检索结果-内蒙古大学图书馆

中国实验血液学杂志 2016年第3期24卷 897-902页

作者：姚春艳魏婷婷郭路路单鹏李柏青蚌埠医学院医学检验系免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233000 蚌埠医学院医学检验系安徽蚌埠233000

目的:探讨3种固有样淋巴细胞i NKT细胞、γδT细胞和B1细胞在正常人外周血淋巴细胞中的百分率及其相关性。方法:采用六色荧光染色和流式细胞术检测i NKT细胞、γδT细胞和B1细胞及适应性T淋巴细胞、B2细胞在50例正常人外周血淋巴细胞中... 详细信息

目的:探讨3种固有样淋巴细胞i NKT细胞、γδT细胞和B1细胞在正常人外周血淋巴细胞中的百分率及其相关性。方法:采用六色荧光染色和流式细胞术检测i NKT细胞、γδT细胞和B1细胞及适应性T淋巴细胞、B2细胞在50例正常人外周血淋巴细胞中所占比例,应用统计软件分析各群细胞在正常人外周血中的频数分布规律及其相关性。结果:i NKT细胞在50例正常人外周血淋巴细胞中百分率为0.18%(0.01%-2.01%),γδT细胞为4.90%(1.45%-20.14%),B1细胞为1.62%(0.20%-3.77%),适应性T细胞为63.52%(33.20%-83.22%),B2细胞为6.64%(3.07%-13.80%)。在B淋巴细胞群体中以B2细胞占多数,其百分率为81.43%(57.90%-94.12%),B1细胞相对较少为17.28%(5.28%-41.13%);在T淋巴细胞群体中i NKT细胞、γδT细胞和适应性T细胞的百分率分别为0.32%(0.01%-3.6%)、7.55%(3.04%-27.66%)、91.98%(72.22%-96.86%)。相关性分析显示,i NKT细胞和γδT细胞间、γδT细胞和适应性T细胞间以及B1细胞和B2细胞间具有显著正相关性(r=0.39,P=0.0056;r=0.602 8,P<0.000 1;r=0.4791,P=0.000 4),其余各指标间均无相关性。女性血液中i NKT细胞百分含量为0.29%(0.06%-2.01%),显著高于男性0.12%(0.01%-1.37%)(P<0.05),其余各亚群含量无性别差异。结论:正常人外周血淋巴细胞中γδT细胞、B1细胞和i NKT细胞百分率显著低于适应性淋巴细胞,其在外周血中含量依次递减;除i NKT细胞外,其余各淋巴细胞亚群含量无性别差异。

关键词：成年人血液固有样淋巴细胞频数分布固有免疫细胞适应性免疫细胞

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重组猪单链IL-12的构建及真核表达

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南方医科大学学报 2011年第10期31卷 1687-1692页

作者：王雪梅袁远英方强夏惠孙新李柏青蚌埠医学院病原生物学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院免疫学教研室安徽蚌埠233030

目的克隆猪IL-12(pIL-12)p35和p40亚单位cDNA,构建含有重组猪单链IL-12(pscIL-12)融合基因的真核表达质粒并进行表达。方法分别从正常成年肉猪的外周血单个核细胞(PBMCs)和脾淋巴细胞中提取总RNA,经RT-PCR分别获得pIL-12 p35和p40亚单... 详细信息

目的克隆猪IL-12(pIL-12)p35和p40亚单位cDNA,构建含有重组猪单链IL-12(pscIL-12)融合基因的真核表达质粒并进行表达。方法分别从正常成年肉猪的外周血单个核细胞(PBMCs)和脾淋巴细胞中提取总RNA,经RT-PCR分别获得pIL-12 p35和p40亚单位编码序列的cDNA,应用重叠延伸PCR技术通过一柔性接头(linker)(Gly4Ser)3串联这两个亚基构建融合基因pscIL-12,将融合基因pscIL-12插入pcDNA3.1(+)真核表达载体,通过阳离子聚合物介导转染CHO-K1细胞进行表达,RT-PCR鉴定pscIL-12融合基因在真核细胞中的表达。结果所克隆的pIL-12 p35亚基和p40亚基的编码基因序列和构建的融合基因pscIL-12序列均经PCR、酶切、测序得以证实;融合基因pscIL-12在CHO-K1细胞中成功转录。结论成功构建了pcDNA3.1(+)-pscIL-12融合基因的真核表达质粒;pcDNA3.1(+)-pscIL-12在CHO-K1细胞中成功转录,为进一步探讨pscIL-12融合蛋白的生物学活性和疫苗佐剂效应奠定了基础。

关键词：白细胞介素-12 单链猪分子克隆真核表达 CHO-K1细胞

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SCF/c-Kit信号促进膀胱癌T24细胞侵袭作用

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南方医科大学学报 2014年第4期34卷 507-510页

作者：郭术俊陶象男汪忆梦唐洁申林宋传旺蚌埠医学院免疫学教研室//安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院科研中心安徽蚌埠233030

目的探讨SCF/c-Kit信号对膀胱癌T24细胞侵袭性的影响。方法采用Western blot检测T24细胞c-Kit表达及经SCF刺激后PI3K途径激活情况;Transwell侵袭实验(直接与间接计数法)观察T24细胞经过SCF(1 ng/ml)刺激前后及使用Wortmannin(特异性PI3... 详细信息

目的探讨SCF/c-Kit信号对膀胱癌T24细胞侵袭性的影响。方法采用Western blot检测T24细胞c-Kit表达及经SCF刺激后PI3K途径激活情况;Transwell侵袭实验(直接与间接计数法)观察T24细胞经过SCF(1 ng/ml)刺激前后及使用Wortmannin(特异性PI3K阻断剂)预处理后侵袭性的变化。结果 T24细胞存在c-Kit蛋白的表达并且经SCF(1 ng/ml)作用24 h后,出现明显的磷酸化Akt;与对照组相比,SCF(1 ng/ml)刺激组穿过聚碳酸酯膜的T24细胞数明显增多(P<0.01),而Wortmannin预刺激阻断了SCF的这种效应。结论 SCF/c-Kit信号促进了T24细胞的侵袭性,这一效应是由PI3K途径介导的。

关键词： SCF c-Kit信号 T24细胞侵袭性膀胱癌

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结核分枝杆菌抗原和TCRγδ抗体诱导人γδT细胞分化并产生IL-17

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细胞与分子免疫学杂志 2015年第2期31卷 226-230页

作者：陈立夏惠汪洪涛盛玲玲徐志庆孙垚唐洁李柏青蚌埠医学院病原生物学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院感染与免疫安徽省重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院免疫学教研室安徽蚌埠233030

目的探讨结核分枝杆菌耐热抗原（MTB—HAg）和抗T细胞受体γδ单克隆抗体（TCRγδ／5mAb）在刺激人γδT细胞诱导分化产生IL-17中的作用。方法健康人外周血单个核细胞经过免疫磁珠分选得到纯化的γδT细胞后，加入MTB-HAg或包被的TCRγ... 详细信息

目的探讨结核分枝杆菌耐热抗原（MTB—HAg）和抗T细胞受体γδ单克隆抗体（TCRγδ／5mAb）在刺激人γδT细胞诱导分化产生IL-17中的作用。方法健康人外周血单个核细胞经过免疫磁珠分选得到纯化的γδT细胞后，加入MTB-HAg或包被的TCRγδ 5mAb，再加或不加CD28mAb进行刺激，同时加或不加IL-17极化细胞因子组合（CK）（IL-1β、IL-6、TGF-β和IL-23），极化诱导培养10—12d。然后收集诱导极化培养的γδT细胞，经佛波醇酯和离子霉素再刺激6h后，用ELISPOT法检测产生IL—17的细胞数。结果经刺激和诱导分化培养的γδT细胞用ELISPOT法检测产生IL-17的细胞数发现，TCRγδ 8mAb联合CK组与TCRγδ／8mAb组相比明显增加，TCRγδ mAb联合CD28mAb组与TCRγδ mAb同时联合CD28mAb和CK组相比明显减少。TCRγδ 8mAb同时联合CD28mAb和CK组与TCRγδ mAb联合CK组相比明显增多。MTB—Hag同时联合CD28mAb和CK组与TCRγδ mAb同时联合CD28mAb和CK组相比显著减少，但与MTB—HAg联合CD28mAb组相比明显增多。结论诱导Th17分化的CK（IL-1β、IL-6、TGF-β和IL-23）也能诱导人γδT细胞分化产生IL-17，TCRγδ 8mAb刺激γδT细胞增殖后诱导分化产生IL—17的活性比MTB—HAg更强。另外，CD28在TCRγδ 8mAb激活γδT细胞诱导产生IL-17的过程中也有重要作用。

关键词：结核分枝杆菌耐热抗原 γδT细胞 IL-17

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结核分枝杆菌抗原B细胞表位肽对人外周γδT细胞的特异性激活作用

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中国免疫学杂志 2015年第7期31卷 884-889页

作者：王充李柏青(指导) 蚌埠医学院免疫学教研室感染与免疫安徽省重点实验室蚌埠233030

目的：探讨结核分枝杆菌（Mtb）抗原中B细胞多肽表位能否特异性刺激γδT细胞的活化和增殖。方法：选择文献报道的Mtb抗原中B细胞识别的多肽表位（BP）序列,人工合成6条多肽（BP1~BP6）和本实验室筛选的γδT细胞识别的2条表位多肽（TP... 详细信息

目的：探讨结核分枝杆菌（Mtb）抗原中B细胞多肽表位能否特异性刺激γδT细胞的活化和增殖。方法：选择文献报道的Mtb抗原中B细胞识别的多肽表位（BP）序列,人工合成6条多肽（BP1~BP6）和本实验室筛选的γδT细胞识别的2条表位多肽（TP）,包被24孔培养板,采集健康成年人外周血分离获取PBMC,经CFSE染色后放入分别包被BP1至BP6和TP14、15的培养板中刺激培养。以Mtb耐热抗原（Mtb-HAg）作为阳性对照,以IL-2作为阴性对照。培养12 d后,收集扩增细胞,用流式细胞术检测γδT细胞百分率及增殖指数（PI）。结果：用Wilcoxon符号秩检验将各组与阴性对照进行配对样本比较,发现14例的γδT细胞百分率在BP2、BP4、TP14、TP15组和Mtb-HAg组的增加具有统计学意义（P〈0.05）;7例的γδT细胞增殖指数在BP2、BP4、BP5、BP6、TP14组和TP15组的增加具有统计学意义（P〈0.05）。结论：Mtb抗原中B细胞表位肽片段,与γδT细胞的表位肽类似,在体外能刺激人PBMC中γδT细胞的增殖。虽然对γδT细胞刺激增殖和活化有个体差异性,但仍有力提示B细胞表位肽可特异性激活γδT细胞。

关键词： Mtb 抗原 γδT细胞 B细胞表位

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IL-12增强结核病患者中性粒细胞吞噬和杀伤结核杆菌的活性

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细胞与分子免疫学杂志 2011年第11期27卷 1191-1194页

作者：姜丽娜姚春艳金齐力贺文欣李柏青蚌埠医学院免疫学教研室蚌埠医学院病理生理学教研室感染与免疫安徽省重点实验室安徽蚌埠233030

目的:观察IL-12对结核病患者外周血中性粒细胞(PMN)对结核分枝杆菌(***)吞噬和杀伤功能的影响。方法:结核病患者和正常人外周血与异硫氰酸荧光素(FITC)标记的***共同孵育不同时间后,用流式细胞术(FCM)检测PMN对***的吞噬率;结核病患者... 详细信息

目的:观察IL-12对结核病患者外周血中性粒细胞(PMN)对结核分枝杆菌(***)吞噬和杀伤功能的影响。方法:结核病患者和正常人外周血与异硫氰酸荧光素(FITC)标记的***共同孵育不同时间后,用流式细胞术(FCM)检测PMN对***的吞噬率;结核病患者和正常人外周血均加入2'7'二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)作用,同时加或者不加***共同孵育不同时间后,用FCM检测PMN的活化率并计算活性氧(ROS)产生量;不同浓度IL-12预先作用外周血后,再用上述方法检测PMN对***吞噬率,活化率及产生ROS的变化。结果:结核病患者和正常人PMN对***吞噬率,PMN活化率和ROS产生均随时间延长而增加,但结核病患者5 min吞噬率(51.82±6.93)%高于正常人(47.20±4.26)%(P<0.05);IL-12预先作用后,结核病患者和正常人PMN吞噬率、PMN活化率和ROS的产生均随浓度增大而显著增加,两者之间无显著性差异。结论:结核病患者外周血PMN对***的吞噬功能以及ROS产生与正常人无显著性差异,仅早期吞噬率较高。IL-12略增强PMN吞噬和产生ROS的反应能力。

关键词：结核中性粒细胞吞噬活性氧 IL-12

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Th1型和Th2型细胞因子对人中性粒细胞吞噬结核杆菌活性的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第6期30卷 576-580页

作者：姜丽娜李柏青姚春艳金齐力蚌埠医学院免疫学教研室感染与免疫安徽省重点实验室233030 蚌埠医学院病理生理学教研室

目的建立用流式细胞术检测人外周血中性粒细胞（PMNs）吞噬结核分枝杆菌（Mtb）的方法 ,并探讨Th1和Th2型细胞因子对PMNs吞噬Mtb活性的影响.方法运用抗酸染色、激光共聚焦显微镜观察人PMNs吞噬Mtb,并用流式细胞术检测人PMNs对FTTC标记... 详细信息

目的建立用流式细胞术检测人外周血中性粒细胞（PMNs）吞噬结核分枝杆菌（Mtb）的方法 ,并探讨Th1和Th2型细胞因子对PMNs吞噬Mtb活性的影响.方法运用抗酸染色、激光共聚焦显微镜观察人PMNs吞噬Mtb,并用流式细胞术检测人PMNs对FTTC标记Mtb的吞噬活性.外周血预先分别与IL-2、IFN-γ、GM-CSF和IL-4等细胞因子孵育,再加FTTC标记Mtb后,用流式细胞术检测PMNs对Mtb吞噬率,并与对照组比较吞噬率的变化.结果抗酸染色和激光共聚焦显微镜均能观测到人PMNs吞噬Mtb.用流式细胞术检测健康人外周血PMNs对Mtb的吞噬率在5 min时为47%,15～20 min达到平台期,为66%～72%.外周血预先加IL-2或IFN-γ作用后,PMNs对Mtb的吞噬率可分别增加76.7%和75.2%;而预先加IL-4作用后,吞噬率降低31.7%.结论 IL-2和IFN-γ对PMNs吞噬Mtb功能有增强作用,而IL-4有降低作用,表明Th1型和Th2型细胞因子参与调节PMNs抗结核杆菌感染的免疫作用.

关键词：中性粒细胞 IL-2 IL-4 IFN-γ 流式细胞术

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白细胞介素17对结核病患者中性粒细胞凋亡的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2014年第8期30卷 833-836页

作者：姜丽娜姚春艳金齐力李柏青蚌埠医学院病理生理学教研室感染与免疫安徽省重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院免疫学教研室

目的探讨白细胞介素-17（IL-17）对结核病患者外周血中性粒细胞（PMN）凋亡的影响以及可能涉及的信号通路。方法取结核病患者和健康人外周血PMN培养0-24 h, annexinⅤ染色后流式细胞术检测PMN凋亡率; 或加不同浓度IL-17刺激培养24 h... 详细信息

目的探讨白细胞介素-17（IL-17）对结核病患者外周血中性粒细胞（PMN）凋亡的影响以及可能涉及的信号通路。方法取结核病患者和健康人外周血PMN培养0-24 h, annexinⅤ染色后流式细胞术检测PMN凋亡率; 或加不同浓度IL-17刺激培养24 h再检测PMN凋亡率; 或用MAPK特异性抑制剂U0126预处理30 min 后, 再加IL-17培养24 h后检测PMN的凋亡。结果结核病患者和正常人PMN凋亡率均随培养时间延长而增加（P〈0.05）, 结核病患者PMN在0、6、12、24 h 时的annexin Ⅴ＋细胞分别为（4.49±1.39）%、（21.89±2.90）%、39.96±4.15）%、（68.35±7.01）%, 均分别高于正常人组的（2.65±0.75）%、（11.00 ±1.72）%、（25.84±3.90）%, （45.59±4.10）%（P〈0.05）。而经IL-17刺激后, 结核病患者与正常人PMN的凋亡率, 在IL-17 0.5 μg/L组, 分别为（59.81±7.19）%和（34.65 ±4.79）%; 在IL-17 5 μg/L组, 分别为（51.62±6.91）%和（29.04±3.62）%; 均低于未加IL-17对照组（68.35±7.01）%和（45.59±4.10）%（P〈0.05）; 而在IL-17 50 μg/L组, 凋亡率则分别达到（76.04±5.59）%和（53.24±4.62）%, 明显高于对照组（P〈0.05）。预先用U0126处理, 可大部分阻断IL-17对结核病患者和正常人PMN凋亡的抑制作用。结论结核病患者和正常人PMN凋亡率均随培养时间延长而增加, 且结核病患者PMN凋亡率高于正常人。IL-17较低浓度延迟凋亡, 较高浓度促进凋亡。IL-17抑制PMN凋亡的作用和ERK途径有关。

关键词：结核中性粒细胞白细胞介素-17 凋亡

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H37Rv结核分枝杆菌蛋白脯氨酸-谷氨酸8(PE8)的表达及其兔多克隆抗体制备

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细胞与分子免疫学杂志 2020年第6期36卷 549-554页

作者：许涛张丽钱中清李柏青汪洪涛蚌埠医学院检验医学院临床检验诊断学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院检验医学实验中心安徽蚌埠233030 蚌埠医学院免疫学教研室感染与免疫安徽省重点实验室安徽蚌埠233030

目的克隆Rv1040c结核分枝杆菌脯氨酸-谷氨酸8(PE8)基因、构建pET28a-PE8重组载体和表达纯化PE8蛋白,制备抗PE8多克隆抗体。方法利用重组克隆技术,将PE8基因克隆至原核表达载体pET28a,测序鉴定后,转化至大肠杆菌BL21(DE3),用0.5 mmol/L... 详细信息

目的克隆Rv1040c结核分枝杆菌脯氨酸-谷氨酸8(PE8)基因、构建pET28a-PE8重组载体和表达纯化PE8蛋白,制备抗PE8多克隆抗体。方法利用重组克隆技术,将PE8基因克隆至原核表达载体pET28a,测序鉴定后,转化至大肠杆菌BL21(DE3),用0.5 mmol/L异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达、稀释复性与纯化。用纯化PE8蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,间接ELISA和Western blot法进行效价及特异性鉴定。结果成功构建pET28a-PE8原核表达载体,ITPG诱导后PE8蛋白在大肠杆菌主要以包涵体的形式表达,复性后纯化PE8蛋白纯度达90%,纯化多克隆抗体效价为1∶430080以上,能与PE8蛋白发生特异性反应。结论大肠杆菌表达的PE8重组蛋白免疫新西兰大白兔获得高效价的多克隆抗体。

关键词：结核分枝杆菌(MTB)脯氨酸-谷氨酸8(PE8)蛋白 Rv1040c 多克隆抗体

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结核分枝杆菌抗原激活核因子κB延迟中性粒细胞自发凋亡的作用

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中华检验医学杂志 2007年第3期30卷 306-309页

作者：宋传旺唐洁刘琦葛晓松蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室 233003

目的探讨结核分枝杆菌抗原(Mtb-Ag)对中性粒细胞自发凋亡的影响。方法取健康成人外周血分离中性粒细胞,加 Mtb-Ag 培养24 h,或用核因子κB(NF-κB)抑制剂 N-甲苯磺基-L-苯乙胺酰氯甲基酮(TPCK)预处理30 min 后,膜联蛋白 V(AnnexinV/PI)... 详细信息

目的探讨结核分枝杆菌抗原(Mtb-Ag)对中性粒细胞自发凋亡的影响。方法取健康成人外周血分离中性粒细胞,加 Mtb-Ag 培养24 h,或用核因子κB(NF-κB)抑制剂 N-甲苯磺基-L-苯乙胺酰氯甲基酮(TPCK)预处理30 min 后,膜联蛋白 V(AnnexinV/PI)染色,流式细胞术观察细胞凋亡情况;并用凝胶电泳迁移率变动分析(EMSA)化学发光法检测 Mtb-Ag 刺激0、1、2、4、6、24 h 后,中性粒细胞 NF-κB的 DNA 结合活性。结果加 Mtb-Ag(1.125 mg/ml)培养的中性粒细胞凋亡率(32%±3%)与中性粒细胞体外培养24 h 后自发凋亡率(55%±6%)相比,明显降低(P<0.05)。Mtb-Ag(1.125 mg/ml)作用中性粒细胞1 h 后明显可见 NF-κB活化,2 h NF-κB的 DNA 结合活性达高峰,24 h 回到静息水平;经 TPCK(30μmol/L)预处理后可阻断 Mtb-Ag 的抑制凋亡作用。结论经激活 NF-κB介导后,Mtb-Ag 对中性粒细胞自发凋亡有抑制作用。

关键词：细胞凋亡分枝杆菌,结核核因子κB 中性粒细胞

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