检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2016年第9期36卷 1537-1543页

作者：贺晓丽林小湲刘军王勃卓伟伟张涌郑月茂西北农林科技大学动物医学院农业部动物生物技术重点开放实验室陕西杨凌712100 新疆哈密地区动物疫病预防控制中心新疆哈密839000

构建O型口蹄疫病毒抗原表位VP1的重组腺病毒载体,并在体外和体内培养试验中检测腺病毒介导VP1的表达。利用PCR技术,从原始质粒中扩增VP1基因片段,双酶切后连接载体构建重组穿梭质粒pHBAd-MCMVVP1-GFP,并经磷酸钙沉淀法携带骨架质粒按比... 详细信息

构建O型口蹄疫病毒抗原表位VP1的重组腺病毒载体,并在体外和体内培养试验中检测腺病毒介导VP1的表达。利用PCR技术,从原始质粒中扩增VP1基因片段,双酶切后连接载体构建重组穿梭质粒pHBAd-MCMVVP1-GFP,并经磷酸钙沉淀法携带骨架质粒按比例转染HEK293A细胞,获得P1代腺病毒颗粒,经多轮扩增后进行浓缩纯化,获得复制缺陷型腺病毒颗粒,测定病毒滴度。进行体外感染乳腺上皮细胞,通过GFP的荧光表达量确定最佳感染复数。然后用RT-PCR和Western blotting检测感染的乳腺上皮细胞中抗原表位VP1的表达。进一步用纯化的腺病毒通过乳头滴定法感染羊乳腺组织,检测其乳汁中VP1的表达。结果显示,PCR、双酶切和基因测序等结果表明基因扩增和腺病毒载体构建正确,以其感染关中奶山羊乳腺上皮细胞和乳腺组织时,均可检测到VP1蛋白表达。结果表明,成功构建了含VP1基因的重组腺病毒载体,且能够介导VP1基因在体外和体内培养试验中有效表达,为进一步研究纯化分离的VP1蛋白的抗原性并提高抗原优化技术提供基础研究。

关键词： VP1 腺病毒表达系统蛋白表达乳腺上皮细胞奶山羊

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

牛HA和Flag标记h3f3b基因真核表达载体的构建及鉴定

引用

农业生物技术学报 2015年第10期23卷 1386-1393页

作者：何荣军谢荣霞葛陆星权富生张涌西北农林科技大学动物医学院/农业部生物技术重点开放实验室

组蛋白变体H3.3是一种参与重编程的关键母源因子,在核移植操作后,卵母细胞中的组蛋白变体H3.3蛋白会将供体细胞中的组蛋白H3.3替换,从而打开染色质结构,促进重编程过程。这两种H3.3蛋白的氨基酸序列上没有差别,而且目前还没有特异性的H... 详细信息

组蛋白变体H3.3是一种参与重编程的关键母源因子,在核移植操作后,卵母细胞中的组蛋白变体H3.3蛋白会将供体细胞中的组蛋白H3.3替换,从而打开染色质结构,促进重编程过程。这两种H3.3蛋白的氨基酸序列上没有差别,而且目前还没有特异性的H3.3抗体,为了研究这一替换过程,本实验采用添加标签的方法,构建了牛(Bos taurus)H3.3蛋白的真核表达载体。H3f3b是编码这一蛋白的基因,实验通过PCR的方法获得了h3f3b的CDs区全长,并添加标签,通过双酶切的方法将片段连接到真核表达载体pcDNA3.1(+)上,构建了pcDNA3.1(+)-HA-h3f3b和pcDNA(+)-Flag-h3f3b重组质粒。双酶切和测序结果显示,片段连接正确,测序结果与Gen Bank一致。将该质粒转染293T细胞后,通过反转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)和免疫荧光染色及免疫印迹(Western blot)等方法确定了重组质粒的表达和定位。反转录PCR检测表明,只有在转染重组质粒组才能检测到重组H3.3基因的表达;Western blot检测表明,只有在转染重组质粒组中才能检测到标签蛋白的表达;免疫荧光染色后发现融合蛋白可以正确的定位到细胞核中。本研究成功构建了两种携带标签的h3f3b表达载体,并且能正确表达,可为将来研究H3.3交换提供方便。这种添加标签的方法也可以用于其他母源蛋白对供体细胞中蛋白交换的研究。

关键词：牛母源因子 h3f3b基因 H3.3蛋白真核表达载体

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

BoLA-Ⅰ类基因在牛体细胞克隆胚早期发育中的表达

引用

中国兽医学报 2015年第1期35卷 103-108页

作者：王勃贺晓丽王勇胜王雪娇张涌郑月茂西北农林科技大学动物医学院农业部动物生物技术重点开放实验室陕西杨凌712100

体外培养成熟的卵母细胞,通过核移植(Nuclear transfer,NT)技术,构建体细胞克隆(Somatic cell nuclear transfer,SCNT)胚胎,以体外受精胚胎作为对照组。收集MⅡ期卵母细胞、2细胞胚胎、4细胞胚胎、8细胞胚胎、16细胞胚胎、桑椹胚和囊胚... 详细信息

体外培养成熟的卵母细胞,通过核移植(Nuclear transfer,NT)技术,构建体细胞克隆(Somatic cell nuclear transfer,SCNT)胚胎,以体外受精胚胎作为对照组。收集MⅡ期卵母细胞、2细胞胚胎、4细胞胚胎、8细胞胚胎、16细胞胚胎、桑椹胚和囊胚,采用实时荧光定量PCR的方法检测经典BoLA-I基因和非经典BoLA-I基因在MⅡ期卵母细胞及各期胚胎中的相对表达量。结果显示,BoLA-I类基因在在牛MⅡ期卵母细胞中的相对表达量显著高于其在其他各时期胚胎的相对表达量(P<0.05);BoLA-I类基因在牛SCNT胚和IVF胚中相对表达量随胚胎发育的变化趋势类似,随着第1次及随后的卵裂,经典BoLA-I、NC1、NC2基因mRNA的表达下降到极微的水平;NC3、NC4在整个发育阶段均表达很低甚至难以检测到它们表达。结果表明,本试验通过在体外制备及培养SCNT胚胎,初步建立BoLA-I类基因在其的表达模式,为BoLA-I类基因参与母胎免疫机制的研究奠定基础,为进一步寻找评估胚胎质量的标志物提供依据。

关键词： BoLA-I 胚胎 SCNT qRT-PCR 牛

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

山羊卵巢间质细胞对小腔卵泡发育的影响

引用

畜牧兽医学报 2013年第7期44卷 1043-1050页

作者：邱明宁韩成全杨忠财刘军权富生张涌西北农林科技大学动物医学院农业部动物生物技术重点开放实验室杨凌712100

为了能有效利用山羊小腔卵泡和研究相关小腔卵泡发育的机理,将山羊小腔卵泡与卵巢皮质间质细胞、卵泡膜细胞和卵巢髓质间质细胞体外共培养,测定培养第5天卵泡直径、培养液中类固醇激素分泌量、卵母细胞特异性分泌因子gdf9和bmp15基因的... 详细信息

为了能有效利用山羊小腔卵泡和研究相关小腔卵泡发育的机理,将山羊小腔卵泡与卵巢皮质间质细胞、卵泡膜细胞和卵巢髓质间质细胞体外共培养,测定培养第5天卵泡直径、培养液中类固醇激素分泌量、卵母细胞特异性分泌因子gdf9和bmp15基因的表达和卵泡颗粒细胞以及卵母细胞凋亡与抗凋亡基因表达。研究结果显示,山羊小腔卵泡与卵巢间质细胞共培养5d,卵泡直径增加明显大于小腔卵泡单独培养组(P<0.05);小腔卵泡与卵巢皮质间质细胞共培养5d后,小腔卵泡分泌的雌二醇激素的量高于小腔卵泡单独培养组(P<0.01),为413.95pg·mL-1;小腔卵泡与卵巢髓质间质细胞共培养5d后,小腔卵泡分泌孕酮的量(11.695ng·mL-1)极显著高于小腔卵泡单独培养组和其他共培养组(P<0.01),小腔卵泡与卵泡膜细胞共培养5d后,小腔卵泡分泌的孕酮的量高于小腔卵泡单独培养组(P<0.05);小腔卵泡与卵巢皮质间质细胞、髓质间质细胞以及与卵泡膜细胞共培养5d后,其卵母细胞特异性分泌因子gdf9基因和bmp15基因表达显著上调(P<0.01);与卵巢间质细胞共培养5d后,小腔卵泡内卵丘细胞和卵母细胞抗凋亡基因表达上调(P<0.05),小腔卵泡内卵丘细胞和卵母细胞抗凋亡基因表达下调(P<0.05)。表明卵巢间质细胞促进小腔卵泡的生长以及类固醇激素如雌二醇和孕酮分泌,促进小腔卵泡内卵母细胞特异性分泌的生长因子(gdf9和bmp15)基因的表达,同时抑制小腔卵泡的凋亡。尤其是卵巢卵泡膜细胞与小腔卵泡共培养后明显提高小腔卵泡的抗凋亡能力。

关键词：小腔卵泡卵巢间质细胞共培养细胞凋亡山羊

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

生物反应器在干细胞培养中的应用研究进展

引用

中国细胞生物学学报 2013年第3期35卷 374-380页

作者：杨忠财邱明宁刘红亮刘军权富生张涌西北农林科技大学动物医学院农业部生物技术重点开放实验室杨凌712100

干细胞是一类具有自我更新能力和多向分化潜能的细胞,在再生医学、药物筛选及毒理学等生物医学领域呈现出诱人的前景。通过目前的干细胞分离培养技术可获得的干细胞数量极少,远远不能满足临床需要,因此体外大规模扩增培养干细胞是亟待... 详细信息

干细胞是一类具有自我更新能力和多向分化潜能的细胞,在再生医学、药物筛选及毒理学等生物医学领域呈现出诱人的前景。通过目前的干细胞分离培养技术可获得的干细胞数量极少,远远不能满足临床需要,因此体外大规模扩增培养干细胞是亟待解决的问题。该文简述了适用于干细胞培养的各种生物反应器的特点,以及悬浮生物反应器体系在不同类型干细胞群中的研究应用。同时对利用生物反应器培养干细胞过程中几个主要的关键参数进行了阐述,将为干细胞的培养和研究从思路和方法上提供参考。

关键词：干细胞生物反应器悬浮培养组织工程再生医学

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

小鼠早期胚胎发育过程中的DNA去甲基化

引用

畜牧兽医学报 2013年第4期44卷 501-507页

作者：刘青青郑丽明刘红亮苏建民权富生张涌西北农林科技大学动物医学院农业部生物技术重点开放实验室杨凌712100

表观遗传修饰在基因转录与表达、细胞生长与分化以及动物个体正常发育等过程中都具有重要的调控作用。表观遗传修饰发生异常,会引起机体生长发育中的各种异常。哺乳动物从精卵受精到附植前的胚胎早期发育阶段会发生重要的表观遗传重编程... 详细信息

表观遗传修饰在基因转录与表达、细胞生长与分化以及动物个体正常发育等过程中都具有重要的调控作用。表观遗传修饰发生异常,会引起机体生长发育中的各种异常。哺乳动物从精卵受精到附植前的胚胎早期发育阶段会发生重要的表观遗传重编程,主要包括DNA甲基化和组蛋白修饰。精卵受精后DNA发生主动和被动2种方式的去甲基化。本文主要综述了与DNA甲基化相关的蛋白和早期胚胎发育过程中的去甲基化机制,并对小鼠附植前胚胎发育过程中的DNA甲基化的动态变化进行了详细的论述。

关键词：小鼠早期胚胎表观重编程 DNA去甲基化

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

猪免疫抑制因子MNSFβ的克隆、表达与组织分布

引用

遗传 2013年第12期35卷 1377-1383页

作者：王静娜蒋朋飞亢展展李登云华琳琳张洋张淑霞张德礼西北农林科技大学兽医免疫学研究所动物生物技术农业部重点开放实验室杨凌712100 西北农林科技大学动物医学院预防兽医系兽医微生物学与病毒学课程组病毒免疫与生物信息研究室杨凌712100

MNSFβ(Monoclonal nonspecific suppressor factorβ)是一种天然免疫抑制因子,参与机体免疫反应、应激反应、细胞分裂、细胞凋亡和核转运等生物过程,但其功能在猪中鲜有报道。文章通过电子克隆得到猪MNSFβ的全长序列,利用RT-PCR首次... 详细信息

MNSFβ(Monoclonal nonspecific suppressor factorβ)是一种天然免疫抑制因子,参与机体免疫反应、应激反应、细胞分裂、细胞凋亡和核转运等生物过程,但其功能在猪中鲜有报道。文章通过电子克隆得到猪MNSFβ的全长序列,利用RT-PCR首次从猪脾脏中克隆了包含完整开放阅读框的MNSFβcDNA(GenBank登录号:KF77642500)片段,测序正确后分析猪MNSFβ的核酸序列和蛋白质序列。将猪MNSFβ基因编码区序列插入表达载体pEGFP-C1,构建真核表达载体pEGFP-MNSFβ;用脂质体将重组质粒转染到猪脐静脉内皮细胞(SUVEC)中,利用荧光检测、Western blot和激光共聚焦分析SUVEC中猪MNSFβ的表达;并用实时荧光定量PCR对猪MNSFβ在不同组织的表达丰度进行分析。结果表明:猪MNSFβ基因全长402 bp,编码133个氨基酸,含一个外显子。生物信息学分析表明,猪MNSFβ为无信号肽的稳定蛋白,由泛素样结构域与核糖体蛋白S30组成。对猪MNSFβ与已发现的18个物种的MNSFβ氨基酸序列进行相似性分析和进化树分析,显示其蛋白相似度均在91%以上,且进化距离都小于0.05,说明MNSFβ在各物种间高度保守。荧光检测和Western blot结果显示,猪MNSFβ在SUVEC中成功表达,激光共聚焦显示其在细胞质与细胞核内均有分布。组织表达谱分析表明,猪MNSFβ在各免疫相关组织广泛表达,但在肺脏中未检测到表达,说明其在机体免疫反应中发挥重要作用。

关键词：猪 MNSFβ 真核表达组织分布

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

小鼠Dazl基因融合蛋白表达载体的构建及转染

引用

中国兽医学报 2013年第2期33卷 236-240页

作者：王龙周莹胡玥于萌白耀富华进联西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心农业部动物生物技术重点开放性实验室陕西杨凌712100 西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100

根据NCBI数据库上公布的小鼠Dazl基因的mRNA序列设计引物,以小鼠睾丸组织RNA为模板,RT-PCR扩增小鼠Dazl基因编码区片段,并将其克隆到增强型绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1中,构建重组融合蛋白表达载体pEGFP-C1-Dazl,单双酶切和测序验证... 详细信息

根据NCBI数据库上公布的小鼠Dazl基因的mRNA序列设计引物,以小鼠睾丸组织RNA为模板,RT-PCR扩增小鼠Dazl基因编码区片段,并将其克隆到增强型绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1中,构建重组融合蛋白表达载体pEGFP-C1-Dazl,单双酶切和测序验证正确。将pEGFP-C1-Dazl质粒转染293和NIH-3T3细胞,荧光显微镜下观察到融合表达的绿色荧光蛋白,且呈胞质表达;对照组转染pEGFP-C1,绿色荧光遍布整个细胞。Dazl蛋白的免疫荧光试验也证明重组载体转染后,Dazl基因和GFP共同定位于胞质部分。pEGFP-C1-Dazl融合蛋白表达载体的成功构建为进一步研究生殖特异性基因Dazl在小鼠和大型动物的表达特性奠定了一定的基础。

关键词：小鼠生殖细胞 Dazl基因绿色荧光蛋白

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

PLZF与哺乳动物雄性生殖干细胞的发育分化

引用

中国生物化学与分子生物学报 2013年第9期29卷 825-832页

作者：宋文聪华进联西北农林科技大学动物医学院、陕西省干细胞工程技术研究中心、农业部动物生物技术重点开放性实验室陕西杨凌712100

早幼粒细胞白血病锌指蛋白(promyelocytic leukemia zinc finger,PLZF),也被称为ZBTB16(zinc finger and BTB domain containing 16,ZBTB16)或锌指蛋白145(zinc finger protein 145,ZFP145),是我国学者发现与人类疾病相关的蛋白质.人类PLZF的是由673个氨基酸残基组成的转录抑制因子,属于蛋白质超家族.该超家族以N端的BTB/POZ(bric-à-brac,tramtrack,brad complex(BTB)/poxvirus zinc finger(POZ)domain)结构为特征.PLZF蛋白的BTB/POZ结构与个体发育、胚胎发生、染色体的重构等事件相关.近年发现,PLZF在哺乳动物雄性生殖干细胞(male germline stem cells,mGSCs)发育分化过程中也发挥重要作用.探讨PLZF的生物学功能和作用机制,将有助于理解其在mGSCs发育过程中的重要作用.本文就PLZF在维持mGSCs自我更新和在发育分化调控中的作用给予综述.

关键词：早幼粒细胞白血病锌指蛋白(PLZF) 雄性生殖干细胞自我更新发育分化哺乳动物

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

牛PLCζ-Venus真核载体的构建以及其在Hela细胞中的初步表达

牛PLCζ-Venus真核载体的构建以及其在Hela细胞中的初步表达

引用

第七次全国动物生物技术学术研讨会暨新疆畜牧科学院第六次学术年会

作者：宁静许晓磊许荣李建雷安民西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心农业部动物生物技术重点开放性实验室陕西杨凌712100

本文从牛睾丸组织中提取总RNA,经RT-PCR克隆获得牛PLCδ1CDS全长，连接到本实验室提供的pMD19-T载体上，经DHSα转化后提质粒，经KpnI和NheI双酶切验证后送检测序。将测序结果与NCBI上公布的牛PLCδ1序列进行比对，测序正确后，选取鉴... 详细信息

本文从牛睾丸组织中提取总RNA,经RT-PCR克隆获得牛PLCδ1CDS全长，连接到本实验室提供的pMD19-T载体上，经DHSα转化后提质粒，经KpnI和NheI双酶切验证后送检测序。将测序结果与NCBI上公布的牛PLCδ1序列进行比对，测序正确后，选取鉴定结果正确的质粒和空pVenus载体各自进行KpnI和NheI双酶切并纯化回收目的片段和线性化的pVenus载体，通过T4DNA连接酶将目的片段和线性化的pVenus载体连接，后经DHS。转化后提质粒，经KpnI和NheI双酶切鉴定，而后在进行高纯度的质粒提取。提前在24孔板上接种培养Hela细胞，待其均匀分布贴壁达到70％-80%时用PLCδ-Venus转染Hela细胞，转染程序按照LipofectamineTM2000说明书进行操作。转染24h后在荧光倒置显微镜下观察荧光表达情况。以空载体pVenus组和未转染组为对照。结果经PCR扩增PLC基因，产物进行1%琼脂糖凝胶电泳，在约1900bp处出现特异性条带，回收的目的DNA片段连接pMD-19T在感受肤大肠杆菌中扩增，将所得质粒进行双酶切鉴定和测序对比，结果证明所回收的DNA片段确为牛PLCδl。在PLCδ-Venus转染Hela细胞相较于对照组死亡较多，在荧光显微镜下观察，出现了绿色荧光，荧光蛋白在细胞核周围呈弥散状分布。在pVenus转染组绿色荧光蛋白在整个细胞中都有分布。未转染组在荧光显微镜下观察时未观察到绿色荧光出现。讨论试验结果说明载体构建在分子水平和蛋白水平均验证正确。这有利于进一步研究牛PLCδ1在牛卵母细胞激活中的作用，并且为牛卵母细胞激活方法的改进与生物学激活方法的研究奠定基础。

关键词：牛卵母细胞真核表达载体 Hela细胞

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：