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中国人兽共患病学报 2009年第12期25卷 1158-1161页

作者：韦莉金齐力刘勇夏佩莹蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030

目的探讨结核分枝杆菌19kD脂蛋白(Mtb P19)对单核巨噬细胞表面TLR-2表达的影响。方法以10μg/ml Mtb P19作用于拂波醇酯(PMA)分化的THP-1细胞,CO2孵箱孵育6 h。免疫细胞化学法(ICC)观察巨噬细胞TLR-2分布;对巨噬细胞TLR-2进行荧光抗体染... 详细信息

目的探讨结核分枝杆菌19kD脂蛋白(Mtb P19)对单核巨噬细胞表面TLR-2表达的影响。方法以10μg/ml Mtb P19作用于拂波醇酯(PMA)分化的THP-1细胞,CO2孵箱孵育6 h。免疫细胞化学法(ICC)观察巨噬细胞TLR-2分布;对巨噬细胞TLR-2进行荧光抗体染色,流式细胞术分析P19作用前后TLR-2的表达变化;激光共聚焦显微镜观察其受体排列。结果ICC法观察发现TLR-2均匀分布于巨噬细胞表面。P19作用组与对照组相比平均荧光强度明显增强;在作用组细胞表面出现多个斑块状染色阳性的荧光标记区,而对照组TLR-2分子总体呈现随机动态的分布。结论Mtb P19不仅能诱导巨噬细胞TLR-2表达增加,还可以引起受体发生功能性聚集。

关键词：结核分枝杆菌P19 THP-1细胞 TLR-2

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蛋白激酶Cθ在γδT细胞表达L-选择素中的调控作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2009年第2期29卷 146-150页

作者：武文娟耿英华唐洁李柏青蚌埠医学院生物化学与分子生物学教研室 233030 安徽省感染与免疫重点实验室免疫学教研室蚌埠医学院附属医院血液科

目的探讨蛋白激酶Cθ（PKCθ）信号转导途径在γδT细胞表达L-选择素（CD62L）中的调控作用。方法用结核分枝杆菌抗原（Mtb-Ag）刺激人外周血单个核细胞（PBMC）并培养6～8d，获得富含γδT细胞的结核分枝杆菌活化T细胞（MtbAT），作为... 详细信息

目的探讨蛋白激酶Cθ（PKCθ）信号转导途径在γδT细胞表达L-选择素（CD62L）中的调控作用。方法用结核分枝杆菌抗原（Mtb-Ag）刺激人外周血单个核细胞（PBMC）并培养6～8d，获得富含γδT细胞的结核分枝杆菌活化T细胞（MtbAT），作为γδT细胞来源，分别加佛波醇酯（PMA）、PMA＋离子霉素（IMN）培养3、6、12、24h，或用培养8d的MtbAT细胞分别加入Mtb—Ag、Rottlerin＋Mtb-Ag、PMA、Rottlerin＋PMA刺激4h，收集细胞用荧光抗体染色后，流式细胞术（FCM）检测CD62L在18T细胞表面的表达。结果体外激活培养6～8d的18T细胞表面CD62L的表达率为75．0％～87．0％。PMA刺激78T细胞3～12h时CD62L表达逐渐下调，表达率为42．3％～25．5％；但在刺激后24h时，又明显回升至53．2％。而PMA＋IMN刺激3、6h时，18T细胞CD62L表达也下调，表达率分别为52．1％、39．3％；但在刺激12h和24h时CD62L表达率分别为52．9％和35．3％。在PMA刺激γδT细胞同时加入Rottlerin，则CD62L的表达率（47．9％）明显高于PMA单独刺激组（31．8％）；MtbAT用Mtb—Ag再刺激4h后，γδT细胞CD62L的表达率由70．0％降为54．8％，而在***再刺激时加入Rottlerin，则CD62L表达率增加到63．1％。结论γδT细胞在PMA或Mtb-Ag刺激后CD62L的表达下调可被PKCθ特异性抑制剂部分阻断，表明CD62L在γδT细胞表面的表达可能与PKCθ信号转导途径的调控相关。

关键词： L-选择素 γδT细胞蛋白激酶C

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VEGF-C和VEGFR-3在大肠癌中的表达及与淋巴结转移的关系

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中国组织化学与细胞化学杂志 2009年第5期18卷 597-601页

作者：欧玉荣于东红承泽农蚌埠医学院病理学教研室蚌埠233030 蚌埠医学院第一附属医院病理科蚌埠233030 安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030

目的研究大肠癌患者癌组织中VEGF-C和VEGFR-3的表达及其相互之间的关系,以探讨VEGF-C和VEGFR-3在大肠癌发生发展中的作用及与临床预后的关系。方法运用原位杂交方法及免疫组化SP法检测69例大肠癌组织中VEGF-CmRNA和VEGF-C的表达,同时运... 详细信息

目的研究大肠癌患者癌组织中VEGF-C和VEGFR-3的表达及其相互之间的关系,以探讨VEGF-C和VEGFR-3在大肠癌发生发展中的作用及与临床预后的关系。方法运用原位杂交方法及免疫组化SP法检测69例大肠癌组织中VEGF-CmRNA和VEGF-C的表达,同时运用免疫组化法分析相同组织中VEGFR-3表达状况。结果VEGF-C mRNA及VEGF-C在大肠癌组织中的表达阳性率分别为52.17%(36/69)和49.27%(34/69),VEGF-C基因和蛋白表达基本相符合。VEGFR-3表达阳性率为43.48%(30/69),正常黏膜未见VEGFR-3表达(P<0.05);大肠癌组织中VEGF-C与VEGFR-3蛋白表达之间存在显著的相关性(P<0.01)。在伴有淋巴结转移的大肠腺癌中,VEGF-C与VEGFR-3的阳性表达率分别为67.74%(21/31)和64.52%(20/31),转移组与非转移组相比较均有显著性差异(P<0.01);VEGF-C及VEGFR-3表达与Duke's分期呈负相关(P<0.05),与组织分化、性别、年龄、肿瘤大小等临床病理因素无关(P>0.05)。结论VEGF-C与VEGFR-3表达可增加大肠癌淋巴道转移和侵袭能力,其检测有助于大肠癌恶性程度评价及预后的判断,两者在大肠癌的发展中起重要作用。

关键词：大肠肿瘤 VEGF—C VEGFR-3 免疫组织化学淋巴结转移

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丝裂原蛋白激酶两种抑制剂对弓形虫侵入宿主细胞影响的差异

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中国人兽共患病学报 2009年第2期25卷 97-99页

作者：杨小迪陈兴智徐军孙新常雪莲王媛媛胡守锋葛晓松李柏青感染与免疫安徽省重点实验室蚌埠医学院病原生物学教研室蚌埠233030 安徽省淮南市第一人民医院检验科淮南232007

目的观察两种丝裂原蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPK)抑制剂PD98059及U0126对刚地弓形虫侵入宿主细胞的影响,探讨其对弓形虫速殖子侵入宿主细胞信号转导途径的不同阻断效应。方法丝裂原蛋白激酶抑制剂PD98059或U0126... 详细信息

目的观察两种丝裂原蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPK)抑制剂PD98059及U0126对刚地弓形虫侵入宿主细胞的影响,探讨其对弓形虫速殖子侵入宿主细胞信号转导途径的不同阻断效应。方法丝裂原蛋白激酶抑制剂PD98059或U0126分别在不同时间及不同剂量作用于速殖子-宿主细胞培养系统,用流式细胞仪(FCM)检测宿主细胞感染速殖子的差异。结果流式细胞仪检测加入U01261μmol/L、10μmol/L和100μmol/L的细胞培养孔的细胞感染弓形虫速殖子的量分别比对照组平均降低了26.10%(P<0.01),66.42%(P<0.01)和70.39%(P<0.01)。而加入PD980591μmol/L、10μmol/L和100μmol/L的分别比对照组平均降低了25.45%(P<0.01),53.01%(P<0.01)和64.70%(P<0.01)。实验中发现100μmol/L U0126作用培养细胞9h的时候,可导致HL-60细胞出现部分聚集成团、漂浮的中毒现象。结论U0126和PD98059均可明显抑制弓形虫速殖子侵入宿主细胞,但其差异无显著性,其机制有待进一步探索。

关键词：弓形虫速殖子 MAP激酶 U0126 PD98059

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子痫前期患者血清细胞因子表达谱及其临床意义

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生殖与避孕 2009年第10期29卷 683-687页

作者：钱中清曾耀英朱斌季煜华何芳黄秀燕暨南大学组织移植与免疫实验中心广州510632 蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染免疫重点实验室蚌埠232001 广州市番禺区何贤纪念医院产科广州510632

目的:研究子痫前期患者血清中细胞因子表达谱的变化及其临床意义。方法:①以Luminex液相芯片技术检测子痫前期患者(A组)16例、正常妊娠妇女(B组)19例、正常非孕妇(C组)12例3组人群血清IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IFN-γ、TNF-α、MCP-1... 详细信息

目的:研究子痫前期患者血清中细胞因子表达谱的变化及其临床意义。方法:①以Luminex液相芯片技术检测子痫前期患者(A组)16例、正常妊娠妇女(B组)19例、正常非孕妇(C组)12例3组人群血清IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IFN-γ、TNF-α、MCP-1、VEGF、NT-proBNP等细胞因子表达水平,并进行比较;②收集、整理和分析3组对象血压、白细胞计数、尿蛋白及尿酸等临床常规检查指标,并与细胞因子表达谱的变化间进行对比分析。结果:①与B比,A组血清中IL-8、MCP-1、IL-6、TNF-α和VEGF5种细胞因子表达水平升高,有统计学差异(P<0.05),与疾病严重程度无明显相关性;②与B比,轻度(A1组)和重度(A2组)子痫前期者白细胞计数、尿酸水平均升高,有统计学差异(P<0.05或0.01);A1组与A2组间比较,尿酸水平有统计学差异(P<0.05),而白细胞计数水平则无统计学差异(P>0.05)。结论:子痫前期患者血清细胞因子表达呈炎症及血管损伤特征,尿酸水平可作为其疾病严重程度的监控指标。

关键词：子痫前期细胞因子 Luminex

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人工合成的siRNA转染外周血活化T淋巴细胞方法学研究

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生物学杂志 2009年第1期26卷 79-80,95页

作者：葛晓松薛祝平李柏青蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030

观察人工合成siRNA与脂质体DMRIE-C Reagent的复合物对人外周血活化T淋巴细胞转染效果。人外周血标本中分离的外周血单个核细胞用抗原和IL-2刺激扩增培养,产生活化的T淋巴细胞,用不同配比浓度的荧光标记的siRNA-FAM与脂质体的复合物转... 详细信息

观察人工合成siRNA与脂质体DMRIE-C Reagent的复合物对人外周血活化T淋巴细胞转染效果。人外周血标本中分离的外周血单个核细胞用抗原和IL-2刺激扩增培养,产生活化的T淋巴细胞,用不同配比浓度的荧光标记的siRNA-FAM与脂质体的复合物转染活化后的T淋巴细胞,分别采用转染一次和连续转染两次的方法,并在转染后4h,分别取样本,通过流式细胞测定技术,比较两种方法的转染效率,并筛选出最佳转染效率剂量配比。活化T细胞用转染一次和两次的方法后,平均转染阳性率分别为(12.5±0.64)%和(50.37±6.77)%。采用连续两次转染的方法进行转染,转染效率要明显高于一次转染法。

关键词： siRNA 转染脂质体

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siRNA沉默t-bet基因对CD4、CD8T淋巴细胞亚群IFN-γ产生的影响

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生物学杂志 2009年第3期26卷 78-80,74页

作者：汪洪涛葛晓松李柏青蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233003

利用化学合成针对人t-bet基因的小干扰RNA(siRNA),转染体外培养的人外周血单个核细胞,利用流式细胞仪分选纯化CD4+、CD8+T淋巴细胞,半定量RT-PCR检测CD4+、CD8+T淋巴细胞中t-betmRNA的表达变化,流式细胞术检测转染前后IFN-γ产生的变化... 详细信息

利用化学合成针对人t-bet基因的小干扰RNA(siRNA),转染体外培养的人外周血单个核细胞,利用流式细胞仪分选纯化CD4+、CD8+T淋巴细胞,半定量RT-PCR检测CD4+、CD8+T淋巴细胞中t-betmRNA的表达变化,流式细胞术检测转染前后IFN-γ产生的变化情况。探讨转录因子t-bet对人CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群IFN-γ产生的调控作用。与对照组相比,转染后的人CD4+、CD8+T淋巴细胞t-betmRNA表达水平明显下降;转染siRNA后,CD4+T淋巴细胞中IFN-γ+细胞比例为(18.46±6.86)%,与对照组(50.20±5.91)%比较有显著性差异(P<0.01);CD8+T淋巴细胞IFN-γ+细胞比例为(74.18±9.33)%,和对照组(76.51±6.49)%比较差异不明显(P>0.05)。体外转录合成的siRNA可有效降低人CD4+、CD8+T淋巴细胞t-bet的基因表达;转录因子t-bet对人不同淋巴细胞亚群IFN-γ的产生所起作用不同。

关键词： siRNA t-bet IFN-γ 淋巴细胞

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外源性一氧化氮体外杀伤红内期间日疟原虫的实验研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2009年第4期27卷 318-321页

作者：方强夏惠王雪梅陆凤陶志勇曹俊孙新高琪苏州大学基础医学系寄生虫学教研室苏州215123 蚌埠医学院病原生物学教研室、安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 江苏省寄生虫病防治研究所、卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室无锡214064

目的探讨外源性一氧化氮(NO)对红内期间日疟原虫的杀伤作用。方法采集以早期滋养体期为主,原虫密度>0.5%的患者血样,配成含2%红细胞的虫血混悬液。96孔板中每孔加100μl虫血混悬液,再加入各组试剂,亚硝基铁氰化钠(SNP,分别为0.02、0... 详细信息

目的探讨外源性一氧化氮(NO)对红内期间日疟原虫的杀伤作用。方法采集以早期滋养体期为主,原虫密度>0.5%的患者血样,配成含2%红细胞的虫血混悬液。96孔板中每孔加100μl虫血混悬液,再加入各组试剂,亚硝基铁氰化钠(SNP,分别为0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00mmol/L),SNP+血红蛋白(Hb)0.15mmol/L,SNP+硫酸亚铁(FeSO4)0.15mmol/L,SNP+L-半胱氨酸(L-cyst)1.00mmol/L,SNP+FeSO40.15mmol/L+L-cyst1.00mmol/L,后4组SNP浓度均为1.00mmol/L,设对照组,每组重复3次,置37℃5%CO2培养箱中培养。根据虫龄,估计发育至裂殖体时间,提前3h取空白对照孔涂片镜检,确定终止培养时间,培养终止后吉氏染色,镜检计数成熟裂殖体,计算NO对红内期间日疟原虫的抑制率,统计分析各组对间日疟原虫抑制率的差异。结果SNP0.02mmol/L组,间日疟原虫抑制率为(0.84±1.69)%,对培养的红内期间日疟原虫无杀伤作用(P>0.05);SNP0.05mmol/L组,间日疟原虫抑制率为(12.26±3.04)%,对培养的红内期间日疟原虫存在杀伤作用(P<0.01)。且抑制率随SNP浓度上升而升高。在含有1.00mmol/LSNP的孔中分别加入Hb、L-cyst、FeSO4和FeSO4+L-cyst与只添加SNP1.00mmol/L孔相比,红内期间日疟原虫抑制率自(85.40±2.90)%下降为(5.90±2.90)%、(25.86±4.02)%、(30.16±2.75)%和(16.71±2.30)%。结论外源性NO对体外培养的红内期间日疟原虫有杀伤作用,而Hb、L-cyst和FeSO4可以逆转这种杀伤作用。

关键词：外源性NO 间日疟原虫红内期

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加强知识间比较联系,提高临床微生物学实验教学效果

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山西医科大学学报（基础医学教育版） 2009年第5期11卷 564-566页

作者：陈登宇刘勇闵宏林夏佩莹蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室

临床微生物学实验教学内容涉及细菌种类多、内容联系不紧密，教学上应强调知识间的横向和纵向比较联系、要点的突出，促进学习的横向、纵向迁移，提高学生对知识的掌握和应用能力。

关键词：临床微生物学实验教学教学方法

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猪囊尾蚴病患者外周血T细胞亚群比例和产生IFN-γ、IL-4水平研究

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蚌埠医学院学报 2009年第9期34卷 756-758页

作者：胡守锋王雪梅孙新方强夏惠焦玉萌蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030

目的:检测猪囊尾蚴病患者外周血T细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)体外诱生IFN-γ、IL-4的水平,探讨T细胞亚群在感染免疫中的调控。方法:采用流式细胞仪检测猪囊尾蚴病患者PBMC中T细胞亚群比例和IFN-γ/IL-4水平;用Cellqu... 详细信息

目的:检测猪囊尾蚴病患者外周血T细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)体外诱生IFN-γ、IL-4的水平,探讨T细胞亚群在感染免疫中的调控。方法:采用流式细胞仪检测猪囊尾蚴病患者PBMC中T细胞亚群比例和IFN-γ/IL-4水平;用Cellquest软件或WinMDI2.8软件数据分析。结果:猪囊尾蚴病患者T细胞亚群CD3+与CD4+细胞百分率均较正常人升高(P<0.01),CD4+/CD8+比值亦较正常人升高(P<0.01);PBMC中分泌IFN-γ及IL-4的CD3+细胞百分率与正常人差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:猪囊尾蚴病患者PBMC中CD3+、CD4+细胞百分率显著升高,T细胞亚群比例失调,免疫功能紊乱。

关键词：猪囊尾蚴病流式细胞术 Th1/Th2细胞因子

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