检索结果-内蒙古大学图书馆

中国免疫学杂志 2012年第4期28卷 379-383页

作者：蒋朋飞张德礼西北农林科技大学动物医学院兽医免疫学研究所农业部动物生物技术重点开放实验室(病毒免疫与生物信息研究室生物信息学研究中心分子病毒免疫与肿瘤系统生物学研究组杨凌712100

细胞凋亡（Apoptosis）也称为＂程序性细胞死亡＂或＂细胞自杀＂,是由基因介导的一系列变化,是存在于所有哺乳动物细胞中的保守途径。细胞凋亡是调节生物体正常发育和生命活动的一种不可缺少的机制,该调节一旦失败,可能导致机体疾病、... 详细信息

细胞凋亡（Apoptosis）也称为＂程序性细胞死亡＂或＂细胞自杀＂,是由基因介导的一系列变化,是存在于所有哺乳动物细胞中的保守途径。细胞凋亡是调节生物体正常发育和生命活动的一种不可缺少的机制,该调节一旦失败,可能导致机体疾病、畸形甚至死亡。对免疫系统而言,细胞凋亡不仅是免疫系统发育过程中必不可少的一个环节,而且是免疫系统行使功能的一种方式。

关键词：程序性细胞死亡细胞凋亡哺乳动物细胞免疫系统细胞自杀基因介导生命活动正常发育

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兔抗猪CD163蛋白多克隆抗体制备及鉴定

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中国兽医学报 2012年第11期32卷 1624-1628页

作者：郭娟娟彭金美安同庆冷超良吴江宫大庆陈家锃杨永倩田志军张德礼西北农林科技大学、动物医学院病毒免疫与生物信息研究室、生物信息研究中心、分子病毒免疫与肿瘤系统生物学研究组陕西杨凌712100 中国农业科学院、哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室、猪传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为制备兔抗猪CD163多克隆抗体,采用RT-PCR方法从猪PAM RNA中扩增CD163胞质外区部分基因SRCR4-5,克隆至pGEX-6p-1原核表达载体,在IPTG诱导下获得约50 000以包涵体形式表达的重组蛋白。WesternBlotting分析表明,表达产物能够被GST单抗所... 详细信息

为制备兔抗猪CD163多克隆抗体,采用RT-PCR方法从猪PAM RNA中扩增CD163胞质外区部分基因SRCR4-5,克隆至pGEX-6p-1原核表达载体,在IPTG诱导下获得约50 000以包涵体形式表达的重组蛋白。WesternBlotting分析表明,表达产物能够被GST单抗所识别。用该重组蛋白免疫兔制备多抗血清,经间接ELISA检测,多抗血清效价可达105,流式检测发现可与Marc-145和PAM上的天然CD163分子相互作用。抗体阻断试验证明制备的多抗血清可以部分阻断PRRSV感染。本试验为进一步研究PRRSV与受体-CD163相互作用机制打下了基础。

关键词： CD163 抗体鉴定

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猪新基因P58^IPK的分子克隆、原核表达及其多克隆抗体的制备

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细胞与分子免疫学杂志 2011年第6期27卷 637-640页

作者：温俊歌宋豪孙岩郜原徐志坤薄联锋张德礼西北农林科技大学动物医学院病毒免疫与生物信息研究室生物信息研究中心分子病毒免疫与肿瘤系统生物学研究组陕西杨凌712100

目的:分子克隆出猪P58IPK新基因,制备其多克隆抗体,为下一步研究流感病毒与宿主相互作用机制提供条件。方法:根据猪EST数据库,利用生物信息学方法,电子克隆猪P58IPK新基因;采用RT-PCR方法从猪淋巴组织分子克隆P58IPK基因完整开放阅读框(... 详细信息

目的:分子克隆出猪P58IPK新基因,制备其多克隆抗体,为下一步研究流感病毒与宿主相互作用机制提供条件。方法:根据猪EST数据库,利用生物信息学方法,电子克隆猪P58IPK新基因;采用RT-PCR方法从猪淋巴组织分子克隆P58IPK基因完整开放阅读框(ORF),全长1 518 bp,编码505个氨基酸(GenBank登录号:HQ287801),并对其进行初步生物信息学分析;构建P58IPK原核表达载体pET-P58IPK,诱导表达并纯化重组的his-P58IPK融合蛋白,后免疫兔子制备多克隆抗体。结果:成功制备P58IPK多克隆抗体,通过双向琼脂扩散实验检测抗体有活性,ELISA鉴定血清中多抗效价达到1∶20 000,Western blot与免疫荧光检测反应特异性良好。结论:成功克隆猪新基因P58IPK,并制备了其多克隆抗体。

关键词：猪P58IPK 多克隆抗体 ELISA Western blot 免疫荧光

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猪淋巴结PKR基因的克隆与体外初步表达

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2011年第9期39卷 1-6页

作者：孙岩胡健温俊歌郜原薄联锋徐志坤吴耀丽张德礼西北农林科技大学动物医学院病毒免疫与生物信息研究室兽医免疫学研究所农业部动物生物技术重点开放实验室生物信息学研究中心分子病毒免疫与肿瘤系统生物学研究组陕西杨凌712100

【目的】克隆猪淋巴结双链RNA激活的蛋白激酶(PKR)基因,并在体外初步表达,为研究流感病毒感染时猪PKR与P58IPK在体内外的相互作用奠定基础。【方法】用Trizol法从猪淋巴结中提取总RNA,RT-PCR法扩增猪PKR基因的完整编码区,将该片段连接... 详细信息

【目的】克隆猪淋巴结双链RNA激活的蛋白激酶(PKR)基因,并在体外初步表达,为研究流感病毒感染时猪PKR与P58IPK在体内外的相互作用奠定基础。【方法】用Trizol法从猪淋巴结中提取总RNA,RT-PCR法扩增猪PKR基因的完整编码区,将该片段连接到原核表达载体pGEX-4T-1和真核表达载体pDsRed1-N1中,采用SDS-PAGE检测原核表达载体pGEX-PKR在大肠杆菌BL21中的表达情况,用脂质体转染法将真核表达载体pD-sRed1-PKR转入猪脐静脉血管内皮细胞系(SUVECs),Western blot检测其在细胞中的表达。【结果】PCR扩增得到了1 754bp的DNA片段,与预期结果一致;原核表达载体pGEX-PKR和真核表达载体pDsRed1-PKR经双酶切和核酸测序分析,表明载体构建成功;SDS-PAGE检测结果表明,pGEX-PKR重组质粒在大肠杆菌中成功表达;Westernblot检测到pDsRed1-PKR重组质粒在SUVECs中成功表达。【结论】成功克隆了猪淋巴结PKR基因,并在体外初步表达成功。

关键词：猪PKR基因克隆原核表达真核表达

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猪XCL1蛋白纯化、多克隆抗体的制备及其生物活性鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2011年第12期27卷 1335-1338页

作者：吴耀丽温俊歌孙岩张德礼西北农林科技大学动物医学院兽医免疫学研究所农业部动物生物技术重点开放实验室预防兽医学系兽医微生物学与病毒学课程组病毒免疫与生物信息研究室生物信息学研究中心分子病毒免疫与肿瘤系统生物学研究组陕西杨凌712100

目的:纯化获得体外表达猪his-XCL1的重组蛋白,制备多克隆抗体并研究其对淋巴细胞增殖的影响。方法:首先,采用HiTrapTM Chelating HP纯化方法,SDS-PAGE检测重组蛋白纯化情况,Western blot检测重组蛋白表达情况。再免疫动物制备多抗血清,... 详细信息

目的:纯化获得体外表达猪his-XCL1的重组蛋白,制备多克隆抗体并研究其对淋巴细胞增殖的影响。方法:首先,采用HiTrapTM Chelating HP纯化方法,SDS-PAGE检测重组蛋白纯化情况,Western blot检测重组蛋白表达情况。再免疫动物制备多抗血清,双向琼脂扩散试验、间接ELISA检测多克隆抗体效价,MTT法检测猪XCL1对淋巴细胞增殖的影响。结果:当结合缓冲液的浓度为40 mmol/L,洗脱缓冲液500 mmol/L时,SDS-PAGE电泳可观察到有单一目的条带,Western blot显示重组蛋白成功表达,双向琼脂扩散试验证实抗原抗体的结合比为1∶8,间接ELISA检测到抗体水平达到1∶12 800。重组蛋白XCL1能促进淋巴细胞的增殖,而此实验制备的多克隆抗体可以阻断这种效应。结论:体外表达的重组蛋白具有生物活性,制备的多克隆抗体为研究XCL1在猪体中的功能提供科技资料。

关键词： XCL1 纯化蛋白多克隆抗体间接ELISA MTT

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基于蛋白质相互作用网络挖掘物种内的功能相似蛋白质

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生物物理学报 2011年第9期27卷 789-800页

作者：宋宝兴桑青王芬张德礼西北农林科技大学动物医学院西安712100 西北农林科技大学动物科技学院西安712100 西北农林科技大学生物信息学研究中心分子病毒免疫与肿瘤系统生物学研究组西安712100

本文基于图论(graph theory)思想挖掘功能相似蛋白质。将蛋白质相互作用网络(protein-protein interaction network,PPI)转化为图,使用1-hop方法把相互作用网络拆分为子图。应用最短路径法,依次把拆分得到的每一个子图与所有子图进行两... 详细信息

本文基于图论(graph theory)思想挖掘功能相似蛋白质。将蛋白质相互作用网络(protein-protein interaction network,PPI)转化为图,使用1-hop方法把相互作用网络拆分为子图。应用最短路径法,依次把拆分得到的每一个子图与所有子图进行两两比对,寻找最优比对结果,挖掘物种内有相似功能的蛋白质。应用该方法对构建的人类蛋白质相互作用网络进行比对,共挖掘到1081对功能相似蛋白质。该方法的特点是数据量偏小、较可靠。计算结果中还出现了一些序列相似度较低、用序列比对的方法难以挖掘到的功能相似蛋白质。通过对结果的分析可以发现,趋同进化和同源有时很难区分。本实验的全部数据、程序和结果可在网站http://***上查询。

关键词：功能相似蛋白质同源蛋白质相互作用网络

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猪akirin2基因的克隆与真核表达

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中国兽医杂志 2010年第8期46卷 11-13页

作者：曹金锁柳超蒋朋飞赵振华陈新雨张德礼西北农林科技大学动物医学院病毒免疫与生物信息研究室生物信息研究中心分子病毒免疫与肿瘤系统生物学研究组陕西杨凌712100

Trizol法从猪脾脏中提取总RNA,RT-PCR方法得到猪Akirin2的完整编码区,软件分析猪Akirin2的核酸序列与蛋白序列,进行染色体定位。将Akirin2构建到带有荧光标记的真核表达载体pEGFP-C1中,通过脂质体转染法将pEGFP-Akirin2转入猪脐静脉血... 详细信息

Trizol法从猪脾脏中提取总RNA,RT-PCR方法得到猪Akirin2的完整编码区,软件分析猪Akirin2的核酸序列与蛋白序列,进行染色体定位。将Akirin2构建到带有荧光标记的真核表达载体pEGFP-C1中,通过脂质体转染法将pEGFP-Akirin2转入猪脐静脉血管内皮细胞系(SUVEC)中进行表达。结果表明,该序列编码203个氨基酸,猪akirin2基因定位于猪1号染色体,含有4个外显子,猪与牛的Akirin2蛋白高度同源。重组表达质粒pEGFP-Akirin2经双酶切鉴定和测序分析,表明构建成功,pEGFP-Akirin2转染SUVEC细胞后,经荧光检测证实转入的akirin2基因得到表达。研究结果为探讨猪Aki-rin2蛋白在免疫调控中的功能提供了基础数据。

关键词： akirin2基因克隆染色体定位真核表达

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酵母重复基因在蛋白质互作网络中的分歧进化

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2010年第10期38卷 165-170,177页

作者：赵振华陈新雨周鹏方郭阳刘敏林文超张德礼西北农林科技大学生命科学学院生物信息学研究中心分子病毒免疫与肿瘤系统生物学研究组陕西杨凌712100 西北农林科技大学动物医学院病毒免疫与生物信息研究室预防兽医学系兽医微生物学与病毒学课程组陕西杨凌712100

【目的】分析全基因组重复后,蛋白质互作网络对重复基因分歧模式的作用机制。【方法】结合高精度的蛋白质互作数据集和具有相同进化年代的重复基因数据集,在全基因组范围关联分析拷贝间进化距离与网络结构的相关性,并通过对拷贝间连接... 详细信息

【目的】分析全基因组重复后,蛋白质互作网络对重复基因分歧模式的作用机制。【方法】结合高精度的蛋白质互作数据集和具有相同进化年代的重复基因数据集,在全基因组范围关联分析拷贝间进化距离与网络结构的相关性,并通过对拷贝间连接水平的差异程度分类,分析不同阶段网络结构对基因功能的影响。【结果】重复基因两拷贝间的进化距离与其祖先基因在网络中的连接水平呈显著负相关,与重复基因间的连接度差异率呈显著正相关;网络结构完全歧化的重复基因间的非同义替换均值,较未完全歧化的重复基因显著高出30.2%。【结论】网络结构对重复基因的进化起调节作用,网络系统在保持核心稳定的同时,使外围组分发生了更大变化;重复基因在网络结构改变的前期为基因组提供功能冗余,但在网络结构差别较大后,显著增加的突变更有利于基因新功能的产生。

关键词：基因重复蛋白质相互作用进化距离非同义替换连接度酵母

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