检索结果-内蒙古大学图书馆

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2011年第9期39卷 1-6页

作者：孙岩胡健温俊歌郜原薄联锋徐志坤吴耀丽张德礼西北农林科技大学动物医学院病毒免疫与生物信息研究室兽医免疫学研究所农业部动物生物技术重点开放实验室生物信息学研究中心分子病毒免疫与肿瘤系统生物学研究组陕西杨凌712100

【目的】克隆猪淋巴结双链RNA激活的蛋白激酶(PKR)基因,并在体外初步表达,为研究流感病毒感染时猪PKR与P58IPK在体内外的相互作用奠定基础。【方法】用Trizol法从猪淋巴结中提取总RNA,RT-PCR法扩增猪PKR基因的完整编码区,将该片段连接... 详细信息

【目的】克隆猪淋巴结双链RNA激活的蛋白激酶(PKR)基因,并在体外初步表达,为研究流感病毒感染时猪PKR与P58IPK在体内外的相互作用奠定基础。【方法】用Trizol法从猪淋巴结中提取总RNA,RT-PCR法扩增猪PKR基因的完整编码区,将该片段连接到原核表达载体pGEX-4T-1和真核表达载体pDsRed1-N1中,采用SDS-PAGE检测原核表达载体pGEX-PKR在大肠杆菌BL21中的表达情况,用脂质体转染法将真核表达载体pD-sRed1-PKR转入猪脐静脉血管内皮细胞系(SUVECs),Western blot检测其在细胞中的表达。【结果】PCR扩增得到了1 754bp的DNA片段,与预期结果一致;原核表达载体pGEX-PKR和真核表达载体pDsRed1-PKR经双酶切和核酸测序分析,表明载体构建成功;SDS-PAGE检测结果表明,pGEX-PKR重组质粒在大肠杆菌中成功表达;Westernblot检测到pDsRed1-PKR重组质粒在SUVECs中成功表达。【结论】成功克隆了猪淋巴结PKR基因,并在体外初步表达成功。

关键词：猪PKR基因克隆原核表达真核表达

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奶山羊睾丸组织冷冻保存及复苏后精原干细胞的分离培养

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中国兽医学报 2011年第4期31卷 583-588,593页

作者：朱海鲸华进联宋文聪黄建升田泽华西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心农业部动物生殖发育与胚胎工程重点开放性实验室陕西省农业分子生物学重点实验室陕西杨凌712100

以关中奶山羊为材料,比较了2种玻璃化冷冻法和1种慢速冷冻法对睾丸组织保存的效率,复苏后发现3种冻存方法均有较高的成活率(超过50%),其中玻璃化Ⅱ组达65%以上,培养及检测后均有精原干细胞存活,在体外培养可以形成胚胎干细胞样克隆,其... 详细信息

以关中奶山羊为材料,比较了2种玻璃化冷冻法和1种慢速冷冻法对睾丸组织保存的效率,复苏后发现3种冻存方法均有较高的成活率(超过50%),其中玻璃化Ⅱ组达65%以上,培养及检测后均有精原干细胞存活,在体外培养可以形成胚胎干细胞样克隆,其表达精原干细胞和多能性干细胞的相关特异性标记:碱性磷酸酶(AP)、CD49f、CD133、C-Myc、Oct4和Klf4阳性,证明睾丸组织冷冻可以提供一种有效的奶山羊精原干细胞的保存方法。试验中所使用的低温保存方法简便易行,效果良好,表明这些方法可为癌症治疗等造成的无精症及少精症等不育症患者的医治以及一些珍稀濒危物种和优良畜禽的生殖细胞保存提供一种简捷有效的途径。

关键词：睾丸组织低温保存精原干细胞奶山羊

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维生素A类化合物与生殖细胞发育

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解剖学杂志 2011年第4期34卷 548-552页

作者：曹晖华进联西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心农业部动物生殖发育与胚胎工程重点开放性实验室陕西省农业分子生物学重点实验室杨凌712100

维生素A（VA）是生命有机体内细胞增长、分化、增殖和程序性凋亡的关键调节因子，其参与胚胎发育、组织分化、肿瘤细胞生长等重要过程，对视力、上皮组织及骨骼发育、配子生成及胎儿的生长发育等所必需。视黄酸（RA）是维生素A的生物活... 详细信息

维生素A（VA）是生命有机体内细胞增长、分化、增殖和程序性凋亡的关键调节因子，其参与胚胎发育、组织分化、肿瘤细胞生长等重要过程，对视力、上皮组织及骨骼发育、配子生成及胎儿的生长发育等所必需。视黄酸（RA）是维生素A的生物活性代谢所产生的一种脂溶性的小分子物质，主要由环乙烯、侧链和极性基团组成。根据其双键构型的不同，可分为反式视黄酸和顺式视黄酸。

关键词：维生素A 生殖细胞发育类化合物肿瘤细胞生长组织分化小分子物质视黄酸细胞增长

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猪Akirin2基因的定位及其影响IL-1β和IL-6 mRNA表达的研究

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中国兽医杂志 2011年第11期47卷 25-27,I0002页

作者：徐志坤薄联峰温俊歌孙岩郜原吴江张德礼西北农林科技大学动物医学院兽医免疫学研究所农业部动物生物技术重点开放实验室预防兽医学系兽医微生物学与病毒学课程组病毒免疫与生物信息研究室陕西杨凌712100

本研究旨在研究猪新天然免疫相关基因Akirin2所表达的蛋白在细胞中的定位,以及在受到外源刺激物LPS刺激时,对细胞因子IL-6和IL-1βmRNA表达的影响。本试验用实验室构建好的pEGFP-Akirin2真核表达载体转染猪脐静脉血管内皮细胞(SUVEC),... 详细信息

本研究旨在研究猪新天然免疫相关基因Akirin2所表达的蛋白在细胞中的定位,以及在受到外源刺激物LPS刺激时,对细胞因子IL-6和IL-1βmRNA表达的影响。本试验用实验室构建好的pEGFP-Akirin2真核表达载体转染猪脐静脉血管内皮细胞(SUVEC),用激光共聚焦显微镜分析Akirin2在SUVEC的定位,并用LPS作为外源刺激物刺激转染Akirin2基因的细胞,荧光实时定量分析细胞因子IL-6和IL-1βmRNA表达量的变化。结果表明,Akirin2基因编码的蛋白严格定位于细胞核之内,并在核仁区有明显表达,在LPS刺激后,Akirin2基因对细胞因子IL-6和IL-1βmRNA表达量都具有明显上调作用。本研究证实了Akirin2蛋白的亚细胞定位及其对细胞因子表达的影响,为Akirin2基因的作用机制的进一步研究奠定了基础。

关键词：猪Akirin2基因 LPS 细胞定位细胞因子 qRT-PCR

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猪XCL1蛋白纯化、多克隆抗体的制备及其生物活性鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2011年第12期27卷 1335-1338页

作者：吴耀丽温俊歌孙岩张德礼西北农林科技大学动物医学院兽医免疫学研究所农业部动物生物技术重点开放实验室预防兽医学系兽医微生物学与病毒学课程组病毒免疫与生物信息研究室生物信息学研究中心分子病毒免疫与肿瘤系统生物学研究组陕西杨凌712100

目的:纯化获得体外表达猪his-XCL1的重组蛋白,制备多克隆抗体并研究其对淋巴细胞增殖的影响。方法:首先,采用HiTrapTM Chelating HP纯化方法,SDS-PAGE检测重组蛋白纯化情况,Western blot检测重组蛋白表达情况。再免疫动物制备多抗血清,... 详细信息

目的:纯化获得体外表达猪his-XCL1的重组蛋白,制备多克隆抗体并研究其对淋巴细胞增殖的影响。方法:首先,采用HiTrapTM Chelating HP纯化方法,SDS-PAGE检测重组蛋白纯化情况,Western blot检测重组蛋白表达情况。再免疫动物制备多抗血清,双向琼脂扩散试验、间接ELISA检测多克隆抗体效价,MTT法检测猪XCL1对淋巴细胞增殖的影响。结果:当结合缓冲液的浓度为40 mmol/L,洗脱缓冲液500 mmol/L时,SDS-PAGE电泳可观察到有单一目的条带,Western blot显示重组蛋白成功表达,双向琼脂扩散试验证实抗原抗体的结合比为1∶8,间接ELISA检测到抗体水平达到1∶12 800。重组蛋白XCL1能促进淋巴细胞的增殖,而此实验制备的多克隆抗体可以阻断这种效应。结论:体外表达的重组蛋白具有生物活性,制备的多克隆抗体为研究XCL1在猪体中的功能提供科技资料。

关键词： XCL1 纯化蛋白多克隆抗体间接ELISA MTT

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芦丁对大鼠免疫器官指数的影响

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动物医学进展 2011年第11期32卷 70-72页

作者：郭旭东刁其玉郭宇廷汪新建高杰中国农业科学院饲料研究所农业部饲料生物技术重点实验室北京100081 贵阳医学院贵州贵阳550001 河南农业大学农业部动物生长发育调控重点开放实验室河南郑州450002 西北农林科技大学陕西杨陵712100

研究天然植物提取物芦丁对大鼠免疫器官指数的影响,考察芦丁调节动物免疫功能的作用。选择16只Wistar雌性青春期大鼠,随机分为2组,每组8只,分别为对照组(每日每只灌胃生理盐水2mL)、芦丁组(每日灌服芦丁60mg/kg体重),正式试验为期2周。1... 详细信息

研究天然植物提取物芦丁对大鼠免疫器官指数的影响,考察芦丁调节动物免疫功能的作用。选择16只Wistar雌性青春期大鼠,随机分为2组,每组8只,分别为对照组(每日每只灌胃生理盐水2mL)、芦丁组(每日灌服芦丁60mg/kg体重),正式试验为期2周。12只Wistar受孕母鼠,随机分为2组,每组6只,相同处理,从哺乳第4天开始连续给药2周,基础日粮相同。测定大鼠胸腺指数和脾脏指数。结果显示,雌性青春期大鼠芦丁组胸腺指数为56.57±1.91,脾脏指数为266.54±1.39,显著高于对照组的144.84±4.61和251.96±5.72(P<0.05),泌乳大鼠芦丁组胸腺指数和脾脏指数分别为89.36±1.82和247.41±18.13,同样高于对照组的72.57±6.16和191.89±12.61(P<0.05),呈现相同趋势。表明芦丁能够促进雌性青春期大鼠和泌乳大鼠免疫器官胸腺和脾脏的发育。

关键词：芦丁大鼠免疫器官指数

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小鼠Nanos3基因的克隆及真核表达载体的构建

小鼠Nanos3基因的克隆及真核表达载体的构建

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“细胞活动生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会

作者：于萌廉智敏华进联西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心农业部动物生殖发育与胚胎工程重点开放性实验室陕西省农业分子生物学重点实验室

小鼠Nanos3基因是果蝇Nanos同源基因,是Nanos基因家族的一员。Nanos3是一种RNA结合蛋白,靠近其C端含有两个非常保守且连续的(Cys-Cys-His-Cys)2特异锌指结构域。Northern Blot结果显示,Nanos3在小鼠生殖细胞中表达,并在原始生殖细胞(PG... 详细信息

小鼠Nanos3基因是果蝇Nanos同源基因,是Nanos基因家族的一员。Nanos3是一种RNA结合蛋白,靠近其C端含有两个非常保守且连续的(Cys-Cys-His-Cys)2特异锌指结构域。Northern Blot结果显示,Nanos3在小鼠生殖细胞中表达,并在原始生殖细胞(PGCs)的定型和维持等方面起重要作用。其在精子发生中的重要作用引起了越来越多的关注。我们从小鼠的睾丸组织中克隆得到了Nanos3 CDS全长序列,并将其连接到pMD18-T载体上,酶切鉴定并测序,测序结果显示其与GenBank上公布的序列BC119514.1相同。将Nanos3 CDS序列定向亚克隆到pEGFP-C1载体的多克隆位点上,构建成pEGFP-C1-Nanos3重组载体。将Nanos3真核表达载体转染GC-1细胞系、小鼠精原干细胞系(SSCs),24小时后Nanos3蛋白开始表达。通过半定量及定量RT-PCR检测发现,pEGFP-C1-Nanos3转入GC-1、SSCs后,生殖细胞特异的多能性标记基因Oct4、Sox2表达量较对照组均有上调。讨论:Nanos3的常规作用机制主要有两方面,一方面通过Nanos-Pumilio蛋白复合体结合靶mRNA的3'UTR区的Nanos-响应元件(NRE),降解靶mRNA或调控其翻译活性;另一方面通过抑制依赖或不依赖Bax的凋亡通路来维持小鼠生殖细胞。以往Nanos3的研究借助Nanos3 Knockout小鼠,表现为性腺发育失常、雄性雌性小鼠不育。但由于在个体水平上难于实时动态地研究其作用机制。因此我们通过转染体外培养雄性生殖干细胞的方法,从细胞水平上探究Nanos3超表达对雄性小鼠体外生殖干细胞发育的影响,并从细胞和分子水平上揭示Nanos3可能参与的调控机制。

关键词： Nanos3基因生殖细胞精子发生小鼠

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奶牛X性控冻精的卵胞质内精子注射研究

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农业生物技术学报 2010年第5期18卷 1007-1012页

作者：徐红强李键马保华郜勇刘闯赵晓娥西北农林科技大学动物医学院农业部动物生殖生理和胚胎工程重点开放实验室西南民族大学生命科学与技术学院

探讨奶牛X性控冻精的卵胞质内单精子注射(ICSI)技术的可行性及显微操作条件对奶牛X性控冻精ICSI效果的影响。结果表明,注射运动性控冻精ICSI卵的卵裂率和囊胚发育率均高于不运动组,但差异不显著(P>0.05)。分别用5%、8%和10%聚乙烯吡... 详细信息

探讨奶牛X性控冻精的卵胞质内单精子注射(ICSI)技术的可行性及显微操作条件对奶牛X性控冻精ICSI效果的影响。结果表明,注射运动性控冻精ICSI卵的卵裂率和囊胚发育率均高于不运动组,但差异不显著(P>0.05)。分别用5%、8%和10%聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的精子操作液处理性控冻精,进行ICSI操作,ICSI卵的卵裂率差异不显著;但PVP在5%和10%时,正常卵裂率分别是78.4%和69.1%(P<0.05),囊胚率分别是29.7%和20.4%(P<0.05)。精子显微注射时,将卵母细胞的极体调整在相当于时钟6点与12点的位置时,所获ICSI卵的卵裂率差异不显著,但正常卵裂率(76.4%,66.7%)和囊胚率(28.6%,19.0%)明显提高(P<0.05)。结论认为,进行奶牛X性控冻精ICSI操作时,应选用运动精子,并用含5%PVP的精子操作液进行处理,而且注射在卵母细胞极体置于6点的位置,有利于ICSI卵体外发育。

关键词： X性控冻精卵胞质内单精子注射奶牛

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非洲猪瘟病毒VP73基因主要抗原表位区的融合原核表达

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中国生物工程杂志 2010年第2期30卷 60-65页

作者：李秋霞滕达童德文杨雅麟田子罡王建华西北农林科技大学动物医学院杨凌712100 中国农业科学院饲料研究所基因工程室农业部饲料生物技术重点开放实验室北京100081

人工合成VP73基因全长序列,利用DNAstar软件确定其中抗原性较高的区域,利用Primer Premier5.0设计一对特异性引物,通过PCR扩增得到243bp的非洲猪瘟病毒VP73基因片段(vp73l)。将该片段与表达载体pET-32a连接克隆至大肠杆菌Escherichia co... 详细信息

人工合成VP73基因全长序列,利用DNAstar软件确定其中抗原性较高的区域,利用Primer Premier5.0设计一对特异性引物,通过PCR扩增得到243bp的非洲猪瘟病毒VP73基因片段(vp73l)。将该片段与表达载体pET-32a连接克隆至大肠杆菌Escherichia coli(***)DH5α菌株,经测序、菌落PCR和酶切鉴定,选取VP73L基因正向插入,读码框正确的阳性克隆。构建重组质粒并转化BL21(DE3),经IPTG诱导,融合蛋白以可溶性形式在***21(DE3)高效表达,经His亲和层析柱得以纯化。Western blotting显示,该融合蛋白能与兔抗非洲猪瘟病毒VP73多克隆抗体发生特异性反应。所得结果为进一步研究:分离纯化该重组融合蛋白;确证目标抗原蛋白VP73L免疫原性及其特异性,进而达到建立非洲猪瘟病毒的免疫检测方法奠定了必要的材料与技术基础。

关键词：非洲猪瘟病毒 VP73基因主要抗原表位区表达

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密闭培养条件下小鼠早期胚胎Igf2/H19印迹调控区甲基化状态分析

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中国生物化学与分子生物学报 2010年第7期26卷 672-677页

作者：陈海燕马保华刘洁赵晓娥曹宇静雷晓华西北农林科技大学动物医学院农业部动物生殖生理和胚胎工程重点开放实验室陕西杨凌712100 中国科学院动物研究所生殖生物学国家重点实验室北京100101

胚胎密闭培养是空间胚胎发育研究的基本条件.本文主要研究密闭培养条件对小鼠早期胚胎发育过程中印迹基因Igf2/H19的印迹调控区(ICR)甲基化水平的影响.应用亚硫酸氢盐测序法(BSP)分析小鼠2-细胞胚胎在密闭条件下分别培养24h、48h和72h后... 详细信息

胚胎密闭培养是空间胚胎发育研究的基本条件.本文主要研究密闭培养条件对小鼠早期胚胎发育过程中印迹基因Igf2/H19的印迹调控区(ICR)甲基化水平的影响.应用亚硫酸氢盐测序法(BSP)分析小鼠2-细胞胚胎在密闭条件下分别培养24h、48h和72h后,相对应的发育阶段胚胎Igf2/H19的ICR甲基化水平,以常规体外培养和体内发育的各阶段胚胎为对照.结果显示,密闭培养条件下,小鼠8-细胞胚胎、桑葚胚和囊胚的Igf2/H19的ICR甲基化水平都低于常规体外培养的结果,且更明显低于体内发育的结果;同时发现,小鼠8-细胞胚胎密闭培养时,Igf2/H19的ICR甲基化水平最低.由此可见,密闭培养会引起小鼠植入前各发育阶段胚胎Igf2/H19的ICR甲基化水平降低,并证明Igf2/H19的ICR甲基化水平可以作为监测哺乳动物早期胚胎发育状况的分子指标.

关键词：密闭培养胚胎甲基化印迹基因Igf2/H19 小鼠

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