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第八届全国免疫学学术大会

作者：薛玉芹王英陈勇唐洁王雪梅方强蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠医学院免疫教研室

研究背景:培养滤液蛋白CFP10,是结核分枝杆菌 RD1区编码的核心抗原之一,仅存在于致病性和一些非典型的分枝杆菌中,而不存在BCG和非致病分枝杆菌中,可强烈诱导T细胞的增殖和IFN-γ的产生,使得CFP10蛋白成为结核病重要的诊断性抗原和热点... 详细信息

研究背景:培养滤液蛋白CFP10,是结核分枝杆菌 RD1区编码的核心抗原之一,仅存在于致病性和一些非典型的分枝杆菌中,而不存在BCG和非致病分枝杆菌中,可强烈诱导T细胞的增殖和IFN-γ的产生,使得CFP10蛋白成为结核病重要的诊断性抗原和热点疫苗候选分子,而高效可溶性表达CFP-10蛋白是其应用的重要前提。目的:克隆、原核表达、纯化结核分枝杆菌CFP-10,并对重组蛋白进行抗原性鉴定。方法:用PCR方法从结核分枝杆菌H37 Ra基因组中扩增CFP10基因,将其克隆至带有GST和HIS标签的原核表达载体PET-42a(+),经酶切、测序鉴定后将其转入宿主菌*** BL21(DE3)中,通过IPTG诱导表达并优化诱导表达条件,经GST和HIS亲和层析柱纯化表达的融合蛋白。以SDSPAGE电泳和Western-blotting对目的蛋白进行分析和鉴定。结果:经PCR扩增出的目的片段长约300bp,构建的重组表达质粒经PCR、酶切验证,和预期的结果一致,测序鉴定显示插入片段与Genbank中CFP-10基因完全吻合。转化有重组质粒的*** BL21(DE3)经过0.1 mmol/L IPTG 37℃诱导6 h,高效表达了占菌体蛋白总量39.7%的相对分子质量约为37KD的可溶性融合蛋白,经亲和层析柱纯化后的获得高纯度的CFP10重组蛋白。Westernblotting结果显示目的蛋白能被结核病患者的阳性血清所识别,而不被正常人血清所识别。结论:成功克隆并高效可溶性原核表达和纯化了结核分枝杆菌CFP-10蛋白,为结核病的诊断、疫苗研究奠定了一定的基础。

关键词：结核分枝杆菌CFP-10 克隆可溶性原核表达

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猪带绦虫六钩蚴TSO45-4B抗原FNⅢ结构域线性B细胞表位预测及鉴定

猪带绦虫六钩蚴TSO45-4B抗原FNⅢ结构域线性B细胞表位预测及鉴定

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第八届全国免疫学学术大会

作者：王媛媛王小莉常雪莲陶志勇夏惠方强蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室

研究背景:猪囊尾蚴病是由猪带绦虫幼虫囊尾蚴引起的一种严重危害畜牧业生产和人类健康的人兽共患寄生虫病,疫苗是最有前景的防治囊虫病的手段之一。TSO45W-4B是研究较多的囊尾蚴病疫苗候选分子,与其他具有良好保护潜力的羊带绦虫TO45W... 详细信息

研究背景:猪囊尾蚴病是由猪带绦虫幼虫囊尾蚴引起的一种严重危害畜牧业生产和人类健康的人兽共患寄生虫病,疫苗是最有前景的防治囊虫病的手段之一。TSO45W-4B是研究较多的囊尾蚴病疫苗候选分子,与其他具有良好保护潜力的羊带绦虫TO45W、牛绦虫TSA9和猪带绦虫TSOL18、TSOL16基因等疫苗候选分子类似,其编码蛋白含有一个由66个氨基酸构成的纤连蛋白Ⅲ型(Fn Ⅲ)结构域。但至今TSO45W蛋白Fn Ⅲ结构域的免疫学特性的认识尚不清楚。预测并鉴定猪带绦虫六钩

关键词：猪带绦虫六钩蚴细胞表位 TSO45-4B 结构域

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囊尾蚴病多期复合基因疫苗的构建及免疫效应评价

囊尾蚴病多期复合基因疫苗的构建及免疫效应评价

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第八届全国免疫学学术大会

作者：齐文娟王媛媛常雪莲焦玉萌陈勇王雪梅夏惠方强蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室

研究背景:囊尾蚴病一种严重人兽共患寄生虫病,有效的囊尾蚴病疫苗,将可以有效的保护易感者,对于有效的控制甚至最终消灭囊尾蚴病具有极其重要的作用。现有的囊尾蚴病疫苗尚不令人十分满意。而本研究针对寄生虫生活史多阶段的特点,研制... 详细信息

研究背景:囊尾蚴病一种严重人兽共患寄生虫病,有效的囊尾蚴病疫苗,将可以有效的保护易感者,对于有效的控制甚至最终消灭囊尾蚴病具有极其重要的作用。现有的囊尾蚴病疫苗尚不令人十分满意。而本研究针对寄生虫生活史多阶段的特点,研制囊尾蚴病多期复合基因疫苗,以期得更佳效果。目的:(1)构建包含猪带绦虫六钩蚴期和囊尾蚴期特异性疫苗候选分子的囊尾蚴病多期复合基因疫苗。(2)评价该复合基因疫苗诱导的免疫效应。方法:(1)扩增六钩蚴期特异性抗原TSOL18和囊尾蚴期特异性抗原c C1编码基因,通过柔性接头(linker)(Gly4Ser)3串联这两个基因(简写为TSOL18/L/c C1),并装载入p VAX1,构建p VAX1-TSOL18/L/c C1重组质粒,同时构建p VAX1-TSOL18,p VAX1-c C1。将所构建的重组质粒转染293T细胞,通过 RT-PCR、间接免疫荧光、Western-blot鉴定融合基因在真核细胞中的表达状态;以构建的重组质粒肌肉注射小鼠,以免疫组化检测融合基因在小鼠骨骼肌的真核表达效果。(2)以p VAX1-TSOL18/L/c C1经肌肉注射途径免疫BALB/c小鼠,以流式细胞术检测免疫后小鼠脾淋巴细胞胞内细胞因子等细胞免疫指标,并以间接ELISA法检测相应的特异性抗体。结果:(1)构建的p VAX1-TSOL18/L/c C1重组质粒经酶切电泳和测序结果与预期设计的基因序列一致。 RT-PCR、间接免疫荧光、Western-blot、免疫组化显示目的基因可在转染的细胞和组织内有效表达。(2)p VAX1-TSOL18/L/c C1组小鼠血清中检测出高滴度TSOL18Ig G抗体和c C1组抗体。p VAX1-TSOL18/L/c C1组分泌IFN-γ和分泌IL-4的CD4+T细胞亚群比例及分泌IFN-γ的CD8+T细胞亚群比例均较空质粒对照组显著升高。结论:(1)成功构建包含猪带绦虫六钩蚴和囊尾蚴期特异性疫苗候选分子的囊尾蚴病多期复合基因疫苗p VAX1-TSOL18/L/c C1。(2)囊尾蚴病多期复合基因疫苗p VAX1-TSOL18/L/c C1基因疫苗有效地诱导了特异性体液免疫和细胞免疫效应。

关键词：囊尾蚴病六钩蚴囊尾蚴复合基因疫苗免疫效应

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铜绿假单胞菌L型对第三代和第四代头孢菌素药物敏感性研究

铜绿假单胞菌L型对第三代和第四代头孢菌素药物敏感性研究

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纪念中国微生物学会成立六十周年大会暨2012年中国微生物学会学术年会

作者：陈登宇蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠 233030

目的：探讨铜绿假单胞菌标准菌株L型对第三代和第四代头孢菌素药物敏感及耐药状况。方法：利用K-B药物纸片琼脂扩散法检测铜绿假单胞菌标准菌株L型对第三代和第四代头孢菌素药物敏感程度，分析铜绿假单胞菌L型的耐药状况。结果：铜绿假... 详细信息

目的：探讨铜绿假单胞菌标准菌株L型对第三代和第四代头孢菌素药物敏感及耐药状况。方法：利用K-B药物纸片琼脂扩散法检测铜绿假单胞菌标准菌株L型对第三代和第四代头孢菌素药物敏感程度，分析铜绿假单胞菌L型的耐药状况。结果：铜绿假单胞菌标准菌株L型对第三代头孢菌素抑菌圈直径较原菌缩小，对第三代头孢菌素头孢噻肟和头孢曲松的药物敏感性维持在中度敏感程度，与原菌有明显差异(P＜0.5)，对第三代头孢菌素头孢哌酮和头孢他啶的药物敏感性维持在敏感程度，对第四代头孢菌素头孢吡肟药物敏感性维持在敏感程度。结论：铜绿假单胞菌L型对第三代头抱菌素具有一定耐药性，联合使用抗菌药物是降低L型出现的有效方法。

关键词：头孢菌素药物铜绿假单胞菌敏感性分析

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猪带绦虫六钩蚴TSO45-4B抗原FNⅢ结构域线性B细胞表位预测及鉴定

猪带绦虫六钩蚴TSO45-4B抗原FNⅢ结构域线性B细胞表位预测及鉴定

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2012年安徽省医学会微生物与免疫学、热带病与寄生虫病学会换届改选与学术研讨会

作者：王媛媛王小莉常雪莲陶志勇夏惠方强蚌埠医学院病原生物学教研室，安徽省感染与免疫重点实验室，安徽蚌埠 233030

目的：预测并鉴定猪带绦虫六钩蚴TSO45-4B抗原FnⅢ结构域线性B细胞表位。　　方法：利用生物信息学在线工具分析TSO45-4B的FNⅢ结构域序列预测其线性B细胞表位，采用SWISS-MODEL预测TSO45-4B的蛋白空间结构，并合成两条预测表位肽。用EL... 详细信息

目的：预测并鉴定猪带绦虫六钩蚴TSO45-4B抗原FnⅢ结构域线性B细胞表位。
　　方法：利用生物信息学在线工具分析TSO45-4B的FNⅢ结构域序列预测其线性B细胞表位，采用SWISS-MODEL预测TSO45-4B的蛋白空间结构，并合成两条预测表位肽。用ELISA方法检测猪囊虫病人血清与两条预测表位肽的免疫反应性。
　　结果：获得2个TSO45-4B抗原FnⅢ结构域线性B细胞预测表位，其中1条预测表位合成肽可为猪囊尾蚴病患者血清识别。
　　结论：成功预测并鉴定了猪带绦虫六钩蚴TSO45-4B抗原FnⅢ结构域线性B细胞表位。

关键词：猪带绦虫六钩蚴 TSO45-4B抗原 FNⅢ结构域 B细胞表位抗原鉴定

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妊娠期母鼠给予葡萄球菌肠毒素B对成年子代CD3+TCR Vβ8+T细胞的影响

妊娠期母鼠给予葡萄球菌肠毒素B对成年子代CD3+TCR Vβ8+T细胞的...

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纪念中国微生物学会成立六十周年大会暨2012年中国微生物学会学术年会

作者：管俊昌刘勇孔晓明朱翔余峰玲林娜刘从森张涛蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠 233030 蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠 233030

目的：观察妊娠期母鼠给予葡萄球菌肠毒B(SEB)对成年子代CD3+TCR Vβ8+T细胞的影响。方法：在妊娠16d时给予SD大鼠尾静脉注射15μg SEB,同时设立PBS对照组。利用流式细胞仪检测成年子代鼠胸腺及外周血中CD3+TCR Vβ8+T细胞;并观察成年... 详细信息

目的：观察妊娠期母鼠给予葡萄球菌肠毒B(SEB)对成年子代CD3+TCR Vβ8+T细胞的影响。方法：在妊娠16d时给予SD大鼠尾静脉注射15μg SEB,同时设立PBS对照组。利用流式细胞仪检测成年子代鼠胸腺及外周血中CD3+TCR Vβ8+T细胞;并观察成年子代鼠再次给予SEB时胸腺及外周血中CD3+TCR Vβ8+T细胞的应答变化。结果：妊娠期母鼠给予SEB可导致雌、雄性成年子代鼠胸腺CD3+TCR Vβ8+T细胞比例，较对照组的明显减少。PBS组的雌雄性成年子代鼠给予SEB后其胸腺及外周血中CD3+TCR Vβ8+T细较同窝对照组明显减少。结论：妊娠期母鼠给予SEB改变其成年子代大鼠CD3+TCR Vβ8+T细胞对再次SEB刺激的应答方式。

关键词：葡萄球菌肠毒素妊娠期动物模型细胞发育应答方式

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结核分枝杆菌感染对THP-1细胞CD14表达的影响

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蚌埠医学院学报 2012年第2期37卷 131-133页

作者：金齐力韦莉李柏青蚌埠医学院第二附属医院检验科安徽蚌埠233040 蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院病原生物学教研室安徽蚌埠233030

目的:探讨结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染THP-1细胞后对细胞表面白细胞分化抗原14(CD14)表达的影响。方法:Mtb以10∶1感染佛波醇酯(PMA)分化的THP-1细胞,建立Mtb感染THP-1细胞的模型。采用流式细胞术检测THP-1细胞、... 详细信息

目的:探讨结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染THP-1细胞后对细胞表面白细胞分化抗原14(CD14)表达的影响。方法:Mtb以10∶1感染佛波醇酯(PMA)分化的THP-1细胞,建立Mtb感染THP-1细胞的模型。采用流式细胞术检测THP-1细胞、PMA分化的THP-1细胞及Mtb感染THP-1细胞CD14的表达。结果:THP-1细胞和PMA分化的THP-1细胞表面表达CD14的阳性率分别为5.5%和21.6%,对Mtb的吞噬率分别为7.7%和93.0%;Mtb感染的THP-1细胞表面表达CD14的阳性率为27.5%。结论:PMA分化后的THP-1细胞表面CD14的表达增加,Mtb感染后CD14的表达进一步增加,对Mtb的吞噬率增加。

关键词：结核分枝杆菌 THP-1细胞白细胞分化抗原14

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外源性一氧化氮体外杀伤旋毛虫成虫的实验研究

外源性一氧化氮体外杀伤旋毛虫成虫的实验研究

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2012年安徽省医学会微生物与免疫学、热带病与寄生虫病学会换届改选与学术研讨会

作者：王小莉王媛媛方强薛玉芹夏惠沈继龙蚌埠医学院病原生物学教研室、安徽省感染与免疫重点实验室，蚌埠 233030 安徽医科大学病原生物学教研室，合肥 230032

目的：探讨外源性一氧化氮(NO)对旋毛虫成虫的杀伤作用。　　方法：取感染旋毛虫的BALB/c小鼠肠组织，分离成虫，配制成虫悬液(1000条/ml)。48孔板中每孔加入100 μl成虫悬液，再加入各组试剂，终浓度分别为：亚硝基铁氰化钠(SNP)0.02、... 详细信息

目的：探讨外源性一氧化氮(NO)对旋毛虫成虫的杀伤作用。
　　方法：取感染旋毛虫的BALB/c小鼠肠组织，分离成虫，配制成虫悬液(1000条/ml)。48孔板中每孔加入100 μl成虫悬液，再加入各组试剂，终浓度分别为：亚硝基铁氰化钠(SNP)0.02、0.05、0.10、0.20、0.50和1.00 mmol/L，1.00 mmoFL SNP+0.15mmol/L血红蛋白(Hb)、1.00 mmol/LSNP+0.15 mmol/L FeSO4、1.00 mmol/L SNP+1.00mmol/LL-cyst、1.00 mmol/LSNP+0.15mmol/L FeSO4+1.00mmol/L L-cyst，设空白对照组和阳性对照组(1.00 mmol/LSNP+100 μl肌幼虫悬液)，每组设3个复孔。置37℃ 5％CO2培养箱中孵育。第4天收集各孔成虫，镜检并作番红染色，计算各组虫体死亡率。
　　结果：SNP 0.02 mmol/L和0.05mmo儿组旋毛虫死亡率分别为(1.4±1.2)％和(3.2±1.0)％，这两组与空白对照组的死亡率之间的差异无统计学意义(P>0.05)。SNP 0.10、0.20、0.50和1.00 mmol/L组虫体死亡率分别为为(9.9±1.8)％、(37.7±2.5)％、(50.1±3.5)％和(80.84±1.1)％，与空白对照组之间的差异有统计学意义(P<0.05)。旋毛虫成虫死亡率与sNP浓度呈线性趋势(P<0.05)，且呈正相关(P<0.05)。在加入1.00 mmol/L SNP的孔中分别加入Hb、L-cyst、FeSO4和FeSO4+L-cyst与仅SNP1.00mmol/L实验组比较，成虫死亡率均有所下降，分别为(56.54±3.7)％、(72±74.5±6)％、(74.8±2.4)％和(69.84±2.3)％。SNP1.00 mmol/L组与SNP+Hb、sNP+FeSO4+L-cyst组旋毛虫成虫死亡率间的差异有统计学意义(P<0.05)。
　　结论：外源性NO对体外培养的旋毛虫成虫有杀伤作用，而Hb、L-cyst+FeSO4可抑制该杀伤作用。

关键词：外源性一氧化氮体体外培养杀伤实验旋毛虫成虫

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重组猪单链IL-12的构建及真核表达

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南方医科大学学报 2011年第10期31卷 1687-1692页

作者：王雪梅袁远英方强夏惠孙新李柏青蚌埠医学院病原生物学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院免疫学教研室安徽蚌埠233030

目的克隆猪IL-12(pIL-12)p35和p40亚单位cDNA,构建含有重组猪单链IL-12(pscIL-12)融合基因的真核表达质粒并进行表达。方法分别从正常成年肉猪的外周血单个核细胞(PBMCs)和脾淋巴细胞中提取总RNA,经RT-PCR分别获得pIL-12 p35和p40亚单... 详细信息

目的克隆猪IL-12(pIL-12)p35和p40亚单位cDNA,构建含有重组猪单链IL-12(pscIL-12)融合基因的真核表达质粒并进行表达。方法分别从正常成年肉猪的外周血单个核细胞(PBMCs)和脾淋巴细胞中提取总RNA,经RT-PCR分别获得pIL-12 p35和p40亚单位编码序列的cDNA,应用重叠延伸PCR技术通过一柔性接头(linker)(Gly4Ser)3串联这两个亚基构建融合基因pscIL-12,将融合基因pscIL-12插入pcDNA3.1(+)真核表达载体,通过阳离子聚合物介导转染CHO-K1细胞进行表达,RT-PCR鉴定pscIL-12融合基因在真核细胞中的表达。结果所克隆的pIL-12 p35亚基和p40亚基的编码基因序列和构建的融合基因pscIL-12序列均经PCR、酶切、测序得以证实;融合基因pscIL-12在CHO-K1细胞中成功转录。结论成功构建了pcDNA3.1(+)-pscIL-12融合基因的真核表达质粒;pcDNA3.1(+)-pscIL-12在CHO-K1细胞中成功转录,为进一步探讨pscIL-12融合蛋白的生物学活性和疫苗佐剂效应奠定了基础。

关键词：白细胞介素-12 单链猪分子克隆真核表达 CHO-K1细胞

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寄生虫病DNA疫苗研究进展

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中国血吸虫病防治杂志 2011年第3期23卷 340-344页

作者：齐文娟方强蚌埠医学院免疫学教研室蚌埠233030 安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠医学院病原生物学教研室

寄生虫病防治策略之一是研制安全有效的疫苗,DNA疫苗是近10多年发展起来的新型疫苗。近年来寄生虫病DNA疫苗研究取得了很大进展。本文就DNA疫苗的免疫机理、构建与优化、佐剂、递送途径,以及疟疾、血吸虫病、囊尾蚴病、弓形虫病等重要... 详细信息

寄生虫病防治策略之一是研制安全有效的疫苗,DNA疫苗是近10多年发展起来的新型疫苗。近年来寄生虫病DNA疫苗研究取得了很大进展。本文就DNA疫苗的免疫机理、构建与优化、佐剂、递送途径,以及疟疾、血吸虫病、囊尾蚴病、弓形虫病等重要寄生虫病DNA疫苗的研究进展作一综述。

关键词： DNA疫苗寄生虫病疟疾血吸虫病囊尾蚴病弓形虫病

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