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IL-2或IL-15协同结核分枝杆菌抗原诱导人外周血单个核细胞体外扩增细胞的特性比较

细胞与分子免疫学杂志 2016年第10期32卷 1306-1310,1316页

作者：陈勇蚌埠医学院病原生物学教研室、感染与免疫安徽省重点实验室安徽蚌埠233030

目的分析白细胞介素2(IL-2)或IL-15协同结核分枝杆菌抗原(MTB-Ag)诱导人外周血单个核细胞(PBMC)扩增细胞的生物学特性。方法采用MTB-Ag联合IL-2或MTB-Ag联合IL-15体外分别刺激正常人PBMC,培养至第12天时,经流式细胞术检测扩增细胞中γδ... 详细信息

目的分析白细胞介素2(IL-2)或IL-15协同结核分枝杆菌抗原(MTB-Ag)诱导人外周血单个核细胞(PBMC)扩增细胞的生物学特性。方法采用MTB-Ag联合IL-2或MTB-Ag联合IL-15体外分别刺激正常人PBMC,培养至第12天时,经流式细胞术检测扩增细胞中γδT细胞、自然杀伤(NK)细胞和CD4+T细胞所占的比例,以及分析3种淋巴细胞扩增的绝对数量。同时用MTT法检测两组扩增细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。结果与MTB-Ag联合IL-2刺激组相比,MTB-Ag联合IL-15刺激组扩增细胞中γδT细胞所占比例明显高于前者,NK细胞所占比例明显低于前者;而两组扩增细胞中CD4^+T细胞所占比例并无显著性差异。与2个刺激组中3种淋巴细胞数量的分析结果一致。并且MTB-Ag联合IL-15刺激组扩增细胞对不同肿瘤细胞均具有显著的杀伤活性,但与MTB-Ag联合IL-2刺激组相比,并无显著性差异。结论 IL-15协同MTB-Ag可高效诱导人PBMC产生以γδT细胞增殖为主的效应细胞,该扩增细胞在体外对肿瘤细胞具有显著的杀伤活性。

关键词：白细胞介素15(IL-15) 白细胞介素2(IL-2) 结核分枝杆菌抗原(MTB-Ag) T细胞 NK细胞细胞毒作用流式细胞术

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刚地弓形虫排泄分泌抗原刺激NK细胞过继转输对小鼠B16F10黑色素瘤生长的抑制作用

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2019年第4期37卷 444-447,452页

作者：焦玉萌夏惠王雪梅陶志勇朱琳方强蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室

目的观察刚地弓形虫排泄分泌抗原(TgESA)刺激后的NK细胞对小鼠B16F10黑色素瘤生长的作用。方法取弓形虫RH株体外培养12h后,从培养上清收集获得弓形虫ESA。取10只C57BL/6小鼠随机分为2组,每组5只,每只小鼠右腋窝皮下接种B16F10黑素瘤细胞... 详细信息

目的观察刚地弓形虫排泄分泌抗原(TgESA)刺激后的NK细胞对小鼠B16F10黑色素瘤生长的作用。方法取弓形虫RH株体外培养12h后,从培养上清收集获得弓形虫ESA。取10只C57BL/6小鼠随机分为2组,每组5只,每只小鼠右腋窝皮下接种B16F10黑素瘤细胞2×10^5个。接种后第7天,随机取1组小鼠腹腔注射100μlTgESA,另1组注射等量的PBS。接种后第14天,无痛处死小鼠,无菌条件下制备小鼠脾细胞悬液,分离2组荷瘤鼠的NK细胞,分别记为NKB16F10和NKESA,用于后续过继转输实验。取30只C57BL/6小鼠随机分为对照组、NKB16F10组和NKESA组,每组10只。3组小鼠均右腋窝皮下接种B16F10细胞2×10^5个/鼠。其中NKB16F10组和NKESA组小鼠同时分别尾静脉注射2×10^5个NKB16F10和NKESA。观察瘤体生长情况以及各组小鼠死亡数和死亡时间,共观察35 d。结果 NK细胞过继转输后,NKd、组和“心間。组小鼠平均出瘤时间分别为(14.70 ±0.95)、(12.60 ± 0.70) d,均晚于对照组的(8.50 ± 0.85) d (P < 0.05).3组小鼠出瘤后,瘤体均不断增长,至第35天,NKB16F10组和NKESA组的平均瘤体面积分别为(686.53 ± 17.84)和(577.79 ± 49.70) mm^2,均小于对照组的(787.84 ± 19.94) mm^2 (P< 0.05 ).对照组、NKB16F10组和NKESA组小鼠分别于接种B16F10细胞后第24、27和30天开始出现死亡,至第35天,存活的小鼠数分别为3、4和6只。结论弓形虫ESA刺激的NK细胞过继转输小鼠后可较为明显地抑制B16F10黑色素瘤瘤体的生长。

关键词：刚地弓形虫排泄分泌抗原自然杀伤细胞黑色素卿

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弓形虫排泄分泌抗原对Lewis肺癌小鼠瘤体生长的抑制作用

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中国血吸虫病防治杂志 2019年第4期31卷 400-403,438页

作者：焦玉萌陶志勇崔裕健刘春祥夏惠王雪梅方强蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室

目的探讨弓形虫排泄分泌抗原(ESA)对Lewis肺癌小鼠CD4^+CD25^+Foxp3^+T(Treg)细胞亚群的影响,观察弓形虫ESA对肿瘤生长的抑制作用。方法将C57BL/6小鼠随机分成PBS组(14只)和Lewis组(34只)。Lewis组小鼠右腋窝皮下接种Lewis肺癌细胞2... 详细信息

目的探讨弓形虫排泄分泌抗原(ESA)对Lewis肺癌小鼠CD4^+CD25^+Foxp3^+T(Treg)细胞亚群的影响,观察弓形虫ESA对肿瘤生长的抑制作用。方法将C57BL/6小鼠随机分成PBS组(14只)和Lewis组(34只)。Lewis组小鼠右腋窝皮下接种Lewis肺癌细胞2×10^5个,PBS组注射等量无菌PBS。接种后第7天(D7),将PBS组小鼠分成PBS2组、PBS2+ESA组,每组7只;将Lewis组分成Lewis2组和Lewis2+ESA组,每组17只;PBS2+ESA组及Lewis2+ESA组小鼠腹腔注射100μL弓形虫ESA。ESA干预后7 d计算各组小鼠脾脏系数,检测Treg细胞数量变化,同时观察荷瘤鼠长期瘤体生长情况。结果 ESA干预后7 d,PBS2+ESA组[(0.66±0.09)%]和Lewis2+ESA组[(0.69±0.07)%]脾脏明显增大,脾脏系数与PBS2组[(0.30±0.02)%]和Lewis2组[(0.33±0.03)%]比较,差异均有统计学意义(P均<0.05)。PBS2+ESA组[(1.28±0.14)%]和Lewis2+ESA组[(1.58±0.14)%]脾脏Treg细胞占脾细胞的比例均下降,与PBS2组[(2.06±0.07)%]和Lewis2组[(2.44±0.23)%]比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。ESA干预后,瘤体生长延缓,在实验终点时,Lewis2+ESA组小鼠瘤体明显小于Lewis2组(P <0.05)。结论 ESA可下调荷瘤鼠脾脏Treg细胞占脾细胞的比例,抑制瘤体生长。

关键词：弓形虫排泄分泌抗原 CD4^+CD25^+ Foxp3^+ T细胞肺癌小鼠

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恶性疟原虫配子体期特异性蛋白Pfgdv1克隆表达及鉴定

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中国血吸虫病防治杂志 2016年第1期28卷 34-38页

作者：苏胖胖孟令文李江艳陶志勇陈勇乔继琛武肖肖金赟王好鹏方强王雪梅夏惠蚌埠医学院病原生物学教研室、安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030

目的克隆恶性疟原虫配子体期特异性基因(Plasmodium falciparum gametocyte development 1 gene,Pfgdv1),体外表达和鉴定重组Pfgdv1蛋白。方法通过PCR法从恶性疟原虫感染病人血液DNA样本中扩增Pfgdv1基因,插入到原核表达载体p ET28a(+)... 详细信息

目的克隆恶性疟原虫配子体期特异性基因(Plasmodium falciparum gametocyte development 1 gene,Pfgdv1),体外表达和鉴定重组Pfgdv1蛋白。方法通过PCR法从恶性疟原虫感染病人血液DNA样本中扩增Pfgdv1基因,插入到原核表达载体p ET28a(+),构建p ET28a-Pfgdv1重组表达质粒,转化至大肠埃希菌(***)BL21(DE3+),通过异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导表达重组蛋白,经Ni+-亲和层析柱纯化重组蛋白,纯化产物经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blotting鉴定。结果 PCR扩增的Pfgdv1基因长度约为1.65 kb,重组p ET28a-Pfgdv1质粒构建成功,插入方向正确无框移,转化至*** BL21(DE3+)所表达的重组蛋白分子量约为67 k Da,且能被抗His标签单克隆抗体识别。结论成功克隆了Pfgdv1基因,表达并纯化了重组Pfgdv1蛋白,为进一步研究恶性疟原虫配子体期传播阻断疫苗奠定了基础。

关键词：恶性疟原虫 Pfgdv1 配子体传播阻断疫苗原核表达

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旋毛虫及其衍生产物调节过敏性及自身免疫性疾病的研究进展

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2016年第4期34卷 382-386页

作者：丁忆晗王小莉宋迪吴琦杨小迪蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030

旋毛虫(Trichinella spiralis)及其衍生抗原可通过诱导树突状细胞(DC)的半成熟来刺激T细胞的活化,从而调节Th1/Th2型细胞的免疫应答,以缓解或抑制过敏性疾病/自身免疫性疾病。在此免疫调节过程中,调节性T细胞(Treg)及抑炎细胞因子的释... 详细信息

旋毛虫(Trichinella spiralis)及其衍生抗原可通过诱导树突状细胞(DC)的半成熟来刺激T细胞的活化,从而调节Th1/Th2型细胞的免疫应答,以缓解或抑制过敏性疾病/自身免疫性疾病。在此免疫调节过程中,调节性T细胞(Treg)及抑炎细胞因子的释放发挥着重要作用。本文综述了旋毛虫及其衍生产物在各种免疫失调性疾病中的调节作用及其机制。

关键词：旋毛虫调节过敏性疾病自身免疫性疾病

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魏氏棘唇线虫衍生抗原ES-62调节免疫失调性疾病研究进展

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中国血吸虫病防治杂志 2022年第2期34卷 204-211页

作者：胡琪邢敬雨吴培黄婷婷杨小迪安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院病原生物学教研室安徽蚌埠233030

ES-62(excretory secretory-62)是源自魏氏棘唇线虫(Acanthocheilonema viteae)排泄分泌物中的一种由磷酰胆碱修饰的四聚体糖蛋白,可通过诱导树突状细胞、单核-巨噬细胞和调节性B细胞等免疫细胞耐受介导免疫调节反应,以预防或治疗免疫... 详细信息

ES-62(excretory secretory-62)是源自魏氏棘唇线虫(Acanthocheilonema viteae)排泄分泌物中的一种由磷酰胆碱修饰的四聚体糖蛋白,可通过诱导树突状细胞、单核-巨噬细胞和调节性B细胞等免疫细胞耐受介导免疫调节反应,以预防或治疗免疫失调性疾病。近年来,ES-62蛋白在过敏性、自身免疫性及代谢性疾病等多种免疫失调性疾病中的作用成为研究热点。本文综述了ES-62蛋白在各种免疫失调性疾病中的调节作用及相关机制,为进一步研究提供理论依据及实验参考。

关键词：魏氏棘唇线虫排泄分泌物 ES-62 免疫失调性疾病

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α-毒素诱导的脐静脉内皮细胞凋亡在金葡菌L型垂直感染中的作用(英文)

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南方医科大学学报 2013年第5期33卷 619-624页

作者：管俊昌朱翔余峰玲杨文选刘婷婷张涛林娜刘勇刘从森蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院病原生物学教研室安徽蚌埠233030

目的确定α-毒素诱导脐静脉内皮细胞(HUV-EC-C)的凋亡在金葡菌L型垂直感染中的作用。方法在培养的HUV-EC-C细胞中加入不同浓度(0、10、30、90、270 ng/ml)的金葡菌α-毒素,处理不同时间(0、2、4、6、8 h)后经Annexin V-PI染色,流式细胞... 详细信息

目的确定α-毒素诱导脐静脉内皮细胞(HUV-EC-C)的凋亡在金葡菌L型垂直感染中的作用。方法在培养的HUV-EC-C细胞中加入不同浓度(0、10、30、90、270 ng/ml)的金葡菌α-毒素,处理不同时间(0、2、4、6、8 h)后经Annexin V-PI染色,流式细胞仪检测HUV-ECC细胞的凋亡率。通过ELISA检测α肿瘤坏死因子(TNF-α)、caspase-3与caspase-8的表达量,并观察加入TNF-α中和抗体、caspases-3抑制剂zDEVD-FMK、caspase-8抑制剂zIETD-fmk对α-毒素诱导HUV-EC-C细胞凋亡的影响。结果α-毒素能够诱导HUV-EC-C细胞凋亡并表现为时间、剂量依赖性,明显增加HUV-EC-C细胞中TNF-α、caspase-3与caspase-8的表达;在加入TNF-α中和抗体、zDEVD-FMK、zIETD-fmk后可部分阻断α-毒素能够诱导的HUV-EC-C细胞凋亡。结论α-毒素通过TNF-α及caspase-8介导的外源性死亡途径诱导HUV-EC-C细胞凋亡,表明α-毒素诱导内皮细胞凋亡是金葡菌L型垂直感染影响胎儿发育的主要机制之一。

关键词：脐静脉内皮细胞 α-毒素垂直感染金葡菌 L型

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结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6的构建、鉴定及免疫效应评价

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南方医科大学学报 2013年第7期33卷 945-950页

作者：王雪梅王英薛玉芹陈勇陶志勇夏惠唐洁方强蚌埠医学院病原生物学教研室蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院蚌埠医学院免疫学教研室安徽蚌埠233030

目的构建结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6并探讨其诱导的免疫效应。方法将扩增自结核杆菌基因组的ESAT-6基因装入pVAX1载体构建pVAX1/ESAT-6重组质粒;经酶切、测序鉴定后,利用阳离子聚合物介导将重组质粒pVAX1/ESAT-6转染Hela细胞,分别以RT-... 详细信息

目的构建结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6并探讨其诱导的免疫效应。方法将扩增自结核杆菌基因组的ESAT-6基因装入pVAX1载体构建pVAX1/ESAT-6重组质粒;经酶切、测序鉴定后,利用阳离子聚合物介导将重组质粒pVAX1/ESAT-6转染Hela细胞,分别以RT-PCR法检测ESAT-6 mRNA的表达、间接免疫荧光法检测ESAT-6蛋白表达。重组质粒经体内电转染免疫小鼠后,采用ELISA法测定小鼠血清中IFN-γ及抗ESAT-6特异性抗体IgG的水平;流式细胞术检测小鼠淋巴细胞增殖水平;ELISPOT检测产生IFN-γ的淋巴细胞频数。结果构建的重组质粒pVAX1/ESAT-6经双酶切于3000 bp和300 bp处各见1条带,测序结果显示插入序列与ESAT-6基因序列无差异。重组质粒转染Hela细胞后,RT-PCR产物经琼脂糖凝胶电泳于约300 bp处见目的条带,间接免疫荧光检测显示特异性绿色荧光。重组质粒免疫小鼠后,血清中抗ESAT-6特异性抗体IgG水平较对照组(空质粒组和生理盐水对照组)明显升高;血清中IFN-γ水平、小鼠脾淋巴细胞增殖水平及产生IFN-γ的淋巴细胞数明显均高于对照组(空质粒组和生理盐水对照组)。结论成功构建了结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6,该疫苗可有效诱导小鼠产生特异性细胞免疫和体液免疫效应。

关键词：结核分枝杆菌 ESAT-6 DNA疫苗细胞免疫体液免疫

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重组猪单链IL-12的构建及真核表达

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南方医科大学学报 2011年第10期31卷 1687-1692页

作者：王雪梅袁远英方强夏惠孙新李柏青蚌埠医学院病原生物学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院免疫学教研室安徽蚌埠233030

目的克隆猪IL-12(pIL-12)p35和p40亚单位cDNA,构建含有重组猪单链IL-12(pscIL-12)融合基因的真核表达质粒并进行表达。方法分别从正常成年肉猪的外周血单个核细胞(PBMCs)和脾淋巴细胞中提取总RNA,经RT-PCR分别获得pIL-12 p35和p40亚单... 详细信息

目的克隆猪IL-12(pIL-12)p35和p40亚单位cDNA,构建含有重组猪单链IL-12(pscIL-12)融合基因的真核表达质粒并进行表达。方法分别从正常成年肉猪的外周血单个核细胞(PBMCs)和脾淋巴细胞中提取总RNA,经RT-PCR分别获得pIL-12 p35和p40亚单位编码序列的cDNA,应用重叠延伸PCR技术通过一柔性接头(linker)(Gly4Ser)3串联这两个亚基构建融合基因pscIL-12,将融合基因pscIL-12插入pcDNA3.1(+)真核表达载体,通过阳离子聚合物介导转染CHO-K1细胞进行表达,RT-PCR鉴定pscIL-12融合基因在真核细胞中的表达。结果所克隆的pIL-12 p35亚基和p40亚基的编码基因序列和构建的融合基因pscIL-12序列均经PCR、酶切、测序得以证实;融合基因pscIL-12在CHO-K1细胞中成功转录。结论成功构建了pcDNA3.1(+)-pscIL-12融合基因的真核表达质粒;pcDNA3.1(+)-pscIL-12在CHO-K1细胞中成功转录,为进一步探讨pscIL-12融合蛋白的生物学活性和疫苗佐剂效应奠定了基础。

关键词：白细胞介素-12 单链猪分子克隆真核表达 CHO-K1细胞

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妊娠期母鼠给予葡萄球菌肠毒素B对成年子代CD3^+TCR Vβ8^+T细胞的影响

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南方医科大学学报 2012年第9期32卷 1230-1233页

作者：管俊昌刘勇孔晓明朱翔余峰玲林娜刘从森张涛蚌埠医学院病原生物学教研室安徽蚌埠2330302 蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030

目的观察妊娠期母鼠给予葡萄球菌肠毒B(SEB)对成年子代CD3+TCR Vβ8+T细胞的影响。方法在妊娠16 d时给予SD大鼠尾静脉注射15μg SEB,同时设立PBS对照组。孕鼠自然分娩后子代鼠生长至成年,流式细胞仪检测成年子代鼠胸腺及外周血中CD3+TC... 详细信息

目的观察妊娠期母鼠给予葡萄球菌肠毒B(SEB)对成年子代CD3+TCR Vβ8+T细胞的影响。方法在妊娠16 d时给予SD大鼠尾静脉注射15μg SEB,同时设立PBS对照组。孕鼠自然分娩后子代鼠生长至成年,流式细胞仪检测成年子代鼠胸腺及外周血中CD3+TCR Vβ8+T细胞;并观察成年子代鼠再次给予SEB时胸腺及外周血中CD3+TCR Vβ8+T细胞的应答变化。结果妊娠期母鼠给予SEB可导致雌、雄性成年子代鼠胸腺CD3+TCR Vβ8+T细胞的比例(雌性:1.760,雄性:1.098),较对照组的(雌性:2.714,雄性:2.088)明显减少(P<0.05),其外周血中CD3+TCR Vβ8+T细胞的变化与胸腺中类似。PBS组的雌雄性成年子代鼠给予SEB后其胸腺及外周血中CD3+TCR Vβ8+T细胞较同窝对照组明显减少(P<0.05);而SEB组的雌雄性成年子代鼠给予SEB后与其同窝PBS对照组比较,胸腺中CD3+TCR Vβ8+T细胞无变化(P>0.05),但外周血中CD3+TCR Vβ8+T细胞则明显增加(P<0.05)。结论妊娠期母鼠给予SEB改变其成年子代大鼠CD3+TCR Vβ8+T细胞对再次SEB刺激的应答方式。

关键词：妊娠 CD3+TCR Vβ8+T细胞胸腺葡萄球菌肠毒B

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