检索结果-内蒙古大学图书馆

中国血吸虫病防治杂志 2014年第3期26卷 287-291页

作者：王雪梅骆江坤李倩李江艳陈勇陶志勇夏惠方强蚌埠医学院病原生物学教研室蚌埠233030 安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠医学院免疫学教研室

目的构建表达猪囊尾蚴cC1抗原的重组耻垢分枝杆菌疫苗。方法提取pET28a-cC1质粒DNA,用xho I和BamH I双酶切,用Klenow酶补平xho I酶切末端,同时提取pMV261穿梭质粒载体,用Hind III和BamH I双酶切,用Klenow酶补平Hind III酶切末端,纯化后... 详细信息

目的构建表达猪囊尾蚴cC1抗原的重组耻垢分枝杆菌疫苗。方法提取pET28a-cC1质粒DNA,用xho I和BamH I双酶切,用Klenow酶补平xho I酶切末端,同时提取pMV261穿梭质粒载体,用Hind III和BamH I双酶切,用Klenow酶补平Hind III酶切末端,纯化后的酶切产物通过T4连接酶连接,构建pMV261-cC1穿梭质粒,测序验证正确后,将pMV261cC1穿梭质粒经电穿孔法转化耻垢分枝杆菌,构建重组耻垢分枝杆菌,经热诱导后,以猪囊尾蚴病患者血清为一抗进行Western-blotting鉴定。此外,比较正常耻垢分枝杆菌和重组cC1耻垢分枝杆菌生长状态并绘制生长曲线。结果构建的重组穿梭载体经酶切、测序验证正确。构建的重组耻垢分枝杆菌经热诱导后,SDS-PAGE电泳分析显示,在40 kDa处有外源性蛋白表达,与预期值相符。Western-blotting显示其可被猪囊尾蚴病患者血清识别,表明cC1抗原基因在耻垢分枝杆菌中表达成功。重组耻垢分枝杆菌与正常耻垢分枝杆菌的增殖特性无明显差异。结论成功构建了表达猪囊尾蚴特异性抗原cC1的重组耻垢分枝杆菌疫苗。

关键词：猪囊尾蚴 cC1 耻垢分枝杆菌疫苗

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两种转基因载体对关节软骨细胞中内参基因转录水平的影响

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中国生物制品学杂志 2012年第6期25卷 697-699,703页

作者：王雪梅焦玉萌陈传好蚌埠医学院病原生物学教研室安徽蚌埠233030 安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院人体解剖学教研室安徽蚌埠233030

目的探讨质粒型和腺相关病毒两种转基因载体对家兔关节软骨细胞中GAPDH、B2M、18S rRNA和TUBB内参基因mRNA转录水平的影响。方法将携带增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EFGP)报告基因的质粒型载体pcDNA6.2-EGFP... 详细信息

目的探讨质粒型和腺相关病毒两种转基因载体对家兔关节软骨细胞中GAPDH、B2M、18S rRNA和TUBB内参基因mRNA转录水平的影响。方法将携带增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EFGP)报告基因的质粒型载体pcDNA6.2-EGFP和腺相关病毒载体AAV2-EGFP分别转染至体外培养的家兔关节软骨细胞中,荧光显微镜观测转染后关节软骨细胞中EGFP的表达,实时PCR技术检测两各组关节软骨细胞中GAPDH、B2M、18S rRNA和TUBB基因mRNA转录水平的变化。结果转染48 h后,两组转基因关节软骨细胞中均可见明显的绿色荧光;与正常对照组相比,4个内参基因在两组转基因细胞内的转录水平均下调,其中GAPDH和TUBB基因下调较小,腺相关病毒载体对转基因的影响最小。结论腺相关病毒载体对关节软骨细胞中内参基因表达的影响低于质粒型载体,表明腺相关病毒对关节软骨细胞本身影响较小;GAPDH和TUBB基因可作为实验的内参基因校正目的基因的表达量。

关键词：转基因载体软骨细胞绿色荧光蛋白内参基因实时聚合酶链反应

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基于529bp高度重复序列的弓形虫PCR诊断方法的建立

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中国生物制品学杂志 2010年第7期23卷 767-769页

作者：方强夏惠陈兴智徐家森王雪梅齐文娟孙新沈继龙蚌埠医学院病原生物学教研室安徽蚌埠233030 安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院免疫学教研室安徽蚌埠233030 安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的建立基于529bp高度重复序列的弓形虫PCR诊断方法。方法以弓形虫基因组中529bp的高度重复序列为诊断靶基因设计引物,并以其为模板经PCR扩增该基因,与pMD18-T载体连接,构建pMD18/Tox529bp重组质粒,测序鉴定正确后,经稀释标定作为标准... 详细信息

目的建立基于529bp高度重复序列的弓形虫PCR诊断方法。方法以弓形虫基因组中529bp的高度重复序列为诊断靶基因设计引物,并以其为模板经PCR扩增该基因,与pMD18-T载体连接,构建pMD18/Tox529bp重组质粒,测序鉴定正确后,经稀释标定作为标准品。优化PCR反应体系及条件,并验证该方法的灵敏度及特异性。结果所构建的pMD18/Tox529bp重组质粒经测序正确,建立的PCR方法最低可检出10个拷贝的目的基因,除对弓形虫基因组DNA扩增出特异性条带外,用该方法对健康志愿者全血、正常小鼠全血、间日疟原虫、恶性疟原虫及结核杆菌基因组DNA均未扩增出特异性条带。结论已建立了一种具有较高灵敏度和特异性的弓形虫PCR诊断方法 ,有望应用于人和动物弓形虫感染的筛查、临床诊断及流行病学调查。

关键词：弓形虫病重复序列,核酸聚合酶链反应

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单核细胞增生李斯特菌L型对小鼠脾脏树突状细胞免疫调节作用影响的研究

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四川大学学报（医学版） 2019年第6期50卷 847-851页

作者：韦莉 Moshin Raza Kashif 金齐力蚌埠医学院病原生物学教研室蚌埠233030 蚌埠医学院感染与免疫安徽省重点实验室蚌埠233030 蚌埠医学院第二附属医院检验科蚌埠233040

目的研究单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes, LM)感染对树突状细胞(dendritic cell, DC)免疫功能的影响,探讨细菌型(WT)和L型(L-form)LM对DC的免疫活化能力差异。方法将C57BL/6小鼠随机分为对照组、WT组、L-form组,3组小鼠... 详细信息

目的研究单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes, LM)感染对树突状细胞(dendritic cell, DC)免疫功能的影响,探讨细菌型(WT)和L型(L-form)LM对DC的免疫活化能力差异。方法将C57BL/6小鼠随机分为对照组、WT组、L-form组,3组小鼠分别经尾静脉感染PBS液、细菌型LM和L型LM,电镜观察脾脏DC超微结构特征;流式细胞术检测小鼠脾脏DC的数量、共刺激分子表达、胞内细胞因子分泌、脾脏T细胞亚群及其活化程度。结果透射电镜可观察到对照组小鼠脾脏DC表面有大量丝状伪足,胞浆均匀,细胞核大而偏于一侧;吞噬细菌后,表面丝状伪足减少,胞质内空泡增多;小鼠感染后第1天脾脏中DC绝对值无明显升高或降低(P>0.05),但成熟表型特征性分子表达上调(P<0.05),L-form感染组DC表面CD80和CD86分子均高于WT组(P<0.05);小鼠感染LM后TNF-α^+DC比例明显升高,L-form感染组分泌TNF-α的DC高于WT组(P<0.05);感染LM后第7天,3组小鼠脾脏CD4^+T细胞和CD8^+T细胞在淋巴细胞中所占比例差异均无统计学意义(P>0.05),但L-form组CD69^+ T细胞比例高于WT组(P<0.05)。结论 L型LM可介导相对高水平的TNF-α,促进DC成熟以增强其抗原递呈的能力。

关键词：单核细胞增生李斯特菌 L型树突状细胞

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三种免疫调节剂增强弓形虫重组ROP2疫苗保护效应的研究

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中国人兽共患病学报 2013年第6期29卷 570-574页

作者：陈兴智杨小迪杨雯陈勇刘丽丽沈继龙孙新蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 安徽病原生物学省级实验室人兽共患病安徽省重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的观察弗氏佐剂(Freund’s Adjuvant,FA)、匹多莫德(Pidotimod,PT)和西咪替丁(Cimetidine,CIM)等3种免疫调节剂增强重组弓形虫棒状体蛋白2(rROP2)疫苗的免疫保护效应。方法将100只BALB/c小鼠随机分为PBS对照组、重组rROP2疫苗组、FA-r... 详细信息

目的观察弗氏佐剂(Freund’s Adjuvant,FA)、匹多莫德(Pidotimod,PT)和西咪替丁(Cimetidine,CIM)等3种免疫调节剂增强重组弓形虫棒状体蛋白2(rROP2)疫苗的免疫保护效应。方法将100只BALB/c小鼠随机分为PBS对照组、重组rROP2疫苗组、FA-rROP2疫苗组、PT-rROP2疫苗组和CIM-rROP2疫苗组等5组;FA、PT和CIM分别与rROP2抗原混合皮下注射免疫,检测小鼠细胞免疫和体液免疫指标,并观察弓形虫RH株攻击感染后的生存时间。结果 FA-rROP2组、CIM-rROP2组小鼠血清IFN-γ、特异性IgG、脾细胞增殖活性及外周血CD4+/CD8+比值均显著高于rROP2蛋白组(P<0.05);PT对外周血CD4+/CD8+比值无明显影响,但显著增加了IFN-γ的水平及脾细胞增殖活性。小鼠攻击试验表明,FA-rROP2组、PT-rROP2组以及CIM-rROP2组小鼠存活时间显著长于rROP2组和PBS对照组组;rROP2蛋白组各项指标均显著高于PBS组(P<0.05)。结论 FA、PT和CIM可增强rROP2蛋白抗原诱导的细胞免疫和体液免疫反应,都能延长攻击感染小鼠的生存时间,具有增强rROP2蛋白疫苗保护效应的功能。其中CIM的佐剂样免疫促进作用接近于FA,但副作用显著低于后者,具有临床实用的潜在价值。

关键词：弓形虫弗氏佐剂匹多莫德西咪替丁 ROP2蛋白免疫佐剂

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旋毛虫成虫排泄分泌蛋白组分分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2017年第1期35卷 24-29页

作者：杨小迪陶志勇程洋吴琦王小莉宋迪徐岚松薛仁敏常雪莲张慧汪瑞陈兴智方强蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 江南大学无锡医学院病原感染与免疫组无锡214122

目的通过"鸟枪法"(shotgun技术)分析旋毛虫(Trichinella spiralis)成虫排泄分泌蛋白(adult worm excretory/secretory protein,AWESP)的组分,寻找其调节人炎症性肠炎的活性成分。方法制备旋毛虫AWESP,经十二烷基硫酸钠-聚丙... 详细信息

目的通过"鸟枪法"(shotgun技术)分析旋毛虫(Trichinella spiralis)成虫排泄分泌蛋白(adult worm excretory/secretory protein,AWESP)的组分,寻找其调节人炎症性肠炎的活性成分。方法制备旋毛虫AWESP,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离酶解后,采用shotgun液相色谱-串联质谱系统鉴定,将分析所得的数据通过Masco软件进行数据库检索,完成蛋白的鉴定,并对鉴定出的蛋白从细胞组分、分子功能和生物学途径3个方面进行Gene Ontology(GO)分类。结果 SDS-PAGE分离的旋毛虫AWESP相对分子质量(Mr)约15 000~116 000,质谱分析共获得280个蛋白,通过Masco软件检索已鉴定的蛋白为96种,假定的蛋白为98种,未鉴定的蛋白为86种。已初步发现至少有4种蛋白可能具有潜在的调节人炎症性肠炎的作用,包括半胱氨酸蛋白酶抑制剂、丝氨酸蛋白酶、53 000排泄/分泌抗原和谷胱氨肽转移酶。GO工具分析显示,已鉴定的蛋白具有104种分子功能,参与了363种生物过程。结论经Masco软件检索,旋毛虫AWESP成分复杂多样,已鉴定的蛋白有96种,从已明确的蛋白中初步筛选出4种与调节人炎症性肠炎潜在相关的蛋白。

关键词：旋毛虫成虫排泄分泌蛋白 shotgun技术炎症性肠炎

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我国血吸虫病报告病例数ARIMA模型预测研究

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中华地方病学杂志 2021年第9期40卷 712-717页

作者：常雪莲王小莉魏星李亮蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院数字医学与智慧健康安徽省重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠学院食品与生物工程系安徽蚌埠233000

目的研究我国(不含港、澳、台地区)的血吸虫病月报告病例数进行自回归移动平均(autoregressive integrated moving average,ARIMA)模型预测作用,为血吸虫病的防控提供科学依据。方法采用ARIMA模型,以2009年1月至2018年12月我国血吸虫病... 详细信息

目的研究我国(不含港、澳、台地区)的血吸虫病月报告病例数进行自回归移动平均(autoregressive integrated moving average,ARIMA)模型预测作用,为血吸虫病的防控提供科学依据。方法采用ARIMA模型,以2009年1月至2018年12月我国血吸虫病月报告病例数时间序列为训练集,应用R 3.6.2软件进行平稳性分析后,采用赤池信息准则和贝叶斯信息准则等筛选参数,选出较优ARIMA模型;以2019年1-12月我国血吸虫病月报告病例数为测试集进行验证和逐月优化,得到1个最优ARIMA模型;并以2019年1月至2020年10月我国血吸虫病月报告病例数验证最优ARIMA模型的预测效果。结果基于2009年1月至2018年12月数据,可以得到4种较优ARIMA模型,分别为ARIMA(2,0,2)(1,0,1)[12]、ARIMA(2,0,2)(0,0,1)[12]、ARIMA(2,0,2)(1,0,0)[12]和ARIMA(2,0,2);以2019年1-12月的病例数实际值和4种ARIMA模型预测值分别进行对比,构建出的血吸虫病月报告病例数的最优预测模型为ARIMA(2,0,2)(1,0,1)[12];预测的相对误差均值为0.51%。结论本研究构建的ARIMA模型精度较高,适用于我国血吸虫病病例数的短期预测分析,可为该病防治提供数据支持,具有一定实践指导意义。

关键词：血吸虫病月报告病例数时间序列 ARIMA模型预测

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细粒棘球蚴囊液蛋白组分分析

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中国血吸虫病防治杂志 2021年第5期33卷 476-482,539页

作者：王舒颖杨小迪高宏宇邢敬雨胡琪黄婷婷吴培赵艺婷刘浩伟刘为玥王会娜周瑞褚亮蚌埠医学院第一附属医院儿科蚌埠233000 安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠医学院病原生物学教研室蚌埠医学院第二附属医院普外科

目的利用鸟枪法分析细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus)囊液蛋白(hydatid cyst fluid protein,HCFP)组分,寻找其中具有潜在调控免疫失调性疾病功能的活性组分。方法无菌收集细粒棘球蚴病患者肝囊肿中的细粒棘球蚴囊液,采用鸟枪法进行... 详细信息

目的利用鸟枪法分析细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus)囊液蛋白(hydatid cyst fluid protein,HCFP)组分,寻找其中具有潜在调控免疫失调性疾病功能的活性组分。方法无菌收集细粒棘球蚴病患者肝囊肿中的细粒棘球蚴囊液,采用鸟枪法进行液相色谱-串联质谱鉴定,采用Max Quant 1.6.1.0软件进行数据库检索。利用基因本体论(Gene Ontol-ogy,GO)对已鉴定的蛋白质从细胞组分、分子功能和生物学功能三个方面进行分类。结果经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离的细粒棘球蚴囊液蛋白条带相对分子量为25~70 k Da,质谱分析共获得37个蛋白,其中已鉴定蛋白32种、未知蛋白5种。已初步发现至少有4种蛋白具有潜在调节免疫失调性疾病作用,即抗原B、谷胱甘肽S-转移酶、硫氧还蛋白过氧化物酶和苹果酸脱氢酶。GO富集分析显示,已鉴定蛋白具有149种分子功能,参与341种生物学过程。结论细粒棘球蚴囊液蛋白成分复杂多样,从已知蛋白中初步筛选出4种与调节免疫失调性疾病潜在相关的蛋白。

关键词：细粒棘球蚴囊液蛋白质组鸟枪法免疫失调性疾病

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小鼠疟原虫感染经氯喹治疗痊愈后再感染免疫特征分析

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中国血吸虫病防治杂志 2020年第6期32卷 569-576页

作者：王艺姚鑫唐明洋刘磊宋世好陶志勇夏惠常雪莲方强蚌埠医学院病原生物学教研室、安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 蚌埠医学院临床医学院蚌埠医学院临床医学院2系蚌埠医学院精神医学院

目的探讨疟原虫感染小鼠在原虫血症高峰期经氯喹治愈后,再感染同/异种疟原虫的疾病进程和免疫保护特征。方法用非致死型约氏疟原虫17XNL株(P.y 17XNL株)感染C57BL/6小鼠,感染率达高峰时(第9天)半数小鼠以氯喹治疗,其余小鼠自然痊愈。痊... 详细信息

目的探讨疟原虫感染小鼠在原虫血症高峰期经氯喹治愈后,再感染同/异种疟原虫的疾病进程和免疫保护特征。方法用非致死型约氏疟原虫17XNL株(P.y 17XNL株)感染C57BL/6小鼠,感染率达高峰时(第9天)半数小鼠以氯喹治疗,其余小鼠自然痊愈。痊愈后小鼠于初次感染90 d后分别采用等量致死型约氏疟原虫17XL株(P.y 17XL株)或伯氏疟原虫ANKA株(P.b ANKA株)再次感染,采用吉姆萨薄血膜染色法观察原虫血症水平变化,并应用酶联免疫吸附试验和流式细胞术分别检测再感染前后小鼠血清中IgG抗体水平和脾细胞中记忆性T细胞亚群比例。结果初次感染P.y 17XNL株后,自愈与氯喹治愈组小鼠血清IgG抗体水平分别为(5.047±0.924)、(4.429±0.624)pg/mL,差异无统计学意义(t=0.437,P>0.05);但均显著高于无感染正常组小鼠的(1.624±0.280)pg/mL(F=22.522,P<0.01)。自愈和氯喹治愈组小鼠再感染P.y 17XL株或P.b ANKA株并痊愈后,各组小鼠血清IgG抗体水平分别为(15.487±1.173)、(14.644±1.523)、(15.965±1.150)pg/mL和(15.185±1.333)pg/mL,差异无统计学意义(F=0.542,P>0.05);但均高于初次感染组,差异有统计学意义(F=67.383,P<0.01)。感染P.y 17XNL株后自愈及氯喹治愈组小鼠再感染P.y 17XL株或P.b ANKA株并痊愈后,各组小鼠CD4+记忆性T细胞比例分别为(34.023±2.289)%、(35.608±1.779)%、(34.208±2.106)%和(32.820±1.930)%,CD8+记忆性T细胞比例分别为(17.103±1.627)%、(17.873±1.425)%、(17.935±2.092)%和(18.918±2.823)%,组间差异均无统计学意义(F=0.944、0.390,P均>0.05);但均高于初次感染后小鼠,且差异有统计学意义(CD4+记忆性T细胞,F=50.532,P<0.01;CD8+记忆性T细胞,F=21.751,P<0.01)。结论小鼠疟疾经氯喹治疗痊愈不影响宿主在再感染时产生有效免疫保护力。初次感染后,小鼠对同种和异种疟原虫再感染均具有一定保护性且对同种疟原虫再感染的抵抗力强于异种疟原虫。

关键词：疟原虫再感染寄生虫血症记忆T细胞小鼠

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猪囊尾蚴病患者组织中IL-17和IL-23的表达及意义

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中国组织化学与细胞化学杂志 2014年第5期23卷 433-438页

作者：王雪梅方强陶志勇焦玉萌夏惠孙新蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030

目的观察猪囊尾蚴病患者局部病灶的病理学特征及IL-17、IL-23的表达情况,探讨IL-17、IL-23在免疫调控中的作用及意义。方法对猪囊尾蚴病患者病变组织进行苏木素伊红(HE)染色观察炎性细胞浸润情况;免疫组织化学ElivisionTMplus两步法观察... 详细信息

目的观察猪囊尾蚴病患者局部病灶的病理学特征及IL-17、IL-23的表达情况,探讨IL-17、IL-23在免疫调控中的作用及意义。方法对猪囊尾蚴病患者病变组织进行苏木素伊红(HE)染色观察炎性细胞浸润情况;免疫组织化学ElivisionTMplus两步法观察IL-17、IL-23的表达水平。结果 HE染色结果显示,病变组织中有多种类型炎细胞浸润,以异物巨细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞浸润为主。38例病变组织中16例有IL-17的表达,阳性表达率为42.11%,11例有IL-23的表达,阳性表达率为28.95%,阳性表达多定位于异物巨细胞、淋巴细胞和巨噬细胞的胞浆。脑型猪囊尾蚴病变组织中IL-17的阳性表达强度高于皮肌型病变组织。IL-17和IL-23在猪囊尾蚴病变组织中表达呈正相关(r=0.39588,P<0.05)。结论猪囊尾蚴感染的病变组织有不同程度的炎症改变;IL-17和IL-23参与了猪囊尾蚴感染的免疫反应,且IL-17和IL-23在猪囊尾蚴感染的免疫应答过程中有一定的相互影响。

关键词：猪囊尾蚴病 IL-17 IL-23 免疫组织化学

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