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刚地弓形虫排泄分泌抗原刺激NK细胞过继转输对小鼠B16F10黑色素瘤生长的抑制作用

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2019年第4期37卷 444-447,452页

作者：焦玉萌夏惠王雪梅陶志勇朱琳方强蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室

目的观察刚地弓形虫排泄分泌抗原(TgESA)刺激后的NK细胞对小鼠B16F10黑色素瘤生长的作用。方法取弓形虫RH株体外培养12h后,从培养上清收集获得弓形虫ESA。取10只C57BL/6小鼠随机分为2组,每组5只,每只小鼠右腋窝皮下接种B16F10黑素瘤细胞... 详细信息

目的观察刚地弓形虫排泄分泌抗原(TgESA)刺激后的NK细胞对小鼠B16F10黑色素瘤生长的作用。方法取弓形虫RH株体外培养12h后,从培养上清收集获得弓形虫ESA。取10只C57BL/6小鼠随机分为2组,每组5只,每只小鼠右腋窝皮下接种B16F10黑素瘤细胞2×10^5个。接种后第7天,随机取1组小鼠腹腔注射100μlTgESA,另1组注射等量的PBS。接种后第14天,无痛处死小鼠,无菌条件下制备小鼠脾细胞悬液,分离2组荷瘤鼠的NK细胞,分别记为NKB16F10和NKESA,用于后续过继转输实验。取30只C57BL/6小鼠随机分为对照组、NKB16F10组和NKESA组,每组10只。3组小鼠均右腋窝皮下接种B16F10细胞2×10^5个/鼠。其中NKB16F10组和NKESA组小鼠同时分别尾静脉注射2×10^5个NKB16F10和NKESA。观察瘤体生长情况以及各组小鼠死亡数和死亡时间,共观察35 d。结果 NK细胞过继转输后,NKd、组和“心間。组小鼠平均出瘤时间分别为(14.70 ±0.95)、(12.60 ± 0.70) d,均晚于对照组的(8.50 ± 0.85) d (P < 0.05).3组小鼠出瘤后,瘤体均不断增长,至第35天,NKB16F10组和NKESA组的平均瘤体面积分别为(686.53 ± 17.84)和(577.79 ± 49.70) mm^2,均小于对照组的(787.84 ± 19.94) mm^2 (P< 0.05 ).对照组、NKB16F10组和NKESA组小鼠分别于接种B16F10细胞后第24、27和30天开始出现死亡,至第35天,存活的小鼠数分别为3、4和6只。结论弓形虫ESA刺激的NK细胞过继转输小鼠后可较为明显地抑制B16F10黑色素瘤瘤体的生长。

关键词：刚地弓形虫排泄分泌抗原自然杀伤细胞黑色素卿

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弓形虫排泄分泌抗原对Lewis肺癌小鼠瘤体生长的抑制作用

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中国血吸虫病防治杂志 2019年第4期31卷 400-403,438页

作者：焦玉萌陶志勇崔裕健刘春祥夏惠王雪梅方强蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室

目的探讨弓形虫排泄分泌抗原(ESA)对Lewis肺癌小鼠CD4^+CD25^+Foxp3^+T(Treg)细胞亚群的影响,观察弓形虫ESA对肿瘤生长的抑制作用。方法将C57BL/6小鼠随机分成PBS组(14只)和Lewis组(34只)。Lewis组小鼠右腋窝皮下接种Lewis肺癌细胞2... 详细信息

目的探讨弓形虫排泄分泌抗原(ESA)对Lewis肺癌小鼠CD4^+CD25^+Foxp3^+T(Treg)细胞亚群的影响,观察弓形虫ESA对肿瘤生长的抑制作用。方法将C57BL/6小鼠随机分成PBS组(14只)和Lewis组(34只)。Lewis组小鼠右腋窝皮下接种Lewis肺癌细胞2×10^5个,PBS组注射等量无菌PBS。接种后第7天(D7),将PBS组小鼠分成PBS2组、PBS2+ESA组,每组7只;将Lewis组分成Lewis2组和Lewis2+ESA组,每组17只;PBS2+ESA组及Lewis2+ESA组小鼠腹腔注射100μL弓形虫ESA。ESA干预后7 d计算各组小鼠脾脏系数,检测Treg细胞数量变化,同时观察荷瘤鼠长期瘤体生长情况。结果 ESA干预后7 d,PBS2+ESA组[(0.66±0.09)%]和Lewis2+ESA组[(0.69±0.07)%]脾脏明显增大,脾脏系数与PBS2组[(0.30±0.02)%]和Lewis2组[(0.33±0.03)%]比较,差异均有统计学意义(P均<0.05)。PBS2+ESA组[(1.28±0.14)%]和Lewis2+ESA组[(1.58±0.14)%]脾脏Treg细胞占脾细胞的比例均下降,与PBS2组[(2.06±0.07)%]和Lewis2组[(2.44±0.23)%]比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。ESA干预后,瘤体生长延缓,在实验终点时,Lewis2+ESA组小鼠瘤体明显小于Lewis2组(P <0.05)。结论 ESA可下调荷瘤鼠脾脏Treg细胞占脾细胞的比例,抑制瘤体生长。

关键词：弓形虫排泄分泌抗原 CD4^+CD25^+ Foxp3^+ T细胞肺癌小鼠

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我国旋毛虫病流行病学诊断治疗及防治措施研究进展

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中国血吸虫病防治杂志 2020年第5期32卷 448-452,458页

作者：杨小迪徐常艳王舒颖高宏宇梁金宝蚌埠医学院病原生物学教研室蚌埠233030 安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠医学院第一附属医院

旋毛虫病是一种呈世界性分布的人兽共患寄生虫病,人和多种动物(包括肉食动物、草食动物甚至某些禽鸟类)均可被感染,人因生食或半生食含有活幼虫囊包的肉类或肉制品而感染。在中国,该病主要流行于西南、东北和中原地区,危害人数多、社会... 详细信息

旋毛虫病是一种呈世界性分布的人兽共患寄生虫病,人和多种动物(包括肉食动物、草食动物甚至某些禽鸟类)均可被感染,人因生食或半生食含有活幼虫囊包的肉类或肉制品而感染。在中国,该病主要流行于西南、东北和中原地区,危害人数多、社会影响大。该病暴发所导致的突发性公共卫生事件,严重威胁着人民健康和社会稳定。本文就我国旋毛虫病流行状况、诊断、治疗和防控措施等作一概述,旨在为进一步做好我国旋毛虫病防治工作提供参考。

关键词：旋毛虫病流行病学诊断治疗防控措施

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间日疟原虫安徽地域株乳酸脱氢酶基因序列同源性分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2013年第2期31卷 148-150页

作者：胡明洁方强吴守伟汤必奎张静焦玉萌夏惠沈继龙蚌埠医学院遗传学教研室蚌埠233030 蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

采集安徽省蚌埠市区、五河县、怀远县、蒙城县和利辛县2009-2010年的39例间日疟患者血样,分别提取DNA,PCR扩增间日疟原虫乳酸脱氢酶(PvLDH)基因,并克隆测序,以及Blast序列分析。结果显示,克隆的PvLDH基因片段为951 bp。序列分析发现,采... 详细信息

采集安徽省蚌埠市区、五河县、怀远县、蒙城县和利辛县2009-2010年的39例间日疟患者血样,分别提取DNA,PCR扩增间日疟原虫乳酸脱氢酶(PvLDH)基因,并克隆测序,以及Blast序列分析。结果显示,克隆的PvLDH基因片段为951 bp。序列分析发现,采自安徽地区的39例间日疟患者血样的PvLDH基因序列之间无差异(登录号为GU078391),与GenBank中其他地域株的PvLDH基因序列同源性均>99%,氨基酸序列仅分别与EJEU60134株和MIA061251株存在1个氨基酸的差异。

关键词：间日疟原虫乳酸脱氢酶同源性分析

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猪囊尾蚴期特异性抗原cC1的克隆与高效可溶性原核表达

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南方医科大学学报 2010年第2期30卷 206-209页

作者：方强骆江坤崔琢齐文娟胡元生沈继龙蚌埠医学院病原生物学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院免疫学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院第一附属医院安蚌埠233004 安徽医科大学病原生物学教研室安徽合肥230032

目的克隆猪囊尾蚴期特异性抗原cC1基因,并进行高效可溶性原核表达。方法利用PT-PCR从猪囊尾蚴中获得cC1编码基因,T-A克隆后,将cC1插入原核表达载体pET28a中,经酶切、测序鉴定后将其转入宿主菌*** BL21(DE3)中,通过IPTG诱导表达并优化表... 详细信息

目的克隆猪囊尾蚴期特异性抗原cC1基因,并进行高效可溶性原核表达。方法利用PT-PCR从猪囊尾蚴中获得cC1编码基因,T-A克隆后,将cC1插入原核表达载体pET28a中,经酶切、测序鉴定后将其转入宿主菌*** BL21(DE3)中,通过IPTG诱导表达并优化表达条件,表达的融合蛋白Ni+-亲和层析柱纯化后经快速液相蛋白层析分离系统检测其纯度。采用SDS-PAGE和Western-blotting对目的蛋白进行分析和鉴定。结果RT-PCR扩增出的片段长度为1056bp,构建的重组表达质粒经PCR、酶切验证,和预期的结果一致,测序鉴定与Genbank中cC1基因相比于423位存在1个同义突变。转化有重组质粒的E. coli BL21(DE3)经过0.05mmol/LIPTG 37℃诱导6h高效表达了占菌体蛋白总量60%的可为囊虫病患者血清识别的相对分子质量约为40000的可溶性融合蛋白,经Ni+-亲和层析柱纯化后纯度达94%。结论成功克隆并高效可溶性原核表达了猪囊尾蚴期特异性抗原cC1,为其进一步研究和应用奠定了基础。

关键词：猪囊尾蚴,抗原cC1 克隆原核表达条件优化

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安徽省中北部淡色库蚊对多种杀虫剂抗性及其kdr基因突变研究

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中国血吸虫病防治杂志 2016年第4期28卷 406-410页

作者：魏星杨小迪王小莉李江艳王媛媛夏惠常雪莲方强蚌埠医学院病原生物学教研室、安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 蚌埠医学院公共课程部

目的了解安徽省中北部地区淡色库蚊对多种杀虫剂的抗药性现状及其kdr基因突变情况。方法 2014年6-9月在淮北市、蚌埠市和滁州市3地采集淡色库蚊幼虫,带回实验室饲养至成虫,采用WHO成蚊接触筒药膜滤纸接触法对其进行0.05%溴氰菊酯、5%马... 详细信息

目的了解安徽省中北部地区淡色库蚊对多种杀虫剂的抗药性现状及其kdr基因突变情况。方法 2014年6-9月在淮北市、蚌埠市和滁州市3地采集淡色库蚊幼虫,带回实验室饲养至成虫,采用WHO成蚊接触筒药膜滤纸接触法对其进行0.05%溴氰菊酯、5%马拉硫磷、0.1%噁虫威、4%DDT抗性生物测定。以PCR扩增经溴氰菊酯抗性测定的库蚊抗性相关kdr基因并进行测序,统计L1014位点突变情况。结果上述3个地区淡色库蚊对溴氰菊酯、马拉硫磷、噁虫威、DDT 4种杀虫剂都产生了不同程度的抗药性,对DDT产生的抗性较高;虽然3地淡色库蚊接触DDT后的死亡率差异无统计学意义(F=1.027,P>0.05);但接触溴氰菊酯、马拉硫磷、噁虫威后的死亡率差异均有统计学意义(F=23.823、33.955、128.841,P均<0.01)。3地淡色库蚊种群的kdr基因1014位点均存在L1014F、L1014S这2种非同义突变;L1014F突变频率与溴氰菊酯抗性水平呈正相关(r2=0.718,P<0.01)。结论安徽省中北部地区淡色库蚊对溴氰菊酯、马拉硫磷、噁虫威、DDT均产生了较强的抗性,kdr基因L1014F突变频率与溴氰菊酯抗性水平呈正相关;各地区卫生部门需加强对媒介蚊虫抗性的动态监测。

关键词：淡色库蚊杀虫剂抗药性溴氰菊酯马拉硫磷噁虫威 kdr基因突变安徽省

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亚硝基铁氰化钠来源的外源性NO体外杀伤旋毛虫肌幼虫作用研究

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中国血吸虫病防治杂志 2015年第2期27卷 166-169页

作者：王小莉杨小迪常雪莲王媛媛崔洁朱伟夏惠方强蚌埠医学院病原生物学教研室、安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 蚌埠医学院显微形态实验中心

目的探讨亚硝基铁氰化钠(SNP)来源的NO体外杀伤旋毛虫肌幼虫的作用及其相关机制。方法制作浓度为1 000条/ml的旋毛虫肌幼虫悬液。培养板每孔加入0.1 ml肌幼虫悬液,再加入SNP,使其终浓度分别为0.02、0.05、0.10、0.20、0.50 mmol/L和1.00... 详细信息

目的探讨亚硝基铁氰化钠(SNP)来源的NO体外杀伤旋毛虫肌幼虫的作用及其相关机制。方法制作浓度为1 000条/ml的旋毛虫肌幼虫悬液。培养板每孔加入0.1 ml肌幼虫悬液,再加入SNP,使其终浓度分别为0.02、0.05、0.10、0.20、0.50 mmol/L和1.00 mmol/L,并设空白对照组,37℃5%CO2培养箱中孵育4 d后收集各孔肌幼虫,镜检计数,计算并比较各组肌幼虫死亡率。另于培养板中每孔加入0.1 ml肌幼虫悬液,分别设A组(对照组,1.00 mmol/L SNP)、B组(0.15 mmol/L Fe SO4+1.00 mmol/L SNP)、C组(1.00 mmol/L L-半胱氨酸+1.00 mmol/L SNP)、D组(0.15 mmol/L Fe SO4+1.00mmol/L L-半胱氨酸+1.00 mmol/L SNP)、E组(0.15 mmol/L Hb+1.00 mmol/L SNP),培养、检测方法同前,计算并比较各组肌幼虫死亡率。结果 0.02 mmol/L SNP组与空白对照组的旋毛虫肌幼虫死亡率分别为(5.50±1.80)%和(4.93±0.25)%(P>0.05)。0.05、0.10、0.20、0.50、1.00 mmol/L SNP组虫体死亡率分别为(20.19±2.71)%、(29.21±2.12)%、(41.81±2.03)%、(47.85±3.79)%和(60.98±5.19)%,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。旋毛虫肌幼虫死亡率与SNP浓度呈正相关(rs=0.875,P<0.05)。B、C、D、E组肌幼虫死亡率分别为(49.48±1.34)%、(47.29±2.79)%、(26.28±1.37)%和(17.93±3.49)%,均较A组(60.98±5.19)%有所下降(P均<0.05)。结论 SNP来源NO对体外培养的旋毛虫肌幼虫具有杀伤作用,而血红蛋白、硫酸亚铁、L-半胱氨酸对该杀伤具有抑制作用,以血红蛋白抑制效果最显著。

关键词：旋毛虫肌幼虫亚硝基铁氰化钠一氧化氮体外研究

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过继转移在蠕虫调控过敏性和自身免疫性疾病的研究进展

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2015年第4期33卷 290-294页

作者：丁忆晗周瑞杨小迪张莉莉蚌埠医学院病原生物学教研室.安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 蚌埠医学院第一附属医院儿科蚌埠233030

寄生蠕虫或其衍生物可通过诱导免疫细胞的活化,释放调节性细胞因子,从而抑制过敏性及自身免疫性疾病。目前大量的动物实验表明过继回输活化的淋巴细胞对免疫失调性疾病具有保护作用,体现出潜在的临床应用价值。本文对过继转移在蠕虫调... 详细信息

寄生蠕虫或其衍生物可通过诱导免疫细胞的活化,释放调节性细胞因子,从而抑制过敏性及自身免疫性疾病。目前大量的动物实验表明过继回输活化的淋巴细胞对免疫失调性疾病具有保护作用,体现出潜在的临床应用价值。本文对过继转移在蠕虫调控过敏性和自身免疫性疾病方面的进展进行综述。

关键词：蠕虫过继转移过敏性和自身免疫性疾病

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两种转基因载体对关节软骨细胞中内参基因转录水平的影响

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中国生物制品学杂志 2012年第6期25卷 697-699,703页

作者：王雪梅焦玉萌陈传好蚌埠医学院病原生物学教研室安徽蚌埠233030 安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院人体解剖学教研室安徽蚌埠233030

目的探讨质粒型和腺相关病毒两种转基因载体对家兔关节软骨细胞中GAPDH、B2M、18S rRNA和TUBB内参基因mRNA转录水平的影响。方法将携带增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EFGP)报告基因的质粒型载体pcDNA6.2-EGFP... 详细信息

目的探讨质粒型和腺相关病毒两种转基因载体对家兔关节软骨细胞中GAPDH、B2M、18S rRNA和TUBB内参基因mRNA转录水平的影响。方法将携带增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EFGP)报告基因的质粒型载体pcDNA6.2-EGFP和腺相关病毒载体AAV2-EGFP分别转染至体外培养的家兔关节软骨细胞中,荧光显微镜观测转染后关节软骨细胞中EGFP的表达,实时PCR技术检测两各组关节软骨细胞中GAPDH、B2M、18S rRNA和TUBB基因mRNA转录水平的变化。结果转染48 h后,两组转基因关节软骨细胞中均可见明显的绿色荧光;与正常对照组相比,4个内参基因在两组转基因细胞内的转录水平均下调,其中GAPDH和TUBB基因下调较小,腺相关病毒载体对转基因的影响最小。结论腺相关病毒载体对关节软骨细胞中内参基因表达的影响低于质粒型载体,表明腺相关病毒对关节软骨细胞本身影响较小;GAPDH和TUBB基因可作为实验的内参基因校正目的基因的表达量。

关键词：转基因载体软骨细胞绿色荧光蛋白内参基因实时聚合酶链反应

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寄生虫病DNA疫苗研究进展

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中国血吸虫病防治杂志 2011年第3期23卷 340-344页

作者：齐文娟方强蚌埠医学院免疫学教研室蚌埠233030 安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠医学院病原生物学教研室

寄生虫病防治策略之一是研制安全有效的疫苗,DNA疫苗是近10多年发展起来的新型疫苗。近年来寄生虫病DNA疫苗研究取得了很大进展。本文就DNA疫苗的免疫机理、构建与优化、佐剂、递送途径,以及疟疾、血吸虫病、囊尾蚴病、弓形虫病等重要... 详细信息

寄生虫病防治策略之一是研制安全有效的疫苗,DNA疫苗是近10多年发展起来的新型疫苗。近年来寄生虫病DNA疫苗研究取得了很大进展。本文就DNA疫苗的免疫机理、构建与优化、佐剂、递送途径,以及疟疾、血吸虫病、囊尾蚴病、弓形虫病等重要寄生虫病DNA疫苗的研究进展作一综述。

关键词： DNA疫苗寄生虫病疟疾血吸虫病囊尾蚴病弓形虫病

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