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中国人兽共患病学报 2010年第3期26卷 197-200页

作者：韦莉金齐力刘勇夏佩莹蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030

目的探讨结核分枝杆菌19kD脂蛋白(MtbP19)对单核巨噬细胞功能及表型的影响。方法以10μg/mLMtbP19作用于拂波醇酯(PMA)分化的THP-1细胞,CO2孵箱孵育,酶联免疫吸附法(ELISA)检测不同时间巨噬细胞TNF-α和IL-6的分泌水平;对巨噬细胞表型分... 详细信息

目的探讨结核分枝杆菌19kD脂蛋白(MtbP19)对单核巨噬细胞功能及表型的影响。方法以10μg/mLMtbP19作用于拂波醇酯(PMA)分化的THP-1细胞,CO2孵箱孵育,酶联免疫吸附法(ELISA)检测不同时间巨噬细胞TNF-α和IL-6的分泌水平;对巨噬细胞表型分子HLA-DR进行荧光抗体染色,流式细胞术分析P19对巨噬细胞表型的影响;流式细胞术及光学显微镜研究MtbP19对巨噬细胞吞噬活性的影响。结果P19能够诱导巨噬细胞TNF-α和IL-6分泌水平的增加,呈时间依赖关系;经P19刺激的巨噬细胞HLA-DR表达增强,平均荧光强度(MFI)为(54.3±3.4)%,与BSA对照组(34.3±3.6)%比较P<0.05;P19能增强巨噬细胞的吞噬活性。结论MtbP19能诱导巨噬细胞活化,在感染过程中可能具有一定的抗结核保护作用。

关键词：结核分枝杆菌P19 THP-1细胞细胞因子表型分子吞噬

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过继转移在蠕虫调控过敏性和自身免疫性疾病的研究进展

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2015年第4期33卷 290-294页

作者：丁忆晗周瑞杨小迪张莉莉蚌埠医学院病原生物学教研室.安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 蚌埠医学院第一附属医院儿科蚌埠233030

寄生蠕虫或其衍生物可通过诱导免疫细胞的活化,释放调节性细胞因子,从而抑制过敏性及自身免疫性疾病。目前大量的动物实验表明过继回输活化的淋巴细胞对免疫失调性疾病具有保护作用,体现出潜在的临床应用价值。本文对过继转移在蠕虫调... 详细信息

寄生蠕虫或其衍生物可通过诱导免疫细胞的活化,释放调节性细胞因子,从而抑制过敏性及自身免疫性疾病。目前大量的动物实验表明过继回输活化的淋巴细胞对免疫失调性疾病具有保护作用,体现出潜在的临床应用价值。本文对过继转移在蠕虫调控过敏性和自身免疫性疾病方面的进展进行综述。

关键词：蠕虫过继转移过敏性和自身免疫性疾病

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猪囊尾蚴期特异性抗原cC1的克隆与高效可溶性原核表达

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南方医科大学学报 2010年第2期30卷 206-209页

作者：方强骆江坤崔琢齐文娟胡元生沈继龙蚌埠医学院病原生物学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院免疫学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院第一附属医院安蚌埠233004 安徽医科大学病原生物学教研室安徽合肥230032

目的克隆猪囊尾蚴期特异性抗原cC1基因,并进行高效可溶性原核表达。方法利用PT-PCR从猪囊尾蚴中获得cC1编码基因,T-A克隆后,将cC1插入原核表达载体pET28a中,经酶切、测序鉴定后将其转入宿主菌*** BL21(DE3)中,通过IPTG诱导表达并优化表... 详细信息

目的克隆猪囊尾蚴期特异性抗原cC1基因,并进行高效可溶性原核表达。方法利用PT-PCR从猪囊尾蚴中获得cC1编码基因,T-A克隆后,将cC1插入原核表达载体pET28a中,经酶切、测序鉴定后将其转入宿主菌*** BL21(DE3)中,通过IPTG诱导表达并优化表达条件,表达的融合蛋白Ni+-亲和层析柱纯化后经快速液相蛋白层析分离系统检测其纯度。采用SDS-PAGE和Western-blotting对目的蛋白进行分析和鉴定。结果RT-PCR扩增出的片段长度为1056bp,构建的重组表达质粒经PCR、酶切验证,和预期的结果一致,测序鉴定与Genbank中cC1基因相比于423位存在1个同义突变。转化有重组质粒的E. coli BL21(DE3)经过0.05mmol/LIPTG 37℃诱导6h高效表达了占菌体蛋白总量60%的可为囊虫病患者血清识别的相对分子质量约为40000的可溶性融合蛋白,经Ni+-亲和层析柱纯化后纯度达94%。结论成功克隆并高效可溶性原核表达了猪囊尾蚴期特异性抗原cC1,为其进一步研究和应用奠定了基础。

关键词：猪囊尾蚴,抗原cC1 克隆原核表达条件优化

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外源性一氧化氮对旋毛虫感染小鼠抗氧化能力的影响

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中国血吸虫病防治杂志 2017年第1期29卷 48-52,58页

作者：王小莉李亮张慧魏星陶志勇夏惠王媛媛杨小迪方强蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 蚌埠学院食品与生物工程系蚌埠医学院公共课程部

目的探讨外源性NO供体亚硝基铁氰化钠(SNP)对旋毛虫病小鼠肝脏、外周血中抗氧化酶活性及脂质氧化的影响。方法采用消化法分离旋毛虫肌幼虫,感染BALB/c小鼠,400条/只。42 d后,收集感染鼠及正常小鼠外周血、肝脏。设A组(感染鼠肝脏匀浆物+... 详细信息

目的探讨外源性NO供体亚硝基铁氰化钠(SNP)对旋毛虫病小鼠肝脏、外周血中抗氧化酶活性及脂质氧化的影响。方法采用消化法分离旋毛虫肌幼虫,感染BALB/c小鼠,400条/只。42 d后,收集感染鼠及正常小鼠外周血、肝脏。设A组(感染鼠肝脏匀浆物+SNP)、B组(正常鼠肝脏匀浆物+SNP)、C组(感染鼠外周血+SNP)、D组(正常鼠外周血+SNP)。每组内设5个SNP反应终浓度,分别为0(空白对照)、2、5、10、30μmol/L,37℃反应30 min,测定各组超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及脂质氧化(MDA)含量。结果与正常鼠相比,旋毛虫感染鼠肝脏、外周血中SOD、CAT、GSH-Px活性上升,MDA含量增加,差异均有统计学意义(P均<0.05);在A、B组中,10、30μmol/L SNP作用下SOD、CAT、GSH-Px活性较空白对照降低(P均<0.05);与2~30μmol/L SNP反应后,MDA含量较空白对照明显升高(P均<0.05)。在C、D组中,30μmol/LSNP作用下SOD、CAT、GSH-Px活性显著下降,MDA浓度升高,与空白对照比较差异均有统计学意义(P均<0.01)。在2~30μmol/L浓度区间,SNP浓度与旋毛虫感染鼠肝脏、外周血中SOD、CAT、GSH-Px活性呈负相关(r肝SOD=-0.901,r肝CAT=-0.802,r肝GSH-Px=-0.847,r血SOD=-0.899,r血CAT=-0.685,r血GSH-Px=-0.635,P均<0.05),与MDA含量呈正相关(r肝MDA=0.697,r血MDA=0.764,P均<0.05)。结论旋毛虫感染可致小鼠肝脏、外周血中活性氧自由基产生增加,SOD、CAT、GSH-Px活性升高;外源性NO可降低旋毛虫感染小鼠SOD、CAT、GSH-Px活性,抑制小鼠的抗氧化能力。

关键词：旋毛虫一氧化氮脂质氧化硝普钠脂质过氧化物超氧化物歧化酶过氧化氢酶谷胱甘肽过氧化物酶

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中国中部地区间日疟原虫分离株Duffy血型结合蛋白Ⅱ区的克隆表达与初步鉴定

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中国血吸虫病防治杂志 2012年第4期24卷 474-477页

作者：刘丹夏惠陶志勇陈勇方强王雪梅孙新高颖买月琴蚌埠医学院病原生物学教研室蚌埠233030 安徽省感染与免疫重点实验室

目的克隆中国中部地区间日疟原虫分离株Duffy血型结合蛋白Ⅱ区基因(PvDBPⅡ),体外表达和鉴定重组PvDBPⅡ蛋白。方法PCR法从间日疟患者血液DNA样品中扩增PvDBPⅡ基因,将产物插入到原核表达载体pET28a(+)中,构建pET28a PvDBPⅡ重组表达质... 详细信息

目的克隆中国中部地区间日疟原虫分离株Duffy血型结合蛋白Ⅱ区基因(PvDBPⅡ),体外表达和鉴定重组PvDBPⅡ蛋白。方法PCR法从间日疟患者血液DNA样品中扩增PvDBPⅡ基因,将产物插入到原核表达载体pET28a(+)中,构建pET28a PvDBPⅡ重组表达质粒,转化大肠埃希菌(***)BL21(DE3+),异丙基βD硫代吡喃半乳糖苷诱导表达带有His标签的重组蛋白,采用镍柱亲和层析纯化重组蛋白,相应表达物分别采用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot进行分析鉴定。结果PCR扩增的PvDBPII基因为1.1 kb,重组pET28a PvDBPⅡ质粒经测序验证,其插入片段序列与GenBank参考序列相似性为99%,转化***所表达的重组蛋白分子量约为44 kDa,且能被间日疟患者血清特异性识别。结论成功克隆了PvDBPⅡ基因,表达了重组PvDBPII蛋白,为进一步研究基于PvDBPⅡ的红内期间日疟疫苗奠定了基础。

关键词：间日疟原虫疟疾 Duffy血型结合蛋白原核表达疫苗中国Ⅱ

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沙门菌外膜囊泡对小鼠髓源树突状细胞的免疫调控作用

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四川大学学报（医学版） 2021年第6期52卷 948-953页

作者：韦莉陈光璋孙潮张涛管俊昌金齐力蚌埠医学院病原生物学教研室蚌埠233030 感染与免疫安徽省重点实验室蚌埠233030 蚌埠医学院第二附属医院检验科蚌埠233040

目的研究鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium,ST)外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)对树突状细胞(dendritic cells,DC)超微结构及免疫功能的影响。方法无菌取小鼠骨髓细胞,体外经重组鼠源粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(recombina... 详细信息

目的研究鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium,ST)外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)对树突状细胞(dendritic cells,DC)超微结构及免疫功能的影响。方法无菌取小鼠骨髓细胞,体外经重组鼠源粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(recombinant mouse granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,rm GM-CSF)和重组鼠源白细胞介素-4(recombinant mouse interleukin-4,rm IL-4)联合诱导扩增出DC,倒置相差显微镜下观察细胞形态,流式细胞术鉴定表型;超速离心分离获取ST-OMVs,CCK-8法测其对DC存活情况的影响,确定OMVs刺激浓度;透射电镜观察细胞负载OMVs后超微结构特征;流式细胞术检测DC细胞因子分泌、表面分子表达、吞噬能力。结果体外诱导和扩增的DC具有典型的细胞形态,纯度达85%以上,透射电镜可见DC表面有大量丝状伪足;OMVs负载后,可见DC表面树突状结构减少,胞浆内有大量囊泡状结构,线粒体增多,肿胀以及细胞凋亡;OMVs 5μg/mL和10μg/mL处理后,DC吞噬能力下降(P<0.05),成熟表型特征性分子表达上调(P<0.05),肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)表达升高(P<0.05)。结论 ST-OMVs可诱导DC分泌TNF-α和IL-1β,具有促进DC成熟和抗原提呈的能力。

关键词：鼠伤寒沙门菌外膜囊泡树突状细胞

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基于超星教学平台的人体寄生虫学课程线上混合式教学探索与实践

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中国基层医药 2022年第7期29卷 1104-1106页

作者：王小莉陶志勇常雪莲王媛媛夏惠杨小迪蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030

目的探讨基于超星教学平台的人体寄生虫学课程线上混合式教学实践情况及评价效果。方法选取蚌埠医学院2018级临床医学专业学生进行教学,通过问卷调查对教学方案和效果进行评价。结果问卷显示,81.13%同学对线上混合式教学模式感兴趣,64.... 详细信息

目的探讨基于超星教学平台的人体寄生虫学课程线上混合式教学实践情况及评价效果。方法选取蚌埠医学院2018级临床医学专业学生进行教学,通过问卷调查对教学方案和效果进行评价。结果问卷显示,81.13%同学对线上混合式教学模式感兴趣,64.10%以上同学认为线上教学目标清晰、教学时间安排合理、教学内容有扩展性、教学节奏紧凑。大部分同学认同在线上授课中学习了完整的课程知识,提升了解决问题能力、自主学习能力、创新科研能力。结论基于超星平台构建的人体寄生虫学线上混合式教学方案保证了教学质量,强化了课程信息化建设与教学的融合,为进一步深化教学改革提供了有益借鉴。

关键词：教育医学寄生虫学教育远程教学超星平台模型教育调查和问卷

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猪带绦虫六钩蚴TSO45-4B抗原FnⅢ结构域线性B细胞表位预测及鉴定

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中国血吸虫病防治杂志 2012年第6期24卷 681-684,I0001页

作者：王媛媛王小莉常雪莲陶志勇夏惠方强蚌埠医学院病原生物学教研室、安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030

目的预测并鉴定猪带绦虫六钩蚴TSO45-4B抗原FnⅢ结构域线性B细胞表位。方法利用生物信息学在线工具分析TSO45-4B抗原FnⅢ结构域序列并预测其线性B细胞表位;采用SWISS-MODEL软件预测TSO45-4B的蛋白空间结构,并合成两条预测表位肽。采用... 详细信息

目的预测并鉴定猪带绦虫六钩蚴TSO45-4B抗原FnⅢ结构域线性B细胞表位。方法利用生物信息学在线工具分析TSO45-4B抗原FnⅢ结构域序列并预测其线性B细胞表位;采用SWISS-MODEL软件预测TSO45-4B的蛋白空间结构,并合成两条预测表位肽。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测猪囊尾蚴病人血清与两条预测表位肽的免疫反应性。结果获得2个TSO45-4B抗原FnⅢ结构域线性B细胞预测表位,其中1条预测表位合成肽可为猪囊尾蚴病患者血清识别。结论成功预测并鉴定了猪带绦虫六钩蚴TSO45-4B抗原FnⅢ结构域线性B细胞表位。

关键词：猪带绦虫六钩蚴 TSO45-4B FnⅢ结构域 B细胞表位

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恶性疟原虫抗原对健康人外周血T细胞免疫功能的影响

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中国血吸虫病防治杂志 2014年第4期26卷 410-414页

作者：陈立陶莉李倩陶志勇方强夏惠蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030

目的探讨恶性疟原虫抗原对健康人外周血T淋巴细胞免疫功能的影响。方法健康成人外周血单个核细胞(PBMC)体外分别用恶性疟原虫(P.f)抗原(5μg/ml)和正常红细胞(nRBC)抗原(5μg/ml)进行刺激,同时给予IL-2维持细胞增殖,另外设立只加IL-2的... 详细信息

目的探讨恶性疟原虫抗原对健康人外周血T淋巴细胞免疫功能的影响。方法健康成人外周血单个核细胞(PBMC)体外分别用恶性疟原虫(P.f)抗原(5μg/ml)和正常红细胞(nRBC)抗原(5μg/ml)进行刺激,同时给予IL-2维持细胞增殖,另外设立只加IL-2的阴性对照组进行培养。培养12 d时,刺激组细胞再用对应的抗原刺激20 h,用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群分泌IL-4和IFN-γ的情况,并用羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(Carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl ester,CFSE)标记法检测T细胞增殖反应。结果健康人PBMC经P.f抗原刺激扩增后CD4+T细胞的增殖指数(PI)明显高于nRBC抗原刺激组和阴性对照组(P均<0.05),但3组γδT的PI差异无统计学意义(P>0.05)。P.f抗原组分泌IL-4的CD4+T细胞百分率明显高于nRBC抗原组和阴性对照组(P均<0.05),但3组分泌IFN-γ的CD4+T细胞百分率差异无统计学意义(P>0.05)。结论 P.f抗原在体外可刺激健康人外周血CD4+T细胞增殖活化,后者通过优先分泌IL-4而发挥免疫调节作用。

关键词：恶性疟原虫抗原免疫功能 T细胞 IL-4 IFN-γ

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约氏疟原虫感染对小鼠黑色素瘤的抑制作用

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中国血吸虫病防治杂志 2017年第3期29卷 315-319页

作者：乔继琛张慧焦玉萌杨玉婷董家军王争争李江艳孟令文杨小迪陶志勇夏惠方强蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 蚌埠医学院临床医学2系蚌埠医学院临床医学1系

目的观察约氏疟原虫17XL虫株感染对小鼠黑色素瘤的抑制作用。方法取C57BL/6小鼠20只,腋下注射传代培养的B16F10黑色素瘤细胞;次日,将小鼠随机分为约氏疟原虫(P.y)感染组和对照组2组,10只/组;P.y感染组小鼠每只腹腔注射1×106个含虫... 详细信息

目的观察约氏疟原虫17XL虫株感染对小鼠黑色素瘤的抑制作用。方法取C57BL/6小鼠20只,腋下注射传代培养的B16F10黑色素瘤细胞;次日,将小鼠随机分为约氏疟原虫(P.y)感染组和对照组2组,10只/组;P.y感染组小鼠每只腹腔注射1×106个含虫红细胞率为20%的小鼠红细胞;对照组小鼠腹腔注射等量的C57BL/6小鼠正常红细胞。观察两组小鼠黑色素瘤出瘤时间并测量肿瘤的体积。结果 P.y感染组小鼠黑色素瘤出瘤时间为注射黑色素瘤细胞后(11.30±0.21)d,晚于对照组[(10.40±0.22)d](P<0.05);自可精确测量瘤体起至实验终点,2组小鼠肿瘤均不断增长,P.y感染组瘤体体积均显著小于对照组(P均<0.05);P.y感染组瘤体生长速度为(71.10±6.29)mm3/d,明显慢于对照组[(302.80±49.94)mm3/d](P<0.05),且P.y感染组肿瘤每日生长速度亦明显慢于对照组(P均<0.05)。结论约氏疟原虫感染可以延缓肿瘤出瘤时间,且对小鼠黑色素瘤瘤体的增长具有明显的抑制作用。

关键词：约氏疟原虫感染黑色素瘤抑瘤作用小鼠

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