检索结果-内蒙古大学图书馆

蚌埠医学院学报 2014年第7期39卷 841-845页

作者：李见王露李玉云蚌埠医学院临床检验诊断学实验中心安徽蚌埠233030 蚌埠医学院临床检验诊断学教研室安徽蚌埠233030

目的:构建重组表达人吲哚胺2,3-过氧化酶(IDO)基因的慢病毒载体。方法:设计相应引物,从含有人IDO基因的cDNA文库中,利用聚合酶链反应(PCR)方法钓取人IDO基因的全长编码区片段。将目的基因与经酶切线性化的慢病毒载体pGC-FU进行定向的连... 详细信息

目的:构建重组表达人吲哚胺2,3-过氧化酶(IDO)基因的慢病毒载体。方法:设计相应引物,从含有人IDO基因的cDNA文库中,利用聚合酶链反应(PCR)方法钓取人IDO基因的全长编码区片段。将目的基因与经酶切线性化的慢病毒载体pGC-FU进行定向的连接,将产物转化细菌感受态细胞。对长出的克隆进行菌落PCR鉴定,并对阳性的克隆进行测序及比对分析。重组慢病毒及辅助包装质粒共转染293T细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达情况;采用Wester blot检测IDO-GFP融合蛋白的表达情况;实时荧光定量PCR检测慢病毒浓缩液的滴度。结果:成功获取人IDO基因编码区序列,人IDO基因慢病毒转染质粒连接正确;293T细胞中产生慢病毒颗粒;IDO基因在细胞内稳定表达;人IDO基因重组慢病毒载体的滴度为2×108TU/ml。结论:成功构建并包装出高滴度的人IDO基因重组慢病毒表达载体,为下一步转染目的细胞奠定了实验基础。

关键词：基因表达吲哚胺2,3-过氧化酶慢病毒载体 293T细胞

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敲低线粒体转录因子A(TFAM)抑制人宫颈癌细胞及骨肉瘤细胞自噬及增殖、侵袭和迁移

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第4期40卷 311-318页

作者：许颖高榴杨靖瑞汪晶蒋旭禹莉蚌埠医科大学检验医学院肿瘤基础研究与临床检验诊断重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医科大学临床医学院安徽蚌埠233030 蚌埠医科大学临床检验诊断学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医科大学输血学教研室安徽蚌埠233030

目的研究线粒体转录因子A(TFAM)对宫颈癌HeLa细胞及骨肉瘤U2OS细胞的线粒体功能、自噬、增殖、侵袭、迁移的影响。方法HeLa、U2OS细胞转染TFAM小干扰片段(si-TFAM)下调TFAM表达,Mito-Tracker Red CMXRos染色结合激光共聚焦显微镜检测线... 详细信息

目的研究线粒体转录因子A(TFAM)对宫颈癌HeLa细胞及骨肉瘤U2OS细胞的线粒体功能、自噬、增殖、侵袭、迁移的影响。方法HeLa、U2OS细胞转染TFAM小干扰片段(si-TFAM)下调TFAM表达,Mito-Tracker Red CMXRos染色结合激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位(MMP)、MitoSOX^(TM)Red标记法检测线粒体活性氧(mtROS)水平、实时定量PCR检测线粒体DNA(mtDNA)的表达,免疫荧光细胞化学染色检测自噬体数量的变化。Western blot法检测TFAM、微管相关蛋白1轻链3A/B(LC3A/B)、自噬相关基因2A(ATG2A)、ATG2B、ATG9A、锌指转录因子Snail、基质金属蛋白酶2(MMP2)和MMP9的表达。CCK-8法、平板集落形成实验检测细胞增殖,Transwell^(TM)实验、划痕愈合实验检测细胞侵袭、迁移的变化。结果下调TFAM表达导致HeLa及U2OS细胞MMP减少,mtDNA拷贝数减少,mtROS产生量增加。LC3A/B蛋白含量较对照组明显下降,胞质内自噬体数量明显减少,自噬早期阶段蛋白ATG2B、ATG9A表达量明显减少。HeLa及U2OS细胞Snail、MMP2和MMP9蛋白表达均减少。干扰TFAM表达,抑制HeLa及U2OS细胞的增殖、侵袭、迁移能力。结论下调TFAM表达抑制线粒体功能,延缓自噬进程,降低宫颈癌细胞及骨肉瘤细胞的增殖、侵袭、迁移能力。

关键词：宫颈癌细胞骨肉瘤细胞线粒体转录因子A(TFAM) 自噬侵袭迁移

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临床血液学与检验实验教学探讨

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基础医学教育 2011年第9期13卷 856-858页

作者：马芳郝艳梅殷平鳌陈乐张英杰禹莉李玉云蚌埠医学院医学检验系临床检验诊断学教研室蚌埠233003

为使医学检验专业本科生掌握临床血液学与检验的基本原理和基本技能,全面提高学生的综合素质,应根据实际教学情况和学生培养目标,对临床血液学与检验实验教学的教师素质提出更高的要求,从而极大促进学生创新精神和实践能力的培养,也在... 详细信息

为使医学检验专业本科生掌握临床血液学与检验的基本原理和基本技能,全面提高学生的综合素质,应根据实际教学情况和学生培养目标,对临床血液学与检验实验教学的教师素质提出更高的要求,从而极大促进学生创新精神和实践能力的培养,也在一定程度上为今后临床血液学检验的教学方法改革提供新的思路。

关键词：血液学检验实验教学基本技能综合素质

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结核分枝杆菌PPE59蛋白的表达、纯化和生物信息学分析

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长治医学院学报 2023年第1期37卷 1-7页

作者：王楚彤袁美丽魏婧李敏英许涛汪洪涛蚌埠医学院检验医学院检验医学实验中心安徽蚌埠233030 蚌埠医学院检验医学院免疫学教研室蚌埠医学院检验医学院临床检验诊断学教研室蚌埠医学院慢性疾病免疫学基础与临床安徽省重点实验室

目的:构建结核分枝杆菌pET28a-PPE59原核表达载体,异丙基-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达和纯化获得PPE59蛋白;同时对PPE59蛋白进行生物信息学分析,预测其可能结构和功能。方法:以H37Rv基因组为模板扩增获得PPE59基因,利用同源重组将其克... 详细信息

目的:构建结核分枝杆菌pET28a-PPE59原核表达载体,异丙基-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达和纯化获得PPE59蛋白;同时对PPE59蛋白进行生物信息学分析,预测其可能结构和功能。方法:以H37Rv基因组为模板扩增获得PPE59基因,利用同源重组将其克隆至原核表达载体pET28a,后转化至大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,采用Ni~+-NTA亲和层析柱对PPE59蛋白进行纯化,获得重组PPE59蛋白并进行鉴定。使用Protparam、NetPhos 3.1 Servera、ABCpred、SYEPEITHI等软件对PPE59蛋白的理化性质、磷酸化位点和T、B细胞表位等进行预测和分析。结果:成功构建pET28a-PPE59重组载体,经诱导表达和纯化,成功获得PPE59蛋白;生物信息学预测发现,PPE59有2个开放阅读框,31个磷酸化位点,并含有多个T细胞和B细胞抗原表位。结论:成功构建pET28a-PPE59表达载体,获得高纯度PPE59蛋白,且被抗His-tag小鼠单抗特异性识别;PPE59具有大量的磷酸化位点及丰富的T、B细胞表位,可作为结核病疫苗的重要候选蛋白之一。

关键词：结核分枝杆菌 PPE59蛋白原核表达生物信息学

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人脐带间充质干细胞分离培养建立及其生物学特性观察

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蚌埠医学院学报 2010年第10期35卷 982-985页

作者：谢扬虎李玉云蚌埠医学院临床检验诊断学实验中心安徽蚌埠233030 蚌埠医学院临床检验诊断学教研室安徽蚌埠233030

目的:建立从人的脐带组织中分离和培养脐带间充质干细胞(UC-MSCs)的方法,并探讨UC-MSCs的生物学特性。方法:分别采用原代贴壁培养法和酶消化法(胶原酶Ⅱ和胰酶)分离培养UC-MSCs,瑞氏染色观察细胞形态,流式细胞术检测第3代以后的UC-MSCs... 详细信息

目的:建立从人的脐带组织中分离和培养脐带间充质干细胞(UC-MSCs)的方法,并探讨UC-MSCs的生物学特性。方法:分别采用原代贴壁培养法和酶消化法(胶原酶Ⅱ和胰酶)分离培养UC-MSCs,瑞氏染色观察细胞形态,流式细胞术检测第3代以后的UC-MSCs表面特异标志物表达,MTT法检测P7细胞增殖情况。UC-MSCs同外周血单个核细胞共培养后,用MTT法测定细胞增殖率,Hoechst与PI双染色,观察UC-MSCs对健康人淋巴细胞增殖的影响。结果:原代贴壁培养法1周左右可见成纤维样细胞从组织块边缘爬出,成簇生长;酶消化法3～5天可见成纤维样细胞均匀生长。传代培养后,UC-MSCs均呈长梭形、旋涡状生长;细胞核大,核仁清晰;免疫表型:CD29阳性率为(95.71±2.23)%,CD31和CD34阳性率分别为(2.47±0.54)%和(3.24±0.34)%;第7代UC-MSCs仍具有较强的分裂增殖能力。UC-MSCs对淋巴细胞的增殖反应具有抑制作用,呈细胞数量剂量依赖性,而淋巴细胞对UC-MSCs的生长未见影响。结论:从人脐带中成功分离培养的细胞具有UC-MSCs生物学特性。

关键词：干细胞,间充质脐带分离培养淋巴细胞

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抗DNP、Sm、ds-DNA抗体检测在系统性红斑狼疮诊断中的应用

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蚌埠医学院学报 2004年第2期29卷 176-178页

作者：张强李玉云王丽蚌埠医学院临床检验诊断学教研室安徽蚌埠233003

目的 :探讨抗DNP抗体、抗Sm抗体、抗ds DNA抗体联合检测在系统性红斑狼疮 (SLE)诊断中的价值。方法 :用免疫印迹法检测抗Sm抗体 ,免疫斑点法检测抗ds DNA抗体 ,胶乳免疫法检测抗DNP抗体。结果 :5 7例SLE患者 ,抗DNP抗体阳性率为 73.7% ,... 详细信息

目的 :探讨抗DNP抗体、抗Sm抗体、抗ds DNA抗体联合检测在系统性红斑狼疮 (SLE)诊断中的价值。方法 :用免疫印迹法检测抗Sm抗体 ,免疫斑点法检测抗ds DNA抗体 ,胶乳免疫法检测抗DNP抗体。结果 :5 7例SLE患者 ,抗DNP抗体阳性率为 73.7% ,抗Sm抗体阳性率 33.3% ,抗ds DNA抗体阳性率 6 1 .4 % ,三者联合检测阳性率达 94 .7%。结论 :抗DNP抗体、抗Sm抗体、抗ds DNA抗体联合检测可提高对SLE诊断的阳性率 ;对SLE病情的追踪和预后判定有重要作用 ;用抗DNP抗体检测代替LEC检测可直接检测血清中的狼疮因子。

关键词：红斑狼疮系统性诊断抗DNP抗体抗Sm抗体抗ds—DNA抗体

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三氧化二砷对HL-60细胞MMP-2及MMP-9表达的影响

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蚌埠医学院学报 2011年第6期36卷 547-550页

作者：禹莉李玉云郝艳梅蚌埠医学院临床检验诊断学教研室安徽蚌埠233030

目的:探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对HL-60细胞基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9表达的影响。方法:以HL-60细胞为对象,加入0.0、2.5、5.0、7.5μmol/L As2O3干预48 h。RT-PCR检测MMP-2和MMP-9 mRNA的表达,Western blot检测MMP-2和MMP-9蛋白的表达。结果:HL-60细胞MMP-2、MMP-9 mRNA的表达随着As2O3浓度的增加而减少,5.0和7.5μmol/L As2O3组与对照组差异均有统计学意义(P<0.05～P<0.01)。As2O3呈剂量依赖性抑制HL-60细胞MMP-2、MMP-9蛋白的表达,As2O3各组与对照组差异均有统计学意义(P<0.05～P<0.01)。结论:As2O3可抑制HL-60细胞MMP-2、MMP-9的表达,这一效应可能是As2O3治疗白血病的分子机制之一。

关键词：三氧化二砷 HL-60细胞基质金属蛋白酶类

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结核分枝杆菌GroEL2蛋白表达、纯化及生物信息学分析

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山西医科大学学报 2023年第12期54卷 1591-1599页

作者：宋亚敏魏婧郭方正李柏青许涛汪洪涛蚌埠医学院检验医学院检验医学实验中心蚌埠233030 蚌埠医学院慢性疾病免疫学基础与临床安徽省重点实验室蚌埠医学院检验医学院免疫学教研室蚌埠医学院检验医学院临床检验诊断学教研室

目的克隆、表达和纯化结核分枝杆菌H37Ra株GroEL2蛋白,并进行生物信息学分析。方法以结核分枝杆菌H37Ra株基因组DNA为模板,PCR扩增GroEL2基因,克隆至pET-28a载体中,构建重组pET-28a-GroEL2载体,将其转化至BL21(DE3)菌株中,在异丙基硫代... 详细信息

目的克隆、表达和纯化结核分枝杆菌H37Ra株GroEL2蛋白,并进行生物信息学分析。方法以结核分枝杆菌H37Ra株基因组DNA为模板,PCR扩增GroEL2基因,克隆至pET-28a载体中,构建重组pET-28a-GroEL2载体,将其转化至BL21(DE3)菌株中,在异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达后,利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)电泳分析表达产物,镍-亚氨基二乙酸(Ni-IDA)亲和层析柱纯化重组GroEL2蛋白,Western blot鉴定GroEL2的表达效果。利用生物信息学方法对GroEL2蛋白的理化性质、蛋白结构、抗原表位等进行预测。结果成功构建重组pET-28a-GroEL2表达载体,在大肠杆菌中以可溶形式表达GroEL2蛋白。Ni-IDA亲和层析柱纯化重组GroEL2蛋白,纯度达90%以上。生物信息学分析显示其能与多种蛋白相互作用,且存在多个潜在的T细胞、B细胞抗原表位。结论重组GroEL2蛋白具有良好的免疫反应性,可能是结核病新型疫苗和诊断方法开发的新靶点。

关键词：结核分枝杆菌 GroEL2蛋白原核表达蛋白纯化生物信息学

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二烯丙基三硫对人白血病HL-60细胞凋亡作用的实验研究

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实用肿瘤杂志 2008年第5期23卷 429-431页

作者：郝艳梅李玉云陈乐张强张英杰徐慧蚌埠医学院临床检验诊断学教研室安徽蚌埠233030

目的研究二烯丙基三硫对HL-60细胞凋亡的影响及其作用机制。方法将浓度为30 mg/L的二烯丙基三硫与HL-60细胞体外共培养48小时后,采用Wright染色在光学显微镜下观察细胞形态学变化;以流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞凋亡率;应用... 详细信息

目的研究二烯丙基三硫对HL-60细胞凋亡的影响及其作用机制。方法将浓度为30 mg/L的二烯丙基三硫与HL-60细胞体外共培养48小时后,采用Wright染色在光学显微镜下观察细胞形态学变化;以流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞凋亡率;应用免疫组化方法检测细胞内Bcl-2、survivin蛋白的表达。结果光镜下可见二烯丙基三硫作用后细胞形态出现凋亡的形态特征,空白对照和30 mg/L的二烯丙基三硫分别与HL-60细胞作用48小时,细胞的凋亡率分别为(12.42±0.76)%和(60.57±3.24)%(P<0.05),二烯丙基三硫组HL-60细胞的Bcl-2、survivin蛋白呈弱阳性或阴性表达,而对照组均阳性表达。结论二烯丙基三硫促进HL-60细胞的凋亡的机制,可能是通过抑制Bcl-2、survivin蛋白的表达。

关键词：白血病肿瘤细胞,培养的流式细胞术细胞凋亡二烯丙基三硫 Bcl-2蛋白 survivin蛋白免疫组织化学

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临床输血学专业课程的教学初探

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检验医学教育 2010年第2期17卷 20-21页

作者：禹莉李玉云郝艳梅张强张英杰陈乐蚌埠医学院临床检验诊断学教研室安徽蚌埠233030

随着医学技术的发展,社会对输血医学教育提出了新的要求和挑战。临床输血学作为输血方向专业课程,笔者结合教学实践,就如何进行该门课程的教学进行了总结和探索,以提高教学质量。

关键词：输血方向临床输血学探索

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