检索结果-内蒙古大学图书馆

细胞与分子免疫学杂志 2012年第7期28卷 691-695页

作者：王雪梅袁远英方强夏惠孙新李柏青蚌埠医学院病原生物学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 广州复大医疗股份有限公司复大医院广东广州510300 蚌埠医学院免疫学教研室安徽蚌埠233030

目的:真核表达重组猪单链IL-12(pscIL-12)并鉴定表达的pscIL-12的生物学活性。方法:采用梭华-SofastTM将pcDNA3.1(+)-pscIL-12转入CHO-K1细胞,ELISA法测定细胞培养上清中pscIL-12的表达水平;MTT法检测细胞培养上清对NK细胞杀伤作用的影... 详细信息

目的:真核表达重组猪单链IL-12(pscIL-12)并鉴定表达的pscIL-12的生物学活性。方法:采用梭华-SofastTM将pcDNA3.1(+)-pscIL-12转入CHO-K1细胞,ELISA法测定细胞培养上清中pscIL-12的表达水平;MTT法检测细胞培养上清对NK细胞杀伤作用的影响;ELISA法测定细胞培养上清刺激人PBMC分泌IFN-γ的水平;流式细胞术(FCM)检测细胞培养上清对人淋巴母细胞增殖水平的作用。结果:融合基因pscIL-12在CHO-K1细胞中表达产物pscIL-12融合蛋白含量较高;生物学活性鉴定表明:pscIL-12融合蛋白可增强NK细胞活性、提高IFN-γ的产生和促进人淋巴母细胞的增殖。结论:转染pcDNA3.1(+)-pscIL-12质粒的CHO-K1细胞成功表达了具有良好生物学活性的pscIL-12。

关键词：白细胞介素-12 融合基因真核表达

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Tγδ17和Tγδ22细胞在健康成人外周血中的比例

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蚌埠医学院学报 2012年第9期37卷 1009-1012页

作者：徐丹梁华丁艳邱晓静盛玲玲李柏青蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030

目的:观察健康成人外周血中αβT细胞和γδT细胞中辅助性T细胞17(TH17)样细胞和TH22样细胞的比例。方法:采集18名正常人外周血用荧光抗体染色后用流式细胞仪检测αβT细胞、γδT细胞中白细胞介素-22(IL-22)、IL-17和γ干扰素(IFN-γ)... 详细信息

目的:观察健康成人外周血中αβT细胞和γδT细胞中辅助性T细胞17(TH17)样细胞和TH22样细胞的比例。方法:采集18名正常人外周血用荧光抗体染色后用流式细胞仪检测αβT细胞、γδT细胞中白细胞介素-22(IL-22)、IL-17和γ干扰素(IFN-γ)表达细胞的百分比。结果:将正常人外周新鲜全血中CD3+T细胞分成γδT细胞和αβT细胞两群。TH1样细胞在αβT细胞中比例为14.31%,明显低于在γδT细胞中的61.07%(P<0.01),而TH17样细胞在αβT细胞中的比例为1.16%,明显高于在γδT细胞中的0.27%(P<0.01),TH22样细胞在αβT细胞中与γδT细胞中的比例分别为1.06%和0.91%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在γδT细胞中存在IL-17和IL-22均阳性的Tγδ17细胞和仅产生IL-22的Tγδ22细胞,但比αβT细胞中的TH17样细胞和TH22样细胞少。

关键词：外周血 γδT细胞 αβT细胞

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结核杆菌耐热抗原和磷酸类抗原对人外周血γδ T细胞活化和增殖的比较

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蚌埠医学院学报 2012年第7期37卷 745-747页

作者：丁艳盛玲玲邱晓静徐丹李柏青蚌埠医学院免疫学教研室感染与免疫安徽省重点实验室安徽蚌埠233030

目的:比较结核杆菌耐热抗原(Mtb-HAg)和磷酸类抗原(HDMAPP)刺激正常人外周血γδT细胞活化和增殖的特点。方法:健康成人外周血单个核细胞(PBMC,1×106/ml),分别加Mtb-HAg(5μg/ml)和HDMAPP(2×10-9mol/ml)进行刺激,同时给予IL-2... 详细信息

目的:比较结核杆菌耐热抗原(Mtb-HAg)和磷酸类抗原(HDMAPP)刺激正常人外周血γδT细胞活化和增殖的特点。方法:健康成人外周血单个核细胞(PBMC,1×106/ml),分别加Mtb-HAg(5μg/ml)和HDMAPP(2×10-9mol/ml)进行刺激,同时给予IL-2(50 u/ml)维持细胞增殖,另外设立只加IL-2的对照组。培养10 d后,采用抗CD3-FITC和抗TCRγδ-PE荧光抗体标记细胞,流式细胞术检测γδT细胞的比例。结果:正常人PBMC经Mtb-HAg刺激扩增后γδT细胞在扩增细胞中的比例明显低于HDMAPP组(P<0.01),均明显高于IL-2对照组(P<0.01)。各个体对2种抗原刺激扩增γδT细胞呈线性正相关关系(R2=0.855 1,P<0.01)。结论:Mtb-HAg和HDMAPP均可优势激活人γδT细胞,且后者较前者有更强的活性。

关键词：结核杆菌耐热抗原磷酸类抗原 γδT细胞

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屋尘螨成螨形态的扫描电镜观察

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昆虫学报 2012年第4期55卷 493-496,I0001,I0002页

作者：赵学影刘晓宇李玲孙新刘志刚深圳大学过敏反应与免疫学研究所广东深圳518060 蚌埠医学院病原生物学教研室感染与免疫安徽省重点实验室安徽蚌埠233030 深圳大学电子科学技术学院激光工程重点实验室广东深圳518060

【目的】利用扫描电子显微镜(scanning electron microscopy,SEM)观察屋尘螨Dermatophagoides pteronyssinus颚体、躯体、外生殖器及足等的形态结构。【方法】从床尘、枕尘中采集屋尘螨,分离出雌雄成螨,在体视显微镜下清洗处理活螨后,用... 详细信息

【目的】利用扫描电子显微镜(scanning electron microscopy,SEM)观察屋尘螨Dermatophagoides pteronyssinus颚体、躯体、外生殖器及足等的形态结构。【方法】从床尘、枕尘中采集屋尘螨,分离出雌雄成螨,在体视显微镜下清洗处理活螨后,用SEM观察其外部形态特征。【结果】SEM照片显示,屋尘螨螯肢钳状,须肢扁平;体表具细密皮纹,似指纹状,纹间距小于2μm。外生殖器位于腹面正中,雌螨为产卵孔,雄螨生殖孔具1对叶状生殖盖。肛门呈纵行裂孔,雄螨具2个肛吸盘。雌螨足跗节末端各具爪垫1个,雄螨跗节Ⅳ具2个吸盘。【结论】本研究观察结果为尘螨鉴定提供了更多依据。

关键词：尘螨屋尘螨成螨形态扫描电子显微镜

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结核分枝杆菌抗原刺激人γδT细胞的活性单位的计算方法

结核分枝杆菌抗原刺激人γδT细胞的活性单位的计算方法

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第八届全国免疫学学术大会

作者：孙悝陈勇李柏青蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室

研究背景:结核分枝杆菌(Mtb)抗原(Mtb-Ag)具有优势激活人γδT细胞增殖的作用。本实验室发现不同培养条件和不同制备方法所制备的不同批次的Mtb-Ag,在激活人γδT细胞增殖的活性方面有明显差异。目的:为了检测不同批次Mtb-Ag在激活人γ... 详细信息

研究背景:结核分枝杆菌(Mtb)抗原(Mtb-Ag)具有优势激活人γδT细胞增殖的作用。本实验室发现不同培养条件和不同制备方法所制备的不同批次的Mtb-Ag,在激活人γδT细胞增殖的活性方面有明显差异。目的:为了检测不同批次Mtb-Ag在激活人γδT细胞增殖活性的有效成分的浓度,本研究拟参照细胞因子活性单位的方法建立检测和计算Mtb-Ag制剂中激活人γδT细胞增殖的活性单位的方法。方法:培养Mtb-H37 Ra菌株4至6周后收集菌体,用高温和超声处理分别获取Mtb耐热抗原(Mtb-HAg)和超声处理抗原(Mtb-So Ag),并继而采用超滤离心管(3k和10K)和FPLC分组和分离,获取不同分子量组分的Mtb-HAg和Mtb-So Ag。采集健康成年人外周血分离获取PBMC,加入不同浓度梯度的Mtb-Ag或及其分离组分,并加IL-2培养12天后收集扩增细胞,加抗人TCRγδ荧光抗体染色,流式细胞仪检测和分析γδT细胞增殖后比例,以扩增γδT细胞最高比例的50%所对应的浓度计算为一个活性单位。结果:通过计算和比较不同浓度梯度的Mtb-HAg和Mtb-So Ag及其低分子组分的刺激人外周血γδT细胞的活性,发现Mtb-HAg和低分子Mtb-HAg(3-10K)对γδT细胞的活化差异无显著性,但在Mtb-So Ag中的低分子组分对γδT细胞的活化远远大于未分离的全菌体混合抗原。用活性单位计算法分析,某批次的Mtb-HAg(总蛋白590μg/ml)刺激扩增γδT细胞最高比例的50%对应浓度为2.8μg/ml,活性单位为210U/ml;某批次低分子Mtb-So Ag(3-10K)(221μg/ml)扩增γδT细胞最高比例的50%的浓度为1.7μg/ml、其活性单位为130U/ml。结论:通过比较Mtb-Ag不同批次及其不同组分在不同浓度下刺激γδT细胞扩增数量的活性,可以计算获得刺激γδT细胞扩增的一个活性单位,为检测Mtb-Ag制剂刺激γδT细胞增殖活性建立了标准化程序。

关键词：结核分枝杆菌 γδT细胞耐热抗原超声抗原,活性单位

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LPS促进结核杆菌感染的THP-1细胞 ROS产生的机制研究

LPS促进结核杆菌感染的THP-1细胞 ROS产生的机制研究

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第八届全国免疫学学术大会

作者：何小燕钱中清蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室

研究背景:结核分枝杆菌(Mtb)是结核病的病原体,可能通过TLR信号通路干扰或阻断巨噬细胞的激活,从而逃逸免疫系统的识别和杀伤。寻找纠正Mtb阻断巨噬细胞激活的调控措施,对结核病的治疗和防控具有重要价值。目的:探讨TLR激动剂LPS促进Mt... 详细信息

研究背景:结核分枝杆菌(Mtb)是结核病的病原体,可能通过TLR信号通路干扰或阻断巨噬细胞的激活,从而逃逸免疫系统的识别和杀伤。寻找纠正Mtb阻断巨噬细胞激活的调控措施,对结核病的治疗和防控具有重要价值。目的:探讨TLR激动剂LPS促进Mtb感染的巨噬细胞产生活性氧( ROS)及其调控机制。方法:用Mtb菌株H37 Ra感染经PMA刺激诱导分化的巨噬细胞的THP-1细胞(Mtb:THP-1=10:1),建立Mtb感染巨噬细胞模型。Mtb感染的巨噬细胞先加TLR4阻断性抗体(HTA125)或NADPH氧化酶抑制剂DPI(20μM),再以LPS(100ng/ml)刺激90min,经 ROS探针罗丹明123染色后,在流式细胞仪上检测THP-1细胞胞内 ROS产生的水平。结果:Mtb感染组巨噬细胞胞内 ROS的水平(16.62±2.86)较未感染组(19.77±3.55)明显降低(P<0.05,n=3);LPS刺激Mtb感染巨噬细胞组胞内 ROS水平(38.10±2.93),与无LPS刺激Mtb感染巨噬细胞组(16.62±2.86)比较明显升高(P<0.05,n=3);HTA125封闭TLR4受体后,再加LPS刺激Mtb感染巨噬细胞组,其 ROS水平(30.07±5.19),明显低于未加HTA125组(38.10±2.93)(P<0.05,n=3);DPI阻断NOX2 NADPH氧化酶后,再加LPS刺激的Mtb感染巨噬细胞组胞内 ROS水平(20.86±4.17),也明显低于未加DPI组(38.10±2.93)(P<0.05,n=3)。结论:TLR激动剂LPS可激活TLR4信号途径,经NOX2 NADPH氧化酶通路促进Mtb感染巨噬细胞产生 ROS。

关键词： THP-1 结核分枝杆菌 LPS 活性氧 NADPH氧化酶

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结核病患者中性粒细胞表面Toll样受体2和Toll样受体4的表达及意义

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蚌埠医学院学报 2012年第6期37卷 624-626页

作者：姜丽娜姚春艳金齐力李柏青蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院病理生理学教研室安徽蚌埠233030

目的:检测结核病患者外周血中性粒细胞(PMN)体外感染结核分枝杆菌(***)前后表面Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)的表达,并探讨其意义。方法:采用流式细胞仪检测结核病患者PMN表面TLR2和TLR4的表达,同时检测正常人PMN表面TLR2和TLR... 详细信息

目的:检测结核病患者外周血中性粒细胞(PMN)体外感染结核分枝杆菌(***)前后表面Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)的表达,并探讨其意义。方法:采用流式细胞仪检测结核病患者PMN表面TLR2和TLR4的表达,同时检测正常人PMN表面TLR2和TLR4的表达率;再用***感染结核病患者和正常人外周血,检测PMN表面TLR2和TLR4表达情况。结果:结核病患者外周血感染***前PMN表面TLR2和TLR4表达率明显高于正常人(P<0.01);结核病患者和正常人外周血在感染***后PMN表面TLR2和TLR4表达率均较感染前明显降低(P<0.01)。结论:结核病患者PMN表面TLR2和TLR4的表达和活化有助于机体抵御结核感染,TLR2和TLR4共同参与了宿主对***的免疫应答。

关键词：结核中性粒细胞 Toll样受体2 Toll样受体4

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然免疫细胞在抗结核分枝杆菌感染免疫中的作用机制

然免疫细胞在抗结核分枝杆菌感染免疫中的作用机制

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第八届全国免疫学学术大会

作者：李柏青蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室

结核分枝杆菌(Mtb)感染引起的结核病(TB)仍是发病率和病死率最高的传染病之一。Mtb感染人群仅5～10%可发展为TB,提示对Mtb感染发病有明显个体差异。虽然以往研究已证明抗Mtb感染的免疫主要依赖于T细胞介导的特异性细胞免疫,但TB患者可... 详细信息

结核分枝杆菌(Mtb)感染引起的结核病(TB)仍是发病率和病死率最高的传染病之一。Mtb感染人群仅5～10%可发展为TB,提示对Mtb感染发病有明显个体差异。虽然以往研究已证明抗Mtb感染的免疫主要依赖于T细胞介导的特异性细胞免疫,但TB患者可再次发病的现象,提示针对Mtb的特异性T细胞免疫应答并不能产生有效的终生保护性免疫。这也提示Mtb潜伏感染者不发生TB的机制还可能涉及非特异性的天然免疫的作用。因此,有必要探讨天然免疫细胞如中性粒细胞(PMN),树突状细胞(DC),NK细胞,NKT细胞以及γδT细胞在抗Mtb感染免疫中的作用及调控机制。PMN是最早达到细菌侵入局部的吞噬细胞,实验研究已发现Mtb感染局部有PMN聚集或浸润。PMN可吞噬并有效杀伤Mtb,其杀伤机制可涉及氧依赖和非氧依赖途径。PMN吞噬和杀伤Mtb的活性也可受细胞因子的调控。DC是最重要的抗原提呈细胞,可分为p DC和m DC两个主要亚群。TB患者外周血中p DC数量明显降低。体外实验发现Mtb及其抗原对DC的成熟及其功能有调控作用。NK细胞及其不同亚群不仅直接发挥天然免疫作用,还参与对其他免疫细胞的调控作用。已发现TB患者外周血的NK细胞数量减少,虽然胞内杀伤分子的表达没有明显变化,但是产生细胞因子(IL-17,Il-22等)的NK细胞明显增加。NKT细胞包括CD3+56+NKT细胞和i NK(Vα24)T细胞。实验发现在TB患者外周血CD3+56+NKT细胞在IL-2刺激下表现为高活化低增殖;而i NK(Vα24)T细胞在TB患者外周血明显减少,但是其表面的活化分子(CD69,CD25,HLA-DR)明显高于正常对照,提示iNKT可能涉及Mtb导致TB的过程。γδT细胞具有连接天然免疫和特异性免疫的桥梁作用,其本身也兼具两类免疫的功能特征。Mtb感染宿主后γδT细胞及其不同亚群可通过天然免疫和特异性免疫的作用发挥抗Mtb感染的免疫作用。

关键词：结核分枝杆菌中性粒细胞树突状细胞,NK细胞,NKT细胞,γδT细胞

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Tγδ17和Tγδ22细胞在健康成人外周血中的比例

Tγδ17和Tγδ22细胞在健康成人外周血中的比例

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第八届全国免疫学学术大会

作者：徐丹梁华丁艳邱晓静盛玲玲李柏青蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室

研究背景:已知小鼠γδT细胞是产生IL-17的主要细胞,人外周血γδT细胞中也有少量可分泌IL-17。最近研究发现人γδT细胞经IL-23和TGF-β等体外诱导培养后,可以分化为分泌IL-17的Tγδ17细胞,和仅分泌IL-22的Tγδ22细胞。但健康人新鲜... 详细信息

研究背景:已知小鼠γδT细胞是产生IL-17的主要细胞,人外周血γδT细胞中也有少量可分泌IL-17。最近研究发现人γδT细胞经IL-23和TGF-β等体外诱导培养后,可以分化为分泌IL-17的Tγδ17细胞,和仅分泌IL-22的Tγδ22细胞。但健康人新鲜外周血中是否也有Tγδ22细胞,以及数量有多少尚不明了。目的:观察健康成人外周血αβT细胞中Th17和Th22细胞,以及γδT细胞中Tγδ17和Tγδ22细胞的比例。方法:采集18名正常人外周血用PMA和Ionomycin刺激2小时后加monensin再培养4小时,然后加荧光抗体进行表面分子染色,溶血透膜处理,再加抗IFN-γ,抗IL17和抗IL-22的荧光标记抗体作胞内细胞因子染色。最后在流式细胞仪上检测和分析αβT细胞和γδT细胞中表达IFN-γ,IL-17和IL-22的细胞比例,并将仅表达IFN-γ的作为Th1和Tγδ1细胞,仅表达IL-17作为Th17和Tγδ17细胞,仅表达IL-22的作为Th22和Tγδ22细胞,分辨计算在αβT细胞和γδT细胞中所占比例。结果:将正常人外周新鲜全血中CD3+T细胞分成γδT细胞和αβT细胞两群。Th1细胞在αβT细胞中的比例为14.31%,明显低于Tγδ1细胞在γδT细胞中的61.07%(P<0.01),而Th17细胞在αβT细胞中的比例为1.16%,明显高于Tγδ17细胞在γδT细胞中的0.27%(P<0.01),Th22细胞在αβT细胞中的比例和Tγδ22细胞在γδT细胞中的比例分别为1.06%和0.91%,差异无统计学意义(P>0.05)。另外,在γδT细胞和αβT细胞中均存在共分泌IL-17和IL-22的T细胞亚群。结论:在γδT细胞中仅分泌IL-17的Tγδ17细胞比例明显低于αβT细胞中的Th17细胞,而仅分泌IL-22的Tγδ22细胞在γδT细胞中的比例和仅产生IL-22的Th22细胞在αβT细胞中的比例均很低,且无明显差异。

关键词：外周血 γδT细胞 αβT细胞 Th17 Th22

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不同巨噬细胞亚群在SD大鼠脊髓损伤后的变化规律

不同巨噬细胞亚群在SD大鼠脊髓损伤后的变化规律

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第八届全国免疫学学术大会

作者：朱海吕合作江政松蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室

研究背景:脊髓损伤属于中枢神经退行性疾病,是人类致残性疾病之一;SD鼠大脊髓损伤模型和人类神经系统脊髓损伤相似,可用来分析脊髓损伤后的病理生理变化;巨噬细胞在脊髓损伤后的一系列变化中处于最上游的位置,了解巨噬细胞及其亚型的变... 详细信息

研究背景:脊髓损伤属于中枢神经退行性疾病,是人类致残性疾病之一;SD鼠大脊髓损伤模型和人类神经系统脊髓损伤相似,可用来分析脊髓损伤后的病理生理变化;巨噬细胞在脊髓损伤后的一系列变化中处于最上游的位置,了解巨噬细胞及其亚型的变化有利于更深入了解脊髓损伤的免疫机制。目的:了解脊髓损伤大鼠外周血及损伤局部免疫微环境中巨噬细胞不同亚群的变化规律,进一步探讨和阐明脊髓损伤后涉及免疫学因素参与的损伤机制。方法:将体重为300克左右的SD大鼠用2%戊巴比妥钠(1ml/400g)麻醉后,用NYU重物坠落装置按物重10g、高度25mm的参数,在暴露的脊髓处制造中等损伤程度的脊髓重物坠落伤模型;在损伤后1d、3d、5d、7d和21d取外周血或取损伤脊髓局部组织制备细胞悬液,用流式细胞术测定M1型巨噬细胞的特异性标志CD68和CD86和M2型巨噬细胞的特异性标志CD68和CD163;通过统计分析计算出不同巨噬细胞亚群在SD大鼠脊髓损伤后的1d至21d的时间动力学变化情况。结果:脊髓损伤SD大鼠外周血单核细胞的CD86表达比例(%)为14.86到54.55,但变化没有统计学意义;而在损伤局部巨噬细胞总比例在损伤后第1d到第3d出现明显的增加,并且持续到第7d左右;M1和M2两型巨噬细胞在损伤后的1d、3d、5d、7d、21d占CD68阳性细胞的比例(%)则分别为20.34±3.31和23.34±5.01、3.67±2.76和40.67±4.57、10.58±2.98和35.26±3.43、4.23±1.45和57.28±7.12及14.50±3.14和9.68±3.57。结论:外周血单核细胞在SD大鼠脊髓损伤后没有表现出明显的变化规律;在损伤局部巨噬细胞则在损伤后第一周持续增加,损伤前三天的增加尤为明显;同时在损伤局部,对损伤后修复有利的M2型巨噬细胞占总的巨噬细胞比例,在损伤后第3d和第7d出现两次明显的高峰。强烈提示在SD大鼠脊髓损伤后修复过程中,损伤后的这两个时间点可能会是最为重要的时间点。

关键词： SD大鼠脊髓损伤巨噬细胞流式细胞术

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