目的研究氯化钴(CoCl_2)诱导的低氧条件下,脂连蛋白(APN)对RAW264. 7巨噬细胞凋亡的保护作用及其机制。方法巨噬细胞分为CoCl_2处理组和APN预处理组,前者给予100μmol/L CoCl_2,后者先用(0. 5、1、2)μg/m L APN预处理2 h,再给予100μmo...
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目的研究氯化钴(CoCl_2)诱导的低氧条件下,脂连蛋白(APN)对RAW264. 7巨噬细胞凋亡的保护作用及其机制。方法巨噬细胞分为CoCl_2处理组和APN预处理组,前者给予100μmol/L CoCl_2,后者先用(0. 5、1、2)μg/m L APN预处理2 h,再给予100μmol/L的CoCl_2处理。CCK-8法检测各组细胞活力;免疫荧光法观察细胞胱天蛋白酶3(caspase-3)的分布及CoCl_2和APN对其表达的影响;流式细胞术检测各组细胞的凋亡比例;分光光度计法检测各组细胞内超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)含量; Western blot法检测各组细胞B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、BAX、裂解型caspase-3(c-caspase-3)及低氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白水平。结果与CoCl_2组相比,APN预处理能提高细胞活力,减少细胞凋亡并升高SOD含量、降低MDA含量;Caspase-3主要分布在细胞膜上,与CoCl_2组相比,APN预处理能上调Bcl2的表达,下调BAX、c-caspase-3及HIF-1α的表达。结论 APN可减少CoCl_2诱导的巨噬细胞凋亡,可能是通过增强细胞内抗氧化活性,以及上调Bcl2、下调BAX、c-caspase-3及HIF-1α的表达来实现的。
目的:观察心肌成纤维细胞是否存在线粒体乙醛脱氢酶2(ALDH2)的表达,探讨ALDH2在高糖诱导的心肌成纤维细胞引起纤维化发生中的作用。方法:原代培养心肌成纤维细胞,分为正常对照组(5.5 mmol/L)、正常+ALDH2激动剂Alda-1(20μmol/L)组、高糖组(30 mmol/L)、高糖+Alda-1组。免疫荧光鉴定心肌成纤维细胞。各组细胞分别培养48 h后应用MTT法检测成纤维细胞增殖活力,RT-PCR和Western blot检测ALDH2 m RNA及蛋白的表达。结果:RT-PCR和Western blot结果显示心肌成纤维细胞ALDH2 m RNA和蛋白均有表达。与正常对照组相比,高糖组心肌成纤维细胞增殖能力提高(P<0.01),ALDH2蛋白表达下降(P<0.05);与高糖组相比,高糖+Alda-1组心肌成纤维细胞增殖能力降低(P<0.01),ALDH2的蛋白表达增加(P<0.05)。结论:心肌成纤维细胞存在ALDH2的表达,ALDH2激动剂Alda-1提高ALDH2的表达后可以抑制高糖引起的心肌成纤维细胞的增殖。
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