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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2013年第2期31卷 148-150页

作者：胡明洁方强吴守伟汤必奎张静焦玉萌夏惠沈继龙蚌埠医学院遗传学教研室蚌埠233030 蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

采集安徽省蚌埠市区、五河县、怀远县、蒙城县和利辛县2009-2010年的39例间日疟患者血样,分别提取DNA,PCR扩增间日疟原虫乳酸脱氢酶(PvLDH)基因,并克隆测序,以及Blast序列分析。结果显示,克隆的PvLDH基因片段为951 bp。序列分析发现,采... 详细信息

采集安徽省蚌埠市区、五河县、怀远县、蒙城县和利辛县2009-2010年的39例间日疟患者血样,分别提取DNA,PCR扩增间日疟原虫乳酸脱氢酶(PvLDH)基因,并克隆测序,以及Blast序列分析。结果显示,克隆的PvLDH基因片段为951 bp。序列分析发现,采自安徽地区的39例间日疟患者血样的PvLDH基因序列之间无差异(登录号为GU078391),与GenBank中其他地域株的PvLDH基因序列同源性均>99%,氨基酸序列仅分别与EJEU60134株和MIA061251株存在1个氨基酸的差异。

关键词：间日疟原虫乳酸脱氢酶同源性分析

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弓形虫ESA诱导小鼠产生的CD8^+ T细胞对早期黑色素瘤生长的影响

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2013年第2期31卷 95-98页

作者：焦玉萌方强夏惠王雪梅陶志勇陈兴智沈继龙蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的观察弓形虫排泄分泌抗原(TgESA)对B16F10黑色素瘤接种小鼠CD8+T细胞的影响,以及CD8+T细胞对B16F10黑色素瘤的作用。方法取RH株弓形虫速殖子体外培养12 h后,收集培养液,离心取上清,获得弓形虫ESA。15只C57BL/6小鼠随机分为A、B和C三... 详细信息

目的观察弓形虫排泄分泌抗原(TgESA)对B16F10黑色素瘤接种小鼠CD8+T细胞的影响,以及CD8+T细胞对B16F10黑色素瘤的作用。方法取RH株弓形虫速殖子体外培养12 h后,收集培养液,离心取上清,获得弓形虫ESA。15只C57BL/6小鼠随机分为A、B和C三组(每组5只)。B组和C组每鼠右腋窝皮下接种B16F10黑色素瘤细胞2×105个,A组注射等量无菌PBS。接种后第7天,C组每只小鼠腹腔注射TgESA 100μl。接种后第13天,处死小鼠,无菌取脾。流式细胞仪检测各组小鼠CD3+CD8+T细胞所占脾细胞比例;采用免疫磁珠分选B组和C组脾细胞中的CD8+T细胞,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测两组CD8+T细胞对B16F10细胞的杀伤作用,分别设效靶细胞比为2.5∶1、5∶1和10∶1。另取30只C57BL/6小鼠随机分为E、F和G三组(每组10只),每鼠接种B16F10细胞2×105个。接种同时,F组和G组小鼠分别尾静脉注射分离自B组和C组的CD8+T细胞(2×105个/鼠)。观察小鼠瘤体生长情况,记录各组小鼠死亡数和死亡时间,共观察35 d。结果流式细胞仪检测结果显示,A、B和C组脾脏CD3+CD8+T细胞占脾细胞的比例分别为(13.86±0.13)%、(14.18±0.27)%和(15.74±0.28)%,C组显著高于其他两组(P<0.05)。LDH释放试验结果显示,不同效靶细胞比时,C组的CD8+T细胞杀伤活性均显著高于B组(均P<0.05)。G组的平均出瘤时间[(14.9±1.2)d]晚于F组[(11.9±0.7)d]和E组[(9.4±1.2)d](P<0.05)。3组小鼠自出瘤后瘤体均不断增长,但增长速度无明显差异,G组的瘤体面积始终小于其他两组(均P<0.05)。E、F和G组小鼠分别于B16F10细胞接种后第26、29和30天开始出现死亡,至观察终点(第35天),3组小鼠存活的数量分别为3、5和7只。结论TgESA可上调B16F10黑色素瘤小鼠CD8+T细胞的数量和杀伤功能,上调的CD8+T细胞具有早期延缓肿瘤生长的作用。

关键词：刚地弓形虫排泄分泌抗原 CD8+ T细胞黑色素瘤

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西咪替丁伍用弓形虫ROP2蛋白免疫小鼠诱导免疫反应的初步研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2013年第2期31卷 99-103页

作者：陈兴智杨小迪杨雯陈勇刘丽丽沈继龙孙新蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 安徽病原生物学省级实验室人兽共患病安徽省重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的观察西咪替丁伍用弓形虫棒状体蛋白2(ROP2)免疫小鼠诱导的免疫反应。方法 80只BALB/c小鼠随机分为A组、B组、C组和D组,各组分别经皮下注射PBS、弓形虫ROP2蛋白+PBS、弓形虫ROP2蛋白+福氏佐剂和弓形虫ROP2蛋白+西咪替丁[200 mg/(kg.... 详细信息

目的观察西咪替丁伍用弓形虫棒状体蛋白2(ROP2)免疫小鼠诱导的免疫反应。方法 80只BALB/c小鼠随机分为A组、B组、C组和D组,各组分别经皮下注射PBS、弓形虫ROP2蛋白+PBS、弓形虫ROP2蛋白+福氏佐剂和弓形虫ROP2蛋白+西咪替丁[200 mg/(kg.d)]免疫BALB/c小鼠,每次ROP2蛋白免疫剂量为100μg/只(200μl),共免疫3次,每次间隔2周。于首次免疫前和每次免疫后2周,采血分离血清。末次免疫后2周,每组小鼠随机处死8只,无菌分离脾细胞,CCK-8法测定淋巴细胞增殖活性。流式细胞术检测小鼠全血T细胞亚群。ELISA法检测小鼠血清IgG抗体和γ干扰素(IFN-γ)水平。各组剩余12只小鼠经腹腔感染弓形虫RH株速殖子(5×104个/鼠),观察攻击感染后小鼠生存时间。结果末次免疫后2周,A、B、C和D组小鼠的血清IFN-γ水平分别为(659.750±239.962)、(872.750±197.011)、(1 600.750±480.680)和(1 494.375±451.655)pg/ml,血清特异性IgG抗体水平分别为0.504±0.078、0.592±0.160、1.068±0.111和1.046±0.147,脾细胞增殖活性分别为0.504±0.078、0.592±0.160、0.831±0.130和0.762±0.089,外周血CD4+/CD8+比值分别为0.504±0.078、0.592±0.160、0.831±0.130和0.762±0.089,C和D组均显著高于A和B组(前3个指标,均P<0.01;后者,均P<0.05),D组与C组的差异均无统计学意义(P>0.05)。各免疫组弓形虫攻击感染后,A、B、C和D组小鼠的生存时间中位数分别为96、108、132和132 h,C组和D组小鼠平均存活时间显著长于A组和B组(P<0.05),D组与C组的相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论西咪替丁可增强ROP2蛋白诱导的细胞免疫和体液免疫反应。

关键词：刚地弓形虫西咪替丁棒状体蛋白2 免疫反应蛋白疫苗

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三种免疫调节剂增强弓形虫重组ROP2疫苗保护效应的研究

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中国人兽共患病学报 2013年第6期29卷 570-574页

目的观察弗氏佐剂(Freund’s Adjuvant,FA)、匹多莫德(Pidotimod,PT)和西咪替丁(Cimetidine,CIM)等3种免疫调节剂增强重组弓形虫棒状体蛋白2(rROP2)疫苗的免疫保护效应。方法将100只BALB/c小鼠随机分为PBS对照组、重组rROP2疫苗组、FA-r... 详细信息

目的观察弗氏佐剂(Freund’s Adjuvant,FA)、匹多莫德(Pidotimod,PT)和西咪替丁(Cimetidine,CIM)等3种免疫调节剂增强重组弓形虫棒状体蛋白2(rROP2)疫苗的免疫保护效应。方法将100只BALB/c小鼠随机分为PBS对照组、重组rROP2疫苗组、FA-rROP2疫苗组、PT-rROP2疫苗组和CIM-rROP2疫苗组等5组;FA、PT和CIM分别与rROP2抗原混合皮下注射免疫,检测小鼠细胞免疫和体液免疫指标,并观察弓形虫RH株攻击感染后的生存时间。结果 FA-rROP2组、CIM-rROP2组小鼠血清IFN-γ、特异性IgG、脾细胞增殖活性及外周血CD4+/CD8+比值均显著高于rROP2蛋白组(P<0.05);PT对外周血CD4+/CD8+比值无明显影响,但显著增加了IFN-γ的水平及脾细胞增殖活性。小鼠攻击试验表明,FA-rROP2组、PT-rROP2组以及CIM-rROP2组小鼠存活时间显著长于rROP2组和PBS对照组组;rROP2蛋白组各项指标均显著高于PBS组(P<0.05)。结论 FA、PT和CIM可增强rROP2蛋白抗原诱导的细胞免疫和体液免疫反应,都能延长攻击感染小鼠的生存时间,具有增强rROP2蛋白疫苗保护效应的功能。其中CIM的佐剂样免疫促进作用接近于FA,但副作用显著低于后者,具有临床实用的潜在价值。

关键词：弓形虫弗氏佐剂匹多莫德西咪替丁 ROP2蛋白免疫佐剂

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谷跗线螨扫描电镜的形态学观察

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中国人兽共患病学报 2013年第3期29卷 248-252,261页

作者：赵学影赵振富孙新刘志刚深圳大学过敏反应与免疫学研究所深圳518060 蚌埠医学院病原生物学教研室感染与免疫安徽省重点实验室蚌埠233030

目的用扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)观察谷跗线螨(Tarsonemus granarius)的体表形态特征。方法从空调滤网灰尘中采集谷跗线螨,在连续变倍体视镜下清洗处理活螨后,用SEM观察其外部形态特征。结果用SEM观察谷跗线螨的体表... 详细信息

目的用扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)观察谷跗线螨(Tarsonemus granarius)的体表形态特征。方法从空调滤网灰尘中采集谷跗线螨,在连续变倍体视镜下清洗处理活螨后,用SEM观察其外部形态特征。结果用SEM观察谷跗线螨的体表形态结构,明确了谷跗线螨颚体、背板、基节板、表皮内突、刚毛等外部形态结构特点。结论用SEM清晰地观察到谷跗线螨的体表形态,对螨类鉴别及其变应原等的研究有重要的意义。

关键词：谷跗线螨跗线螨科扫描电镜形态学

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2009-2011年安徽省五河县疟疾流行特征分析

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中国血吸虫病防治杂志 2013年第1期25卷 70-72页

作者：王雪梅夏立环方强陶志勇焦玉萌夏惠孙新蚌埠医学院病原生物学教研室蚌埠 233030 安徽省感染与免疫重点实验室安徽省五河县疾病预防控制中心

目的分析2009-2011年安徽省五河县疟疾流行特征,为制定行之有效的防治措施提供科学依据。方法对2009-2011年五河县疟疾疫情报表和流行病学调查资料进行统计学分析。结果 2009-2011年五河县疟疾总发病349例,发病呈逐年下降趋势。其中男性... 详细信息

目的分析2009-2011年安徽省五河县疟疾流行特征,为制定行之有效的防治措施提供科学依据。方法对2009-2011年五河县疟疾疫情报表和流行病学调查资料进行统计学分析。结果 2009-2011年五河县疟疾总发病349例,发病呈逐年下降趋势。其中男性205例,女性144例,男女比例为1.42∶1。年龄最小的1岁,最大的100岁,11～、21～岁2个年龄组发病人数较多。疟疾流行有明显的季节性,1-3月发病较少,4月开始上升,6-9月为发病高峰季节,11-12月仅占2.01%。349例中,县城2例,占0.57%,农村347例,占99.43%。县城人口疟疾年均发病率0.08/万,显著低于农村的1.78/万(P<0.05)。发病率前2位为丘陵区的朱顶镇和小溪镇,年均发病率分别为5.53/万和4.78/万,丘陵区占发病总数的36.10%。患者多住平瓦房,纱门、纱窗使用率较低,少有疟防知识且多有露宿习惯。结论五河县疟疾发病呈逐年下降趋势。疟疾发病与居住条件、疟防知识知晓等因素有关。

关键词：疟疾疫情流行病学五河县安徽省

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二(喹唑啉-4-基)二硒醚体外抗弓形虫速殖子的实验研究

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中国人兽共患病学报 2013年第7期29卷 692-696页

作者：陈兴智杨雯杨小迪王旗夏惠刘刚沈继龙蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 鲁东大学化学与材料科学学院烟台264025 人兽共患病安徽省重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的观察二(喹唑啉-4-基)二硒醚体外对弓形虫RH株速殖子杀伤作用,探讨该药抗弓形虫的效果与机制。方法将二(喹唑啉-4-基)二硒醚,(下称药物)浓度分为4组,即生理盐水对照组(A组)、药物浓度为0.05μg/mL(B组)、0.5μg/mL(C组)、5.00μg/mL(... 详细信息

目的观察二(喹唑啉-4-基)二硒醚体外对弓形虫RH株速殖子杀伤作用,探讨该药抗弓形虫的效果与机制。方法将二(喹唑啉-4-基)二硒醚,(下称药物)浓度分为4组,即生理盐水对照组(A组)、药物浓度为0.05μg/mL(B组)、0.5μg/mL(C组)、5.00μg/mL(D组),分别加入到含弓形虫速殖子(含虫体4×106个/mL)的24孔培养板中,于1h、2h、4h后收集弓形虫速殖子,以Trypan blue染色法检测弓形虫着色率;C组和A组以MTT法检测弓形虫活性,Giemsa染色法观察虫体形态和结构变化,透射电镜观察弓形虫速殖子超微结构。结果不同浓度(0.05μg/mL、0.5μg/mL、5.00μg/mL)弓形虫经二(喹唑啉-4-基)二硒醚作用1h后的着色率分别为5.00%、26.70%和99.50%,作用2h后的着色率分别为22.00%、98.70%和100.00%,作用4h后的着色率分别为58.30%、100.00%和100.00%;生理盐水组1h、2h、4h后的着色率分别为1.0%、1.20%和1.70%。0.5μg/mL浓度药物组,MTT检测弓形虫活性,OD值随时间延长增长率明显低于生理盐水对照组(P<0.05);Giemsa染色观察,弓形虫速殖子随着时间的延长,逐渐出现肿胀,两端变圆,虫体坏死现象;透射电镜观察随着时间延长,逐渐出现虫体肿胀,胞膜与基质之间空隙明显,越来越多和大的空泡形成,胞膜出现断裂,内部结构溶解模糊。结论二(喹唑啉-4-基)二硒醚体外可部分或全部杀死弓形虫,效果与时间、剂量相关。

关键词：二(喹唑啉-4-基)二硒醚刚地弓形虫速殖子体外

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猪带绦虫六钩蚴TSO45-4B抗原FnⅢ结构域相应的线性B细胞表位肽免疫原性研究

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蚌埠医学院学报 2013年第5期38卷 513-515页

作者：王媛媛陶志勇杨小迪王小莉常雪莲陈勇孙新夏惠方强蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030

目的:观察载体蛋白偶联的TSO45-4B抗原FnⅢ结构域相应的线性B细胞表位肽诱导的体液免疫反应。方法:人工合成TSO45-4B抗原FnⅢ结构域2条预测表位肽,偶联钥孔血蓝蛋白免疫小鼠,采用ELISA法检测小鼠血清中预测表位肽特异性抗体滴度。结果:... 详细信息

目的:观察载体蛋白偶联的TSO45-4B抗原FnⅢ结构域相应的线性B细胞表位肽诱导的体液免疫反应。方法:人工合成TSO45-4B抗原FnⅢ结构域2条预测表位肽,偶联钥孔血蓝蛋白免疫小鼠,采用ELISA法检测小鼠血清中预测表位肽特异性抗体滴度。结果:免疫小鼠血清中检测到1条预测表位肽特异性抗体,其效价达到1∶1 280。结论:设计的1条TSO45-4B抗原FnⅢ结构域线性B细胞表位肽可诱导小鼠产生体液免疫反应。

关键词：猪带绦虫六钩蚴 TSO45-4B FnⅢ结构域 B细胞表位免疫反应

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小鼠肝脏淋巴细胞几种分离方法的比较

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蚌埠医学院学报 2013年第8期38卷 1052-1055页

作者：孔晓明金齐力韦莉王婷范伟朱翔刘勇蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030

目的:通过比较几种肝脏淋巴细胞分离方法得到的总淋巴细胞、T细胞、自然杀伤T细胞(NKT cells)及自然杀伤细胞(NK细胞)的比例和细胞绝对数,明确各种方法的适用范围。方法:按照析因设计,将不放血(A法)、摘眼球放血(B法)、体循环灌流(C法)... 详细信息

目的:通过比较几种肝脏淋巴细胞分离方法得到的总淋巴细胞、T细胞、自然杀伤T细胞(NKT cells)及自然杀伤细胞(NK细胞)的比例和细胞绝对数,明确各种方法的适用范围。方法:按照析因设计,将不放血(A法)、摘眼球放血(B法)、体循环灌流(C法)、摘眼球结合体循环灌流(B法+C法)4种肝脏预处理方法和单浓度离心法(Ⅰ法)、非连续密度梯度离心法(Ⅱ法)2种Percoll分离方法进行全面组合,共获得8种组合条件,分离小鼠肝脏淋巴细胞,用流式细胞术检测各类型细胞比例。结果:肝脏预处理方法中B法+C法获得淋巴细胞比例最高,A法获得淋巴细胞绝对数最高,B法获得的NKT细胞和NK细胞比例和细胞绝对数均最高;Ⅱ法获得的淋巴细胞、T细胞、NKT细胞和NK细胞比例和细胞绝对数均高于Ⅰ法。对于NKT细胞比例和NK细胞绝对数,肝脏预处理方法和Percoll浓度之间有交互作用(P<0.01和P<0.05),其他均无交互作用(P>0.05)。结论:采用摘眼球放血结合体循环灌流法,结合Percoll非连续密度梯度法(33%+70%),可获得较高数量和比例的固有免疫细胞,有助于对肝脏固有免疫细胞如NKT细胞、NK细胞等的研究。

关键词：细胞分离肝脏淋巴细胞分离方法 Percoll 析因分析

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结核分枝杆菌H37Ra株CFP10基因的克隆与序列分析

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蚌埠医学院学报 2013年第11期38卷 1385-1388页

作者：薛玉芹王英陈勇李江艳李倩唐洁夏惠王雪梅方强蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院免疫学教研室安徽蚌埠233030

目的:克隆结核分枝杆菌减毒株H37Ra培养滤液蛋白10(CFP10)基因,并对其进行序列分析。方法:自结核菌H37Ra株抽提基因组DNA为模板,以已知结核菌H37Ra株CFP10基因设计引物。通过聚合酶链反应(PCR)技术扩增出结核分枝杆菌H37Ra株CFP10基因,... 详细信息

目的:克隆结核分枝杆菌减毒株H37Ra培养滤液蛋白10(CFP10)基因,并对其进行序列分析。方法:自结核菌H37Ra株抽提基因组DNA为模板,以已知结核菌H37Ra株CFP10基因设计引物。通过聚合酶链反应(PCR)技术扩增出结核分枝杆菌H37Ra株CFP10基因,将其克隆至pTG19-T载体后,经PCR和双酶切鉴定后进行DNA序列测定,并以BLAST在线软件进行序列比对分析。结果:PCR产物电泳显示扩增片段约为300 bp,测序获得的片段开放编码框由303 bp组成,与H37Rv株CFP10基因同源性为100%,推导出编码氨基酸序列同源性为100%。结论:成功克隆结核分枝杆菌H37Ra株CFP10基因,其基因序列与H37Rv株CFP10基因序列无差异。

关键词：结核分枝杆菌 H37Ra株培养滤液蛋白10基因克隆序列分析

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