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中国人兽共患病学报 2009年第12期25卷 1158-1161页

作者：韦莉金齐力刘勇夏佩莹蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030

目的探讨结核分枝杆菌19kD脂蛋白(Mtb P19)对单核巨噬细胞表面TLR-2表达的影响。方法以10μg/ml Mtb P19作用于拂波醇酯(PMA)分化的THP-1细胞,CO2孵箱孵育6 h。免疫细胞化学法(ICC)观察巨噬细胞TLR-2分布;对巨噬细胞TLR-2进行荧光抗体染... 详细信息

目的探讨结核分枝杆菌19kD脂蛋白(Mtb P19)对单核巨噬细胞表面TLR-2表达的影响。方法以10μg/ml Mtb P19作用于拂波醇酯(PMA)分化的THP-1细胞,CO2孵箱孵育6 h。免疫细胞化学法(ICC)观察巨噬细胞TLR-2分布;对巨噬细胞TLR-2进行荧光抗体染色,流式细胞术分析P19作用前后TLR-2的表达变化;激光共聚焦显微镜观察其受体排列。结果ICC法观察发现TLR-2均匀分布于巨噬细胞表面。P19作用组与对照组相比平均荧光强度明显增强;在作用组细胞表面出现多个斑块状染色阳性的荧光标记区,而对照组TLR-2分子总体呈现随机动态的分布。结论Mtb P19不仅能诱导巨噬细胞TLR-2表达增加,还可以引起受体发生功能性聚集。

关键词：结核分枝杆菌P19 THP-1细胞 TLR-2

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蛋白激酶Cθ在γδT细胞表达L-选择素中的调控作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2009年第2期29卷 146-150页

作者：武文娟耿英华唐洁李柏青蚌埠医学院生物化学与分子生物学教研室 233030 安徽省感染与免疫重点实验室免疫学教研室蚌埠医学院附属医院血液科

目的探讨蛋白激酶Cθ（PKCθ）信号转导途径在γδT细胞表达L-选择素（CD62L）中的调控作用。方法用结核分枝杆菌抗原（Mtb-Ag）刺激人外周血单个核细胞（PBMC）并培养6～8d，获得富含γδT细胞的结核分枝杆菌活化T细胞（MtbAT），作为... 详细信息

目的探讨蛋白激酶Cθ（PKCθ）信号转导途径在γδT细胞表达L-选择素（CD62L）中的调控作用。方法用结核分枝杆菌抗原（Mtb-Ag）刺激人外周血单个核细胞（PBMC）并培养6～8d，获得富含γδT细胞的结核分枝杆菌活化T细胞（MtbAT），作为γδT细胞来源，分别加佛波醇酯（PMA）、PMA＋离子霉素（IMN）培养3、6、12、24h，或用培养8d的MtbAT细胞分别加入Mtb—Ag、Rottlerin＋Mtb-Ag、PMA、Rottlerin＋PMA刺激4h，收集细胞用荧光抗体染色后，流式细胞术（FCM）检测CD62L在18T细胞表面的表达。结果体外激活培养6～8d的18T细胞表面CD62L的表达率为75．0％～87．0％。PMA刺激78T细胞3～12h时CD62L表达逐渐下调，表达率为42．3％～25．5％；但在刺激后24h时，又明显回升至53．2％。而PMA＋IMN刺激3、6h时，18T细胞CD62L表达也下调，表达率分别为52．1％、39．3％；但在刺激12h和24h时CD62L表达率分别为52．9％和35．3％。在PMA刺激γδT细胞同时加入Rottlerin，则CD62L的表达率（47．9％）明显高于PMA单独刺激组（31．8％）；MtbAT用Mtb—Ag再刺激4h后，γδT细胞CD62L的表达率由70．0％降为54．8％，而在***再刺激时加入Rottlerin，则CD62L表达率增加到63．1％。结论γδT细胞在PMA或Mtb-Ag刺激后CD62L的表达下调可被PKCθ特异性抑制剂部分阻断，表明CD62L在γδT细胞表面的表达可能与PKCθ信号转导途径的调控相关。

关键词： L-选择素 γδT细胞蛋白激酶C

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丝裂原蛋白激酶两种抑制剂对弓形虫侵入宿主细胞影响的差异

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中国人兽共患病学报 2009年第2期25卷 97-99页

作者：杨小迪陈兴智徐军孙新常雪莲王媛媛胡守锋葛晓松李柏青感染与免疫安徽省重点实验室蚌埠医学院病原生物学教研室蚌埠233030 安徽省淮南市第一人民医院检验科淮南232007

目的观察两种丝裂原蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPK)抑制剂PD98059及U0126对刚地弓形虫侵入宿主细胞的影响,探讨其对弓形虫速殖子侵入宿主细胞信号转导途径的不同阻断效应。方法丝裂原蛋白激酶抑制剂PD98059或U0126... 详细信息

目的观察两种丝裂原蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPK)抑制剂PD98059及U0126对刚地弓形虫侵入宿主细胞的影响,探讨其对弓形虫速殖子侵入宿主细胞信号转导途径的不同阻断效应。方法丝裂原蛋白激酶抑制剂PD98059或U0126分别在不同时间及不同剂量作用于速殖子-宿主细胞培养系统,用流式细胞仪(FCM)检测宿主细胞感染速殖子的差异。结果流式细胞仪检测加入U01261μmol/L、10μmol/L和100μmol/L的细胞培养孔的细胞感染弓形虫速殖子的量分别比对照组平均降低了26.10%(P<0.01),66.42%(P<0.01)和70.39%(P<0.01)。而加入PD980591μmol/L、10μmol/L和100μmol/L的分别比对照组平均降低了25.45%(P<0.01),53.01%(P<0.01)和64.70%(P<0.01)。实验中发现100μmol/L U0126作用培养细胞9h的时候,可导致HL-60细胞出现部分聚集成团、漂浮的中毒现象。结论U0126和PD98059均可明显抑制弓形虫速殖子侵入宿主细胞,但其差异无显著性,其机制有待进一步探索。

关键词：弓形虫速殖子 MAP激酶 U0126 PD98059

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猪囊尾蚴病患者外周血T细胞亚群比例和产生IFN-γ、IL-4水平研究

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蚌埠医学院学报 2009年第9期34卷 756-758页

作者：胡守锋王雪梅孙新方强夏惠焦玉萌蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030

目的:检测猪囊尾蚴病患者外周血T细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)体外诱生IFN-γ、IL-4的水平,探讨T细胞亚群在感染免疫中的调控。方法:采用流式细胞仪检测猪囊尾蚴病患者PBMC中T细胞亚群比例和IFN-γ/IL-4水平;用Cellqu... 详细信息

目的:检测猪囊尾蚴病患者外周血T细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)体外诱生IFN-γ、IL-4的水平,探讨T细胞亚群在感染免疫中的调控。方法:采用流式细胞仪检测猪囊尾蚴病患者PBMC中T细胞亚群比例和IFN-γ/IL-4水平;用Cellquest软件或WinMDI2.8软件数据分析。结果:猪囊尾蚴病患者T细胞亚群CD3+与CD4+细胞百分率均较正常人升高(P<0.01),CD4+/CD8+比值亦较正常人升高(P<0.01);PBMC中分泌IFN-γ及IL-4的CD3+细胞百分率与正常人差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:猪囊尾蚴病患者PBMC中CD3+、CD4+细胞百分率显著升高,T细胞亚群比例失调,免疫功能紊乱。

关键词：猪囊尾蚴病流式细胞术 Th1/Th2细胞因子

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永久性混合虫卵玻片标本制作和使用效果观察

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中国病原生物学杂志 2009年第6期4卷 474-474,411页

作者：胡守锋刘家荣孙新夏惠蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030

采用内置小盖片和盖玻片碎片的简化方法制作永久性混合虫卵玻片,经20多年的使用,标本虫卵形态仍较为完整,基本没有褪色和变型,使用效果良好。使用该方法制作玻片,可以节省稀缺的虫卵和玻片的使用量,减少了资源浪费。使用混合虫卵玻片有... 详细信息

采用内置小盖片和盖玻片碎片的简化方法制作永久性混合虫卵玻片,经20多年的使用,标本虫卵形态仍较为完整,基本没有褪色和变型,使用效果良好。使用该方法制作玻片,可以节省稀缺的虫卵和玻片的使用量,减少了资源浪费。使用混合虫卵玻片有利于加深学生对多种寄生虫虫卵的记忆,丰富了实验内容,减少了操作步骤,提高了实验效果。

关键词：混合虫卵标本制作使用效果

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外源性一氧化氮体外杀伤红内期间日疟原虫的实验研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2009年第4期27卷 318-321页

作者：方强夏惠王雪梅陆凤陶志勇曹俊孙新高琪苏州大学基础医学系寄生虫学教研室苏州215123 蚌埠医学院病原生物学教研室、安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 江苏省寄生虫病防治研究所、卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室无锡214064

目的探讨外源性一氧化氮(NO)对红内期间日疟原虫的杀伤作用。方法采集以早期滋养体期为主,原虫密度>0.5%的患者血样,配成含2%红细胞的虫血混悬液。96孔板中每孔加100μl虫血混悬液,再加入各组试剂,亚硝基铁氰化钠(SNP,分别为0.02、0... 详细信息

目的探讨外源性一氧化氮(NO)对红内期间日疟原虫的杀伤作用。方法采集以早期滋养体期为主,原虫密度>0.5%的患者血样,配成含2%红细胞的虫血混悬液。96孔板中每孔加100μl虫血混悬液,再加入各组试剂,亚硝基铁氰化钠(SNP,分别为0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00mmol/L),SNP+血红蛋白(Hb)0.15mmol/L,SNP+硫酸亚铁(FeSO4)0.15mmol/L,SNP+L-半胱氨酸(L-cyst)1.00mmol/L,SNP+FeSO40.15mmol/L+L-cyst1.00mmol/L,后4组SNP浓度均为1.00mmol/L,设对照组,每组重复3次,置37℃5%CO2培养箱中培养。根据虫龄,估计发育至裂殖体时间,提前3h取空白对照孔涂片镜检,确定终止培养时间,培养终止后吉氏染色,镜检计数成熟裂殖体,计算NO对红内期间日疟原虫的抑制率,统计分析各组对间日疟原虫抑制率的差异。结果SNP0.02mmol/L组,间日疟原虫抑制率为(0.84±1.69)%,对培养的红内期间日疟原虫无杀伤作用(P>0.05);SNP0.05mmol/L组,间日疟原虫抑制率为(12.26±3.04)%,对培养的红内期间日疟原虫存在杀伤作用(P<0.01)。且抑制率随SNP浓度上升而升高。在含有1.00mmol/LSNP的孔中分别加入Hb、L-cyst、FeSO4和FeSO4+L-cyst与只添加SNP1.00mmol/L孔相比,红内期间日疟原虫抑制率自(85.40±2.90)%下降为(5.90±2.90)%、(25.86±4.02)%、(30.16±2.75)%和(16.71±2.30)%。结论外源性NO对体外培养的红内期间日疟原虫有杀伤作用,而Hb、L-cyst和FeSO4可以逆转这种杀伤作用。

关键词：外源性NO 间日疟原虫红内期

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加强知识间比较联系,提高临床微生物学实验教学效果

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山西医科大学学报（基础医学教育版） 2009年第5期11卷 564-566页

作者：陈登宇刘勇闵宏林夏佩莹蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室

临床微生物学实验教学内容涉及细菌种类多、内容联系不紧密，教学上应强调知识间的横向和纵向比较联系、要点的突出，促进学习的横向、纵向迁移，提高学生对知识的掌握和应用能力。

关键词：临床微生物学实验教学教学方法

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解脲脲原体垂直感染与新生小鼠肺炎关系的研究

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蚌埠医学院学报 2009年第12期34卷 1057-1059页

作者：吕杰李凤云唐素兰蚌埠医学院微生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030

目的:建立妊娠期解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum,UU)生殖道感染的小鼠模型,观察UU垂直感染与新生小鼠肺炎发生的关系。方法:采用血清4型UU标准菌株生殖道感染妊娠期孕鼠,同时设立对照组,通过病原学检查、病理学及免疫组化等方法观... 详细信息

目的:建立妊娠期解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum,UU)生殖道感染的小鼠模型,观察UU垂直感染与新生小鼠肺炎发生的关系。方法:采用血清4型UU标准菌株生殖道感染妊娠期孕鼠,同时设立对照组,通过病原学检查、病理学及免疫组化等方法观察妊娠期UU感染与新生小鼠肺炎发生之间的关系及垂直传播情况。结果:病理检查显示UU感染组新生小鼠肺部有间质性炎症发生,且脾有多核巨细胞融合的炎性样变;病原学检测显示新生小鼠肺、脾部有UU定植,356只实验组新生仔鼠肺、脾UU阳性检出率分别为71.36%和33.34%;378只对照组相关组织未分离培养出UU;免疫组化显示新生小鼠肺部有UU抗原,而对照组则无。结论:妊娠期UU感染可通过垂直传播方式影响胚胎发育,从而导致新生小鼠间质性肺炎的发生。

关键词：解脲脲原体新生小鼠胚胎发育垂直感染间质性肺炎

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特异性IgG抗体在同源与异种疟原虫再感染中的作用研究

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中国人兽共患病学报 2009年第4期25卷 358-360页

作者：方强刘军陈光曹雅明高琪苏州大学医学院寄生虫学教研室苏州215123 蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 中国医科大学免疫学教研室沈阳110001 佳木斯大学基础医学院寄生虫学教研室佳木斯154000 江苏省寄生虫病防治研究所、卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室无锡

目的探讨特异性IgG抗体在同源和异种疟原虫再感染过程中的作用。方法DBA/2小鼠经腹腔感染致死型约氏疟原虫(Py17XL)60d后,采用等量Py17XL、Py17XNL、Pynigeriensis或PbANKA分别再次攻击,计数红细胞感染率;采用ELISA方法动态检测脾细胞... 详细信息

目的探讨特异性IgG抗体在同源和异种疟原虫再感染过程中的作用。方法DBA/2小鼠经腹腔感染致死型约氏疟原虫(Py17XL)60d后,采用等量Py17XL、Py17XNL、Pynigeriensis或PbANKA分别再次攻击,计数红细胞感染率;采用ELISA方法动态检测脾细胞培养上清中IFN-γ及其血清中特异性IgG抗体水平的变化。结果Py17XNL和Pynigeriensis再感染小鼠出现一过性低水平的原虫血症;再感染后第4d脾细胞培养上清中IFN-γ水平与正常小鼠相比无显著性差异(P>0.05),而血清中特异性IgG抗体水平明显升高(P<0.01),小鼠全部存活。相比,PbANKA再感染小鼠出现高水平的原虫血症,与其初次感染水平相近,再感染后第4d脾细胞培养上清中IFN-γ水平出现明显升高(P<0.01),而血清中特异性的IgG抗体水平却无明显变化,与正常小鼠水平接近,小鼠全部死亡。结论特异性IgG抗体可在宿主抗同源疟原虫再感染中发挥着重要作用,而对异种疟原虫再感染无保护性。

关键词：特异性IgG 啮齿类疟原虫再感染

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槲皮素对BGC-823胃癌细胞caspase-3、Bcl-2表达影响与抑癌作用研究

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蚌埠医学院学报 2009年第5期34卷 379-383页

作者：张珂王萍张庆于东红陈昌杰承泽农李柏青蚌埠医学院第一附属医院病理科蚌埠医学院病理学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院第一附属医院中心实验室安徽蚌埠233004 蚌埠医学院生物化学与分子生物学教研室安徽蚌埠233030 安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030

目的：研究槲皮素（quercetin，QUE）抑制人胃癌BGC-823细胞增殖和诱导凋亡的作用。方法：采用四甲基噻唑氮蓝（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）比色法检测不同终浓度的QUE对BGC-823细胞增殖的影响及其细胞毒活性，流式细胞术（FC... 详细信息

目的：研究槲皮素（quercetin，QUE）抑制人胃癌BGC-823细胞增殖和诱导凋亡的作用。方法：采用四甲基噻唑氮蓝（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）比色法检测不同终浓度的QUE对BGC-823细胞增殖的影响及其细胞毒活性，流式细胞术（FCM）对不同浓度的QUE作用24h的BGC-823细胞进行凋亡检测及其周期分析．用免疫组化法测定Bcl-2、caspase-3的表达率。结果：QUE对体外培养的BGC-823细胞具有明显的增殖抑制作用，在30～120μmol／L范围内可显著抑制BGC-823细胞增殖，且呈剂量-时间依赖性。FCM检测后，BGC-823细胞周期阻滞于S期，药物浓度呈正相关。经QUE处理后BGC-823细胞株caspase-3蛋白表达明显增加，Bcl-2蛋白表达降低。免疫组化检测表明，用药组Bcl-2蛋白的表达下降，easpase-3蛋白的表达率增强，与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：QUE诱导BGC-823细胞发生凋亡，使细胞周期阻滞于S期，抑制增生与诱导凋亡的机制可能与下调Bcl-2、上调caspase-3蛋白的表达有关。

关键词：槲皮素 BGC-823细胞抑制凋亡蛋白的表达

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