检索结果-内蒙古大学图书馆

肺结核患者CD3^+ CD56^+ NKT细胞对IL-2刺激的反应性研究

细胞与分子免疫学杂志 2010年第9期26卷 884-886页

作者：姚春艳王兆华姜丽娜彭美玉王婧李柏青蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠市传染病医院呼吸科安徽蚌埠233000

目的:观察IL-2刺激后肺结核患者CD3+CD56+NKT细胞活化的规律和增殖情况。方法:结核病患者和健康人外周血单个核细胞用IL-2刺激和培养不同时间,采用多色荧光染色和流式细胞术检测NKT细胞的CD69的表达率以及培养前后NKT细胞数量的变化。结... 详细信息

目的:观察IL-2刺激后肺结核患者CD3+CD56+NKT细胞活化的规律和增殖情况。方法:结核病患者和健康人外周血单个核细胞用IL-2刺激和培养不同时间,采用多色荧光染色和流式细胞术检测NKT细胞的CD69的表达率以及培养前后NKT细胞数量的变化。结果:肺结核患者外周血NKT细胞的比率在刺激培养前与正常人比较无明显差异;经IL-2刺激0、8、16、40和64 h后,患者组和正常组NKT细胞表面CD69的表达量均显著增加,但患者组NKT细胞的CD69表达水平高于正常组(P<0.05);培养14 d后,患者组NKT细胞的数量扩增(108.69±59.22)倍,正常组NKT细胞的数量扩增(246.26±134.06)倍,明显高于患者组(P<0.05)。结论:肺结核患者外周血NKT细胞在IL-2刺激后表现为高度活化和低增殖的特点。

关键词：肺结核 NKT细胞 IL-2

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猪囊尾蚴期特异性抗原cC1的克隆与高效可溶性原核表达

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南方医科大学学报 2010年第2期30卷 206-209页

作者：方强骆江坤崔琢齐文娟胡元生沈继龙蚌埠医学院病原生物学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院免疫学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院第一附属医院安蚌埠233004 安徽医科大学病原生物学教研室安徽合肥230032

目的克隆猪囊尾蚴期特异性抗原cC1基因,并进行高效可溶性原核表达。方法利用PT-PCR从猪囊尾蚴中获得cC1编码基因,T-A克隆后,将cC1插入原核表达载体pET28a中,经酶切、测序鉴定后将其转入宿主菌*** BL21(DE3)中,通过IPTG诱导表达并优化表... 详细信息

目的克隆猪囊尾蚴期特异性抗原cC1基因,并进行高效可溶性原核表达。方法利用PT-PCR从猪囊尾蚴中获得cC1编码基因,T-A克隆后,将cC1插入原核表达载体pET28a中,经酶切、测序鉴定后将其转入宿主菌*** BL21(DE3)中,通过IPTG诱导表达并优化表达条件,表达的融合蛋白Ni+-亲和层析柱纯化后经快速液相蛋白层析分离系统检测其纯度。采用SDS-PAGE和Western-blotting对目的蛋白进行分析和鉴定。结果RT-PCR扩增出的片段长度为1056bp,构建的重组表达质粒经PCR、酶切验证,和预期的结果一致,测序鉴定与Genbank中cC1基因相比于423位存在1个同义突变。转化有重组质粒的E. coli BL21(DE3)经过0.05mmol/LIPTG 37℃诱导6h高效表达了占菌体蛋白总量60%的可为囊虫病患者血清识别的相对分子质量约为40000的可溶性融合蛋白,经Ni+-亲和层析柱纯化后纯度达94%。结论成功克隆并高效可溶性原核表达了猪囊尾蚴期特异性抗原cC1,为其进一步研究和应用奠定了基础。

关键词：猪囊尾蚴,抗原cC1 克隆原核表达条件优化

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IL-15对人γδT细胞杀伤结核杆菌感染THP-1细胞的影响

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中国人兽共患病学报 2010年第10期26卷 926-930页

作者：金齐力韦莉姜丽娜姚春艳李柏青蚌埠医学院免疫学教研室蚌埠233030 安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 蚌埠医学院病原生物学教研室蚌埠233030 蚌埠医学院病理生理学教研室蚌埠233030

目的建立结核杆菌(Mtb)感染单核细胞THP-1细胞系模型;用流式细胞术检测人γδT细胞对Mtb感染THP-1细胞的细胞毒活性;并观察IL-15对人γδT细胞杀伤Mtb感染THP-1细胞的细胞毒活性的影响。方法 Mtb以10∶1的比例感染佛波醇酯(PMA)分化的TH... 详细信息

目的建立结核杆菌(Mtb)感染单核细胞THP-1细胞系模型;用流式细胞术检测人γδT细胞对Mtb感染THP-1细胞的细胞毒活性;并观察IL-15对人γδT细胞杀伤Mtb感染THP-1细胞的细胞毒活性的影响。方法 Mtb以10∶1的比例感染佛波醇酯(PMA)分化的THP-1细胞,建立Mtb感染细胞模型。人外周血单个核细胞用Mtb耐热性低分子多肽类抗原刺激优势扩增γδT细胞,作为效应细胞用于细胞毒活性实验。用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记Mtb感染THP-1细胞,作为靶细胞。效应细胞和靶细胞以不同比例孵育4 h,用碘化丙啶(PI)染色后在流式细胞仪上检测,CSFE和PI双阳性细胞为被杀伤靶细胞。IL-15作用于γδT细胞24 h后,再检测γδT细胞对Mtb感染THP-1细胞的细胞毒活性。结果人γδT细胞与Mtb感染THP-1细胞以1∶1至50∶1的比例作用4 h后,人γδT细胞对结核杆菌感染的THP-1细胞的细胞毒活性从22.5%增加至80.7%;而γδT细胞与未感染Mtb的THP-1细胞的细胞毒活性为16.1%至47.2%。IL-15作用γδT细胞后的细胞毒活性(64.06%)与对照组(46.81%)相比明显增加(P<0.05)。结论人γδT细胞对Mtb感染THP-1细胞的杀伤活性明显高于对未感染Mtb的THP-1细胞的作用,杀伤活性随效靶比的增加而增加。IL-15可以增强人γδT细胞对Mtb感染巨噬细胞的细胞毒活性。

关键词： IL-15 结核杆菌 γδT细胞 THP-1细胞细胞毒活性

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基于529bp高度重复序列的弓形虫PCR诊断方法的建立

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中国生物制品学杂志 2010年第7期23卷 767-769页

作者：方强夏惠陈兴智徐家森王雪梅齐文娟孙新沈继龙蚌埠医学院病原生物学教研室安徽蚌埠233030 安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院免疫学教研室安徽蚌埠233030 安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的建立基于529bp高度重复序列的弓形虫PCR诊断方法。方法以弓形虫基因组中529bp的高度重复序列为诊断靶基因设计引物,并以其为模板经PCR扩增该基因,与pMD18-T载体连接,构建pMD18/Tox529bp重组质粒,测序鉴定正确后,经稀释标定作为标准... 详细信息

目的建立基于529bp高度重复序列的弓形虫PCR诊断方法。方法以弓形虫基因组中529bp的高度重复序列为诊断靶基因设计引物,并以其为模板经PCR扩增该基因,与pMD18-T载体连接,构建pMD18/Tox529bp重组质粒,测序鉴定正确后,经稀释标定作为标准品。优化PCR反应体系及条件,并验证该方法的灵敏度及特异性。结果所构建的pMD18/Tox529bp重组质粒经测序正确,建立的PCR方法最低可检出10个拷贝的目的基因,除对弓形虫基因组DNA扩增出特异性条带外,用该方法对健康志愿者全血、正常小鼠全血、间日疟原虫、恶性疟原虫及结核杆菌基因组DNA均未扩增出特异性条带。结论已建立了一种具有较高灵敏度和特异性的弓形虫PCR诊断方法 ,有望应用于人和动物弓形虫感染的筛查、临床诊断及流行病学调查。

关键词：弓形虫病重复序列,核酸聚合酶链反应

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Toll样受体4在强直性脊柱炎外周血单核细胞中的表达及意义

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实用医学杂志 2010年第21期26卷 3907-3909页

作者：武加标李志军李柏青唐洁任敏江苏大学附属武进医院血液风湿科江苏省常州市213100 蚌埠医学院第一附属医院风湿免疫科 233004 蚌埠医学院免疫学教研室感染与免疫安徽省重点实验室233030

目的:研究外周血单核细胞Toll样受体4(Toll-like receptor-4,TLR4)在强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)中的表达及其临床意义。方法:选取38例AS患者,应用流式细胞术测定外周血CD14+单核细胞TLR4表达的百分率,以及单核细胞表达CD1... 详细信息

目的:研究外周血单核细胞Toll样受体4(Toll-like receptor-4,TLR4)在强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)中的表达及其临床意义。方法:选取38例AS患者,应用流式细胞术测定外周血CD14+单核细胞TLR4表达的百分率,以及单核细胞表达CD14荧光强度。42例健康职工作为正常对照组。结果:AS外周血CD14+单核细胞TLR4表达的百分率[(30.45±5.17)%]明显高正常组[(13.14±6.22)%],差异有统计学意义(P<0.01)。而AS组单核细胞的CD14平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)(26.63±11.32)%明显低于对照组(49.81±19.67)%,,差异亦具有统计学意义(P<0.01)。结论:TLR4在AS中表达上调,其表达模式的变化可能与AS的发病有关,未有证据提示可作为评估AS病情的航向标。

关键词：脊柱炎强直性 Toll样受体4 单核细胞流式细胞术

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基因扫描技术检测人TCR δ2链CDR3多态性的方法

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蚌埠医学院学报 2010年第5期35卷 433-436页

作者：马飞郭术俊李柏青蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030

目的:建立利用基因扫描技术检测和分析人TCR δ2亚家族CDR3多态性的方法。方法:从健康成人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),或从PBMCs经IL-2或结核杆菌耐热抗原(Mtb-HAg)刺激培养7天的扩增细胞中提取RNA,用... 详细信息

目的:建立利用基因扫描技术检测和分析人TCR δ2亚家族CDR3多态性的方法。方法:从健康成人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),或从PBMCs经IL-2或结核杆菌耐热抗原(Mtb-HAg)刺激培养7天的扩增细胞中提取RNA,用RT-PCR方法扩增TCRδ2链基因中CDR3片段,分别用聚丙烯酰胺凝胶电泳和基因扫描观察CDR3长度并分析其多态性。结果:聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示,从三组细胞扩增的RT-PCR产物均显示较宽、模糊的条带,而基因扫描结果显示三组RT-PCR产物均可出现清晰可辨的扫描峰,并发现三组中Mtb-HAg组优势峰CDR3片段,较PBMC组和IL-2组长(P<0.01),后两者之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:基因扫描分析技术能方便、快速检测和分析人外周血γδT细胞TCRδ2链基因CDR3片段长度的多态性。

关键词：结核杆菌抗原 γδT细胞基因

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流式细胞术检测中性粒细胞产生活性氧方法学探讨

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蚌埠医学院学报 2010年第6期35卷 541-544,547页

作者：蔡辉姜丽娜李柏青蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030

目的：建立用流式细胞术检测人外周血中性粒细胞（polymorphonuclear cells,PMN）产生活性氧（reactive oxygen species,ROS）的方法。方法：健康人外周全血或用Percoll分离的PMN,加探荧光针双氢罗丹明123（DHR123）或2′,7′-二氯荧光... 详细信息

目的：建立用流式细胞术检测人外周血中性粒细胞（polymorphonuclear cells,PMN）产生活性氧（reactive oxygen species,ROS）的方法。方法：健康人外周全血或用Percoll分离的PMN,加探荧光针双氢罗丹明123（DHR123）或2′,7′-二氯荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）作用15 min,再加佛波醇酯（phorbo 12-myristate 13-acetate,PMA）于37℃作用5－90 min后,用流式细胞仪检测PMN内的罗丹明123（rhodamine 123,RHO）或氧化型二氯荧光素（dichlorofluorecin,DCF）的荧光强度,以反映PMN内ROS产生的水平。结果：以DHR123为荧光探针时,PMA刺激全血或分离PMN产生ROS的时间动力学相似,在37℃作用5－60 min ROS量呈递增趋势,且在60 min左右达到峰值,60－90 min时渐下降。以DCFH-DA为荧光探针时,PMA刺激全血PMN产生ROS,在37℃作用5 min时反应生成ROS量达到峰值,随后出现明显递减趋势,而PMA刺激分离PMN产生ROS在5－30 min逐渐增高并在60－90 min达平台期。实验中还发现甲醛试剂可以降低RHO的荧光强度。结论：采用流式细胞术检测PMN产生ROS是一种简便、可靠、稳定的方法。

关键词：中性粒细胞流式细胞术活性氧双氢罗丹明123 2′,7′-二氯荧光素二乙酸酯

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用于双分子荧光互补技术的Olig1/Id2基因真核表达载体的构建和鉴定

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蚌埠医学院学报 2010年第10期35卷 973-975页

作者：郭术俊赵保明吕合作胡建国蚌埠医学院组织移植安徽省重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院免疫学教研室感染与免疫安徽省重点实验室安徽蚌埠233030

目的:构建pBiFC-VN173-Olig1和pBiFC-VC155-Id2真核表达质粒,并进行鉴定。方法:以pEGFP-N3-Olig1真核表达质粒为模板扩增出Olig1基因,与pBiFC-VN173载体连接,构建pBiFC-VN173-Olig1真核表达质粒;利用RT-PCR方法从新生大鼠脊髓中提取Id2基因片段,与pBiFC-VC155载体连接,构建pBiFC-VC155-Id2真核表达质粒。对此2种质粒进行酶切鉴定、测序。结果:通过酶切鉴定、测序,证明pBiFC-VN173-Olig1和pBiFC-VC155-Id2重组质粒序列和编码框均正确构建成功。结论:成功构建了pBiFC-VN173-Olig1和pBiFC-VC155-Id2真核表达质粒,为进一步在活细胞内研究Olig1和Id2的相互作用提供了实验基础。

关键词：基因 Olig1 Id2 克隆酶切

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人白细胞介素23 p19亚基基因的克隆和序列分析

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蚌埠医学院学报 2010年第6期35卷 545-547页

作者：骆江坤方强齐文娟王雪梅蚌埠医学院免疫学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院病原生物学教研室安徽蚌埠233030

目的:克隆人白细胞介素-23(IL-23)p19亚基基因。方法:分离健康成年人外周血单个核细胞,常规培养后用脂多糖至终浓度为100 ng/m l刺激增殖12 h,收集细胞并提取细胞总RNA,用RT-PCR方法扩增人IL-23 p19 cDNA编码基因,克隆至pMD18-T载体,PC... 详细信息

目的:克隆人白细胞介素-23(IL-23)p19亚基基因。方法:分离健康成年人外周血单个核细胞,常规培养后用脂多糖至终浓度为100 ng/m l刺激增殖12 h,收集细胞并提取细胞总RNA,用RT-PCR方法扩增人IL-23 p19 cDNA编码基因,克隆至pMD18-T载体,PCR鉴定后进行序列测定。结果:RT-PCR产物电泳结果显示所扩增的基因为734 bp,基因测序显示其序列与GenBank报道的人IL-23 p19基因序列完全一致。结论:成功地克隆了人IL-23 p19 cDNA编码基因。

关键词：白细胞介素23,人 p19 RT-PCR 基因克隆序列测定

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抗结核杆菌耐热抗原单克隆抗体杂交瘤细胞的建立及其特性的初步鉴定

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蚌埠医学院学报 2010年第10期35卷 976-978页

作者：彭美玉李柏青山东万杰医学院医学检验学教研室山东淄博255213 蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030

目的:建立针对结核杆菌耐热抗原(Mtb-HAg)的单克隆杂交瘤细胞株,并对其产生的单克隆抗体的特异性和生物学活性作初步鉴定。方法:BALB/C小鼠用Mtb-HAg免疫3次后,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0以10∶1比例在50%PEG作用下细胞融合,随后在... 详细信息

目的:建立针对结核杆菌耐热抗原(Mtb-HAg)的单克隆杂交瘤细胞株,并对其产生的单克隆抗体的特异性和生物学活性作初步鉴定。方法:BALB/C小鼠用Mtb-HAg免疫3次后,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0以10∶1比例在50%PEG作用下细胞融合,随后在HAT培养液中进行选择性培养,常规有限稀释法筛选克隆和亚克隆化;用间接ELISA法测定单抗效价和特异性鉴定。结果:在细胞融合2次,筛选杂交瘤细胞3次和亚克隆化后,获得了3株杂交瘤细胞株,ⅠC12、ⅡE4、ⅡG8,效价分别为1∶32 000、1∶16 000、1∶16 000。其中ⅠC12杂交瘤株分泌的抗体仅与Mtb-HAg的蛋白峰Ⅰ有阳性反应,但ⅠC12单抗对Mtb-HAg激活人γδT细胞的活性没有明显影响。ⅡE4和ⅡG8杂交瘤株分泌的抗体与Mtb-HAg蛋白峰Ⅰ、峰Ⅱ、峰Ⅲ均无反应。结论:应用杂交瘤技术获得了三株能稳定分泌高滴度抗Mtb-HAg的单克隆抗体细胞株,其中ⅠC12对蛋白峰I有特异性。

关键词：结核杆菌抗原 Mtb-HAg 杂交瘤细胞株单克隆抗体

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