目的：地西他滨(Decitabine)作为一种DNA甲基转移酶抑制剂，目前临床上除应用于骨髓增生异常综合征(MDS)一线治疗外，也用于老年、复发/难治急性髓细胞白血病(AML)的治疗。耐药基因表达异常是复发/难治急性髓细胞白血病重要原因之一。多药耐药基因1(MDR1)又称 ATP binding cassette subfamily B member 1(ABCB1)，其所编码的产物P-糖蛋白(P-gp)参与了多种肿瘤细胞耐药的形成。本研究目的在于探讨地西他滨对AML细胞增殖、凋亡以及对MDR1等多种耐药基因表达的影响。
目的探讨miR-let-7c-5p/c-myc信号轴在白血病细胞定向单核/巨噬细胞分化中的调控作用。方法采用PMA+LPS+IFN-γ诱导THP-1白血病细胞向单核/巨噬细胞定向分化,PBS作为对照组。诱导48 h后CCK8法测定细胞增殖水平;流式细胞仪测定细胞CD11b与CD14分化抗原表达水平;RT-qPCR检测白血病细胞分化前后miR-let-7c-5p和c-myc的表达变化;蛋白质印迹法检测c-myc蛋白表达变化;双荧光素酶结合实验检测miR-let-7c-5p与c-myc的3′UTR靶向结合和活性调控关系;转染miR-let-7c-5p mimic观察c-myc表达变化后细胞的增殖分化水平变化;过表达c-myc拯救实验观察miR-let-7c-5p对PMA+LPS+IFN-γ诱导的THP-1细胞增殖分化的影响。THP-1细胞转染miR-let-7c-5p inhibitor,观察c-myc表达变化对THP-1定向分化为M1样巨噬细胞的影响。结果与PBS对照组相比,PMA+LPS+IFN-γ诱导48 h后,THP-1细胞的增殖能力明显降低(0.64±0.01 vs 0.33±0.01,t=45.190,P<0.001)。PMA+LPS+IFN-γ实验组的CD11b和CD14平均阳性表达率升高[(5.51±0.89)%vs(17.72±0.86)%,t=17.050,P<0.001;(6.22±0.70)%vs(16.42±0.14)%,t=24.650,P<0.001]。PMA+LPS+IFN-γ实验组的c-myc蛋白表达水平降低(0.87±0.02 vs 0.64±0.06,t=6.041,P=0.004)。PMA+LPS+IFN-γ实验组的miR-let-7c-5p基因表达量高于对照组,而c-myc基因表达量低于对照组,均P<0.001。Luciferase实验证实,miR-let-7c-5p mimic+c-myc-WT组的荧光素酶活性明显低于mimics NC+c-myc-WT组(0.88±0.09 vs 0.62±0.05,t=4.320,P=0.013)。转染miR-let-7c-5p mimic后,miR-let-7c-5p mimic组的c-myc蛋白表达水平低于miR-let-7c-5p mimic NC组(1.03±0.08 vs 0.39±0.07,t=10.420,P<0.001),伴有细胞增殖水平的降低(0.64±0.01 vs 0.42±0.01,t=30.160,P<0.001),CD11b和CD14阳性表达率升高[(2.18±0.53)%vs(22.10±0.87)%,t=33.530,P<0.001;(3.37±0.73)%vs(22.98±5.43)%,t=6.195,P=0.004]。拯救实验结果表明,miR-let-7c-5p mimics+c-myc vector组的c-myc蛋白表达水平高于miR-let-7c-5p mimics组(0.53±0.02 vs 0.84±0.05,t=9.250,P<0.001)。miR-let-7c-5p mimics组的THP-1细胞增殖D值低于miR-let-7c-5p mimics+c-myc vector组(0.62±0.01 vs 0.42±0.01,t=20.330,P<0.001)。miR-let-7c-5p mimics组的平均CD11b、CD14阳性表达率高于miR-let-7c-5p mimics+c-myc vector组[(6.17±0.76)%vs(19.57±5.96)%,t=3.865,P=0.018;(10.36±1.13)%vs(34.89±3.19)%,t=12.56,P<0.001]。miR-let-7c-5p inhibitor干预PMA+LPS+IFN-γ实验组结果显示,与对照组相比较,PMA+LPS+IFN-γ诱导THP-1细胞分化后,c-myc蛋白的表达水平显著降低(0.97±0.05 vs 0.34±0.19,t=5.377,P=0.006),CXCL9、CXCL10、iNOS基因的相对表达水平明显升高,均P<0.001。与PMA+LPS+IFN-γ实验组相比较,PMA+LPS+IFN-γ+miR-let-7c-5p inhibitor组的c-myc蛋白相对表达水平显著升高(0.34±0.06 vs 0.96±0.07,t=11.310,P<0.001),而CXCL9、CXCL10、iNOS基因的相对表达水平明显降低,均P<0.001。结论miR-let-7c-5p可以靶向结合c-myc 3′UTR区,miR-let-7c-5p/c-myc信号轴是白血病细胞定向分化为单核/巨噬细胞的重要途径之一
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