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热带病与寄生虫学 2009年第1期7卷 13-16页

作者：程启媛徐军杨小迪陈兴智孙新蚌埠医学院临床检验诊断学实验中心淮南市第一人民医院蚌埠医学院病原生物学教研室感染与免疫安徽省重点实验室

目的探讨弓形虫Prugniaud实验感染增强宿主的非特异性抗肿瘤效应,检测Prugniaud株单独感染或联合卡介苗(BCG)对小鼠恶性黑色素瘤的抑制作用。方法体内实验用绿色荧光标记的转基因小鼠每组9只,荷瘤后单独感染弓形虫Prugniaud株或联合BCG... 详细信息

目的探讨弓形虫Prugniaud实验感染增强宿主的非特异性抗肿瘤效应,检测Prugniaud株单独感染或联合卡介苗(BCG)对小鼠恶性黑色素瘤的抑制作用。方法体内实验用绿色荧光标记的转基因小鼠每组9只,荷瘤后单独感染弓形虫Prugniaud株或联合BCG,比较肿瘤生长情况,计算抑瘤率,并用流式细胞仪检测各组小鼠肿瘤细胞的凋亡率。RT-PCR检测肿瘤组织中VEGF的mRNA的表达水平。结果 B16组、BCG/B16组、TG/B16组、TG/BCG/B16组小鼠瘤重分别为3.237±0.552g、2.461±0.320g、1.521±0.263g、1.069±0.444g,各组肿瘤凋亡率分别为7.42±2.09%、9.27±2.10%、23.32±4.37%、43.88±6.33%;光镜下TG/B16组和TG/BCG/B16组小鼠能明显抑制肿瘤细胞生长,并且VEGF120/β-actin和VEGF120/β-actin低于其他组(TG/B16:0.167±0.011,0.190±0.015);TG/BCG/B16:0.140±0.015,0.171±0.011)。结论弓形虫感染对小鼠黑色素瘤有抑制作用,降低血管内皮生长因子mRNA表达量,并且在BCG联合作用下效果得到增强。

关键词：弓形虫 Prugniaud株感染黑色素瘤卡介苗

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紫外线辐照致弱RH株弓形虫速殖子及生物学性质的研究

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热带病与寄生虫学 2009年第2期7卷 63-66页

作者：徐军孙新杨小迪王媛媛程启媛淮南市第一人民医院检验科蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室

目的探讨紫外线辐照致弱RH株弓形虫的条件以及致弱弓形虫的生物学特性。方法以253.7nm紫外线在室温下辐照一定浓度的弓形虫速殖子,辐照时间为0、0.5、1、2、5、10、20、30、35、40min。台盼蓝染色观察辐照速殖子的活力;辐照速殖子与小... 详细信息

目的探讨紫外线辐照致弱RH株弓形虫的条件以及致弱弓形虫的生物学特性。方法以253.7nm紫外线在室温下辐照一定浓度的弓形虫速殖子,辐照时间为0、0.5、1、2、5、10、20、30、35、40min。台盼蓝染色观察辐照速殖子的活力;辐照速殖子与小鼠黑色素瘤B16细胞共同培养观察对细胞侵入以及在细胞内增殖情况;辐照速殖子接种小鼠,观察小鼠存活时间,判断速殖子在小鼠体内增殖情况;线粒体呼吸实验观察速殖子氧代谢功能;辐照2min速殖子免疫小鼠,60 d后接受同株弓形虫攻击,观察小鼠存活时间。结果紫外线辐照35min内速殖子保持活力,而辐照40min速殖子失去活力。辐照1～35min速殖子均能够侵入B16细胞但失去在细胞和小鼠体内的增殖能力,小鼠在30 d实验观察期内无死亡;与未经辐照的速殖子相比,辐照并没有影响速殖子的氧代谢功能;辐照速殖子免疫小鼠在受到攻击后存活时间较对照组明显延长(P<0.05)。结论在本实验条件下,紫外线辐照1～35min即可致弱弓形虫,致弱弓形虫失去增殖能力,但细胞侵入能力正常,并可以诱导一定的免疫保护力。

关键词：弓形虫速殖子紫外线辐照致弱生物学性质

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弓形虫溶解抗原抗小鼠B16黑色素瘤血管生成的实验研究

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中国基层医药 2009年第11期16卷 1946-1948,I0001页

作者：徐军孙新杨晓迪王媛媛王芳淮南市第一人民医院检验科安徽省淮南232007 蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室

目的观察弓形虫溶解抗原（TLA）对小鼠B16黑色素瘤生长以及肿瘤血管生成的影响。方法20只C57BL/6J小鼠皮下接种B16黑色素瘤细胞，建立荷瘤动物模型，从小鼠荷瘤的第7天开始，每隔2天实验组小鼠经腹腔注射TLA0．1ml，对照组小鼠注射同等... 详细信息

目的观察弓形虫溶解抗原（TLA）对小鼠B16黑色素瘤生长以及肿瘤血管生成的影响。方法20只C57BL/6J小鼠皮下接种B16黑色素瘤细胞，建立荷瘤动物模型，从小鼠荷瘤的第7天开始，每隔2天实验组小鼠经腹腔注射TLA0．1ml，对照组小鼠注射同等剂量0．9％氯化钠注射溶液，荷瘤21d后处死小鼠剥取肿瘤，测量肿瘤体积与重量，计算抑瘤率，免疫组化法检测肿瘤微血管密度（MVD）与血管内皮生长因子（VEGF）表达情况。结果TLA显著抑制了小鼠体内黑色素瘤生长，实验组肿瘤体积与重量明显小于对照组（P〈0．05），抑瘤率为49．6％。实验组与对照组的MVD值分别为（44．4000±4．7888）、（31．9000±2．6012），两组相比较差异有统计学意义（P〈0．05）。实验组肿瘤VEGF表达明显低于对照组（P〈0．05）。结论TLA能够抑制小鼠B16黑色素瘤生长，其抗瘤机制可能与抗血管生成有关。

关键词：弓形虫病抗原黑色素瘤

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弓形虫感染小鼠血清对小鼠B16黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响

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中国病原生物学杂志 2009年第3期4卷 202-204,223,F0003页

作者：徐军孙新杨小迪王媛媛程启媛淮南市第一人民医院检验科安徽淮南232007 蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233003

目的观察RH株弓形虫感染小鼠血清在体外对小鼠B16黑色素瘤细胞增殖以及凋亡的影响。方法B16细胞在含5%、10%和20%RH株弓形虫感染小鼠血清RPM1640中培养24和48 h,四甲基氮噻唑蓝(MTT)法检测B16细胞增殖抑制率;在10%、20%感染小鼠血清中培... 详细信息

目的观察RH株弓形虫感染小鼠血清在体外对小鼠B16黑色素瘤细胞增殖以及凋亡的影响。方法B16细胞在含5%、10%和20%RH株弓形虫感染小鼠血清RPM1640中培养24和48 h,四甲基氮噻唑蓝(MTT)法检测B16细胞增殖抑制率;在10%、20%感染小鼠血清中培养24 h,Annexin V/PI染色,流式细胞检测细胞凋亡,HE染色观察细胞形态改变。结果正常血清能促进B16细胞增殖。5%、10%和20%弓形虫感染小鼠血清与B16细胞共孵育24和48 h,细胞生长抑制率分别为(9.06±0.36)%(、14.77±0.94)%(、23.74±0.5)%和(14.82±0.77)%(、24.56±1.04)%、(39.77±2.82)%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);10%、20%弓形虫感染鼠血清组B16细胞24 h凋亡率分别为(26.01±3.27)%和(44.55±2.87)%,显著高于对照组凋亡率(5.01±2.62)(P<0.05)。弓形虫感染鼠血清作用的B16细胞生长密度明显降低,细胞核固缩、浓染。结论RH株弓形虫感染血清能够抑制B16细胞增殖并促进其凋亡。

关键词：弓形虫小鼠血清 B16细胞细胞增殖细胞凋亡

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新生儿脐带血CD4^＋CD25^high调节性T细胞Foxp3的表达

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细胞与分子免疫学杂志 2008年第4期24卷 365-367页

作者：唐洁李柏青阮洁张林杰安徽医科大学基础医学院免疫学教研室安徽合肥230032 蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院第二附属医院妇产科安徽蚌埠233000

目的:检测新生儿脐带血CD4+CD25high调节性T细胞(Treg)数量及胞内转录因子Foxp3的表达,探讨Treg细胞在新生儿期的表达特点。方法:采集新生儿脐带血(n=15)和成人外周血(n=12),密度梯度离心法获取单个核细胞用荧光标记单克隆抗体(mAb)作... 详细信息

目的:检测新生儿脐带血CD4+CD25high调节性T细胞(Treg)数量及胞内转录因子Foxp3的表达,探讨Treg细胞在新生儿期的表达特点。方法:采集新生儿脐带血(n=15)和成人外周血(n=12),密度梯度离心法获取单个核细胞用荧光标记单克隆抗体(mAb)作表面和胞内染色后,在流式细胞仪上检测CD4+CD25high Treg细胞的数量及其胞内转录因子Foxp3的表达。结果:脐带血Treg细胞占CD3+CD4+T细胞的比例(3.86%±1.63%)明显高于成人外周血(0.87%±0.74%,P<0.01);而脐带血Treg细胞中表达Foxp3的比例明显低于外周血Treg细胞(23.21%±8.9%vs71.3%±11.6%,P<0.01)。结论:虽然新生儿脐带血CD4+CD25high Treg细胞数量明显高于成人外周血,但Foxp3+细胞数量明显低于成年人,提示在功能上可能尚未成熟。

关键词：调节性T细胞转录因子新生儿脐带血

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蛋白激酶Cθ信号途径在结核分枝杆菌抗原激活人γδT细胞增殖和分化中的作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第10期28卷 934-938页

作者：朱安友陈礼文王凤超李兴武葛鑫唐洁李柏青蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室 233030 蚌埠医学院第一附属医院检验科

目的研究蛋白激酶Cθ（protein kinase Cθ，PKCθ）信号途径在结核分枝杆菌抗原（Mycobacterium tubemulosis antigen，Mtb—Ag）激活人γδT细胞增殖和分化中的作用。方法健康人外周血单个核细胞（PBMC）用Mtb—Ag和IL-2优势刺激和扩... 详细信息

目的研究蛋白激酶Cθ（protein kinase Cθ，PKCθ）信号途径在结核分枝杆菌抗原（Mycobacterium tubemulosis antigen，Mtb—Ag）激活人γδT细胞增殖和分化中的作用。方法健康人外周血单个核细胞（PBMC）用Mtb—Ag和IL-2优势刺激和扩增γδT细胞，或预先用5．0umol／L Rottlerin（楸毒素）预处理，培养不同时间后，用流式细胞术（FCM）检测γδT细胞表面活化分子和细胞因子表达；同时采用活体染料羧基荧光素乙酰乙酸（CFSE）标记细胞，流式细胞术分析Mtb—Ag刺激γδT细胞后的增殖和各子代细胞百分率。结果PBMC经Mtb—Ag刺激后3d，γδT细胞CD69和CD25表达分别为46．2％和45．6％，而Rottlerin预处理显著地抑制了CD69和CD25表达（P〈0．01）；PBMC经Mtb—Ag激活培养5、10和15d，培养扩增细胞中的γδT细胞比例分别为9．6％、54．6％和82．4％，其中第5天已有少部分1趼细胞发生增殖，第10天和第15天时几乎全部γδT细胞分裂都在6代以上，用Rotderin预处理，显著抑制了γδT细胞增殖反应，但在培养第10天后仍有少部分γδT细胞发生增殖反应；同时在培养第7天、14天和21天，用PMA（佛波酯）＋Ionomyein（离子霉素）再刺激后，产生IFN-γ的γδT细胞均在80％左右；培养21d时，有2．6％的γδT细胞表达IL-4。在Rottlerin预处理组产生TH1型细胞因子IFN-γ的γδT细胞均显著减少（P〈0．05），而γδT细胞表达TH2型细胞因子IL-4则几乎完全抑制（P〈0．01）。结论PKCθ信号途径在Mtb—Ag刺激γδT细胞的增殖和分化中均起重要作用。

关键词： γδT细胞蛋白激酶Cθ 增殖结核分枝杆菌抗原

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粉尘螨生殖系统形态学研究

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昆虫学报 2008年第8期51卷 810-816页

作者：吴桂华刘志刚孙新深圳大学医学院过敏反应与免疫学研究所广东深圳518060 蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030

粉尘螨Dermatophagoides farinae是一种重要的医学螨类。本文用光镜和扫描电镜研究了粉尘螨雌雄生殖系统的形态和结构。结果表明:雄性生殖系统由睾丸、输精管、附腺、射精管、阳茎及附属交配器官组成。睾丸位于血腔末端,不成对,精原细... 详细信息

粉尘螨Dermatophagoides farinae是一种重要的医学螨类。本文用光镜和扫描电镜研究了粉尘螨雌雄生殖系统的形态和结构。结果表明:雄性生殖系统由睾丸、输精管、附腺、射精管、阳茎及附属交配器官组成。睾丸位于血腔末端,不成对,精原细胞、精母细胞和精子依照精子发育的顺序有规则地分布在其内部。雌性生殖系统包括交配孔、囊导管、储精囊、囊导管、卵巢、输卵管、子宫、产卵管及产卵孔,其中卵巢由一个中央营养细胞和围绕其周围的卵母细胞组成。

关键词：粉尘螨生殖系统形态学扫描电镜

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转录因子RORγt对T细胞亚群产生IFN-γ的调控作用

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蚌埠医学院学报 2008年第6期33卷 652-655页

作者：薛祝平马飞唐洁李柏青蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030

目的:探讨转录因子维A酸相关孤独受体γt(RORγt)对T细胞亚群产生IFN-γ的调控作用。方法:健康成人外周血单个核细胞用CD3单克隆抗体和IL-2激活和扩增T细胞,活化T细胞用脂质体法转染人工合成的RORγt基因特异性短干扰RNA(siRNA)序列3个... 详细信息

目的:探讨转录因子维A酸相关孤独受体γt(RORγt)对T细胞亚群产生IFN-γ的调控作用。方法:健康成人外周血单个核细胞用CD3单克隆抗体和IL-2激活和扩增T细胞,活化T细胞用脂质体法转染人工合成的RORγt基因特异性短干扰RNA(siRNA)序列3个片段(RORγt-siRNA-982,-1026,-1197),RT-PCR半定量法检测活化T细胞转染siRNA后RORγt基因表达,流式细胞仪检测不同T细胞亚群产生IFN-γ细胞的比例。结果:活化T细胞转染RORγt-siRNA后,对RORγt基因表达的检测显示,RORγt-siRNA-982序列无抑制作用,而RORγt-siRNA-1026和-1197序列均有明显抑制作用。活化T细胞转染RORγt-siRNA-1026后,产生IFN-γ细胞百分数在CD4+T细胞(32.78±3.41)中,明显低于未转染组(44.54±1.75)(P<0.01)。结论:转录因子RORγt对T细胞,特别是对CD4+T细胞产生IFN-γ有正调控作用。

关键词： T细胞维A酸相关孤独受体短干扰RNA γ-干扰素流式细胞术

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正常人外周血自然杀伤T细胞(CD3^+CD16^+CD56^+)比例

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蚌埠医学院学报 2008年第4期33卷 379-382页

作者：姚春艳金齐力姜丽娜唐洁李柏青蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030

目的:探讨正常人外周血中自然杀伤T(NKT)细胞(CD3+CD16+CD56+)比例的95%参考值范围。方法:取141名正常成年人和30例肺癌患者外周血,直接双色荧光抗体染色,溶血洗涤后用流式细胞仪检测NKT细胞和T细胞各亚群的数量。分析获取的结果以百分... 详细信息

目的:探讨正常人外周血中自然杀伤T(NKT)细胞(CD3+CD16+CD56+)比例的95%参考值范围。方法:取141名正常成年人和30例肺癌患者外周血,直接双色荧光抗体染色,溶血洗涤后用流式细胞仪检测NKT细胞和T细胞各亚群的数量。分析获取的结果以百分位数计算95%的正常值范围。结果:141名正常人外周血NKT细胞(CD3+CD16+CD56+)的百分率平均数为4.16%,标准差为4.13%,以百分位数法获得95%参考值范围为(0.78~11.71)%;18~30岁组、31~50岁组和51~70岁组的NKT细胞(CD3+CD16+CD56+)比例的平均数分别为4.64%,3.91%和3.57%,差异无统计学意义(P>0.05);30例肺癌患者组与正常组该项指标的差异亦无统计学意义(P>0.05)。同时检测到正常人CD3+细胞、CD3+CD4+细胞、CD3+CD8+细胞、CD3+CD4+/CD3+CD8+比值以及NK细胞(CD3-CD16+CD56+)的比例均与大多数报道的正常值相似。结论:正常人外周血中NKT细胞(CD3+CD16+CD56+)比例的95%参考值范围是(0.78~11.71)%,平均数为4.16%,中位数为2.97%,虽然NKT细胞比例随年龄增加而减少,但两者之间无直线相关关系。未发现肺癌组患者NKT细胞比例与正常人有显著性差异。

关键词：淋巴细胞杀伤细胞,自然流式细胞术血细胞计数

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Th1型相关细胞因子对人中性粒细胞吞噬功能的影响

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蚌埠医学院学报 2008年第3期33卷 256-259页

作者：姜丽娜姚春艳金齐力李柏青蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030

目的：用流式细胞术观察Th1型细胞因子IL-2和IFN-γ,以及Th1细胞诱导因子IL-12对人外周血中性粒细胞吞噬功能的影响。方法：用不同浓度异硫氰酸荧光素（FITC）在碳酸盐缓冲液（CB,pH9.5）和磷酸盐缓冲盐水（PBS,pH7.2）中标记大肠埃希... 详细信息

目的：用流式细胞术观察Th1型细胞因子IL-2和IFN-γ,以及Th1细胞诱导因子IL-12对人外周血中性粒细胞吞噬功能的影响。方法：用不同浓度异硫氰酸荧光素（FITC）在碳酸盐缓冲液（CB,pH9.5）和磷酸盐缓冲盐水（PBS,pH7.2）中标记大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌（金葡菌）,流式细胞术检测细菌标记率。取新鲜健康成人外周血与标记细菌于37℃孵育5-20 min后,洗涤和溶血,用流式细胞术检测中性粒细胞吞噬百分率。或外周血预先分别与IL-2、IFN-γ及IL-12孵育2 h,再加标记细菌孵育5 min,流式细胞术检测中性粒细胞吞噬率,并与对照组比较计算吞噬增加比率。结果：FITC标记大肠埃希菌在碱性的CB中标记率较高,而金葡菌在中性的PBS标记率较高（P〈0.01）。健康人外周血中性粒细胞对大肠埃希菌和金葡菌的吞噬率在5 min时分别为45%和38%,15-20 min达到平台期,分别为86%-88%和83%-89%。外周血预先用IL-2（20u/ml）、IFN-γ（50 u/ml）或IL-12（30 u/ml）作用后,中性粒细胞对大肠埃希菌的吞噬率分别增加19%、19%和26%;对金葡菌的吞噬率分别增加25%、23%和35%。结论：Th1型细胞因子IL-2、IFN-γ及Th1型诱导细胞因子IL-12均能增强人中性粒细胞吞噬功能,Th1型细胞因子和IL-12均具有增强中性粒细胞功能的作用。

关键词：白细胞介素-2 干扰素-γ 白细胞介素-12 中性粒细胞吞噬作用流式细胞术

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