检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病原生物学杂志 2016年第11期11卷 986-990页

作者：陈勇张涛刘勇管俊昌夏惠蚌埠医学院病原生物学教研室感染与免疫安徽省重点实验室安徽蚌埠233030

目的研究3种分枝杆菌耐热蛋白抗原体外对人γδT细胞的刺激活性。方法分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),分别使用人型结核分枝杆菌H37Ra耐热蛋白抗原(H37Ra-HAg)、牛型结核分枝杆菌BCG耐热蛋白抗原(BCG-HAg)和耻垢分枝杆菌耐热蛋白抗原... 详细信息

目的研究3种分枝杆菌耐热蛋白抗原体外对人γδT细胞的刺激活性。方法分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),分别使用人型结核分枝杆菌H37Ra耐热蛋白抗原(H37Ra-HAg)、牛型结核分枝杆菌BCG耐热蛋白抗原(BCG-HAg)和耻垢分枝杆菌耐热蛋白抗原(MS-HAg)进行刺激并持续培养12d,采用流式细胞仪检测增殖细胞中γδT细胞数量及CD4+T细胞所占比例。结果 H37Ra-HAg刺激组扩增细胞中γδT细胞的比例和数量均显著高于BCGHAg、MS-HAg刺激组和IL-2对照组[((50.52±5.40)%v.s(7.31±3.15)%、(5.82±3.42)%、(5.56±2.68)%);(9.63±1.64)×106v.s(0.69±0.36)×106、(0.57±0.22)×106、(0.34±0.18)×106))]。BCG-HAg刺激组扩增细胞中CD4+T细胞的比例和数量均显著高于H37Ra-HAg刺激组和IL-2对照组[(73.56±7.12%、66.93±7.65)%v.s(23.18±6.29)%、(52.61±5.37)%;(4.75±0.86)×106、(3.28±0.59)×106 v.s(2.71±0.65)×106、(1.63±0.45)×106]。而BCG-HAg刺激组和MS-HAg刺激组扩增细胞中γδT细胞的比例和数量和IL-2对照组相比并无显著性差异。结论 H37Ra-HAg具有促进γδT细胞增殖活性,BCG-HAg和MS-HAg具有促进CD4+T细胞增殖活性,BCG-HAg和MS-HAg无刺激γδT细胞增殖活性。

关键词：结核分枝杆菌卡介苗耻垢分枝杆菌 γδT细胞增殖流式细胞术

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金丝桃素体外抗刚地弓形虫速殖子效果的观察

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2016年第3期34卷 203-207页

作者：杨小迪孙希萌王旗崔洁计永胜薛洪宝胡守锋苏胖胖李江艳孟令文乔继琛丁忆晗宋迪吴琦方强陈兴智蚌埠医学院病原生物学教研室、安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 首都医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室北京100069 安徽医科大学病原生物学教研室、安徽省人兽共患病重点实验室合肥230032 蚌埠医学院化学教研室蚌埠233030

目的观察金丝桃素对体外培养的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株速殖子的杀伤作用,探讨金丝桃素抗弓形虫的效果。方法将生理盐水(A组)和终浓度为5μg/ml(B组)、50μg/ml(C组)、500μg/ml(D组)的金丝桃素分别加入含弓形虫速殖子1×... 详细信息

目的观察金丝桃素对体外培养的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株速殖子的杀伤作用,探讨金丝桃素抗弓形虫的效果。方法将生理盐水(A组)和终浓度为5μg/ml(B组)、50μg/ml(C组)、500μg/ml(D组)的金丝桃素分别加入含弓形虫速殖子1×106个/孔的24孔培养板中,于2、4、6 h后收集虫体,台盼蓝染色检测速殖子着色率,吉氏染色观察速殖子形态和结构变化,透射电镜观察速殖子超微结构的变化,流式细胞仪检测相同处理的携带黄色荧光蛋白的弓形虫的存活情况。结果弓形虫速殖子经不同浓度金丝桃素作用2 h后,B组、C组和D组虫体的台盼蓝着色率分别为(11.0±3.6)%、(25.0±6.3)%和(40.0±2.7)%,D组着色率高于C组和B组(P<0.01),3组均高于A组(6.0±3.0)%,但B组和A组间差异无统计学意义(P>0.05)。作用4 h后,D组着色率为(97.0±2.0)%,高于C组(30.0±7.2)%、B组(20.0±3.0)%和A组(10.0±1.0)%(P<0.01);作用6 h后,D组着色率为(98.0±1.7)%,亦高于C组(42.7±5.5)%、B组(34.0±6.6)%和A组(19.3±4.9)%,两两比较,各组间差异均有统计学意义(P<0.01)。吉氏染色观察发现,随时间的延长和剂量的增高,虫体两端逐渐变圆、肿胀、坏死。透射电镜观察结果显示,随金丝桃素作用时间延长,虫体逐渐肿胀,胞膜与基质间出现明显空隙,虫体内空泡增多、变大,胞膜破裂,内部结构溶解。流式细胞仪检测结果表明,弓形虫速殖子存活率在金丝桃素作用后的各时间段内与对照组间差异有统计学意义(P<0.01);金丝桃素作用2 h后,D组无弓形虫存活,C组弓形虫存活率为(7.9±1.9)%,低于B组(38.1±5.5)%和A组(81.8±6.0)%(P<0.01);作用4 h后,C组无弓形虫存活;B组在作用4 h和6 h后,弓形虫存活率分别为(14.3±7.9)%和(1.4±1.8)%,均低于A组的(73.8±11.3)%和(64.1±14.4)%(P<0.01)。结论金丝桃素具有较强的体外抗弓形虫速殖子效果,且随剂量增高和作用时间延长抗虫效果更明显。

关键词：金丝桃素刚地弓形虫速殖子体外效果

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肺结核患者外周血中结核分枝杆菌耐热抗原特异性的TNF-α^＋ γδ T细胞数量和亚群分析

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细胞与分子免疫学杂志 2016年第11期32卷 1527-1531页

作者：唐洁陈策查成王兆华张晨曾林丽李柏青蚌埠医学院免疫学教研室安徽蚌埠233030 安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院科研中心安徽蚌埠233030 解放军123医院传染科安徽蚌埠233030 蚌埠市传染病医院安徽蚌埠233030 蚌埠医学院医学检验系安徽蚌埠233030

目的探讨结核分枝杆菌耐热抗原(MTB-HAg)刺激下,肺结核患者、潜伏性MTB感染者、健康者外周血γδT细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)产生细胞数量的差异。方法采集15例正常成人外周血,根据人MTB感染T细胞酶联免疫斑点诊断试剂盒检测结果分... 详细信息

目的探讨结核分枝杆菌耐热抗原(MTB-HAg)刺激下,肺结核患者、潜伏性MTB感染者、健康者外周血γδT细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)产生细胞数量的差异。方法采集15例正常成人外周血,根据人MTB感染T细胞酶联免疫斑点诊断试剂盒检测结果分为健康者(n=9)和潜伏性MTB感染者(n=6),另采集肺结核患者外周血(n=12),3组经密度梯度离心法获取外周血单个核细胞(PBMC),用MTB-HAg刺激20 h。收集细胞,流式细胞术检测TCRαβ+T细胞、TCRγδ+T细胞、CD4+αβT细胞、CD8+αβT细胞、TCR-Vδ2+T细胞亚群中产生TNF-α产生细胞的比例。结果肺结核患者外周血γδT细胞中TNF-α产生细胞比例显著低于潜伏性MTB感染者和健康者;肺结核患者外周血Vδ2T细胞中TNF-α产生细胞比例显著低于潜伏性MTB感染者和健康者;肺结核患者外周血中Vδ2T细胞在TNF-α+γδT细胞中所占比例显著低于潜伏性MTB感染者和健康者。结论肺结核患者外周血MTB-HAg特异性γδT细胞及其Vδ2亚群产生细胞因子TNF-α能力显著低于潜伏性MTB感染者和健康者。

关键词：结核分枝杆菌耐热抗原(MTB-HAg) 潜伏性MTB感染活动性肺结核 γδ T细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)

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利用CRISPR/Cas9技术构建stk基因融合HA、TY1标签序列的恶性疟原虫虫株

利用CRISPR/Cas9技术构建stk基因融合HA、TY1标签序列的恶性疟原...

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第九届北京热带医学与寄生虫学论坛

作者：乔继琛李舟王伟伟夏惠戴雪喻方强蚌埠医学院病原生物学教研室感染与免疫安徽省重点实验室安徽省蚌埠市东海大道2600号蚌埠医学院中国科学院上海巴斯德研究所上海市徐汇区岳阳路320号

目的利用CRISPR/Cas9方法构建stk基因融合HA和TY1标签序列的恶性疟原虫虫株.方法针对stk基因设计sgRNA序列和左、右同源臂.通过搭桥PCR法将HA及TY1标签的编码序列插入左、右同源臂的中间作为供体DNA.将供体DNA 和sgRNA 序列连接到pL6c... 详细信息

目的利用CRISPR/Cas9方法构建stk基因融合HA和TY1标签序列的恶性疟原虫虫株.方法针对stk基因设计sgRNA序列和左、右同源臂.通过搭桥PCR法将HA及TY1标签的编码序列插入左、右同源臂的中间作为供体DNA.将供体DNA 和sgRNA 序列连接到pL6cs-hDHFR 载体,构建pL6cs-hDHFR-stk-HA-TY1-sgRNA质粒并酶切、测序鉴定.以pUF1-BSD-Cas9 质粒与pL6cs-hDHFR-stk-HA-TY1-sgRNA质粒同时电转恶性疟原虫3D7 虫株,加杀稻瘟菌素和WR99210 筛选.药物筛选成功的疟原虫以PCR测序、Western blotting鉴定,并以ant-TY1 为一抗免疫荧光法分析STK蛋白的亚细胞定位.结果经测序比对,成功构建了pL6cs-hDHFR-stk-HA-TY1-sgRNA质粒;PCR测序显示HA 和TY1 成功融合于stk基因,Western b1otting在预期位置显示特异性条带,免疫荧光显示STK蛋白在恶性疟原虫环状体、大滋养体、裂殖体位置相似,定位于细胞核内及环绕核膜的细胞质.结论成功利用CRISPR/Cas9 方法构建了stk基因融合HA 和TY1 标签序列的恶性疟原虫虫株,发现STK蛋白定位于细胞核内及环绕核膜的细胞质.

关键词：恶性疟原虫 CRISPR/Cas9 stk基因 HA标签 TY1标签

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miR-20b直接靶向3′-UTR负性调节VEGF的表达

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华中科技大学学报（医学版） 2016年第1期45卷 22-26页

作者：陶象男汪忆梦宋传旺蚌埠医学院第二附属医院检验科蚌埠233040 蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030

目的探讨miR-20b是否直接靶向VEGF 3′-非编码区(3′-UTR)而调控其表达。方法采用miRanda软件预测VEGF 3′-UTR是否存在miR-20b的结合位点;使用PCR方法扩增RAW264.7细胞VEGF基因3′-UTR序列,经双酶切后克隆到pmiR-RB-Report^(TM)质粒海... 详细信息

目的探讨miR-20b是否直接靶向VEGF 3′-非编码区(3′-UTR)而调控其表达。方法采用miRanda软件预测VEGF 3′-UTR是否存在miR-20b的结合位点;使用PCR方法扩增RAW264.7细胞VEGF基因3′-UTR序列,经双酶切后克隆到pmiR-RB-Report^(TM)质粒海肾荧光素酶的下游,得到pmiR-RB-Report TM-VEGF 3′-UTR双荧光素酶重组质粒,使用电泳法和测序法进行验证;将重组质粒或空质粒与miR-20b模拟物或其对照共转染HeLa细胞,24h后检测相应荧光素酶活性。结果 VEGF 3′-UTR存在miR-20b的结合位点;获得了含VEGF 3′-UTR的双荧光素酶报告载体;重组质粒与miR-20b模拟物共转染组HeLa细胞的荧光素酶活性明显低于空质粒转染组(P<0.05)。结论成功构建小鼠VEGF基因3′-UTR双荧光素酶报告载体,miR-20b可以直接靶向VEGF 3′-UTR而负性调控其表达。

关键词：血管内皮生长因子 3′-非编码区 miR-20b 双荧光素酶报告载体

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不同刺激剂对健康人和结核患者外周血T细胞产生γ干扰素和肿瘤坏死因子-α的影响

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蚌埠医学院学报 2016年第3期41卷 288-291页

作者：徐志庆夏惠李柏青蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030

目的：检测健康人和结核患者外周血经不同刺激剂刺激后T细胞亚群产生γ干扰素（IFN-γ）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的变化。方法：12名健康人和12例结核患者的外周血单个核细胞用佛波醇脂（PMA）＋钙离子霉素（IM）、结核杆菌耐热抗原... 详细信息

目的：检测健康人和结核患者外周血经不同刺激剂刺激后T细胞亚群产生γ干扰素（IFN-γ）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的变化。方法：12名健康人和12例结核患者的外周血单个核细胞用佛波醇脂（PMA）＋钙离子霉素（IM）、结核杆菌耐热抗原（Mtb-HAg）、植物血凝素（PHA）刺激,莫能霉素阻断,流式细胞仪检测产生IFN-γ和TNF-α的T细胞亚群比例。结果：PMA＋IM刺激健康人外周血αβT细胞产生IFN-γ的比例明显高于结核患者（P〈0.01）;PMA＋IM、Mtb-HAg和PHA刺激健康人外周血γδT细胞产生IFN-γ的比例高于结核患者（P〈0.05～P〈0.01）。PMA＋IM和PHA刺激健康人外周血αβT细胞产生TNF-α的比例均高于结核患者（P〈0.05）;PMA＋IM和PHA刺激健康人外周血γδT细胞产生TNF-α的比例均高于结核患者（P〈0.05）。结论：经不同刺激剂刺激后,健康人γδT细胞产生IFN-γ的比例高于结核患者γδT细胞产生IFN-γ的比例。经PMA和PHA刺激后,健康人αβT和γδT细胞产生TNF-α的比例高于结核患者。

关键词：结核分枝杆菌 T细胞亚群 γ-干扰素肿瘤坏死因子-α 流式细胞仪

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微小RNA表达调控机制的概述

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牡丹江医学院学报 2016年第6期37卷 109-111页

作者：王贺龙郭术俊宋传旺蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030

微小RNAs（microRNAs/miRNAs）是广泛存在于真核生物中的一类非编码的单链RNA小分子（~22nt）,可在转录后水平调控基因的表达。miRNAs的表达受到前体miRNAs上游启动子的表达调控,启动子是RNA聚合酶特异性识别的基因序列,并和转录因子和... 详细信息

微小RNAs（microRNAs/miRNAs）是广泛存在于真核生物中的一类非编码的单链RNA小分子（~22nt）,可在转录后水平调控基因的表达。miRNAs的表达受到前体miRNAs上游启动子的表达调控,启动子是RNA聚合酶特异性识别的基因序列,并和转录因子和增强子共同控制基因表达的时间和程度。

关键词：微小RNA 启动子转录

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脂多糖对结核病患者外周血单核细胞Toll样受体4表达及细胞内活性氧产生的影响

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蚌埠医学院学报 2016年第4期41卷 431-433页

作者：方芳张爱霞江京娣何小燕汪洪涛吕静竹钱中清蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院生化教研室安徽蚌埠233030

目的:探讨脂多糖(LPS)对结核病患者外周血单核细胞Toll样受体4(TLR4)表达及细胞内活性氧(ROS)产生的作用。方法:收集健康志愿者外周血标本和结核病患者外周血标本,各13例;取二者肝素抗凝血100μL,荧光探针DHR123或抗人anti-TLR4-PE荧光... 详细信息

目的:探讨脂多糖(LPS)对结核病患者外周血单核细胞Toll样受体4(TLR4)表达及细胞内活性氧(ROS)产生的作用。方法:收集健康志愿者外周血标本和结核病患者外周血标本,各13例;取二者肝素抗凝血100μL,荧光探针DHR123或抗人anti-TLR4-PE荧光素标记抗体,全血染色后,流式细胞仪技术检测分析二者外周血单核细胞TLR4表达及细胞内ROS产生水平;再取二者抗凝血100μL于96孔培养板中,按如下分组进行处理:健康志愿者抗凝血为A组,结核病患者抗凝血为B组,结核病患者抗凝血+LPS 100 ng/m L为C组,每组6孔,培养24 h后,流式细胞仪技术检测单核细胞TLR4表达及细胞内ROS产生水平。结果:结核病患者外周血单核细胞TLR4阳性表达率为(17.6±3.6)%,较健康志愿者的(30.0±2.4)%显著降低(P<0.01);结核病患者外周血单核细胞细胞内ROS水平(74.8±11.4)较健康志愿者(109.6±13.2)显著降低(P<0.01)。LPS刺激24 h后,C组单核细胞胞内ROS水平(182.1±11.3)与B组(127.6±14.1)相比差异有统计学意义(P<0.01);C组单核细胞TLR4阳性表达率为(62.1±3.3)%,与B组的(47.6±4.7)%差异有统计学意义(P<0.01)。结论:LPS可促进结核病患者外周血单核细胞TLR4表达及细胞内ROS产生水平。

关键词：结核病 Toll样受体脂多糖活性氧

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结核病DNA疫苗研究进展

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蚌埠医学院学报 2016年第3期41卷 408-413页

作者：薛玉芹方强蚌埠医学院病原生物学教研室感染与免疫安徽省重点实验室安徽蚌埠233030

结核病（TB）是由结核分枝杆菌（Mtb）引起的以呼吸道为主的一种传染性疾病,严重危害人类健康。随着医学科学技术的发展,人类对抗TB已取得了一定的成果,包括有效的治疗药物及疫苗的研发。但同时由于Mtb耐药的严重性、人类免疫缺陷性病毒... 详细信息

结核病（TB）是由结核分枝杆菌（Mtb）引起的以呼吸道为主的一种传染性疾病,严重危害人类健康。随着医学科学技术的发展,人类对抗TB已取得了一定的成果,包括有效的治疗药物及疫苗的研发。但同时由于Mtb耐药的严重性、人类免疫缺陷性病毒（HIV）与Mtb的双重感染及流动人口的日益增多、吸毒等,加上不少国家对TB的忽视,TB在全球范围内呈回升趋势。

关键词：结核病 DNA疫苗综述

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减毒结核分枝杆菌H37Ra感染小鼠模型的实验研究

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蚌埠医学院学报 2016年第2期41卷 141-144页

作者：张爱霞江京娣吕静竹汪洪涛宋传旺姚春艳钱中清蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院生物化学教研室安徽蚌埠233030

目的:研究减毒结核分枝杆菌(***)H37Ra感染小鼠模型及其病理损伤的机制。方法:将清洁级Balb/c小鼠分为对照组和***模型组,各3只。将H37Ra按照每只小鼠1×106CFU的剂量,经尾静脉注射感染小鼠,分别于感染7、14和21 d后,无菌操作取小... 详细信息

目的:研究减毒结核分枝杆菌(***)H37Ra感染小鼠模型及其病理损伤的机制。方法:将清洁级Balb/c小鼠分为对照组和***模型组,各3只。将H37Ra按照每只小鼠1×106CFU的剂量,经尾静脉注射感染小鼠,分别于感染7、14和21 d后,无菌操作取小鼠肺和脾脏组织,测量肺和脾脏的脏器系数,匀浆后行活菌培养;肺和脾脏组织冷冻切片,行HE染色观察病理损伤情况。结果:小鼠感染*** 14和21 d后,脾脏脏器系数均较感染7 d后显著升高(P<0.01和P<0.05)。感染7 d后,肺和脾脏组织匀浆均可检出活菌,脾脏组织H37Ra活菌量明显高于肺脏,并随感染时间逐渐增加;感染14 d后,肺组织病理观察可见明显感染性病变损伤。结论:*** H37Ra经尾静脉注射感染小鼠模型可造成部分结核病样病理性损伤。

关键词：减毒结核分枝杆菌组织病理损伤小鼠

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