检索结果-内蒙古大学图书馆

解剖学杂志 2010年第3期33卷 281-285页

作者：华进联张姗姗西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心农业部动物生殖生理与胚胎工程重点开放实验室陕西省农业分子生物学重点实验室杨凌712100

随着小RNA组学的兴起，越来越多不曾被关注的小RNA分子，如siRNAs，miRNAs，rasiRNAs和piRNAs等先后被发现。研究显示，相对于基因、蛋白质等具有复杂结构的生物大分子而言，这些结构非常简单的微型RNA对动物正常机能的维持、细胞增殖... 详细信息

随着小RNA组学的兴起，越来越多不曾被关注的小RNA分子，如siRNAs，miRNAs，rasiRNAs和piRNAs等先后被发现。研究显示，相对于基因、蛋白质等具有复杂结构的生物大分子而言，这些结构非常简单的微型RNA对动物正常机能的维持、细胞增殖、分化、凋亡、器官形成、肿瘤形成等各种生命现象都具有极其重要的影响。

关键词： miRNAs 哺乳动物细胞发生生殖 siRNAs RNA分子生物大分子微型RNA

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表观遗传学与生殖细胞发育分化研究发展

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2010年第3期38卷 28-34页

作者：孙军伟华进联西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心农业部动物生殖生理与胚胎工程重点开放性实验室陕西省农业分子生物学重点实验室陕西杨凌712100

从DNA甲基化修饰、组蛋白甲基化和乙酰化修饰、基因印记和RNA干扰等几个方面,综述了表观遗传学的基本机制及其对哺乳动物生殖细胞发育分化的影响。表观遗传学对于动物机体生长、代谢及功能的正常维持具有重要作用,其中任何方面的异常都... 详细信息

从DNA甲基化修饰、组蛋白甲基化和乙酰化修饰、基因印记和RNA干扰等几个方面,综述了表观遗传学的基本机制及其对哺乳动物生殖细胞发育分化的影响。表观遗传学对于动物机体生长、代谢及功能的正常维持具有重要作用,其中任何方面的异常都会导致体细胞和生殖细胞的生长分化调控失常,甚至引发疾病。

关键词：表观遗传学甲基化组蛋白生殖细胞

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猪流产嗜性衣原体MOMP基因的克隆及原核表达

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2010年第7期38卷 33-38,43页

作者：李西玉许信刚周继章邱昌庆曹小安宫晓炜王光华西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室甘肃兰州730046

【目的】克隆猪流产嗜性衣原体青海株主要外膜蛋白(Major outer membrane protein,MOMP)基因,并进行序列分析及原核表达。【方法】根据GenBank公布的猪流产嗜性衣原体MOMP基因的核苷酸序列,设计并合成4条特异性引物,用套式PCR方法扩增... 详细信息

【目的】克隆猪流产嗜性衣原体青海株主要外膜蛋白(Major outer membrane protein,MOMP)基因,并进行序列分析及原核表达。【方法】根据GenBank公布的猪流产嗜性衣原体MOMP基因的核苷酸序列,设计并合成4条特异性引物,用套式PCR方法扩增猪流产嗜性衣原体青海株MOMP基因,将其克隆入pMD18-T载体中,进行测序及序列分析。然后将MOMP基因亚克隆入原核表达载体pGEX4T-1中,在大肠杆菌BL21(DE3)中用IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot检测。【结果】扩增到猪流产嗜性衣原体青海株1170bp的MOMP全长基因。序列分析结果表明,该基因与已发表的猪流产嗜性衣原体B11001株和CP/12株核苷酸同源性均为99.7%。SDS-PAGE电泳可检测到分子质量约为66ku的融合蛋白,主要以包涵体形式存在。Western-blot分析表明,重组蛋白可被猪流产嗜性衣原体抗体识别。【结论】成功克隆了猪流产嗜性衣原体青海株MOMP基因,并进行了原核表达,表达的蛋白具有抗原活性。

关键词：猪流产嗜性衣原体 MOMP蛋白原核表达

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共表达O型口蹄疫病毒P12A＋3C基因的重组杆状病毒的构建

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华北农学报 2010年第1期25卷 1-5页

作者：田飞鹏曹轶梅卢曾军孙普高云英刘在新西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

构建共表达O型口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus,FMDV)衣壳蛋白前体P12A和蛋白酶3C的重组杆状病毒,为进一步研究FMDV空衣壳抗原和基因工程亚单位疫苗奠定基础。从质粒T-OP1中扩增出编码O型FM-DV衣壳蛋白前体的P12A基因,并将其... 详细信息

构建共表达O型口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus,FMDV)衣壳蛋白前体P12A和蛋白酶3C的重组杆状病毒,为进一步研究FMDV空衣壳抗原和基因工程亚单位疫苗奠定基础。从质粒T-OP1中扩增出编码O型FM-DV衣壳蛋白前体的P12A基因,并将其插入到杆状病毒转移载体pFastDual-3C的PH启动子之下,构建重组杆状病毒转移载体pD-P12A3C。通过在大肠杆菌内转座重组,获得重组杆粒B-P12A3C,转染Sf9细胞,获得表达O型FMDV衣壳蛋白的重组杆状病毒。重组杆状病毒经增殖并感染Sf9细胞后,通过双抗体夹心ELISA方法及间接免疫荧光来检测目的蛋白的表达。结果表明,表达产物能被O型FMDV阳性血清识别,具有一定的反应原性,表明重组杆状病毒构建成功,该研究为O型FMDV空衣壳的体外组装及基因工程亚单位疫苗的研究提供了前期材料。

关键词：口蹄疫病毒衣壳蛋白重组杆状病毒构建

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奶山羊骨髓间质干细胞的分离培养及生物学特性研究

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2010年第10期38卷 19-26页

作者：王芳朱海鲸李伟华进联西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心农业部动物生殖发育与胚胎工程重点开放性实验室陕西省农业分子生物学重点实验室陕西杨凌712100 江苏省北科生物科技有限公司江苏泰州225300

【目的】分离、培养奶山羊骨髓间质干细胞(MSCs),探讨其生物学特性,为心血管、神经退化,尤其是不育症患者的细胞移植治疗及相关细胞发育分化研究奠定基础。【方法】采用贴壁培养法进行MSCs的分离和培养,通过形态学观察、生长曲线测定、... 详细信息

【目的】分离、培养奶山羊骨髓间质干细胞(MSCs),探讨其生物学特性,为心血管、神经退化,尤其是不育症患者的细胞移植治疗及相关细胞发育分化研究奠定基础。【方法】采用贴壁培养法进行MSCs的分离和培养,通过形态学观察、生长曲线测定、免疫细胞化学染色和RT-PCR技术等进行检测;并采用免疫细胞化学法对自发分化的细胞及定向诱导分化的神经样细胞、心肌样细胞、生殖样细胞进行检测,计算生殖样细胞的阳性率。【结果】分离得到的MSCs为成纤维样细胞,其增殖能力强,无致瘤性,已连续传代至22代;其表达胚胎干细胞(ESCs)的表面标记Oct4、Nanog、C-myc和TERT;MSCs形成类胚体自发分化的细胞表达3胚层特异标志基因AFP、β-ⅢTubulin和心肌α-actin;MSCs经β-巯基乙醇诱导,定向分化为表达Nestin和β-ⅢTubulin的早期神经样细胞,经5-氮胞苷(5-Aza)诱导,可定向分化为表达CT3及心肌α-actin的心肌样细胞,并出现肌管样结构,经维甲酸(RA)诱导,分化的细胞表达生殖细胞减数分裂前期的蛋白Vasa、Scp3和CD49f(α6整合素)等生殖细胞标记,其阳性率分别达到35.7%,24.0%和14.0%。【结论】自奶山羊骨髓分离得到MSCs,其具备间质干细胞的基本特性,并具有向神经细胞、心肌细胞、生殖细胞分化的潜能。

关键词：奶山羊骨髓间质干细胞神经细胞心肌细胞生殖细胞

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猪流产嗜性衣原体MOMP基因的克隆及原核表达

猪流产嗜性衣原体MOMP基因的克隆及原核表达

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中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会

作者：李西玉许信刚周继章邱昌庆曹小安宫晓炜王光华西北农林科技大学动物医学院中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部兽医公共卫生重点开放实验室

【目的】克隆猪流产嗜性衣原体(Chlamydophila abortus,CA)青海株主要外膜蛋白(major outer membrane protein,MOMP)基因,并进行序列分析及原核表达。【方法】根据GenBank公布的CA MOMP基因的核苷酸序列,设计并合成一对特异性引物,用套... 详细信息

【目的】克隆猪流产嗜性衣原体(Chlamydophila abortus,CA)青海株主要外膜蛋白(major outer membrane protein,MOMP)基因,并进行序列分析及原核表达。【方法】根据GenBank公布的CA MOMP基因的核苷酸序列,设计并合成一对特异性引物,用套式PCR方法扩增猪流产嗜性衣原体青海株MOMP基因,将其克隆入pMD18-T载体中,进行测序及序列分析。然后将MOMP基因亚克隆入原核表达载体pGEX4T-1中,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达。【结果】扩增到1170bp的CA MOMP全长基因,序列分析结果表明,该基因与发表的猪流产嗜性衣原体B11001株和CP/12株核苷酸同源性均为99.7%。SDS-PAGE可检测到大小约为66ku的融合蛋白,主要以包涵体形式存在。Western-blot分析表明,重组蛋白可被猪衣原体阳性血清所识别。【结论】成功克隆了猪流产嗜性衣原体青海株MOMP基因并进行原核表达,为下一步研制猪流产嗜性衣原体诊断抗原奠定基础。

关键词：猪流产嗜性衣原体 MOMP蛋白克隆原核表达

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奶山羊骨髓间质干细胞异体移植对生精缺陷模型小鼠睾丸发育的影响

奶山羊骨髓间质干细胞异体移植对生精缺陷模型小鼠睾丸发育的影响

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第五次全国动物生物技术学术研讨会

作者：王芳刘超张珊珊董武子华进联西北农林科技大学动物医学院，陕西省干细胞工程技术研究中心，农业部动物生殖发育与胚胎工程重点开放性实验室，陕西省农业分子生物学重点实验室，陕西杨凌，712100

骨髓源间质干细胞(MSCs)是一种具有多向分化潜能的成体干细胞，其具有取材方便、增殖快和免疫原性低等优点，在临床治疗应用方面具有重要的应用前景。本研究旨在应用奶山羊MSCs异体移植技术观察对不育模型小鼠睾丸发育的影响。

关键词：奶山羊异体移植骨髓间质干细胞生精缺陷睾丸发育

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蓝舌病病毒VP7基因的原核表达

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中国预防兽医学报 2009年第12期31卷 925-928页

作者：宋红梅杨涛马健男王群张维军徐青元杨增岐吴东来西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001

为获得蓝舌病病毒(BTV)VP7基因的原核表达蛋白,本实验采用RT-PCR方法扩增出了血清1型BTV的VP7基因,并克隆到原核表达载体pMAL-c2X中,构建了重组质粒pMAL-VP7。将重组质粒转化TB1感受态细胞,以0.5mmol/L的IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE电泳... 详细信息

为获得蓝舌病病毒(BTV)VP7基因的原核表达蛋白,本实验采用RT-PCR方法扩增出了血清1型BTV的VP7基因,并克隆到原核表达载体pMAL-c2X中,构建了重组质粒pMAL-VP7。将重组质粒转化TB1感受态细胞,以0.5mmol/L的IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果显示融合蛋白MBP-VP7以可溶形式存在,分子质量约为90ku。以纯化的重组蛋白作为包被抗原,初步建立了检测BTV血清抗体的间接ELISA诊断方法,为今后进一步开展BTV诊断研究奠定了基础。

关键词：蓝舌病病毒 VP7基因原核表达

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非洲猪瘟的风险分析和防控措施

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动物医学进展 2009年第9期30卷 105-109页

作者：李秋霞滕达王建华童德文中国农业科学院饲料研究所基因工程室农业部饲料生物技术重点开放实验室北京100081 西北农林科技大学动物医学院陕西杨陵712100

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是一类动物传染病。由于该病死亡率较高,一旦发生将会给养殖业带来巨大的经济损失。该病因保护性免疫反应的复杂性,目前尚无有效的疫苗进行预防。为了防范非洲猪瘟病毒传入我国,根据该病毒的病原学和... 详细信息

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是一类动物传染病。由于该病死亡率较高,一旦发生将会给养殖业带来巨大的经济损失。该病因保护性免疫反应的复杂性,目前尚无有效的疫苗进行预防。为了防范非洲猪瘟病毒传入我国,根据该病毒的病原学和流行病学特性,尽可能的降低该病的感染和传播途径。并应用血清学和分子生物学无感染性的诊断方法快速、灵敏的检测该病毒,从而将该病传入我国的风险降至最低。

关键词：非洲猪瘟病原学流行病学风险分析防控措施

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杆状病毒介导外源基因在哺乳动物细胞中表达的研究进展

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微生物学通报 2009年第12期36卷 1876-1881页

作者：田飞鹏曹轶梅卢曾军高云英刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100

杆状病毒(Baculovirus)是一种以昆虫为唯一宿主的病毒,可用做生物杀虫剂或作为表达载体在昆虫细胞中大量表达外源蛋白,制备疫苗。研究发现,在哺乳动物细胞中携带哺乳动物启动子的重组杆状病毒能启动下游外源基因的表达但病毒不能在哺乳... 详细信息

杆状病毒(Baculovirus)是一种以昆虫为唯一宿主的病毒,可用做生物杀虫剂或作为表达载体在昆虫细胞中大量表达外源蛋白,制备疫苗。研究发现,在哺乳动物细胞中携带哺乳动物启动子的重组杆状病毒能启动下游外源基因的表达但病毒不能在哺乳动物细胞中增值,对细胞毒性小,转导成功的细胞可以稳定传代并有效表达外源基因,哺乳动物细胞比昆虫细胞对蛋白质具有更好的翻译后修饰,表达出的蛋白结构更接近天然蛋白。因此,杆状病毒可作为一种新型的哺乳动物细胞基因转移载体,用于表达外源基因及作为一种基因治疗载体,具有巨大潜力,日益受到人们的关注。本文对杆状病毒作为一种表达载体在哺乳动物细胞中表达的研究进展进行了综述。

关键词：杆状病毒外源基因哺乳动物细胞

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