药细胞系THP-1R中的差异表达情况，为Livin在白血病多药耐药（multi-drug resistance，MDR）方面的意义提供实验依据。

关键词：白血病细胞耐药 Livin 耐药细胞系 apoptosis 急性白血病细胞系 protein 白血病多药耐药凋亡抑制蛋白

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pBIFC-VN173-CXCR4和pBIFC-VC155-NT21MP真核表达质粒的构建及其在活细胞内的作用

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浙江大学学报（医学版） 2012年第5期41卷 519-526页

作者：高艳军杨清玲陈昌杰丁勇兴蚌埠医学院临床检验诊断学实验中心蚌埠医学院生化与分子生物学教研室蚌埠市中心医院普外肿瘤科安徽蚌埠233030

目的:构建pBIFC-VN173-CXCR4和pBIFC-VC155-NT21MP真核表达质粒,利用双分子荧光互补(BiFC)技术,在活细胞内直接观察趋化因子受体4(chemokine receptor 4、CXCR4和CD184)与CXCR4抑制性多肽的相互作用。方法:应用化学合成法获得巨噬细胞... 详细信息

目的:构建pBIFC-VN173-CXCR4和pBIFC-VC155-NT21MP真核表达质粒,利用双分子荧光互补(BiFC)技术,在活细胞内直接观察趋化因子受体4(chemokine receptor 4、CXCR4和CD184)与CXCR4抑制性多肽的相互作用。方法:应用化学合成法获得巨噬细胞炎症蛋白Ⅱ(viralmacrophage inflammatory protein-Ⅱ,vMIP-Ⅱ)N端21肽(N-terminal 21-mer peptide,NT21MP)编码的基因序列,克隆至经Kpn I和EcoRⅠ酶切的pBiFC-VC155中,筛选含有目标基因的正确克隆。利用RT-PCR扩增人乳腺癌细胞株SKBR3的CXCR4全长基因后,T-A亚克隆至经Kpn I和EcoRⅠ酶切的pBiFC-VN173载体中。然后,经酶切鉴定及DNA测序分析2个基因是否正确连接至真核表达载体中。应用脂质体转染的方法共转染pBiFC-VC155-NT21MP和pBiFC-VC155-CXCR4至细胞株COS-7中,在荧光显微镜下观察NT21MP与CXCR4在胞内的相互作用。结果:经DNA测序及同源性对比,证实pBiFC-VC155-NT21MP和pBiFC-VN173-CXCR4重组载体构建成功;基因片段与NCBI基因库vMIP-Ⅱ和CXCR4基因CDS序列同源性达99.9%。BiFC法观察NT21MP与CXCR4在细胞内结合出现的荧光信号,该信号分布细胞内。结论:本实验成功构建了应用BiFC技术的真核表达载体,并且在活细胞内检测到NT21MP与CXCR4的互相结合。

关键词：受体,趋化因子/遗传学趋化因子CXCL2 质粒重组蛋白质类/遗传学遗传载体转染遗传互补测验

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三氧化二砷对人乳腺癌SKBR-3细胞增殖及Notch1表达的影响

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中国中西医结合杂志 2012年第6期32卷 793-796页

作者：李友建夏俊赵锐孙淼房兵王惠蚌埠医学院临床检验诊断学实验中心安徽233030 蚌埠医学院生物化学与分子生物学教研室安徽233030 南昌市第一医院检验科南昌330008

目的探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对人乳腺癌SKBR-3细胞增殖和迁移力及Notch1表达的影响。方法以SKBR-3细胞为研究对象,以不同浓度As2O3培养24h和终浓度8μmol/L培养24、48、72h后,MTT比色法检测As2O3对SKBR-3细胞增殖的影响... 详细信息

目的探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对人乳腺癌SKBR-3细胞增殖和迁移力及Notch1表达的影响。方法以SKBR-3细胞为研究对象,以不同浓度As2O3培养24h和终浓度8μmol/L培养24、48、72h后,MTT比色法检测As2O3对SKBR-3细胞增殖的影响;Transwell检测As2O3对SKBR-3细胞迁移力的影响;RT-PCR检测Notch1mRNA表达;Western blot检测Notch1蛋白表达。结果 As2O3能显著抑制人乳腺癌SKBR-3细胞增殖,且呈现浓度、时间依赖关系(P<0.05);并能抑制SKBR-3细胞的迁移力(P<0.05);RT-PCR及Western blot结果显示As2O3作用SKBR-3细胞后,可使Notch1mRNA和蛋白的表达水平明显降低(P<0.05)。结论 As2O3能够抑制SKBR-3细胞Notch1的表达及抑制细胞增殖和迁移力,初步揭示As2O3可能是通过Notch1信号通路影响人乳腺癌细胞生物学行为,从而为临床砷剂治疗乳腺癌提供理论和实验依据。

关键词：三氧化二砷 SKBR-3细胞 Notch1 细胞增殖细胞迁移力

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抗慢性粒细胞白血病细胞人源化单链抗体的原核表达及其活性

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中国生物制品学杂志 2012年第7期25卷 877-880页

作者：朱小影王东李身锋张利军钟梁冯文莉重庆医科大学检验医学院临床血液学教研室临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016

目的原核表达抗慢性粒细胞白血病(Chronic myelogenous leukemia,CML)细胞人源化单链抗体(Humanized sin-gle-chain variable fragment,hscFv),并检测其抗原结合活性。方法从重组质粒pUC57-hscFv中扩增hscFv基因,插入含6×His标签的原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-32a-hscFv,转化*** BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组融合蛋白经Ni2+-NTA亲和层析纯化后,SDS-PAGE分析其纯度;Western blot分析其反应原性;间接免疫荧光试验检测其抗原结合活性。结果重组表达质粒经PCR、双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达的重组融合蛋白相对分子质量约为46 000,表达量约占菌体总蛋白的37%,主要以可溶性形式存在;纯化的重组融合蛋白纯度为94%,可与鼠抗6×His单抗及K562细胞表面抗原特异性结合。结论成功原核表达并纯化了抗CML细胞hscFv,为其进一步应用于CML的临床分子诊断和生物靶向治疗奠定了基础。

关键词：慢性粒细胞白血病人源化抗体原核细胞基因表达纯化

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三氧化二砷抑制小鼠乳腺癌细胞MA-891生长作用及其对端粒酶活性的影响

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中国中药杂志 2012年第5期37卷 637-642页

作者：石莹胡博郭俣王慧夏俊蚌埠医学院生化与分子生物学教研室安徽蚌埠233030 苏州大学生物医学研究院肿瘤细胞与分子免疫实验室江苏苏州215123 蚌埠医学院临床检验诊断学实验中心安徽蚌埠233030

目的:探讨As2O3在诱导小鼠乳腺癌细胞MA-891凋亡过程中的作用,以及对端粒酶及其亚单位mTERT mRNA活性表达的影响,为进一步进行小鼠体内实验提供理论和实验依据。方法:以小鼠乳腺癌细胞株MA-891为研究对象,将不同浓度的As2O3与MA-891细... 详细信息

目的:探讨As2O3在诱导小鼠乳腺癌细胞MA-891凋亡过程中的作用,以及对端粒酶及其亚单位mTERT mRNA活性表达的影响,为进一步进行小鼠体内实验提供理论和实验依据。方法:以小鼠乳腺癌细胞株MA-891为研究对象,将不同浓度的As2O3与MA-891细胞共培养不同时间后,MTT法检测As2O3对MA-891细胞的生长抑制作用;流式细胞术检测As2O3对MA-891细胞凋亡的影响;TRAP-PAGE-银染法检测As2O3作用后MA-891细胞中端粒酶活性的改变;RT-PCR检测As2O3对MA-891细胞鼠端粒酶逆转录酶(mTERT)的影响。结果:As2O3能显著抑制MA-891细胞生长,24,48 h的半数生长抑制浓度(IC50)分别为9.68,5.50μmol.L-1。5,10,20μmol.L-1的As2O3诱导MA-891细胞24 h后,细胞凋亡率依次为30.21%,48.26%,57.43%。5,10,20μmol.L-1的As2O3作用MA-891细胞24,48 h后,端粒酶活性显著下降,抑制程度呈明显的时间和浓度依赖性;银染条带也显示出相同结果。RT-PCR产物显示mTERT mRNA表达显著下降并呈时间和浓度依赖关系。结论:As2O3能显著抑制MA-891细胞生长、诱导细胞凋亡,可能是通过抑制细胞端粒酶及其亚单位端粒酶逆转录酶的活性而发挥作用。

关键词： As2O3 小鼠乳腺癌细胞MA-891 凋亡端粒酶端粒酶逆转录酶

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疟原虫青蒿素抗性及抗性检测研究进展

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国际医学寄生虫病杂志 2012年第3期39卷 186-189页

作者：胡东伟孙新蚌埠医学院临床检验诊断学教研室蚌埠233030

疟疾是危害人类健康最严重的寄生虫病。青蒿素类药物是目前首选的抗疟药。随着青蒿素类药物的广泛应用，有潜在产生青蒿素抗性及抗性广泛扩散的风险。体内外药物敏感性测试均显示有产生青蒿素抗性的趋势。该文就近年来国内外文献报道的... 详细信息

疟疾是危害人类健康最严重的寄生虫病。青蒿素类药物是目前首选的抗疟药。随着青蒿素类药物的广泛应用，有潜在产生青蒿素抗性及抗性广泛扩散的风险。体内外药物敏感性测试均显示有产生青蒿素抗性的趋势。该文就近年来国内外文献报道的有关青蒿素抗性的可能机制、检测方法及应对策略等进行归纳讨论。

关键词：疟原虫青蒿素抗药性

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脐带血间充质干细胞的分离培养及诱导表达IDO对免疫介导再生障碍性贫血小鼠的治疗研究

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蚌埠医学院学报 2012年第10期37卷 1147-1150,1161页

作者：魏晓巍李玉云张强蚌埠医学院临床检验诊断学实验中心江苏镇江212013 蚌埠医学院临床检验诊断学教研室安徽蚌埠233030 江苏大学江苏镇江212013

目的:从人脐带血中分离和培养脐带血间充质干细胞(umbilical cord blood mesenchymal stem cells,UCB MSCs),探讨其吲哚胺2,3-过氧化酶(indoleamine2,3-dioxygenase,IDO)活性对MSCs治疗再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)的影响。方法:采集足月分娩儿脐带血,淋巴细胞分离法分离培养UCB MSCs。倒置显微镜观察细胞形态,流式细胞术检测细胞表面标志物表达,成骨与成脂诱导鉴定UCB MSCs分化潜能。建立免疫介导AA小鼠模型,尾静脉输注经γ-干扰素(IFN-γ)诱导的UCBMSCs,观察对AA小鼠的治疗效果。结果:UCB MSCs培养1周可见少量贴壁梭形细胞,于3周左右细胞生长形态较均匀,成纤维样、平行排列或漩涡状;传代细胞1周即可见80%左右融合。流式检测细胞表面标志物,不表达造血标志物CD34,CD44、CD73阳性表达率分别为94.36%和92.48%。UCB MSCs经IFN-γ诱导表达IDO活性,对AA小鼠造血恢复具有治疗作用。结论:脐血分离培养的MSCs在IFN-γ诱导作用下,其IDO基因表达对于免疫介导AA小鼠模型具有治疗作用。

关键词：再生障碍性贫血间充质干细胞脐带血免疫介导吲哚胺2 3-过氧化酶

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皖北地区健康成人血小板相关参数的调查

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蚌埠医学院学报 2012年第12期37卷 1522-1524页

作者：马芳张伦军孙红郝艳梅张英杰蚌埠医学院临床检验诊断学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院第一附属医院检验科安徽蚌埠233004

目的:观察皖北地区汉族健康成年人群静脉血平均血小板体积(MPV)、血小板计数(PLT)等情况。方法:应用日本Sysmex XT-1800i型全自动血细胞分析仪,采用仪器自动吸样的方式对皖北地区的1 339名健康成年汉族人的静脉血MPV、PLT进行检测。结果... 详细信息

目的:观察皖北地区汉族健康成年人群静脉血平均血小板体积(MPV)、血小板计数(PLT)等情况。方法:应用日本Sysmex XT-1800i型全自动血细胞分析仪,采用仪器自动吸样的方式对皖北地区的1 339名健康成年汉族人的静脉血MPV、PLT进行检测。结果:男性PLT总体水平低于女性(P<0.01),MPV总体水平在男女间差异无统计学意义(P>0.05)。男性25～岁组PLT高于65～岁组,而女性25～岁组PLT则高于≥75岁组(P<0.05),但同年龄段不同性别间MPV、PLT差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:皖北地区成年男性PLT水平低于女性,35岁后男女PLT水平均随着年龄的增大而逐渐降低;性别对皖北地区健康成年汉族人群的MPV没有明显影响。

关键词：平均血小板体积血小板计数全自动血细胞分析仪

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气相色谱-质谱法测定硫化氢中毒血液中的硫化物

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重庆医科大学学报 2012年第12期37卷 1025-1028页

作者：罗才会李剑波于天晓刘德伟丁世家重庆医科大学检验医学院、临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016 重庆医科大学基础医学院法医教研室重庆400016

目的：建立气相色谱-质谱（Gas chromatograph-mass spectrometry,GC/MS）法检测硫化氢中毒血液中硫化物的方法并用于实际检案分析。方法：血样本中加入苯扎氯铵与四硼酸钠混合溶液,在碱性条件下中毒血液中多种形态的硫化物转化成硫离子... 详细信息

目的：建立气相色谱-质谱（Gas chromatograph-mass spectrometry,GC/MS）法检测硫化氢中毒血液中硫化物的方法并用于实际检案分析。方法：血样本中加入苯扎氯铵与四硼酸钠混合溶液,在碱性条件下中毒血液中多种形态的硫化物转化成硫离子,用五氟溴卞（Pentafluorobenzyl bromide,PFBBr）衍生化,1,3,5-三溴苯（1,3,5-tribromobenzene,TBB）作为内标,通过液-液萃取法提取衍生物五氟苄基硫醚（Bis-pentaflu-orobenzyl-disulfide,BPFBD）,采用GC/MS仪检测,选择离子检测扫描（Selected ion monitoring,SIM）模式,内标法定量分析。结果：在硫化钠浓度为0.05~10.0μmol/ml范围的血样本中检测信号与硫化钠浓度有良好线性关系,相关系数为0.997 2,最低检出限为0.007 2μmol/ml。结论：本文建立的方法灵敏度高,特异性好,简便省时,分析结果准确可靠,适用于法医鉴定和临床检验血液中硫化氢的快速分析。

关键词：硫化氢中毒血样本液-液萃取气相色谱-质谱法衍生化

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