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高浓度葡萄糖对人树突状细胞CD83、CD86、CD36、CCR7和μ-阿片受体的影响

蚌埠医学院学报 2013年第11期38卷 1392-1395页

作者：周诚买月琴潘治宇陶志勇夏惠李正红蚌埠医学院生理学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030

目的：观察高浓度葡萄糖对人树突状细胞（DC）受体CD83、CD86、CD36、CCR7和μ-阿片受体（MOR）表达的影响，探讨高血糖在动脉粥样硬化免疫炎症反应中的作用。方法：从人外周血中提取和分离单个核细胞，在含重组人粒细胞-巨噬细胞集落... 详细信息

目的：观察高浓度葡萄糖对人树突状细胞（DC）受体CD83、CD86、CD36、CCR7和μ-阿片受体（MOR）表达的影响，探讨高血糖在动脉粥样硬化免疫炎症反应中的作用。方法：从人外周血中提取和分离单个核细胞，在含重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和重组人白介素4的RPMI1640完全培养基中培养。7d后未成熟DC分3组，分别在含有D-葡萄糖5mmol／L（NG组）、10mmol／L（TG组）和25mmool／L（HG组）的RPMI1640完全培养基中继续培养48h后，采用流式细胞术检测DC表面CD83、CD86、CD36、MOR和CCR7的变化。结果：TG组和HG组DC表面分子CD36、CCR7、CD83和CD86的阳性率均高于NG组（P〈0．05-P〈0．01），HG组DC表面分子MOR的阳性率高于NG组（P〈0．05），而HG组CD36、CD83和CD86的阳性率亦均明显高于TG组（P〈0．01）。结论：高浓度葡萄糖能促进DC表面分子CD36、CD86、CD83和CCR7的表达。

关键词：血糖过多树突状细胞 μ-阿片受体趋化因子受体

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结核分枝杆菌H37Ra株CFP10基因的克隆与序列分析

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蚌埠医学院学报 2013年第11期38卷 1385-1388页

作者：薛玉芹王英陈勇李江艳李倩唐洁夏惠王雪梅方强蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院免疫学教研室安徽蚌埠233030

目的:克隆结核分枝杆菌减毒株H37Ra培养滤液蛋白10(CFP10)基因,并对其进行序列分析。方法:自结核菌H37Ra株抽提基因组DNA为模板,以已知结核菌H37Ra株CFP10基因设计引物。通过聚合酶链反应(PCR)技术扩增出结核分枝杆菌H37Ra株CFP10基因,... 详细信息

目的:克隆结核分枝杆菌减毒株H37Ra培养滤液蛋白10(CFP10)基因,并对其进行序列分析。方法:自结核菌H37Ra株抽提基因组DNA为模板,以已知结核菌H37Ra株CFP10基因设计引物。通过聚合酶链反应(PCR)技术扩增出结核分枝杆菌H37Ra株CFP10基因,将其克隆至pTG19-T载体后,经PCR和双酶切鉴定后进行DNA序列测定,并以BLAST在线软件进行序列比对分析。结果:PCR产物电泳显示扩增片段约为300 bp,测序获得的片段开放编码框由303 bp组成,与H37Rv株CFP10基因同源性为100%,推导出编码氨基酸序列同源性为100%。结论:成功克隆结核分枝杆菌H37Ra株CFP10基因,其基因序列与H37Rv株CFP10基因序列无差异。

关键词：结核分枝杆菌 H37Ra株培养滤液蛋白10基因克隆序列分析

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猪带绦虫六钩蚴TSO45-4B抗原FnⅢ结构域相应的线性B细胞表位肽免疫原性研究

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蚌埠医学院学报 2013年第5期38卷 513-515页

作者：王媛媛陶志勇杨小迪王小莉常雪莲陈勇孙新夏惠方强蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030

目的:观察载体蛋白偶联的TSO45-4B抗原FnⅢ结构域相应的线性B细胞表位肽诱导的体液免疫反应。方法:人工合成TSO45-4B抗原FnⅢ结构域2条预测表位肽,偶联钥孔血蓝蛋白免疫小鼠,采用ELISA法检测小鼠血清中预测表位肽特异性抗体滴度。结果:... 详细信息

目的:观察载体蛋白偶联的TSO45-4B抗原FnⅢ结构域相应的线性B细胞表位肽诱导的体液免疫反应。方法:人工合成TSO45-4B抗原FnⅢ结构域2条预测表位肽,偶联钥孔血蓝蛋白免疫小鼠,采用ELISA法检测小鼠血清中预测表位肽特异性抗体滴度。结果:免疫小鼠血清中检测到1条预测表位肽特异性抗体,其效价达到1∶1 280。结论:设计的1条TSO45-4B抗原FnⅢ结构域线性B细胞表位肽可诱导小鼠产生体液免疫反应。

关键词：猪带绦虫六钩蚴 TSO45-4B FnⅢ结构域 B细胞表位免疫反应

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小鼠肝脏淋巴细胞几种分离方法的比较

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蚌埠医学院学报 2013年第8期38卷 1052-1055页

作者：孔晓明金齐力韦莉王婷范伟朱翔刘勇蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030

目的:通过比较几种肝脏淋巴细胞分离方法得到的总淋巴细胞、T细胞、自然杀伤T细胞(NKT cells)及自然杀伤细胞(NK细胞)的比例和细胞绝对数,明确各种方法的适用范围。方法:按照析因设计,将不放血(A法)、摘眼球放血(B法)、体循环灌流(C法)... 详细信息

目的:通过比较几种肝脏淋巴细胞分离方法得到的总淋巴细胞、T细胞、自然杀伤T细胞(NKT cells)及自然杀伤细胞(NK细胞)的比例和细胞绝对数,明确各种方法的适用范围。方法:按照析因设计,将不放血(A法)、摘眼球放血(B法)、体循环灌流(C法)、摘眼球结合体循环灌流(B法+C法)4种肝脏预处理方法和单浓度离心法(Ⅰ法)、非连续密度梯度离心法(Ⅱ法)2种Percoll分离方法进行全面组合,共获得8种组合条件,分离小鼠肝脏淋巴细胞,用流式细胞术检测各类型细胞比例。结果:肝脏预处理方法中B法+C法获得淋巴细胞比例最高,A法获得淋巴细胞绝对数最高,B法获得的NKT细胞和NK细胞比例和细胞绝对数均最高;Ⅱ法获得的淋巴细胞、T细胞、NKT细胞和NK细胞比例和细胞绝对数均高于Ⅰ法。对于NKT细胞比例和NK细胞绝对数,肝脏预处理方法和Percoll浓度之间有交互作用(P<0.01和P<0.05),其他均无交互作用(P>0.05)。结论:采用摘眼球放血结合体循环灌流法,结合Percoll非连续密度梯度法(33%+70%),可获得较高数量和比例的固有免疫细胞,有助于对肝脏固有免疫细胞如NKT细胞、NK细胞等的研究。

关键词：细胞分离肝脏淋巴细胞分离方法 Percoll 析因分析

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盆腔复发性侵袭性血管黏液瘤1例报告并文献复习

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蚌埠医学院学报 2013年第5期38卷 549-551页

作者：甘怀勇张琼李涤臣蚌埠医学院第一附属医院临床病理科安徽蚌埠233004 蚌埠医学院病理学教研室安徽蚌埠233030 安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030

目的:探讨侵袭性血管黏液瘤的临床病理特点、诊断和鉴别诊断。方法:对1复发性例侵袭性血管黏液瘤进行光镜和免疫组织化学观察,并结合文献进行复习讨论。结果:免疫组织化学提示侵袭性血管黏液瘤肿瘤组织高表达波形蛋白、结蛋白和CD34,部... 详细信息

目的:探讨侵袭性血管黏液瘤的临床病理特点、诊断和鉴别诊断。方法:对1复发性例侵袭性血管黏液瘤进行光镜和免疫组织化学观察,并结合文献进行复习讨论。结果:免疫组织化学提示侵袭性血管黏液瘤肿瘤组织高表达波形蛋白、结蛋白和CD34,部分表达平滑肌动蛋白。结论:盆腔复发性侵袭性血管黏液瘤临床症状隐匿,手术不易彻底,术后易复发。根据其病理形态学特点结合免疫表型可正确诊断。

关键词：软组织肿瘤侵袭性血管黏液瘤诊断,鉴别免疫组织化学病理学,临床

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孕鼠给予葡萄球菌肠毒素B对新生子代鼠CD3+TCR Vβ 8+T细胞的印迹效应

孕鼠给予葡萄球菌肠毒素B对新生子代鼠CD3+TCR Vβ 8+T细胞的印迹...

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第五届全国微生物资源学术暨国家微生物资源平台运行服务研讨会

作者：管俊昌朱翔余峰玲杨文选林娜张涛刘勇蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠医学院病原生物学教研室

目的观察妊娠期母鼠给予葡萄球菌肠毒B（SEB）对新生子代鼠CD3TCR Vβ8T细胞的影响。方法在妊娠16d时给予SD大鼠尾静脉注射15μg SEB,同时设立PBS对照组。在子代鼠出生后第1、2、3、5天,用流式细胞仪检测新生子代鼠胸腺及外周血中CD3TC... 详细信息

目的观察妊娠期母鼠给予葡萄球菌肠毒B（SEB）对新生子代鼠CD3TCR Vβ8T细胞的影响。方法在妊娠16d时给予SD大鼠尾静脉注射15μg SEB,同时设立PBS对照组。在子代鼠出生后第1、2、3、5天,用流式细胞仪检测新生子代鼠胸腺及外周血中CD3TCR Vβ8T细胞;并观察新生鼠血液中CD4TCR Vβ8T细胞与CD8TCR Vβ8T细胞比值的变化。结果妊娠期母鼠给予SEB可导致新生子代鼠胸腺中CD3CD8TCR Vβ8T细胞百分比在第1、2、3、5天均较对照组明显减少,而CD3CD4TCR Vβ8T细胞百分比在第1、2、3天均较对照组明显减少;其血液中CD3CD8TCR Vβ8T细胞及CD3CD4TCR Vβ8T细胞百分比均较对照组明显减少;但妊娠期母鼠给予SEB对新生子代鼠血液中CD4TCR Vβ8T细胞与CD8TCR Vβ8T细胞的比值无影响。结论妊娠期母鼠给予SEB改变其新生子代鼠CD3TCR Vβ8T细胞的百分比并形成印迹效应。

关键词：子代鼠 SEB TCR V CD3 肠毒素

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产单核细胞李斯特菌感染小鼠脾脏树突状细胞亚群和表型的变化

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蚌埠医学院学报 2013年第6期38卷 645-647,651页

作者：韦莉金齐力管俊昌孔晓明蚌埠医学院病原生物学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院感染与免疫安徽省重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院第二附属医院检验科安徽蚌埠233040

目的:利用产单核细胞李斯特菌(LM)感染BALB/c小鼠模型,研究LM感染对小鼠脾脏树突状细胞(DC)亚群及表型变化的影响。方法:LM尾静脉感染BALB/c小鼠,感染后第3、5、7天取小鼠脾脏,平板稀释法进行脾脏细菌载量分析;流式细胞术检测脾脏DC亚群... 详细信息

目的:利用产单核细胞李斯特菌(LM)感染BALB/c小鼠模型,研究LM感染对小鼠脾脏树突状细胞(DC)亚群及表型变化的影响。方法:LM尾静脉感染BALB/c小鼠,感染后第3、5、7天取小鼠脾脏,平板稀释法进行脾脏细菌载量分析;流式细胞术检测脾脏DC亚群及DC相关表面分子CD80、CD86的表达情况。结果:感染小鼠脾脏细菌载量感染后第3天有高水平的菌落形成单位计数,随着时间的推移细菌的数量迅速降低,直到第7天基本被清除;CD11c+DC的数量在感染第5天高于对照组(P<0.05),CD4+DC的数量在感染后第5天和第7天均高于对照组(P<0.05),CD8α+DC的数量在感染后第3、5和7天及CD4-CD8α-DC的数量在感染后的第3和第5天亦均高于对照组(P<0.05～P<0.01);LM感染后,DC表面CD80和CD86的表达增加,均于感染后第3天和第5天显著高于对照组(P<0.01)。结论:LM感染早期,小鼠脾脏DC亚群出现的增殖和成熟表型特征性分子表达上调,决定了其在细胞免疫应答活化中的作用地位。

关键词：李斯特菌感染产单核细胞树突状细胞免疫应答小鼠

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孕鼠给予葡萄球菌肠毒素B对新生子代鼠CD3+TCR Vβ 8+T细胞的印迹效应

孕鼠给予葡萄球菌肠毒素B对新生子代鼠CD3+TCR Vβ 8+T细胞的印迹...

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2013年中国微生物学会学术年会

作者：管俊昌朱翔余峰玲杨文选林娜张涛刘勇蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院病原生物学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院病原生物学教研室安徽蚌埠233030

目的观察妊娠期母鼠给予葡萄球菌肠毒B (SEB)对新生子代鼠CD3+ TCR Vβ 8+T细胞的影响.方法在妊娠16d时给予SD大鼠尾静脉注射15u g SEB,同时设立PBS对照组.

关键词：

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间日疟原虫醛缩酶的克隆、表达与初步鉴定

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蚌埠医学院学报 2013年第7期38卷 777-780页

作者：高迎陶志勇夏惠陈勇王雪梅方强蚌埠医学院病原生物学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 河南省南阳市中心医院检验科 473000

目的:克隆间日疟原虫醛缩酶(Plasmodium vivax aldolase,PvALD)基因,体外表达和鉴定重组PvALD蛋白。方法:PCR法从间日疟患者血液DNA样品中扩增PvALD基因,构建pET32c-PvALD重组表达质粒,转化大肠埃希菌(***)BL21(DE3+),诱导表达带有His... 详细信息

目的:克隆间日疟原虫醛缩酶(Plasmodium vivax aldolase,PvALD)基因,体外表达和鉴定重组PvALD蛋白。方法:PCR法从间日疟患者血液DNA样品中扩增PvALD基因,构建pET32c-PvALD重组表达质粒,转化大肠埃希菌(***)BL21(DE3+),诱导表达带有His标签的重组蛋白,并对PvALD在***中表达进行优化,观察诱导时间、诱导剂浓度、培养基种类对该蛋白原核表达的影响。采用镍柱亲和层析纯化重组蛋白,相应表达物分别采用SDS-PAGE电泳和Western blot进行分析鉴定。结果:PvALD的PCR产物分子量为1.1 kb,重组质粒pET32c-PvALD经测序验证,其插入片段序列与GenBank参考序列相似性为100%,转化***所表达的重组蛋白分子量约为60 kD。PvALD在LB中1 mmol/L IPTG诱导6 h条件下获得最佳的表达效果。亲和层析纯化后的PvALD经SDS-PAGE电泳检测,呈现单一条带,Western blot分析结果显示,该重组蛋白只能被间日疟患者血清特异性识别,而不能被恶性疟患者血清识别。结论:成功克隆了PvALD基因,表达了重组PvALD蛋白,为以PvALD作为靶标的间日疟快速诊断方法提供了基础。

关键词：间日疟原虫醛缩酶原核表达纯化亲和层析

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流式细胞术检测人外周血产生IL-22的淋巴细胞亚群及其在结核病患者中的应用

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检验医学 2013年第1期28卷 61-66页

作者：梁华梁友宝贺文欣杨军平孙国宏杨小军李柏青江西中医学院附属医院检验科江西南昌330006 蚌埠市第一医院检验科安徽蚌埠233030 蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030

目的建立用流式细胞术(FCM)检测人外周血产白细胞介素22(IL-22)的不同淋巴细胞亚群的方法,并探讨其在结核病(TB)患者中的应用,以了解产IL-22的淋巴细胞亚群在抗结核感染免疫中的作用。方法采集22例TB患者和18名健康对照者外周血,与相同... 详细信息

目的建立用流式细胞术(FCM)检测人外周血产白细胞介素22(IL-22)的不同淋巴细胞亚群的方法,并探讨其在结核病(TB)患者中的应用,以了解产IL-22的淋巴细胞亚群在抗结核感染免疫中的作用。方法采集22例TB患者和18名健康对照者外周血,与相同体积RPMI-1640培养液混匀,加入佛波醇酯(PMA)和钙离子霉素,混匀后于37℃5%CO2静置培养2 h,再加入莫能霉素后继续培养4 h,收集细胞,用荧光素标记进行细胞表面抗原和胞内细胞因子染色,用FCM检测表达IL-22、IL-17的不同淋巴细胞亚群比例。结果 PMA浓度为100 ng/mL,钙离子霉素浓度为1μg/mL,刺激培养2 h可最有效刺激IL-22的产生;TB患者外周血中产IL-22的γδT细胞比例(7.37%)明显高于正常人(1.81%,P<0.05),而在CD4+T、CD8+T、自然杀伤(NK)细胞和B细胞等其他细胞亚群中,产IL-22的阳性细胞比例在TB患者和健康对照者之间差异无统计学意义(P>0.05);Th22和Th17细胞比例在TB患者和健康对照者之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论建立了一套简便、完整、可靠的FCM检测产IL-22的淋巴细胞亚群的方法,产IL-22的γδT细胞在抗结核感染免疫中可能发挥免疫效应。

关键词：白细胞介素22 白细胞介素17 淋巴细胞结核病流式细胞术

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