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中国药理学会分析药理学专业委员会成立大会、第三届全国分析药理学学术大会暨贵州省药学会药学青年专业委员会成立大会

作者：周晖杨靖肖玉玲徐平洪学传病毒学国家重点实验室武汉大学药学院军事医学科学院放射与辐射医学研究所蛋白质组学国家重点实验室国家蛋白质科学中心(北京)北京蛋白质组研究中心蛋白质药物国家工程研究中心西藏大学医学院

目的:建立快速可靠的靶向分子研究体系,鉴定特异的肝病潜在治疗靶点,用于指导临床治疗。方法:建立蛋白质组结合近红外二区成像的差异表达蛋白筛选及体内活性验证的研究体系。结果:微型染色体维持蛋白(MCM)是DNA复制的重要组成部分,可作... 详细信息

目的:建立快速可靠的靶向分子研究体系,鉴定特异的肝病潜在治疗靶点,用于指导临床治疗。方法:建立蛋白质组结合近红外二区成像的差异表达蛋白筛选及体内活性验证的研究体系。结果:微型染色体维持蛋白(MCM)是DNA复制的重要组成部分,可作为诊断癌症的新型生物标志物。通过蛋白质组鉴定到肝癌靶向分子微小染色体维持蛋白MCM2在肝癌组织中显著上调(>5倍癌/癌旁),MCM2与肝癌患者分期和生存期相关,抑制MCM2能显著影响肝癌细胞系增殖。在细胞水平研究表明,MCM2可能通过影响细胞周期蛋白CDKs 2/7,阻滞S期发展进而影响肝癌细胞增殖,揭示了MCM2与CDK2/7的复杂调控关系。我们开发了一种新型NIR-Ⅱ(第二近红外窗口,1000-1700 nn)小有机荧光染料(CH1055),这比传统的近红一区外成像更有优势。将CH1055与MCM2抗体结合后得到新型探针CH1055-MCM2,发现其在小鼠体内对肝癌具有很强的靶向性。讨论:MCM2是潜在的肝癌靶点,这种新型NIR-Ⅱ探针具有很大的潜力,可用于肝细胞癌的早期诊断和精确的图像引导肿瘤切除手术。

关键词：近红外二区肝癌 MC

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基于抗体芯片的肝癌血清蛋白表达图谱分析和应用

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军事医学 2018年第12期42卷 903-909页

作者：许萌王红叶代佳宇赵晓航牟劲松刘伟孙薇许丹科于晓波南京大学化学化工学院生命分析化学国家重点实验室南京210023 军事科学院军事医学研究院生命组学研究所国家蛋白质科学中心(北京)北京蛋白质组研究中心蛋白质组学国家重点实验室北京102206 国家癌症中心/中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院分子肿瘤学国家重点实验室北京100021 解放军总医院第五医学中心ICU 北京100039 北京大学肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所肝胆胰外一科恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室北京100142

目的基于高密度抗体芯片技术检测肝癌(肝细胞癌,HCC)血清的蛋白表达图谱和潜在生物标志物。方法运用由1000个血清蛋白抗体组成的抗体芯片结合生物素标记血清的策略,对健康人和乙型肝炎、肝硬化、HCC[甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)阴性]... 详细信息

目的基于高密度抗体芯片技术检测肝癌(肝细胞癌,HCC)血清的蛋白表达图谱和潜在生物标志物。方法运用由1000个血清蛋白抗体组成的抗体芯片结合生物素标记血清的策略,对健康人和乙型肝炎、肝硬化、HCC[甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)阴性]4组样本的血清蛋白表达图谱进行检测,通过one-way ANOVA统计方法分析差异蛋白,用实验室点制的小型芯片对检测的差异蛋白进行验证。结果该抗体芯片技术可用于HCC血清蛋白表达图谱的检测,且有很好的重复性和特异性。通过小型芯片的验证发现了AFP、癌胚抗原125(CA125)、Myc诱导核抗原(MINA)和D-二聚体(D-dimer) 4个潜在生物标志物,其中MINA和D-dimer分别与肝硬化和HCC密切相关(P≤0. 01)。另外,生存曲线分析发现MINA和D-dimer对HCC可能具有一定的预后价值(P≤0. 05)。结论通过抗体芯片的方法可初步筛选出具有临床诊断意义的HCC血清标志物,为进一步开展临床验证奠定基础。

关键词：肝癌抗体芯片生物学标记蛋白表达图谱甲胎蛋白类癌胚抗原

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基于蛋白质组学和近红外Ⅱ区成像的肝病靶向分子研究

基于蛋白质组学和近红外Ⅱ区成像的肝病靶向分子研究

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中国药理学会分析药理学专业委员会成立大会、第三届全国分析药理学学术大会暨贵州省药学会药学青年专业委员会成立大会

作者：洪学传徐平肖玉玲徐福春病毒学国家重点实验室武汉大学药学院军事医学科学院放射与辐射医学研究所蛋白质组学国家重点实验室国家蛋白质科学中心(北京)北京蛋白质组研究中心蛋白质药物国家工程研究中心西藏大学医学院

目的:建立快速可靠的靶向分子研究体系,鉴定特异的肝病潜在治疗靶点,用于指导临床治疗。方法:建立蛋白质组结合近红外二区成像的差异表达蛋白筛选及体内活性验证的研究体系。结果:通过蛋白质组鉴定到肝癌靶向分子微小染色体维持蛋白MCM... 详细信息

目的:建立快速可靠的靶向分子研究体系,鉴定特异的肝病潜在治疗靶点,用于指导临床治疗。方法:建立蛋白质组结合近红外二区成像的差异表达蛋白筛选及体内活性验证的研究体系。结果:通过蛋白质组鉴定到肝癌靶向分子微小染色体维持蛋白MCM2在肝癌组织中显著上调(>5倍癌/癌旁),并且结合肝癌小鼠模型的近红外二区体内荧光成像发现MCM2

关键词：靶向分子

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通过NIR-Ⅱ成像和蛋白质组学分析鉴定潜在的肿瘤生物标志物

通过NIR-Ⅱ成像和蛋白质组学分析鉴定潜在的肿瘤生物标志物

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中国药理学会分析药理学专业委员会成立大会暨第三届全国分析药理学学术大会

作者：周晖杨靖肖玉玲徐平洪学传病毒学国家重点实验室武汉大学药学院武汉430072 病毒学国家重点实验室武汉大学药学院武汉430072 军事医学科学院放射与辐射医学研究所蛋白质组学国家重点实验室国家蛋白质科学中心(北京)北京蛋白质组研究中心蛋白质药物国家工程研究中心北京军事医学科学院放射与辐射医学研究所蛋白质组学国家重点实验室国家蛋白质科学中心(北京)北京蛋白质组研究中心蛋白质药物国家工程研究中心北京102206 病毒学国家重点实验室武汉大学药学院武汉430072 西藏大学医学院拉萨850000

目的：建立快速可靠的靶向分子研究体系，鉴定特异的肝病潜在治疗靶点，用于指导临床治疗。方法：建立蛋白质组结合近红外二区成像的差异表达蛋白筛选及体内活性验证的研究体系。结果：微型染色体维持蛋白(MCM)是DNA 复制的重要组成部... 详细信息

目的：建立快速可靠的靶向分子研究体系，鉴定特异的肝病潜在治疗靶点，用于指导临床治疗。方法：建立蛋白质组结合近红外二区成像的差异表达蛋白筛选及体内活性验证的研究体系。结果：微型染色体维持蛋白(MCM)是DNA 复制的重要组成部分，可作为诊断癌症的新型生物标志物。

关键词：近红外二区肝癌 MC

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双反相色谱串联平行反应监测靶向定量蛋白质组方法的建立

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生物工程学报 2017年第11期33卷 1859-1868页

作者：李恺宋雷石文昊田喜凤华北理工大学基础医学院河北唐山063009 军事医学科学院放射与辐射医学研究所国家蛋白质科学中心·北京北京蛋白质组研究中心蛋白质组学国家重点实验室北京102206 河北省慢性疾病重点实验室唐山市慢性病临床基础研究重点实验室河北唐山063000

近年来质谱技术的持续进步促进了靶向蛋白质组的发展,在多反应监测(Multiple reaction monitoring,MRM)靶向蛋白质组定量方法的基础上衍生出平行反应监测(Parallel reaction monitoring,PRM)技术。该技术靶向定量灵敏度和通量更高,重现... 详细信息

近年来质谱技术的持续进步促进了靶向蛋白质组的发展,在多反应监测(Multiple reaction monitoring,MRM)靶向蛋白质组定量方法的基础上衍生出平行反应监测(Parallel reaction monitoring,PRM)技术。该技术靶向定量灵敏度和通量更高,重现性也更好,但其对于高复杂性样本在定量速度和深度上均存在一定的局限性。改善PRM定量的色谱方法包括:色谱柱的优化,增加色谱柱内径、降低柱长;色谱洗脱条件的优化,提高液相洗脱流速、缩短洗脱时间;最终建立了一种简单高效的双反相色谱串联PRM靶向蛋白质组定量平台。该平台使用150μm内径和8 cm长的短色谱柱,在800 nL/min的高流速下和35 min有效洗脱梯度内,可实现对293T全细胞裂解液蛋白样本中多达400条低丰度肽段的快速定量。该研究优化了PRM靶向定量方法,将有利于PRM技术的推广,尤其为低丰度蛋白的精准定量提供了一种技术选择。

关键词：双反相色谱平行反应监测靶向定量

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DNA条形码技术及其在微生物资源鉴别保护中的应用研究

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微生物学杂志 2018年第4期38卷 77-83页

作者：施佳辉田飞唐蜀昆徐平军事医学科学院放射与辐射医学研究所蛋白质组学国家重点实验室北京蛋白质组研究中心北京102206 大益集团微生物研发中心云南昆明650217 云南大学云南省微生物研究所云南昆明650091 河北大学生命科学学院河北保定071000

DNA条形码作为一种新型的物种鉴定、分类、鉴别和溯源方法,通过生物信息学分析将标准DNA片段进行分析比对实现。经过多年的发展,该技术现已成为物种鉴定和分类的研究热点。回顾十余年来DNA条形码技术的发展历程,介绍了这一技术的进展与... 详细信息

DNA条形码作为一种新型的物种鉴定、分类、鉴别和溯源方法,通过生物信息学分析将标准DNA片段进行分析比对实现。经过多年的发展,该技术现已成为物种鉴定和分类的研究热点。回顾十余年来DNA条形码技术的发展历程,介绍了这一技术的进展与成果,分析了该技术的优势及局限,并展望了DNA条形码的应用前景,为后续研究提供参考。

关键词： DNA条形码线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ 物种鉴定资源保护

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基于温敏型材料的固定化酶的制备及其在蛋白质组快速分析中的应用

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分析化学 2016年第11期44卷 1692-1697页

作者：张倩郑斐秦伟捷钱小红军事医学科学院放射与辐射医学研究学所国家蛋白质科学研究中心蛋白质组学国家重点实验室北京蛋白质组研究中心

蛋白质组学通过规模化鉴定、分析从细胞、组织或有机体中提取的蛋白质,从而获得蛋白表达、修饰、组成和定量的变化信息。在目前最为有效的"鸟枪法"蛋白质组学策略中,固定化酶试剂基质常用固相载体材料,该固定化酶试剂在酶解... 详细信息

蛋白质组学通过规模化鉴定、分析从细胞、组织或有机体中提取的蛋白质,从而获得蛋白表达、修饰、组成和定量的变化信息。在目前最为有效的"鸟枪法"蛋白质组学策略中,固定化酶试剂基质常用固相载体材料,该固定化酶试剂在酶解蛋白质时为异相体系,存在固液界面传质阻力和空间位阻,限制了酶解效率和样品处理通量。针对这一技术瓶颈,本研究利用温敏聚合物对外界温度变化的响应能力,制备了一种新型的基于可溶性温敏聚合物的固定化胰蛋白酶试剂。该固定化酶特有的温度敏感特性,使其具有"高温均相酶解,低温异相分离"的特色,且兼具酶切时间显著缩短、酶可重复利用的优势。BSA 1 min固定化酶解产物肽段的氨基酸序列覆盖率可达94%,高于传统溶液酶解12 h所得覆盖率为(74%)。进一步将该固定化酶试剂应用于HeLa细胞全蛋白质组的酶解,其酶解效果与相同条件下溶液酶解12 h相当。该固定化酶试剂对复杂蛋白质的快速、高效酶解充分证明其在蛋白质组学研究中的应用潜力。

关键词：固定化酶温度敏感型聚合物质谱鉴定蛋白质组学快速酶解

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全柱成像毛细管等电聚焦电泳分析蛋白质药物电荷异质性

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分析测试学报 2017年第3期36卷 343-348页

作者：孟晓光甄里刘悦玫侯利平刘丹李斌欧阳伟民魏开华北京正旦国际科技有限责任公司北京102206 北京蛋白质组研究中心蛋白质组学国家重点实验室国家蛋白质科学中心(北京) 北京102206 江汉大学护理与医学技术学院湖北武汉430056 北京绿绵科技有限公司北京100080 军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京100850

评价了cIEF-WCID检测多肽与蛋白质药物等电点的应用效果。测定标准多肽的等电点,验证了cIEF-WCID具有高的准确度和良好的重复性(相对标准偏差<0.50%)。人血红蛋白的4种主要异构体实现了基线分离;甘赖胰岛素的重复测试均只检出单一特... 详细信息

评价了cIEF-WCID检测多肽与蛋白质药物等电点的应用效果。测定标准多肽的等电点,验证了cIEF-WCID具有高的准确度和良好的重复性(相对标准偏差<0.50%)。人血红蛋白的4种主要异构体实现了基线分离;甘赖胰岛素的重复测试均只检出单一特征峰(p I 5.95±0.01);比较重组人生长激素原液和成品,等电点特征峰比例差异明显,且成品有新特征峰出现;对比进口及国产贝伐单抗,发现厂家1、3与原研药基本一致,厂家1的主成分迁移规律与原研药高度一致,厂家2的重链C末端K缺失、N末端焦谷氨酸环化或脱酰胺修饰影响了电荷异质性;通过考察尿素浓度、电解质范围和聚焦时间,优化了检测重组人促卵泡素等电点条件:2 mol/L尿素,两性电解质pH 2.5~5.0与pH 3.0~10.0按1∶1混合,聚焦电压1 000 V(1 min)~1 800 V(4 min)~2 200 V(1 min)。cIEF-WCID可快速、准确测定具有电荷异质性的蛋白类药物等电点,分辨率和重复性好,尤其是可以跟踪聚焦过程中样本的迁移特征,特别适合蛋白类药物复杂电荷异质性的检测。

关键词：全柱成像毛细管等电聚焦电泳电荷异质性重组蛋白质药物抗体药学研究

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MALDI-TOF质谱准内标法及其用于rhTPO复杂糖一致性研究

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分析测试学报 2017年第12期36卷 1458-1463页

作者：刘悦玫侯利平杨梅孟晓光魏开华安徽医科大学研究生院安徽合肥230032 军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京100850 蛋白质药物国家工程研究中心蛋白质组学国家重点实验室北京正旦国际科技有限责任公司北京102206

采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)准内标法准确测定重组人血小板生成素(rhTPO)仿制药和原研药中4类糖修饰的相对含量,并进行样本间和批间一致性比较。结合多种切糖酶逐步切除rhTPO的N-糖、唾液酸和O-糖;以牛血清白蛋... 详细信息

采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)准内标法准确测定重组人血小板生成素(rhTPO)仿制药和原研药中4类糖修饰的相对含量,并进行样本间和批间一致性比较。结合多种切糖酶逐步切除rhTPO的N-糖、唾液酸和O-糖;以牛血清白蛋白(BSA)为标准品,与样本非混合点靶;采用MALDI-TOF质谱准内标法检测,分别获得各样本完整含糖分子量及不同层次切糖后分子量;通过分子量差值计算4类糖修饰的相对含量;最后比较仿制药与原研药样本间和批间一致性。以BSA多电荷峰对rhTPO切糖前后的MALDI-TOF质谱测定值进行准内标法校正,BSA多电荷峰之间相对标准偏差(RSD)均≤0.075%,批间RSD为0.001%~0.004%,方法误差均<0.01%。rhTPO仿制药N-糖、O-糖唾液酸、O-糖和糖化糖的相对含量分别约为24.6%、2.9%、9.0%和5.1%,批间一致性良好,且总糖含量与文献值一致;rhTPO原研药N-糖、O-糖唾液酸、O-糖和糖化糖的相对含量分别约为25.6%、2.9%、7.9%和3.5%,总糖含量较文献值偏低。与rhTPO原研药相比,仿制药糖基化糖相对含量基本一致,糖化糖含量有差异。rhTPO糖化糖研究未见文献报道,其差异是不同厂家rhTPO之间差异的重要因素,主要由发酵工艺差异导致。

关键词：重组人血小板生成素(rhTPO) 基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS) 准内标法糖含量糖化

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流式细胞术分选小鼠肺泡巨噬细胞及鉴定

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安徽医科大学学报 2017年第11期52卷 1596-1600页

作者：韩鑫涛赵殿元唐丽安徽医科大学合肥230032 军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京100850 蛋白质组学国家重点实验室北京102206

目的建立一种基于流式细胞术分离小鼠肺泡巨噬细胞(AM)的方法。方法小鼠肺脏在体外经胶原酶IV消化后获得单细胞悬液,再经CD11b和CD11c抗体标记,利用流式细胞仪分选获得CD11blowCD11c+AM,并经台盼蓝染色计数细胞活力,以及通过Real-time ... 详细信息

目的建立一种基于流式细胞术分离小鼠肺泡巨噬细胞(AM)的方法。方法小鼠肺脏在体外经胶原酶IV消化后获得单细胞悬液,再经CD11b和CD11c抗体标记,利用流式细胞仪分选获得CD11blowCD11c+AM,并经台盼蓝染色计数细胞活力,以及通过Real-time PCR和吞噬功能进行鉴定。结果流式细胞术分选小鼠肺脏单细胞悬液,获得CD11blowCD11c+细胞,纯度为(93±2)%,细胞活力为(80±5)%;Real-time PCR结果显示过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)在该群细胞高表达(P<0.001);细胞吞噬功能实验结果显示该群细胞具有较好的吞噬活性,吞噬率约为10%。结论建立了一种基于流式细胞术分选获得AM的方法,该方法获得的细胞纯度高,细胞活性好,可用于功能性实验。

关键词：肺泡巨噬细胞流式细胞术 Real-time PCR 吞噬功能

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