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第八届全国免疫学学术大会

作者：齐文娟王媛媛常雪莲焦玉萌陈勇王雪梅夏惠方强蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室

研究背景:囊尾蚴病一种严重人兽共患寄生虫病,有效的囊尾蚴病疫苗,将可以有效的保护易感者,对于有效的控制甚至最终消灭囊尾蚴病具有极其重要的作用。现有的囊尾蚴病疫苗尚不令人十分满意。而本研究针对寄生虫生活史多阶段的特点,研制... 详细信息

研究背景:囊尾蚴病一种严重人兽共患寄生虫病,有效的囊尾蚴病疫苗,将可以有效的保护易感者,对于有效的控制甚至最终消灭囊尾蚴病具有极其重要的作用。现有的囊尾蚴病疫苗尚不令人十分满意。而本研究针对寄生虫生活史多阶段的特点,研制囊尾蚴病多期复合基因疫苗,以期得更佳效果。目的:(1)构建包含猪带绦虫六钩蚴期和囊尾蚴期特异性疫苗候选分子的囊尾蚴病多期复合基因疫苗。(2)评价该复合基因疫苗诱导的免疫效应。方法:(1)扩增六钩蚴期特异性抗原TSOL18和囊尾蚴期特异性抗原c C1编码基因,通过柔性接头(linker)(Gly4Ser)3串联这两个基因(简写为TSOL18/L/c C1),并装载入p VAX1,构建p VAX1-TSOL18/L/c C1重组质粒,同时构建p VAX1-TSOL18,p VAX1-c C1。将所构建的重组质粒转染293T细胞,通过 RT-PCR、间接免疫荧光、Western-blot鉴定融合基因在真核细胞中的表达状态;以构建的重组质粒肌肉注射小鼠,以免疫组化检测融合基因在小鼠骨骼肌的真核表达效果。(2)以p VAX1-TSOL18/L/c C1经肌肉注射途径免疫BALB/c小鼠,以流式细胞术检测免疫后小鼠脾淋巴细胞胞内细胞因子等细胞免疫指标,并以间接ELISA法检测相应的特异性抗体。结果:(1)构建的p VAX1-TSOL18/L/c C1重组质粒经酶切电泳和测序结果与预期设计的基因序列一致。 RT-PCR、间接免疫荧光、Western-blot、免疫组化显示目的基因可在转染的细胞和组织内有效表达。(2)p VAX1-TSOL18/L/c C1组小鼠血清中检测出高滴度TSOL18Ig G抗体和c C1组抗体。p VAX1-TSOL18/L/c C1组分泌IFN-γ和分泌IL-4的CD4+T细胞亚群比例及分泌IFN-γ的CD8+T细胞亚群比例均较空质粒对照组显著升高。结论:(1)成功构建包含猪带绦虫六钩蚴和囊尾蚴期特异性疫苗候选分子的囊尾蚴病多期复合基因疫苗p VAX1-TSOL18/L/c C1。(2)囊尾蚴病多期复合基因疫苗p VAX1-TSOL18/L/c C1基因疫苗有效地诱导了特异性体液免疫和细胞免疫效应。

关键词：囊尾蚴病六钩蚴囊尾蚴复合基因疫苗免疫效应

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外源性一氧化氮体外杀伤旋毛虫成虫的实验研究

外源性一氧化氮体外杀伤旋毛虫成虫的实验研究

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2012年安徽省医学会微生物与免疫学、热带病与寄生虫病学会换届改选与学术研讨会

作者：王小莉王媛媛方强薛玉芹夏惠沈继龙蚌埠医学院病原生物学教研室、安徽省感染与免疫重点实验室，蚌埠 233030 安徽医科大学病原生物学教研室，合肥 230032

目的：探讨外源性一氧化氮(NO)对旋毛虫成虫的杀伤作用。　　方法：取感染旋毛虫的BALB/c小鼠肠组织，分离成虫，配制成虫悬液(1000条/ml)。48孔板中每孔加入100 μl成虫悬液，再加入各组试剂，终浓度分别为：亚硝基铁氰化钠(SNP)0.02、... 详细信息

目的：探讨外源性一氧化氮(NO)对旋毛虫成虫的杀伤作用。
　　方法：取感染旋毛虫的BALB/c小鼠肠组织，分离成虫，配制成虫悬液(1000条/ml)。48孔板中每孔加入100 μl成虫悬液，再加入各组试剂，终浓度分别为：亚硝基铁氰化钠(SNP)0.02、0.05、0.10、0.20、0.50和1.00 mmol/L，1.00 mmoFL SNP+0.15mmol/L血红蛋白(Hb)、1.00 mmol/LSNP+0.15 mmol/L FeSO4、1.00 mmol/L SNP+1.00mmol/LL-cyst、1.00 mmol/LSNP+0.15mmol/L FeSO4+1.00mmol/L L-cyst，设空白对照组和阳性对照组(1.00 mmol/LSNP+100 μl肌幼虫悬液)，每组设3个复孔。置37℃ 5％CO2培养箱中孵育。第4天收集各孔成虫，镜检并作番红染色，计算各组虫体死亡率。
　　结果：SNP 0.02 mmol/L和0.05mmo儿组旋毛虫死亡率分别为(1.4±1.2)％和(3.2±1.0)％，这两组与空白对照组的死亡率之间的差异无统计学意义(P>0.05)。SNP 0.10、0.20、0.50和1.00 mmol/L组虫体死亡率分别为为(9.9±1.8)％、(37.7±2.5)％、(50.1±3.5)％和(80.84±1.1)％，与空白对照组之间的差异有统计学意义(P<0.05)。旋毛虫成虫死亡率与sNP浓度呈线性趋势(P<0.05)，且呈正相关(P<0.05)。在加入1.00 mmol/L SNP的孔中分别加入Hb、L-cyst、FeSO4和FeSO4+L-cyst与仅SNP1.00mmol/L实验组比较，成虫死亡率均有所下降，分别为(56.54±3.7)％、(72±74.5±6)％、(74.8±2.4)％和(69.84±2.3)％。SNP1.00 mmol/L组与SNP+Hb、sNP+FeSO4+L-cyst组旋毛虫成虫死亡率间的差异有统计学意义(P<0.05)。
　　结论：外源性NO对体外培养的旋毛虫成虫有杀伤作用，而Hb、L-cyst+FeSO4可抑制该杀伤作用。

关键词：外源性一氧化氮体体外培养杀伤实验旋毛虫成虫

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重组猪单链IL-12的构建及真核表达

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南方医科大学学报 2011年第10期31卷 1687-1692页

作者：王雪梅袁远英方强夏惠孙新李柏青蚌埠医学院病原生物学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院免疫学教研室安徽蚌埠233030

目的克隆猪IL-12(pIL-12)p35和p40亚单位cDNA,构建含有重组猪单链IL-12(pscIL-12)融合基因的真核表达质粒并进行表达。方法分别从正常成年肉猪的外周血单个核细胞(PBMCs)和脾淋巴细胞中提取总RNA,经RT-PCR分别获得pIL-12 p35和p40亚单... 详细信息

目的克隆猪IL-12(pIL-12)p35和p40亚单位cDNA,构建含有重组猪单链IL-12(pscIL-12)融合基因的真核表达质粒并进行表达。方法分别从正常成年肉猪的外周血单个核细胞(PBMCs)和脾淋巴细胞中提取总RNA,经RT-PCR分别获得pIL-12 p35和p40亚单位编码序列的cDNA,应用重叠延伸PCR技术通过一柔性接头(linker)(Gly4Ser)3串联这两个亚基构建融合基因pscIL-12,将融合基因pscIL-12插入pcDNA3.1(+)真核表达载体,通过阳离子聚合物介导转染CHO-K1细胞进行表达,RT-PCR鉴定pscIL-12融合基因在真核细胞中的表达。结果所克隆的pIL-12 p35亚基和p40亚基的编码基因序列和构建的融合基因pscIL-12序列均经PCR、酶切、测序得以证实;融合基因pscIL-12在CHO-K1细胞中成功转录。结论成功构建了pcDNA3.1(+)-pscIL-12融合基因的真核表达质粒;pcDNA3.1(+)-pscIL-12在CHO-K1细胞中成功转录,为进一步探讨pscIL-12融合蛋白的生物学活性和疫苗佐剂效应奠定了基础。

关键词：白细胞介素-12 单链猪分子克隆真核表达 CHO-K1细胞

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寄生虫病DNA疫苗研究进展

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中国血吸虫病防治杂志 2011年第3期23卷 340-344页

作者：齐文娟方强蚌埠医学院免疫学教研室蚌埠233030 安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠医学院病原生物学教研室

寄生虫病防治策略之一是研制安全有效的疫苗,DNA疫苗是近10多年发展起来的新型疫苗。近年来寄生虫病DNA疫苗研究取得了很大进展。本文就DNA疫苗的免疫机理、构建与优化、佐剂、递送途径,以及疟疾、血吸虫病、囊尾蚴病、弓形虫病等重要... 详细信息

寄生虫病防治策略之一是研制安全有效的疫苗,DNA疫苗是近10多年发展起来的新型疫苗。近年来寄生虫病DNA疫苗研究取得了很大进展。本文就DNA疫苗的免疫机理、构建与优化、佐剂、递送途径,以及疟疾、血吸虫病、囊尾蚴病、弓形虫病等重要寄生虫病DNA疫苗的研究进展作一综述。

关键词： DNA疫苗寄生虫病疟疾血吸虫病囊尾蚴病弓形虫病

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铜绿假单胞菌及其L型诱导血管内皮细胞凋亡的实验研究

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中国人兽共患病学报 2011年第1期27卷 37-40页

作者：陈登宇刘勇徐萍萍夏佩莹蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030

目的研究铜绿假单胞菌及其L型感染诱导血管内皮细胞凋亡的能力,比较两者的差异。方法用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测铜绿假单胞菌及其L型感染血管内皮细胞2、4、6、8与10h后各时间段的细胞凋亡率,Giemsa染色观察细胞形态变化判... 详细信息

目的研究铜绿假单胞菌及其L型感染诱导血管内皮细胞凋亡的能力,比较两者的差异。方法用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测铜绿假单胞菌及其L型感染血管内皮细胞2、4、6、8与10h后各时间段的细胞凋亡率,Giemsa染色观察细胞形态变化判断细胞受损情况。结果铜绿假单胞菌及其L型能诱导血管内皮细胞发生凋亡,与对照组比较差异有显著性意义(P<0.05);L型诱导细胞的凋亡率弱于原菌(P<0.05)。结论铜绿假单胞菌及其L型可诱导血管内皮细胞发生凋亡,与细菌致病性相关;铜绿假单胞菌L型较原菌诱导细胞凋亡的能力减弱。

关键词：铜绿假单胞菌细菌L型内皮细胞凋亡

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谷跗线螨交叉反应性变应原的定位

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昆虫学报 2011年第7期54卷 848-852页

作者：赵学影赵振富孙新刘志刚吕艳思蚌埠医学院病原生物学教研室感染与免疫安徽省重点实验室安徽蚌埠233030 深圳大学过敏反廊与免疫学研究所广东深圳518060

为明确谷跗线螨Tarsonemus granarius交叉反应性变应原在体内的定位,制作谷跗线螨石蜡切片,HE染色后光镜观察其内部形态结构;选用对尘螨过敏患者的阳性血清特异性IgE抗体作探针,免疫组织化学染色分析其交叉反应性抗原存在位置。HE染色... 详细信息

为明确谷跗线螨Tarsonemus granarius交叉反应性变应原在体内的定位,制作谷跗线螨石蜡切片,HE染色后光镜观察其内部形态结构;选用对尘螨过敏患者的阳性血清特异性IgE抗体作探针,免疫组织化学染色分析其交叉反应性抗原存在位置。HE染色显示谷跗线螨的消化系统占据其体腔的大部分,包括口咽部、中肠、后肠、肛门和唾液腺等结构。免疫组织化学染色显示谷跗线螨的口咽部、中肠、肠内容物、肠壁及生殖腺等均有阳性反应。谷跗线螨体内存在可诱发人体IgE抗体的变应原,变应原在其体内的分布格局与屋尘螨Dermatophagoides pteronyssinus基本一致。

关键词：谷跗线螨跗线螨科变应原抗原定位免疫组织化学 HE染色交叉反应性

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弓形虫PRU株BSR4基因的体外扩增及生物信息学分析

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蚌埠医学院学报 2011年第3期36卷 217-222页

作者：郭凯陈兴智焦玉萌夏惠方强王雪梅蚌埠医学院病原生物学教研室感染与免疫安徽省重点实验室安徽蚌埠233030

目的:克隆弓形虫Prugniaud(PRU)株表面抗原BSR4基因,并进行序列测定和生物信息学分析。方法:根据BSR4基因已知序列(ME49株)设计合成一对引物,应用PCR技术从弓形虫PRU株基因组DNA中扩增BSR4基因,克隆入pET28a(+)载体并进行序列测定。用... 详细信息

目的:克隆弓形虫Prugniaud(PRU)株表面抗原BSR4基因,并进行序列测定和生物信息学分析。方法:根据BSR4基因已知序列(ME49株)设计合成一对引物,应用PCR技术从弓形虫PRU株基因组DNA中扩增BSR4基因,克隆入pET28a(+)载体并进行序列测定。用生物信息学方法对BSR4的理化性质、结构和功能进行预测。结果:得到弓形虫PRU株BSR4基因片段,测序结果表明,获得BSR4基因片段约1 194 bp,编码398个氨基酸。同源性分析显示,弓形虫PRU株和ME49株基因序列同源性为100%,BSR4相对分子量为42 344.75,有2个功能结构域,氨基酸序列的前40位为信号肽序列。N端为信号肽,C端为疏水序列,预测它为糖基磷脂酰肌醇固着蛋白,存在18个潜在抗原表位及2个保守功能区域。结论:成功获得弓形虫PRU株BSR4基因序列。

关键词：弓形虫 BSR4基因体外扩增生物信息学分析

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弓形虫529 bp重复序列基因的PCR阳性质控质粒的构建

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蚌埠医学院学报 2011年第1期36卷 1-3页

作者：焦玉萌陈兴智孙新王雪梅方强蚌埠医学院病原生物学教研室感染与免疫安徽省重点实验室安徽蚌埠233030

目的:构建含有弓形虫529 bp高度重复序列基因的重组质粒,为基于该基因的弓形虫病分子生物学诊断建立标准阳性对照品。方法:以弓形虫RH株基因组DNA为模板,对529 bp的基因片段进行扩增,将纯化后的PCR产物与pMD18-T载体连接后转入大肠埃希... 详细信息

目的:构建含有弓形虫529 bp高度重复序列基因的重组质粒,为基于该基因的弓形虫病分子生物学诊断建立标准阳性对照品。方法:以弓形虫RH株基因组DNA为模板,对529 bp的基因片段进行扩增,将纯化后的PCR产物与pMD18-T载体连接后转入大肠埃希菌DH-5α中,提取重组质粒PCR及测序鉴定。以弓形虫529 bp基因为靶基因设计的检测引物,扩增弓形虫基因组DNA及质粒DNA。结果:PCR产物序列与GENBANK中弓形虫529 bp基因序列完全一致。以弓形虫基因组DNA和质粒DNA为模板,成功扩增出预期的249bp基因片段。结论:成功构建可作为标准阳性对照品的含有弓形虫529 bp高度重复序列基因的重组质粒pMD-18-Tox,为经济实用的弓形虫诊断试剂盒的研制奠定了基础。

关键词：弓形虫重组质粒 529 bp高度重复序列聚合酶链反应

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妊娠母鼠静脉注射葡萄球菌肠毒素B对胎鼠胸腺发育的影响

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蚌埠医学院学报 2011年第6期36卷 545-546,550页

作者：刘从森刘婷婷孔晓明朱翔刘勇闵宏林管俊昌蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030

目的:观察妊娠母鼠静脉注射葡萄球菌肠毒素B(SEB)对胎鼠胸腺发育的影响。方法:将孕鼠随机分为实验组及对照组,每组12只;实验组和对照组孕鼠在妊娠第16天分别尾静脉注射SEB 15μg和等体积的生理盐水;于妊娠21天打开母鼠腹腔取出胎鼠,称... 详细信息

目的:观察妊娠母鼠静脉注射葡萄球菌肠毒素B(SEB)对胎鼠胸腺发育的影响。方法:将孕鼠随机分为实验组及对照组,每组12只;实验组和对照组孕鼠在妊娠第16天分别尾静脉注射SEB 15μg和等体积的生理盐水;于妊娠21天打开母鼠腹腔取出胎鼠,称量胎盘、胎鼠及其胸腺的湿重和干重;胎鼠胸腺细胞以抗CD4-APC及抗CD8-PE双标染色后用流式细胞仪检测T淋巴细胞各亚群。结果:妊娠母鼠静脉注射SEB后可明显减少胎鼠胸腺的湿重和干重(P<0.01),减少CD4-CD8+、CD4+CD8+T细胞(P<0.01和P<0.05),但明显增加CD4+CD8-T细胞(P<0.01);胎鼠和胎盘的干、湿重与对照组差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:SEB可明显影响胎鼠胸腺的发育。

关键词：妊娠胎鼠胸腺发育葡萄球菌肠毒素B

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铜绿假单胞菌L型诱导血管内皮细胞凋亡机制的探讨

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中国微生态学杂志 2011年第4期23卷 313-315页

作者：刘从森陈登宇李凤云蚌埠医学院显微形态实验中心病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030

目的探讨铜绿假单胞菌L型诱导血管内皮细胞凋亡机制。方法 Annexin V-FITC/PI双染荧光法和流式细胞术法检测铜绿假单胞菌L型感染血管内皮细胞8 h时的凋亡率,分光光度法检测细胞Caspase-9活化情况。结果铜绿假单胞菌L型和血管内皮细胞共... 详细信息

目的探讨铜绿假单胞菌L型诱导血管内皮细胞凋亡机制。方法 Annexin V-FITC/PI双染荧光法和流式细胞术法检测铜绿假单胞菌L型感染血管内皮细胞8 h时的凋亡率,分光光度法检测细胞Caspase-9活化情况。结果铜绿假单胞菌L型和血管内皮细胞共培养8 h时细胞凋亡率、Caspase-9活化程度较对照组增高(P<0.05)。结论铜绿假单胞菌L型可通过活化Caspase-9的线粒体途径诱导血管内皮细胞凋亡。

关键词：铜绿假单胞菌细菌L型内皮细胞凋亡 Caspase-9

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