检索结果-内蒙古大学图书馆

西北农业学报 2007年第4期16卷 52-54,66页

作者：吴瑞楚元奎丰艳妮吴庆侠靳亚平西北农林科技大学动物科技学院农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室陕西杨凌712100

应用MTT比色法,以四因素四水平L16(45)的正交试验测定E2、P4、OT和PGF2α四种激素对猪的外周血单个核细胞(PBMC)的转化效果。结果显示,所选的4种激素在不同浓度组合时刺激PBMC转化的作用不同。这4种激素对PBMC的转化影响的强度依次为:P... 详细信息

应用MTT比色法,以四因素四水平L16(45)的正交试验测定E2、P4、OT和PGF2α四种激素对猪的外周血单个核细胞(PBMC)的转化效果。结果显示,所选的4种激素在不同浓度组合时刺激PBMC转化的作用不同。这4种激素对PBMC的转化影响的强度依次为:PGF2α、OT、E2、P4。在试验剂量范围内,E20.1 pg/mL、P41 ng/mL、OT 10 pg/mL、PGF2α100 ng/mL时,其共同作用对PBMC转化活性最强。提示在不同生理时期,由于机体内各种激素浓度变化不同,免疫系统也发生相应的变化。

关键词：激素淋巴细胞正交试验

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二甲基苯蒽诱导山羊乳腺上皮细胞体外转化研究

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2007年第4期35卷 19-22页

作者：王莉安志兴张涌西北农林科技大学生物工程研究所农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室陕西杨凌712100

分别用5,10和15μg／mL二甲基苯蒽(DMBA)的完全培养液处理体外培养的山羊乳腺上皮细胞36, 24和12 h,再以25 ng／mL佛波酯(TPA)作用2周,研究DMBA和TPA对山羊乳腺上皮细胞的诱导转化作用,确定最佳诱导转化条件,探讨二甲基亚砜(DMSO)对细... 详细信息

分别用5,10和15μg／mL二甲基苯蒽(DMBA)的完全培养液处理体外培养的山羊乳腺上皮细胞36, 24和12 h,再以25 ng／mL佛波酯(TPA)作用2周,研究DMBA和TPA对山羊乳腺上皮细胞的诱导转化作用,确定最佳诱导转化条件,探讨二甲基亚砜(DMSO)对细胞增殖的影响。结果表明,用含15μg／mL DMBA的完全培养液培养12 h,再用TPA连续作用4 d,几乎无山羊乳腺上皮细胞存活,10μg／mL DMBA培养24 h转化效果较差,5μg／mL DMBA培养36 h转化效果最佳;转化的山羊乳腺上皮细胞体积增大、核浓缩、生长排列紊乱、无规则并出现转化灶; DMSO对细胞生长有抑制作用．随培养时间延长抑制作用减弱。试验初步建立了乳腺上皮细胞的体外转化系统。

关键词：二甲基苯蒽细胞转化山羊乳腺上皮细胞

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小鼠卵巢颗粒细胞的体外培养

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2007年第8期35卷 11-14页

作者：王妍赵晓娥杨培先张仕强苏利红马保华西北农林科技大学动物科技学院农业部生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室陕西杨凌712100

为了探讨小鼠卵巢颗粒细胞体外生长的特点及增殖的调控因素,分别添加2μg/mL胰岛素、50ng/mL FSH和20 ng/mL EGF的培养液培养小鼠卵巢颗粒细胞,每隔24 h对细胞进行计数,研究其对小鼠卵巢颗粒细胞增殖的影响。此外,还对培养过程中出现的... 详细信息

为了探讨小鼠卵巢颗粒细胞体外生长的特点及增殖的调控因素,分别添加2μg/mL胰岛素、50ng/mL FSH和20 ng/mL EGF的培养液培养小鼠卵巢颗粒细胞,每隔24 h对细胞进行计数,研究其对小鼠卵巢颗粒细胞增殖的影响。此外,还对培养过程中出现的卵巢颗粒细胞集落进行了AKP染色和C-kit免疫组化染色鉴定。结果显示,在培养的第4天添加EGF组和FSH组与对照组相比均具有显著的促增殖作用(P<0.05),添加胰岛素组促增殖作用不显著(P>0.05);卵巢颗粒细胞集落经AKP染色和C-kit免疫组化染色均呈阳性。提示EGF和FSH对小鼠卵巢颗粒细胞具有促增殖效应,小鼠卵巢颗粒细胞具有干细胞的部分特性。

关键词：卵巢颗粒细胞体外培养细胞增殖小鼠

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不同因素对牛卵母细胞胞质内精子注射效果的影响

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西北农业学报 2007年第6期16卷 8-13页

作者：原巨强陈静波刘赛海里且木赵晓娥马保华西北农林科技大学动物科技学院农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室陕西杨凌712100 新疆畜牧科学院新疆乌鲁木齐830000

采用胞质内精子注射法(ICSI)构建牛显微受精胚胎,探讨卵母细胞成熟培养时间、精子状态及精子操作液中聚乙烯吡咯烷酮(PVP)浓度对牛卵母细胞胞质内显微受精(ICSI)卵体外发育的影响。结果显示:成熟培养20 h、24 h和28 h的卵母细胞用于ICSI... 详细信息

采用胞质内精子注射法(ICSI)构建牛显微受精胚胎,探讨卵母细胞成熟培养时间、精子状态及精子操作液中聚乙烯吡咯烷酮(PVP)浓度对牛卵母细胞胞质内显微受精(ICSI)卵体外发育的影响。结果显示:成熟培养20 h、24 h和28 h的卵母细胞用于ICSI时,ICSI卵的形态完整率分别为94.6%(175/185)、97.2%(173/178)和96.4%(189/196)(P>0.05);成熟培养24 h和28 h的卵母细胞,其ICSI卵的卵裂率(73.4%和70.9%)和囊胚发育率(31.8%和29.6%)显著高于成熟培养20 h的卵母细胞(61.1%和20.6%)(P<0.05)。对成熟培养24 h的卵母细胞注射获能精子时,ICSI卵的卵裂率和囊胚发育率(72.7%和31.4%)高于未获能精子组(69.4%和29.3%)和不运动精子组(71.5%和30.4%),但无统计学差异(P>0.05)。采用含5%,10%和15%PVP的精子操作液处理获能精子后对成熟培养24 h的卵母细胞进行ICSI操作,PVP浓度为5%和10%时,ICSI卵的卵裂率(73.2%和66.9%)和囊胚发育率(32.7%和29.7%)差异不显著(P>0.05),但二者均显著高于15%PVP浓度组的卵裂率和囊胚发育率(51.0%和16.3%)(P<0.01)。结论认为,选用获能精子,并使用含5%PVP的精子操作液进行处理,对成熟培养24 h的牛卵母细胞进行ICSI操作,有利于ICSI卵的体外发育。

关键词：显微受精卵母细胞体外成熟精子状态聚乙烯吡咯烷酮 ICSI卵体外培养牛

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培养液中血清或其替代物对牛体外受精卵体外发育的影响

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安徽农业科学 2007年第12期35卷 3556-3557,3613页

作者：刘赛陈静波原巨强海丽且木赵晓娥马保华西北农林科技大学动物科技学院农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室陕西杨凌712100 新疆畜牧科学院新疆乌鲁木齐830000

探讨在牛体外受精卵体外培养液中添加血清替代品对体外受精卵发育的影响,确定血清在SOF培养液中合适的添加浓度及添加时期,以筛选优良的牛体外受精卵体外培养液。在SOF液中分别添加10%血清(NBS)8、mg/ml牛血清白蛋白(BSA)和1 mg/ml聚乙... 详细信息

探讨在牛体外受精卵体外培养液中添加血清替代品对体外受精卵发育的影响,确定血清在SOF培养液中合适的添加浓度及添加时期,以筛选优良的牛体外受精卵体外培养液。在SOF液中分别添加10%血清(NBS)8、mg/ml牛血清白蛋白(BSA)和1 mg/ml聚乙烯醇(PVA)进行牛体外受精卵的全程培养,添加NBS组的卵裂率(66.3%)显著高于添加BSA组(51.0%)(P<0.05),极显著高于添加PVA组(47.6%)(P<0.01);添加NBS组的囊胚发育率(30.9%)显著高于添加PVA组(20.7%)(P<0.05),极显著高于添加BSA组(13.6%)(P<0.01)。在培养液中添加不同浓度(10%、5%)的NBS及无血清培养液全程培养时,3组之间卵裂率(65.6%、60.0%、58.0%)差异不显著(P>0.05);10%NBS组囊胚发育率(30.0%)极显著高于5%NBS组(17.6%)和无血清组(6.0%)(P<0.01)。5%NBS组的囊胚发育率极显著地高于无血清组(P<0.01)。在受精卵培养的最初48 h用5%NBS,之后用10%NBS培养液时,卵裂率(58.6%)和囊胚发育率(29.3%)与SOF+10%NBS全程培养组(66.3%、30.9%)差异都不显著(P>0.05)。试验结果表明,SOF培养液中添加PVA、BSA替代血清时卵裂率和囊胚发育率都明显下降,可能SOF培养液中添加血清比添加PVA或BSA更有利于牛体外受精卵的体外发育。体外培养时在SOF培养液中添加一定浓度的血清以及改变血清的添加方式,可提高牛体外受精卵体外发育效果。

关键词：体外受精牛血清白蛋白聚乙烯醇血清体外培养牛

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NRID主成分在山羊体内的释放规律

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2007年第12期35卷 53-56,62页

作者：马保华杨亚提田秀娥王志东于志峰黄建锋张红李键陈玉林王永军西北农林科技大学动物科技学院农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室西北农林科技大学理学院陕西杨凌712100 四川省动物生物技术研究中心四川成都610066

为了分析NRID主成分炔诺酮在山羊体内的释放规律,春季在甘肃天水用本地山羊、秋季在四川成都用关中奶山羊各108只进行体内试验。试验羊在同一天阴道放置羊用NRID,以放置NRID当天为0 d,从放置NRID的次日(1 d)起,每天分别随机取出6只羊的N... 详细信息

为了分析NRID主成分炔诺酮在山羊体内的释放规律,春季在甘肃天水用本地山羊、秋季在四川成都用关中奶山羊各108只进行体内试验。试验羊在同一天阴道放置羊用NRID,以放置NRID当天为0 d,从放置NRID的次日(1 d)起,每天分别随机取出6只羊的NRID,直到18 d全部回收结束。在实验室用丙酮溶解,并用紫外线分光光度仪测定每枚NRID内炔诺酮剩余量,计算每枚NRID内炔诺酮释放量,模拟分析NRID主成分炔诺酮在山羊体内的释放规律。结果表明,在春季和秋季,山羊体内放置的NRID中,炔诺酮的总释放规律是前期释放速度较快,之后释放速度逐渐降低,并呈现缓慢持续释放的特点。由此可以估测山羊阴道内每天NRID中炔诺酮的释放量,并可为建立NRID的应用程序提供理论依据。

关键词：炔诺酮体内释放炔诺酮阴道缓慢释放装置山羊

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家兔子宫内膜细胞和平滑肌细胞的分离培养及鉴定

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2007年第6期35卷 19-23页

作者：李瑞梅陈秀荔王海滨靳亚平西北农林科技大学动物科技学院农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室陕西杨凌712100 军事医学科学院组织工程中心北京100850

为了建立一种高效的子宫细胞分离培养方法,用酶消化、过滤、离心与差速贴壁纯化相结合的方法分离培养家兔子宫细胞,分别以上皮细胞角蛋白、波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白等为抗原的免疫荧光对分离培养的细胞进行鉴定,并采用流式细胞仪分... 详细信息

为了建立一种高效的子宫细胞分离培养方法,用酶消化、过滤、离心与差速贴壁纯化相结合的方法分离培养家兔子宫细胞,分别以上皮细胞角蛋白、波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白等为抗原的免疫荧光对分离培养的细胞进行鉴定,并采用流式细胞仪分析细胞纯度。结果表明,家兔子宫内膜上皮细胞培养24 h后大部分贴壁,培养3 d左右形成单层细胞集落,呈角蛋白阳性,细胞圆形或椭圆形,胞质呈红色,核呈蓝色,纯度达96%以上;子宫内膜基质细胞培养0.5 h后即有贴壁,培养2 d后呈单层细胞集落状生长,呈波形蛋白阳性,细胞多边形或梭形,胞质呈红色,核呈蓝色,纯度达95%以上;平滑肌细胞培养24 h后大部分贴壁,6-7 d融合成片,呈α-平滑肌肌动蛋白阳性,细胞大都长梭形,胞质呈红色,核呈蓝色,纯度达98%以上。说明该方法能够成功分离并得到高产量、高纯度、高增殖能力的子宫内膜细胞及平滑肌细胞。

关键词：动物细胞培养子宫内膜上皮细胞子宫内膜基质细胞子宫平滑肌细胞家兔

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LH抗体间接ELISA检测方法的建立

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西北农业学报 2007年第3期16卷 26-28页

作者：崔贞亮李红飞吴庆侠靳亚平刘璇西北农林科技大学动物科技学院农业部家畜内分泌与胚胎工程重点开放实验室陕西杨凌712100 河南省商丘市梁园区动物检疫站河南商丘476000

以高纯度的促黄体素(LH)作为包被抗原,建立了检测LH抗体的间接ELISA法,该法的最适抗原包被浓度为1μg/mL,最佳酶标山羊抗小鼠抗体稀释度为1∶1 500。该法只与LH阳性小鼠血清呈现阳性反应,而与LH阴性小鼠血清和小鼠促卵泡素(FSH)阳性血... 详细信息

以高纯度的促黄体素(LH)作为包被抗原,建立了检测LH抗体的间接ELISA法,该法的最适抗原包被浓度为1μg/mL,最佳酶标山羊抗小鼠抗体稀释度为1∶1 500。该法只与LH阳性小鼠血清呈现阳性反应,而与LH阴性小鼠血清和小鼠促卵泡素(FSH)阳性血清呈现阴性反应。结果表明,该法具有良好的特异性和重复性,可用于LH免疫后抗体水平检测。

关键词：间接ELISA LH抗体小鼠

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分离培养兔子宫内膜细胞的鉴定及性激素对子宫内膜间质细胞形态的影响

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畜牧兽医学报 2006年第11期37卷 1226-1231页

作者：陈秀荔靳亚平张彦明西北农林科技大学农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室杨凌712100

为探讨子宫内膜细胞的形态学特点、分泌功能及性激素在子宫内膜细胞中的作用,采用不同的消化分离方法进行了孕早期家兔子宫内膜细胞的消化和分离培养试验。结果显示:子宫内膜主要包括两类细胞,基质细胞和上皮细胞,两类细胞分别在波形蛋... 详细信息

为探讨子宫内膜细胞的形态学特点、分泌功能及性激素在子宫内膜细胞中的作用,采用不同的消化分离方法进行了孕早期家兔子宫内膜细胞的消化和分离培养试验。结果显示:子宫内膜主要包括两类细胞,基质细胞和上皮细胞,两类细胞分别在波形蛋白和细胞角蛋白免疫细胞化学染色中有阳性反应特点;在培养基中加入雌激素和/或孕酮刺激后,基质细胞形态发生变化,表现一定的蜕膜化现象。

关键词：子宫内膜免疫组织化学雌激素孕酮蜕膜化

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转人乳铁蛋白基因山羊乳腺上皮细胞的研究

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畜牧兽医学报 2006年第12期37卷 1282-1286页

作者：郑月茂刘凤军何小宁张涌农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室西北农林科技大学生物工程研究所杨凌712100

利用脂质体包裹含人乳铁蛋白基因的重组质粒,并导入到山羊乳腺上皮细胞,经G418及PCR筛选获得阳性细胞;转染细胞增殖后经激素诱导,培养液上清通过Western blot检测证明,转染细胞表达并分泌出人乳铁蛋白,其分子质量为58 ku。

关键词：人乳铁蛋白基因乳腺特异性表达载体绿色荧光蛋白转基因山羊乳腺上皮细胞

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