采用昆白小鼠原代胎儿成纤维细胞饲养层,以高糖DMEM+10％NBS+0.1 mM 2-巯基乙醇+双抗为培养基,抑制分化培养89枚昆白小鼠囊胚,其中有3枚类ES细胞传5代.经体外培养分化实验,该类ES细胞形成简单胚体.部分分化为典型的神经细胞和有节律性...
详细信息
采用昆白小鼠原代胎儿成纤维细胞饲养层,以高糖DMEM+10％NBS+0.1 mM 2-巯基乙醇+双抗为培养基,抑制分化培养89枚昆白小鼠囊胚,其中有3枚类ES细胞传5代.经体外培养分化实验,该类ES细胞形成简单胚体.部分分化为典型的神经细胞和有节律性收缩的心肌细胞.同时,观察了ES细胞的生长行为.小鼠ES细胞向上生长,集落形似鸟巢状、山丘状和卵圆柱状等.细胞小,核大,细胞排列紧密,界限不清.ES细胞集落推开饲养层细胞.培养4-5 d初次传代.传代后除类ES细胞集落出现外,还观察到滋养层细胞集落、上皮样细胞集落和内皮样细胞集落等.
采用昆白小鼠胎儿成纤维细胞饲养层,以高糖DMEM+10％NBS+0.1 mM 2-巯基乙醇+双抗培养基添加20 μg/ml牛胰岛素,分离克隆猪类ES细胞系8个(8/31,64.5％),其中传1代的4个(4/31,12.9％),传2代的3个(3/31,9.7％),传3代的1个(1/31,3.2％).该猪...
详细信息
采用昆白小鼠胎儿成纤维细胞饲养层,以高糖DMEM+10％NBS+0.1 mM 2-巯基乙醇+双抗培养基添加20 μg/ml牛胰岛素,分离克隆猪类ES细胞系8个(8/31,64.5％),其中传1代的4个(4/31,12.9％),传2代的3个(3/31,9.7％),传3代的1个(1/31,3.2％).该猪类ES细胞悬浮培养,细胞分化形成腔状胚体.本实验还研究了胚胎日龄、胰岛素等对猪ES细胞分离与克隆的影响.猪胚胎贴壁率与内细胞团(ICM)克隆率的高低依次为9日龄(100％与83.3％)、8日龄(83.3％与66.7％),7日龄(41.6％与33.3％)和6日龄(14.3％与0).胰岛素可使ICM细胞增殖高峰期从96-120 h提前到84-96 h.观察了猪胚胎贴壁生长行为与小鼠的差异:1)ICM生长方式,猪呈平面生长;小鼠为竖向生长.2)ICM形态,猪呈多样性,有条状、团状及混合型形状,稍有隆起;小鼠呈鸟巢状和卵圆柱状等,突出明显.3)滋养层细胞,猪不形成合胞体,细胞扩展范围大,在饲养层表面生长;小鼠形成合胞体细胞,细胞扩展范围小,推开饲养层细胞贴皿底生长;4)ICM初次传代时间,猪8-9 d,小鼠4-5 d.
暂无评论