检索结果-内蒙古大学图书馆

蚌埠医学院学报 2004年第4期29卷 286-288页

作者：朱光能承泽农桂淑玉周青朱华庆张素梅吴强汪渊安徽医科大学分子生物学实验室和生物化学与分子生物学教研室安徽医科大学病理学教研室安徽蚌埠233003 安徽医科大学第一附属医院呼吸内科蚌埠医学院

目的 :探讨紧密连接蛋白occludin表达与人肝细胞癌发生和发展的关系。方法 :运用免疫组化技术检测occludin在人肝细胞癌中的表达 ,并进行苏木精伊红 (HE)染色观察细胞结构。结果 :occludin主要定位于肝细胞膜 ,且癌旁肝组织的表达阳... 详细信息

目的 :探讨紧密连接蛋白occludin表达与人肝细胞癌发生和发展的关系。方法 :运用免疫组化技术检测occludin在人肝细胞癌中的表达 ,并进行苏木精伊红 (HE)染色观察细胞结构。结果 :occludin主要定位于肝细胞膜 ,且癌旁肝组织的表达阳性率明显高于肝细胞癌 (P <0 .0 1)。癌旁肝组织occludin表达～级强度显著高于肝细胞癌 (P <0 .0 0 5 )。occludin在10例分化较好 (Ⅰ、Ⅱ级 )的肝细胞癌及其癌旁组织中的表达 ,其阳性率差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,但 33例分化较差 (Ⅲ、Ⅳ级 )的肝细胞癌中 ,occludin在癌旁组织中表达的阳性率高于癌组织 (P <0 .0 5 )。结论 :肝细胞癌与癌旁肝组织相比 ,occludin表达阳性率及其强度均明显下降 ,其改变在肝细胞癌的发生发展中可能起重要作用。

关键词：肝肿瘤肝细胞癌紧密连接蛋白免疫组织化学

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小鼠cdc25B蛋白特定序列的克隆及原核表达

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第11期23卷 1061-1063页

作者：崔城赵鸿梅王雁邓欣于秉治中国医科大学基础医学院生理学教研室辽宁沈阳110001 辽宁省人民医院检验科辽宁沈阳110016 中国医科大学实验技术中心三部辽宁沈阳110001 中国医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室辽宁沈阳110001

目的:构建小鼠cdc25B蛋白特定序列的原核表达载体,并诱导表达谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合蛋白。方法:采用PCR方法从小鼠cdc25B野生型及位点突变型蛋白编码序列中扩增出约360个碱基的片段,构建原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,... 详细信息

目的:构建小鼠cdc25B蛋白特定序列的原核表达载体,并诱导表达谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合蛋白。方法:采用PCR方法从小鼠cdc25B野生型及位点突变型蛋白编码序列中扩增出约360个碱基的片段,构建原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导后进行融合蛋白表达。Western blot鉴定表达产物。结果:构建出带有GST标签的原核表达载体,在大肠杆菌BL21中表达出相对分子质量(Mr)为40000的重组蛋白质,经Westernblot鉴定,可与GST单克隆抗体结合,发生特异性反应。结论:利用原核表达系统成功表达出小鼠cdc25B蛋白特定序列的蛋白质,为进一步探讨与其他蛋白相互作用提供了基础。

关键词：小鼠 cdc25B 原核表达

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苛求芽孢杆菌基因组DNA提取方法的比较

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生物技术 2006年第2期16卷 41-42页

作者：赵运胜卜友泉张宏娟廖飞基础医学院生物化学与分子生物学教研室重庆医科大学重庆400016 检验系临床微生物学教研室重庆医科大学重庆400016

目的:比较不同方法提取苛求芽孢杆菌基因组DNA的差异。方法:用经典CTAB提取法、改进CTAB法(溶菌酶处理结合CTAB提取法)、UniQ柱吸附提取法制备苛求芽孢杆菌基因组DNA,比较产物完整性和用于PCR扩增的有效性。结果:三种方法制备基因组DNA... 详细信息

目的:比较不同方法提取苛求芽孢杆菌基因组DNA的差异。方法:用经典CTAB提取法、改进CTAB法(溶菌酶处理结合CTAB提取法)、UniQ柱吸附提取法制备苛求芽孢杆菌基因组DNA,比较产物完整性和用于PCR扩增的有效性。结果:三种方法制备基因组DNA纯度接近,但改进CTAB法产率最高,UniQ法产率最低。经典CTAB法和UniQ法提取基因组DNA易降解。三种方法所得基因组DNA用于PCR扩增效率接近。结论:溶菌酶裂解结合CTAB提取更适合制备苛求芽孢杆菌基因组DNA。

关键词：苛求芽孢杆菌基因组DNA提取改进CTAB法

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SV40 PolyA序列及其AATAAA信号对上游GFP基因表达及转录终止的影响

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遗传 2012年第1期34卷 113-119页

作者：李书平冯晶晶王红钢王秀芳吕占军河北医科大学实验动物学部遗传研究室河北省实验动物重点实验室石家庄050017 河北省邢台市人民医院检验二科邢台054001 华东精神卫生康复中心上海200126 河南大学医学院生物化学与分子生物学教研室开封475004

SV40 PolyA(猴空泡病毒PolyA,简称PolyA)序列是有转录终止作用和使转录的mRNA添加PolyA尾的DNA序列(240 bp),含有AATAAA六核苷酸多腺苷化信号(Polyadenylation signal)。在pEGFP-C1质粒的GFP基因下游插入14个同向串联的Alu序列(Alu14),构建pAlu14质粒,瞬时转染HeLa细胞,用Northern blot检测和荧光显微镜观察GFP RNA和GFP蛋白表达,发现Alu串联序列强烈抑制GFP基因表达,该序列没有转录终止作用产生高分子量GFP融合RNA。又在pAlu14质粒GFP基因和Alu串联序列之间按正、反方向插入PolyA序列及去除AATAAA信号的PolyA序列,插入的这些PolyA序列均能部分解除Alu14对GFP基因的抑制作用;去除AATAAA信号的PolyA正、反序列仍然引起转录终止。将PolyA反序(PolyAas)分为4段每段60 bp,中间的2段分别称为2F2R和3F3R,将2F2R或3F3R插在pAlu14质粒的Alu串联序列的上游,随着插入2F2R片段拷贝数的增加转录的GFP融合RNA的分子量增加;2F2R的下游如果依然是2F2R那么2F2R可以支持转录延伸,如果2F2R下游是Alu串联序列则2F2R导致转录终止。无论插入一个3F3R或插入64个3F3R,均产生低分子量GFP RNA。

关键词： Alu SV40 PolyA AATAAA信号 GFP 转录终止

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利用RT-PCR检测SM22基因在胃癌及正常组织中表达差异的生物学意义

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实用医学杂志 2011年第7期27卷 1186-1188页

作者：吕中全闫晓红李文梅吕有勇首都医科大学附属同仁医院检验科北京市100730 内蒙古医学院呼和浩特市010059 北京大学临床肿瘤学院生物化学与分子生物学教研室 100142

目的:检测SM22(smoothmuscle22)mRNA在人胃癌及正常组织中的表达水平,探讨SM22基因与胃癌发生的关系,为进一步鉴定胃癌早期诊断筛查的标志物提供理论依据。方法:应用半定量RT-PCR检测42例胃癌组织及14例胃正常组织中SM22mRNA的表达水平... 详细信息

目的:检测SM22(smoothmuscle22)mRNA在人胃癌及正常组织中的表达水平,探讨SM22基因与胃癌发生的关系,为进一步鉴定胃癌早期诊断筛查的标志物提供理论依据。方法:应用半定量RT-PCR检测42例胃癌组织及14例胃正常组织中SM22mRNA的表达水平并比较其差异。结果:在胃癌组织SM22mRNA的阳性表达率为92.86%(39/42),在正常组织中的阳性表达率为71.43%(10/14),差异无统计学意义(P>0.05)。半定量光密度计数后SM22mRNA表达量在胃癌组织和正常组织中分别为0.86±0.14和0.32±0.22,差异有统计学意义(P<0.01)。在14对胃癌与正常配对标本中,有10对胃癌及正常组织中SM22mRNA均表达阳性而且在肿瘤组织中表达量明显高于正常组织,有4对标本中SM22mRNA只在胃癌组织中表达而在正常组织中表达阴性。结论:SM22mRNA在胃癌组织中的表达量高于正常组织,提示其在胃癌发生发展中可能起一定作用。

关键词：胃肿瘤 SM22 RT—PCR

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真核细胞基因组DNA的制备

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安徽医科大学学报 2004年第1期39卷 74-76页

作者：汪渊胡若磊朱光能张素梅左莉卜丽佳朱华庆周青桂淑玉安徽医科大学分子生物学实验室和生物化学教研室蚌埠医学院生物化学教研室蚌埠233003 安徽医科大学安徽医科大学第一附属医院呼吸内科合肥230022

介绍本实验室常用基因组DNA的提取方法:对来源于培养的细胞或血细胞,一般采用蛋白酶K和去垢剂温和破碎的方法,而对于组织来源的细胞,还要先采用物理方法如匀浆法、超声波法、液氮破碎法等破碎细胞,再行分离.

关键词：真核细胞基因组 DNA 制备分离提纯

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顺铂诱导鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡并降低其线粒体膜电位

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癌症 2001年第8期20卷 887-888页

作者：陈扬超周茂华周克元张月飞中山医科大学生物化学教研室广东广州510089 广东省人民医院检验科广东广州510089 广东医学院生化与分子生物学研究所广东湛江524023 广东医学院附属医院耳鼻喉科广东湛江524023

鼻咽癌是我国华南地区高发的恶性肿瘤，放疗是其治疗的基本方法，由于中晚期鼻咽癌治疗后有较高的远处转移率及局部复发率，化疗具有十分重要的作用。到目前为止，国内外研究报道均认为鼻咽癌化疗方案中以含有顺铂（ cisplatin,cDDP）... 详细信息

鼻咽癌是我国华南地区高发的恶性肿瘤，放疗是其治疗的基本方法，由于中晚期鼻咽癌治疗后有较高的远处转移率及局部复发率，化疗具有十分重要的作用。到目前为止，国内外研究报道均认为鼻咽癌化疗方案中以含有顺铂（ cisplatin,cDDP）的联合化疗方案疗效较好 [1]。本文以人鼻咽癌低分化上皮细胞株 CNE-2Z为体外模型，经 cDDP处理后，通过荧光染色、流式细胞仪等检测手段发现， cDDP能诱导鼻咽癌细胞凋亡，同时伴有线粒体膜电位的降低。

关键词：顺铂鼻咽肿瘤细胞凋亡线粒体膜电位

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NK细胞体外扩增的影响因素及临床应用

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生命的化学 2024年第5期44卷 900-909页

作者：刘金影庞晶晶高旭寇佳媛张艳芬哈尔滨医科大学附属第二医院检验科哈尔滨150081 哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室哈尔滨150081

随着免疫学及分子生物学技术的发展,以细胞为主体的(如T细胞、NK细胞等)生物疗法在肿瘤过继性细胞免疫治疗中显示出巨大的潜能。与T细胞疗法相比,NK细胞无需激活即可完成杀伤,具有快速释放炎性细胞因子和杀死靶细胞的能力,因此近年来受... 详细信息

随着免疫学及分子生物学技术的发展,以细胞为主体的(如T细胞、NK细胞等)生物疗法在肿瘤过继性细胞免疫治疗中显示出巨大的潜能。与T细胞疗法相比,NK细胞无需激活即可完成杀伤,具有快速释放炎性细胞因子和杀死靶细胞的能力,因此近年来受到格外关注。但人体内NK细胞的数量、纯度和活性无法满足科研及临床应用的需要,阻碍了以NK细胞为基础的多种应用的发展,故有必要在体外对NK细胞进行有效扩增。本文从NK细胞体外扩增的影响因素及其临床应用两方面进行综述。

关键词： NK细胞体外扩增临床应用

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地高辛标记核酸病理形态学检测方法的建立及应用

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中国医科大学学报 2012年第11期41卷 977-980页

作者：杨雪勾文峰丁蕾肖丽君高野康雄郑华川中国医科大学基础医学院生物化学与分子生物学研究室病理与病理生理研究所沈阳110001 解放军463医院检验科沈阳110042 承德医学院基础部免疫教研室河北承德067000 日本神奈川县立癌中心临床研究所

目的建立地高辛标记原位杂交(ISH)和原位PCR(ISP)方法,探讨其在病理形态学检测中的应用。方法以细胞cDNA或质粒DNA为模板制备地高辛探针,ISH检测肺癌、胃癌或结直肠癌切片上JCV T抗原DNA、beclin 1和SERCA3 mRNA表达水平。在肺癌和胃癌... 详细信息

目的建立地高辛标记原位杂交(ISH)和原位PCR(ISP)方法,探讨其在病理形态学检测中的应用。方法以细胞cDNA或质粒DNA为模板制备地高辛探针,ISH检测肺癌、胃癌或结直肠癌切片上JCV T抗原DNA、beclin 1和SERCA3 mRNA表达水平。在肺癌和胃癌切片上扩增地高辛标记的JCV T抗原DNA。杂交或标记后,进行抗地高辛碱性磷酸酶反应并行NBT/BCIP或Fuchsin显色。结果 PCR扩增获得高纯度地高辛标记DNA探针,甲酰胺杂交液杂交显示JCV T抗原存在于JCI细胞的细胞核中,beclin 1和SERCA3 mRNA阳性信号见于结肠癌和癌旁黏膜上皮细胞质中。ISP扩增了地高辛标记的JCV T抗原DNA,显色后发现JCV T抗原主要定位在JCI细胞、肺泡上皮细胞和肺癌细胞核、胃癌及癌旁黏膜细胞核中。NBT/BCIP显色比Fuchsin显色更为敏感,甲基绿复染使得上述2种显色更加清晰。结论地高辛标记的ISH和ISP操作简便,敏感度高,NBT/BCIP显色和甲基绿复染图像美观。

关键词：原位杂交原位PCR 核酸病理形态学检测

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一个遗传性听神经病伴视神经萎缩家系研究

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听力学及言语疾病杂志 2024年第2期32卷 107-111页

作者：董佩索利敏张磊何敏贾薇李通范林静李青峰杨洁靳玲李丹薛金梅赵长青张亚茜段建雄山西医科大学第二医院耳鼻咽喉头颈外科山西省气道炎性疾病神经免疫研究省级重点培育实验室太原030000 山西医科大学第二医院眼科山西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室山西国信凯尔医学检验所

目的研究探讨一个听神经病伴视神经萎缩家系遗传性致病原因。方法详细询问先证者病史及家族史、进行临床相关检查确诊听神经病伴视神经萎缩,绘制该家系遗传系谱。抽取先证者(Ⅲ-7)外周血行全外显子组测序,对检出的突变进行致病性判读... 详细信息

目的研究探讨一个听神经病伴视神经萎缩家系遗传性致病原因。方法详细询问先证者病史及家族史、进行临床相关检查确诊听神经病伴视神经萎缩,绘制该家系遗传系谱。抽取先证者(Ⅲ-7)外周血行全外显子组测序,对检出的突变进行致病性判读,对先证者妻子(Ⅲ-8)、大女儿(Ⅳ-7)、二女儿(Ⅳ-9)和儿子(Ⅳ-10)进行Sanger测序验证突变位点,并结合临床表现和检查结果进行研究。结果该家系遗传方式为常染色体显性遗传,先证者(Ⅲ-7)19岁时出现视力下降,30岁时出现双侧感音神经性聋,言语识别率下降,其所在5代20人大家系中10人(2人已故)有类似听力及视力下降症状。先证者(Ⅲ-7)、大女儿(Ⅳ-7)和儿子(Ⅳ-10)听力学检查:纯音测听示双侧感音神经性聋,ABR双耳未引出,40 Hz相关电位(AERP)双耳均未引出,OAE部分或全部频率可引出,镫骨肌声反射阈值未引出;Ⅲ-7、Ⅳ-10眼底检查有不同程度视乳头萎缩,OCT示双眼视盘神经纤维层厚度变薄、视觉诱发电位示P100波峰时延长,确诊为遗传性听神经病伴视神经萎缩。Ⅲ-7行全外显子检测发现3号染色体有一个致病位点OPA1基因c.1334G>A(***445His,NM_015560.2)突变,一代测序结果示Ⅳ-7和Ⅳ-10也有该突变,Ⅲ-8和Ⅳ-9该位点的基因型是野生纯合型,即未发生突变。结论 OPA1基因c.1334G>A(***445His,NM_015560.2)突变位点为该家系致病突变。

关键词：听神经病遗传性视神经萎缩 OPA1基因

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